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穿透肽嵌合金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶LysJS25-R9的表达及其活性分析

中国抗生素杂志 2017年第10期42卷 865-870页

作者：孙利厂周艳张莉莉庞茂达何涛包红朵张辉王冉江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地农业部农产品质量安全控制技术与标准重点实验室江苏省畜禽产品安全性研究重点实验室南京210014

前期分离得到1株具有较强裂解能力的金黄色葡萄球菌噬菌体vB_SauM_JS25。测序后发现,噬菌体vB_SauM_JS25的裂解酶基因LysJS25与裂解酶LysK同源性最高,且可以广谱裂解金黄色葡萄球菌。为提高LysJS25细胞穿透效果,设计了穿透肽嵌合裂解酶L... 详细信息

前期分离得到1株具有较强裂解能力的金黄色葡萄球菌噬菌体vB_SauM_JS25。测序后发现,噬菌体vB_SauM_JS25的裂解酶基因LysJS25与裂解酶LysK同源性最高,且可以广谱裂解金黄色葡萄球菌。为提高LysJS25细胞穿透效果,设计了穿透肽嵌合裂解酶LysJS25-R9,经原核表达和纯化,体外评价了LysJS25-R9裂解活性、细胞穿透活性及细胞内杀菌活性。结果表明:LysJS25-R9对葡萄球菌表现出较好的裂解能力,杀菌效率较原裂解酶提高2.1倍。激光共聚焦及细胞内杀菌活性实验证实LysJS25-R9进入MAC-T细胞内杀菌。该研究为穿透肽嵌合裂解酶的设计提供了一个良好的例证,同时有助于裂解酶细胞穿透性改造的设计。

关键词：金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶细胞穿透肽

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用于检测转基因作物中调控元件的质粒标准分子的构建

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江苏农业学报 2018年第6期34卷 1392-1400页

作者：邢宇俊陆丹丹吴季荣徐剑宏王园园梁杰史建荣江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所/江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地/农业部农产品质量安全控制技术与标准重点实验室/农业部农产品质量安全风险评估实验室/江苏省转基因安全评价公共服务中心/江苏省现代粮食流通与安全协同创新中心/中德农产品质量安全评估技术研发中心江苏南京210014

为解决转基因农产品检测中阳性标准物质匮乏的问题,利用重叠PCR技术将检测过程中常用的调控元件Ca MV35S启动子、FMV35S启动子、PAT29启动子、Ubiquitin启动子、NOS启动子、35S终止子、NOS终止子和E9终止子依次连接获得融合片段,再利用... 详细信息

为解决转基因农产品检测中阳性标准物质匮乏的问题,利用重叠PCR技术将检测过程中常用的调控元件Ca MV35S启动子、FMV35S启动子、PAT29启动子、Ubiquitin启动子、NOS启动子、35S终止子、NOS终止子和E9终止子依次连接获得融合片段,再利用分子克隆技术将融合片段转化到载体p MD-19T中,获得含有调控元件的标准质粒p MD-RG。PCR和测序结果验证了标准分子构建的正确性,并且标准质粒的均匀性和稳定性比较好,符合标准物质候选物的要求,可代替阳性标准物质用于转基因成分的检测和研究。该质粒可用于大多数已经批准的转基因作物的检测和监管工作中。

关键词：转基因作物质粒标准分子调控元件

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肠出血性大肠埃希菌噬菌体裂解酶的毕赤酵母重组表达及裂解活性分析

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2018年第4期39卷 1-6页

作者：孙利厂庞茂达何灵尘周艳何涛王冉江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所/省部共建国家重点实验室培育基地--江苏省食品质量安全重点实验室/农业农村部农产品质量安全控制技术与标准重点实验室/江苏省畜禽产品安全性研究重点实验室南京210014

