检索结果-内蒙古大学图书馆

中国农业科学 2017年第6期50卷 1147-1156页

作者：应诗家戴子淳郭佳佳施振旦江苏省农业科学院畜牧研究所动物品种改良和繁育重点实验室

【目的】研究鹅卵泡基质层TLR家族基因表达谱及其对LPS不同处理时间后的反应性。【方法】在大群散养条件下,实时观察鹅产蛋过程,分别在产蛋后8和2 h以及产前4、16和28 h注射LPS,并在产蛋后8h屠宰,即LPS作用0、6、12、24和36 h,每个时间... 详细信息

【目的】研究鹅卵泡基质层TLR家族基因表达谱及其对LPS不同处理时间后的反应性。【方法】在大群散养条件下,实时观察鹅产蛋过程,分别在产蛋后8和2 h以及产前4、16和28 h注射LPS,并在产蛋后8h屠宰,即LPS作用0、6、12、24和36 h,每个时间点各5只鹅。屠宰时,取卵巢,观察卵泡外观形态,并分离F1-F5级卵泡基质层。试验鹅自由饮水、自由采食、自然光照。LPS处理0、24和36 h的单个F1-F5级卵泡基质层或卵泡用于基因表达分析,而其他LPS处理的每只鹅等级卵泡基质层RNA等质量混合后用于基因表达分析。采用普通PCR方法检测10种鸟类TLR家族基因的在鹅等级卵泡基质层的表达谱,其中以脾脏组织为阳性对照,以不加c DNA模板为阴性对照。根据RT-PCR的表达谱结果,采用Real-time PCR检测不同等级卵泡基质层TLRs表达水平以及不同LPS处理时间对基质层TLRs表达水平的影响。对不同等级卵泡和不同LPS处理时间对基质层TLRs表达的数据,采用单因子方差分析,Duncan法多重比较;对变性卵泡与对照组基质层TLRs表达水平的数据,采用T检验分析。【结果】(1)已公开的10种鸟类TLR家族基因,如TLRs 1A、1B、2A、2B、3、4、5、7、15和21基因均在等级卵泡基质层组织中表达。(2)随等级卵泡生长,TLRs 2A和15表达水平逐渐升高;F1级卵泡基质层TLR2A表达水平显著高于F3、F4和F5级卵泡,TLR15表达水平显著高于F5级卵泡;其他TLR家族基因,如TLRs 1A、1B、2B、3、4、5、7和21在不同等级卵泡基质层中的表达水平差异不显著。(3)在LPS处理0、6和12 h时,等级卵泡外观形态无明显变化,但在LPS处理24 h时,3只鹅的等级卵泡呈深黄色胶冻状变性;在LPS处理36 h时,全部试验鹅等级卵泡呈深黄色胶冻状变性。(4)与对照组(LPS处理0 h)相比,TLRs 2A、4和5表达水平在LPS处理12和24 h时显著升高,TLR2B表达水平在LPS处理24 h时显著升高,TLRs 7和15表达水平在LPS处理6-24 h期间均显著升高,而TLRs 1A、1B、3和21表达水平在LPS处理6-24 h期间差异不显著。(5)与等级卵泡基质层相比,在LPS处理24和36 h的变性卵泡中,TLRs 1A、2A、2B、4、5、7和15表达水平显著升高,TLR3表达水平显著降低,而在LPS处理36 h的变性卵泡中,TLRs 1B和21表达水平显著升高。【结论】已发现的10种鸟类TLR家族基因均在种鹅等级卵泡基质层表达,且随LPS作用时间延长,等级卵泡形态结构发生变化,但TLRs表达水平逐渐升高。

关键词：种鹅等级卵泡内毒素脂多糖(LPS) TLRs

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血清及山羊卵丘细胞共培养对猪胚胎体外发育的促进作用

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华中农业大学学报 2014年第5期33卷 73-79页

作者：王慧利李静心王婧孟春花朱前明张俊钱勇曹少先江苏省农业科学院畜牧研究所/江苏省农业科学院动物品种改良和繁育重点实验室南京210014

为进一步完善猪胚胎体外发育系统,以孤雌激活胚胎为研究对象,依次对胚胎培养液种类、培养期间血清添加方式、卵丘细胞共培养体系进行筛选优化。结果表明,与常规的PZM3培养液相比,CR1aa并不适合猪胚胎的体外发育;猪胚胎在PZM3中培养4d后... 详细信息

为进一步完善猪胚胎体外发育系统,以孤雌激活胚胎为研究对象,依次对胚胎培养液种类、培养期间血清添加方式、卵丘细胞共培养体系进行筛选优化。结果表明,与常规的PZM3培养液相比,CR1aa并不适合猪胚胎的体外发育;猪胚胎在PZM3中培养4d后添加10%胎牛血清培养至第6天,体外发育能力得到显著改善,卵裂率、囊胚率、囊胚孵化率、囊胚细胞数分别达到95.1%、56.5%、27.3%、79.3;在此基础上,利用山羊卵丘细胞与猪胚胎进行共培养,将囊胚孵化率进一步提高至36.6%,初步建立了一套高效稳定的猪胚胎体外发育系统。

关键词：猪胚胎体外发育血清共培养凋亡

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外源肌苷酸对肉鸡生长性能、肉品质及血清生化指标的影响

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动物营养学报 2016年第1期28卷 125-134页

作者：闫俊书宦海琳周维仁吴乐刘培峰徐小明施振旦江苏省农业科学院畜牧研究所动物品种改良与繁育重点实验室南京210014

本试验旨在研究不同剂量外源肌苷酸对三黄鸡生长性能、肉品质及血清生化指标的影响。选取健康的1日龄三黄肉公鸡1 500只,随机分为5组（各组饲粮中分别添加0、0.05%、0.10%、0.20%、0.30%的肌苷酸）,每组6个重复,每个重复50只,试验期52 ... 详细信息

本试验旨在研究不同剂量外源肌苷酸对三黄鸡生长性能、肉品质及血清生化指标的影响。选取健康的1日龄三黄肉公鸡1 500只,随机分为5组（各组饲粮中分别添加0、0.05%、0.10%、0.20%、0.30%的肌苷酸）,每组6个重复,每个重复50只,试验期52 d。结果表明：1）在肉鸡生长前期（1-36日龄）0.30%肌苷酸组料重比显著低于0.20%肌苷酸组（P〈0.05）;而整个生长期（1-52日龄）,各组生长性能无显著差异（P〉0.05）。2）0.20%肌苷酸组胸肌蒸煮损失较对照组降低了21.83%（P〈0.05）,剪切力降低了16.72%（P〉0.05）;0.30%肌苷酸组胸肌重显著高于对照组（P〈0.05）。与对照组相比,0.20%肌苷酸组胸肌红度（a^＊）、黄度（b^＊）值显著提高（P〈0.05）,而0.10%、0.30%肌苷酸组亮度（L^＊）值显著降低（P〈0.05）。3）52日龄时,0.30%肌苷酸组胸肌肌苷酸含量最高,较对照组提高了38.8%（P〈0.05）,0.20%肌苷酸组腿肌肌苷酸含量比对照组提高了26.14%（P〈0.05）。4）52日龄时,与对照组相比,0.30%肌苷酸组血清中球蛋白含量显著提高（P〈0.05）,而总蛋白含量、碱性磷酸酶活性有所提高,但差异不显著（P〉0.05）。5）36日龄,与对照组相比,0.30%肌苷酸组血清中总胆固醇含量显著降低（P〈0.05）,同时,0.05%肌苷酸组高密度脂蛋白胆固醇含量提高了38.41%（P〈0.05）。以上结果表明,在三黄鸡饲粮中添加外源肌苷酸可降低肉鸡生长前期料重比,改善肌肉颜色,显著提高肌肉肌苷酸的沉积量;另外,外源肌苷酸可提高肉仔鸡血清中总蛋白、球蛋白、高密度脂蛋白胆固醇含量及碱性磷酸酶活性,降低总胆固醇的含量,提高了体内蛋白质及脂质代谢水平;综合生长性能、肉品质及血清生化指标,在三黄鸡饲粮中添加0.30%外源肌苷酸效果最佳。

关键词：肌苷酸肉鸡生长性能肉品质脂质代谢

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鹅原始生殖细胞体外分离与冷冻保存方法的比较研究

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浙江农业学报 2017年第3期29卷 401-407页

作者：于建宁闫乐艳陈哲邵西兵戴子淳应诗家施振旦江苏省农业科学院畜牧研究所/动物品种改良和繁育重点实验室江苏南京210014

为了建立针对鹅原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)的分离纯化与冷冻保存方法,对血液Ficoll密度梯度离心法、血液ACK裂解法、生殖腺胰酶-EDTA消化法与生殖腺消化结合体外短时间培养法4种PGCs分离方法以及STEM-CELLBANKER、CELLBA... 详细信息