为研究噬菌体V-EcoM-C1所编码裂解酶LysC1的裂解活性,在酵母菌GS115中重组表达裂解酶LysC1,并检测裂解酶LysC1对大肠埃希菌的裂解活性。结果表明:通过甲醇诱导后,含有裂解酶基因LysC1的重组表达质粒pPIC9K-LysC1能够在酵母菌GS115中表达... 详细信息

为研究噬菌体V-EcoM-C1所编码裂解酶LysC1的裂解活性,在酵母菌GS115中重组表达裂解酶LysC1,并检测裂解酶LysC1对大肠埃希菌的裂解活性。结果表明:通过甲醇诱导后,含有裂解酶基因LysC1的重组表达质粒pPIC9K-LysC1能够在酵母菌GS115中表达,重组蛋白LysC1的分子量约为25ku,以外分泌方式表达,经HIS-trap HP(GE)亲和层析柱纯化后可获得有活性的重组蛋白LysC1,且该裂解酶对多种不同O抗原类型的肠出血性大肠埃希菌均具有较高的裂解活性,其最小抑菌浓度(MIC)为100μg·mL^(-1)。这一研究利用酵母表达系统成功表达出大肠埃希菌噬菌体裂解酶,且该裂解酶无需穿孔素等破膜因子的辅助,可直接裂解大肠埃希菌,为肠出血性大肠埃希菌的防控提供了新的思路和途径。

关键词：肠出血性大肠埃希菌噬菌体裂解酶

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沙门氏菌噬菌体在动物和食品中的生物防控研究进展

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食品安全质量检测学报 2022年第2期13卷 605-611页

作者：包红朵呼圣杰王冉江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地农业农村部农产品质量安全风险评估实验室(南京)江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所南京210014 江南大学食品学院无锡214122

随着沙门氏菌耐药性持续发展、耐药菌不断出现以及食物中毒事件频发,噬菌体已成为一种新型防控耐药性沙门氏菌的生物杀菌剂。噬菌体的作用机制与抗生素完全不同,在控制耐药性沙门氏菌感染与污染方面具有良好的应用前景,尤其在治疗超级... 详细信息

随着沙门氏菌耐药性持续发展、耐药菌不断出现以及食物中毒事件频发,噬菌体已成为一种新型防控耐药性沙门氏菌的生物杀菌剂。噬菌体的作用机制与抗生素完全不同,在控制耐药性沙门氏菌感染与污染方面具有良好的应用前景,尤其在治疗超级耐药沙门氏菌方面有着极大的优势,但是由于沙门氏菌血清型众多,需要开展针对不同血清型的沙门氏菌特异性噬菌体的分离和鉴定,这样的噬菌体疗法更具有针对性,从而成功应对新出现的沙门氏菌。本文综述了沙门氏菌危害、沙门氏菌噬菌体及商用沙门氏菌噬菌体制剂的研究进展、沙门氏菌噬菌体生物防治的研究进展和最新发现,重点介绍沙门氏菌噬菌体在食品工业中的应用,为噬菌体作为抗菌剂防控沙门氏菌提供借鉴和参考。

关键词：沙门氏菌沙门氏菌噬菌体食品工业生物防控

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抗菌药对鲍曼不动杆菌外膜囊泡产量及主要生物学特性的影响

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微生物学通报 2024年第1期51卷 295-305页

作者：李倩茹何涛吉星魏瑞成王冉于美玲李俊广西大学动物科学技术学院广西南宁530004 江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所、江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地、农业农村部农产品质量安全风险评估实验室(南京) 江苏南京210014

【背景】细菌耐药性已成为全球健康卫生和经济发展的巨大威胁。替加环素是治疗多重耐药肠杆菌所致严重感染的主要药物之一,但在2019年发现了可介导其高水平耐药的可转移替加环素耐药基因tet(X3)。外膜囊泡作为介导水平基因转移的新型方... 详细信息

【背景】细菌耐药性已成为全球健康卫生和经济发展的巨大威胁。替加环素是治疗多重耐药肠杆菌所致严重感染的主要药物之一,但在2019年发现了可介导其高水平耐药的可转移替加环素耐药基因tet(X3)。外膜囊泡作为介导水平基因转移的新型方式,在介导tet(X3)水平转移中的作用目前尚无报道。【目的】以tet(X3)阳性替加环素耐药鲍曼不动杆菌34AB为对象,探究不同抗菌药物对其外膜囊泡产量及主要生物学特性的影响。【方法】采用微量肉汤稀释法测定细菌药物敏感性,超速离心法提取细菌外膜囊泡,BCA法测定外膜囊泡产量,使用马尔文纳米粒度电位仪测定外膜囊泡的粒径与电位,PCR法(定性)及RT-qPCR法(定量)检测外膜囊泡中携带的tet(X3)基因。【结果】相较于无抗生素对照组[(0.64±0.04)mg/mL],在不同抗菌药物亚抑菌浓度(1/2 MIC和1/4 MIC)处理后,34AB外膜囊泡的产量均有所增加,以头孢他啶[1/2 MIC,(2.83±0.57)mg/mL;1/4 MIC,(2.38±0.29)mg/mL]和美罗培南[1/2 MIC,(2.19±0.11)mg/mL;1/4 MIC,(1.96±0.37)mg/mL]作用最为显著(P<0.01)。同时抗菌药物作用后,各组外膜囊泡粒径和电位均有所降低,而携带的tet(X3)基因拷贝数均有所上升(2.80×104-2.63×107 copies/μL)。【结论】抗菌药物的临床应用可能会导致耐药细菌外膜囊泡产量及携带的耐药基因丰度增加,进而增强其作为水平基因转移载体传播耐药基因的风险。

关键词：鲍曼不动杆菌外膜囊泡替加环素耐药性 tet(X3)

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噬菌体赋形剂的种类、配方及包被技术研究进展

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微生物学通报 2022年第5期49卷 1823-1831页

作者：包红朵夏兴朱树娇仲召鑫夏雨王冉江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地农业农村部农产品质量安全风险评估实验室(南京) 江苏南京210014 江南大学食品学院江苏无锡214122 江苏省农业科学院沿海地区农业科学研究所江苏盐城224002

噬菌体制剂的研究与应用受到医药领域、畜牧兽医领域及食品生产在内的各行业的重视。然而,噬菌体作为一种具有蛋白质外壳的活微生物,其在防治致病菌污染、感染及储存运输过程中,会遇到一些活性丧失、储存期短、液体状态运输不便等问题... 详细信息

噬菌体制剂的研究与应用受到医药领域、畜牧兽医领域及食品生产在内的各行业的重视。然而,噬菌体作为一种具有蛋白质外壳的活微生物,其在防治致病菌污染、感染及储存运输过程中,会遇到一些活性丧失、储存期短、液体状态运输不便等问题。因此,寻找合适的包被赋形剂,以减少噬菌体在使用、储存及运输过程中的活性损失,是噬菌体疗法亟须解决的问题。本文主要综述制备噬菌体制剂时使用的包被赋形剂种类、配方及包被技术等,及其对噬菌体抗逆性和储存稳定性的影响,并探讨了该领域最重要的研究成果,以期为固态噬菌体制剂寻找合适的包被赋形剂、配方和包被技术,为噬菌体的靶向治疗和控制释放奠定基础,有助于噬菌体治疗的更广泛的临床应用。

关键词：噬菌体赋形剂封装技术耐胃酸

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草甘膦铵盐对3种滩涂动物抗氧化酶、丙二醛及大弹涂鱼红细胞微核的影响

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农药学学报 2018年第5期20卷 587-594页

作者：袁建军谢嘉华张猛陈细香余向阳泉州师范学院海洋与食品学院/近海资源生物技术福建省高校重点实验室福建泉州362000 江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所/江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地南京210014

为评价草甘膦对河口及滩涂水域生物的影响,采用室内人工染毒法,研究了草甘膦铵盐对可口革囊星虫Phascolosoma esculenta、缢蛏Sinonovacula constricta Lamark和大弹涂鱼Boleophthalmus pectinirostris 3种滩涂动物超氧化物歧化酶（SOD... 详细信息

为评价草甘膦对河口及滩涂水域生物的影响,采用室内人工染毒法,研究了草甘膦铵盐对可口革囊星虫Phascolosoma esculenta、缢蛏Sinonovacula constricta Lamark和大弹涂鱼Boleophthalmus pectinirostris 3种滩涂动物超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、丙二醛（MDA）及大弹涂鱼红细胞微核的影响。结果表明：经低浓度（63.5 mg/L）草甘膦短时间（2 d）染毒后,可口革囊星虫肠组织的SOD、CAT活性值及MDA含量分别为231.54、1.719 U/mg pro.和0.60 nmol/mg pro.,3种指标均显著或极显著高于相应对照值（204.88、1.521 U/mg pro.和0.54 nmol/mg pro.）,且随着药剂处理浓度增加,SOD、CAT活性及MDA含量均升高;但当染毒时间延长至8 d时,可口革囊星虫肠组织的SOD、CAT活性值及MDA含量均明显降低,分别为155.67、1.403 U/mg pro.和0.53 nmol/mg pro.,显著低于对照,且随药剂处理浓度进一步增加,酶活性及MDA含量值降低更显著。草甘膦对缢蛏内脏团及大弹涂鱼肝脏SOD、CAT活性及MDA含量的影响表现出类似规律。此外,经低浓度（53.5 mg/L）草甘膦染毒8 d后,大弹涂鱼红细胞微核率及核异常率分别为17.00‰和21.33‰,均极显著高于相应对照值（13.67‰和13.33‰）,且随着草甘膦浓度增大,其红细胞微核率及核异常率均显著升高,表明大弹涂鱼对草甘膦有较高的敏感性。所得研究结果可为评价草甘膦对河口及滩涂水域生物的影响提供参考依据。

关键词：草甘膦环境毒性可口革囊星虫缢蛏大弹涂鱼抗氧化酶丙二醛红细胞微核

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贝莱斯芽孢杆菌6W1挥发性有机物对禾谷镰刀菌的抑菌抑毒作用

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微生物学通报 2024年第9期51卷 3484-3496页

作者：周萍王赤恒仇剑波高弢江苏大学食品与生物工程学院江苏镇江212013 江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地、农业农村部农产品质量安全控制技术与标准重点实验室、江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所江苏南京210014 新乡医学院三全学院河南新乡453000

【背景】由禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)复合种引起的小麦赤霉病和镰刀菌毒素污染严重影响小麦的产量和质量,生防菌产生的挥发性有机物(volatile organic compound,VOC)可作为植物病害生物防治因子。【目的】为生防菌株在病害生物... 详细信息

【背景】由禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)复合种引起的小麦赤霉病和镰刀菌毒素污染严重影响小麦的产量和质量,生防菌产生的挥发性有机物(volatile organic compound,VOC)可作为植物病害生物防治因子。【目的】为生防菌株在病害生物防治上的更深层次应用提供理论依据。【方法】对前期分离得到的拮抗菌贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)6W1产生的VOC进行抑菌作用测定和组分分析,利用二分格平皿研究其对菌丝生长的影响,利用培养皿对扣熏蒸法研究对孢子萌发及脱氧雪腐镰刀烯醇(deoxynivalenol,DON)毒素产生的影响,再利用气相色谱-离子迁移谱(gas chromatography-ion mobility spectrometry,GC-IMS)技术对该菌株的体外挥发性抑菌物质进行定性分析。【结果】菌株产生的VOC能够显著抑制禾谷镰刀菌丝的生长及DON毒素的产生,但不影响孢子的萌发。GC-IMS分析结果显示,菌株所产的VOC种类主要包括酯类、醇类、醛类、烯类和酮类。选取各物质的纯品进行体外抑菌控毒研究,结果表明这几种物质对禾谷镰刀菌的生长和DON毒素的产生都能有较强的抑制作用。【结论】菌株6W1能够产生具有抑菌控毒活性的VOC,这种微生物资源在开发为生防产品方面具有巨大的潜力,其VOC在植物病害防治等方面也具有较高的研究和应用价值。

关键词：禾谷镰刀菌贝莱斯芽孢杆菌 VOC 拮抗作用

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小菜蛾杀虫抗体的对靶设计及验证

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江苏农业学报 2024年第7期40卷 1212-1219页

作者：谢雅晶杨立应胡晓丹徐重新张霄高美静卢莉娜仲建锋朱庆刘媛刘贤金江苏大学食品与生物工程学院江苏镇江212013 江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地/农业农村部农产品质量安全控制技术与标准重点实验室/农业农村部农产品质量安全风险评估实验室<南京>/江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所江苏南京210014 江苏农林职业技术学院江苏镇江212400

本研究拟通过模拟Cry毒素创制新型杀虫蛋白质用于小菜蛾防治,主要利用三维结构模拟及分子对接技术,以前期获得的抗Cry1Ab抗体为模板设计2个基因工程抗体(GEAb)。其中,具有杀虫活性的GEAb-GGCC与小菜蛾中肠刷状边缘膜囊泡(BBMV)具有较高... 详细信息

本研究拟通过模拟Cry毒素创制新型杀虫蛋白质用于小菜蛾防治,主要利用三维结构模拟及分子对接技术,以前期获得的抗Cry1Ab抗体为模板设计2个基因工程抗体(GEAb)。其中,具有杀虫活性的GEAb-GGCC与小菜蛾中肠刷状边缘膜囊泡(BBMV)具有较高结合活性,并与Cry1A和Cry1B具有重叠的BBMV结合位点。BBMV免疫沉淀分析鉴定结果显示,与GEAb-GGCC结合的中肠蛋白质包括氨肽酶N(APN)、V-ATP酶B亚基和polycalin。由于GEAb-GGCC缺乏Cry1A类蛋白质中负责成孔的α-螺旋结构,推测GEAb-GGCC或通过结合小菜蛾中肠受体激活下游信号通路,引起中肠损伤,导致虫体死亡。

关键词：对靶设计杀虫基因工程抗体分子对接小菜蛾 Cry毒素

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噬菌体尾突蛋白的结构功能及应用的研究进展

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中国兽医科学 2021年第9期51卷 1175-1181页

作者：周艳万启旸包红朵张辉庞茂达王冉江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地江苏南京210014 江苏大学食品与生物工程学院江苏镇江212013

随着抗生素的大量使用和耐药致病菌的频繁出现,噬菌体作为新型抗菌手段而成为研究热点。噬菌体尾突蛋白在噬菌体侵染细菌中发挥着非常重要的作用,不仅负责识别宿主受体,而且具有解聚酶或糖苷水解酶的抑菌活性。目前揭示噬菌体尾突蛋白... 详细信息

随着抗生素的大量使用和耐药致病菌的频繁出现,噬菌体作为新型抗菌手段而成为研究热点。噬菌体尾突蛋白在噬菌体侵染细菌中发挥着非常重要的作用,不仅负责识别宿主受体,而且具有解聚酶或糖苷水解酶的抑菌活性。目前揭示噬菌体尾突蛋白的结构和功能的进展增多,了解噬菌体尾突蛋白的结构和功能有助于明确噬菌体的多样性和生命复制循环过程,更好地应用和开发噬菌体相关抗菌制剂。本文就噬菌体尾突蛋白的结构、功能及应用的研究进展展开综述,从尾突蛋白的角度加深对噬菌体的生物学认识。

关键词：噬菌体尾突蛋白耐药性抗菌蛋白解聚酶识别吸附

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