为了建立针对鹅原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)的分离纯化与冷冻保存方法,对血液Ficoll密度梯度离心法、血液ACK裂解法、生殖腺胰酶-EDTA消化法与生殖腺消化结合体外短时间培养法4种PGCs分离方法以及STEM-CELLBANKER、CELLBANKER 2与10%DMSO加90%血清等3种冻存液进行了比较研究。通过形态学观察、糖原染色与PGCs特异免疫荧光染色鉴定PGCs,同时利用台盼蓝染色检测PGCs活力等方法对其分离和保存效果进行评价。结果表明,从鹅胚血液与生殖腺中均已经成功分离到鹅PGCs;生殖腺消化结合体外短期培养法与传统的血液分离法相比,获得的鹅PGCs数量、纯度与活力最高,每枚胚胎获得的鹅PGCs数量达到115个、细胞纯度达80.8%、细胞活率达88.3%;而商业化的干细胞冷冻保护液STEM-CELLBANKER同一般的体细胞冻存液相比更适合鹅PGCs的冷冻保存,冷冻解冻后的细胞存活率达90%左右。试验可以得出结论:生殖腺消化结合体外短期培养法成功分离到数量与纯度都可观的鹅PGCs,STEM-CELLBANKER冻存液能够用于鹅PGCs的长期冷冻保存。

关键词：鹅原始生殖细胞生殖腺消化结合短期培养法冷冻保存

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Kiss-1基因多态性与苏淮山羊产羔数的关联分析

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畜牧兽医学报 2014年第12期45卷 1917-1923页

作者：李隐侠张俊钱勇李静心孟春花王慧利钟声曹少先江苏省农业科学院畜牧研究所南京210014 江苏省农业科学院动物品种改良和繁育重点实验室南京210014

为了研究Kiss-1基因多态性与苏淮山羊产羔数之间的关系,本研究采用DNA池测序技术筛选苏淮山羊Kiss-1基因突变位点,采用AS-PCR和PCR-RFLP方法检测130只苏淮山羊Kiss-1基因突变位点的多态性,并分析其与产羔数的关联性。结果表明,在苏淮山... 详细信息

为了研究Kiss-1基因多态性与苏淮山羊产羔数之间的关系,本研究采用DNA池测序技术筛选苏淮山羊Kiss-1基因突变位点,采用AS-PCR和PCR-RFLP方法检测130只苏淮山羊Kiss-1基因突变位点的多态性,并分析其与产羔数的关联性。结果表明,在苏淮山羊内含子1中发现2个突变位点g.2270C>T和g.2510A>G,其中g.2510A>G位点有3种基因型AA、AG和GG,基因型频率分别为0.209、0.496和0.295;g.2270C>T位点在苏淮山羊中共检测3种基因型(CC、CT和TT),基因型频率分别为0.143、0.750和0.107。关联分析发现,g.2510A>G位点3种基因型在苏淮山羊各胎产羔数和平均产羔数间差异不显著,g.2270C>T位点中CC型的二胎产羔数显著高于CT和TT型(P<0.05)。单倍型分析发现,g.2510A>G和g.2270C>T位点在苏淮山羊群体中共构建8种单倍型,其中AGCT是主要的单倍型;各单倍型与苏淮山羊产羔数的关联分析发现仅AGCT单倍型的头胎产羔数与AACT单倍型的头胎产羔数间差异显著,其他单倍型在苏淮山羊的各胎产羔数间差异均不显著。综合以上研究表明,Kiss-1基因的g.2270C>T位点可能对苏淮山羊繁殖性状的选育具有一定的指导作用。

关键词：苏淮山羊 Kiss-1基因 PCR-RFLP AS-PCR 单倍型产羔数

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组蛋白H3S10及H3S28磷酸化对小鼠卵母细胞成熟的调控

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南京农业大学学报 2015年第5期38卷 850-856页

作者：王慧利王婧孟春花李静心曹少先江苏省农业科学院畜牧研究所/动物品种改良和繁育重点实验室江苏南京210014

[目的]进一步明确小鼠卵母细胞中组蛋白H3的磷酸化模式及其对卵母细胞成熟过程的调控。[方法]采用免疫荧光技术,对不同减数分裂阶段小鼠卵母细胞中组蛋白H3S10/H3S28的磷酸化状态进行了检测,在利用Aurora激酶广谱抑制剂ZM447439处理并... 详细信息

[目的]进一步明确小鼠卵母细胞中组蛋白H3的磷酸化模式及其对卵母细胞成熟过程的调控。[方法]采用免疫荧光技术,对不同减数分裂阶段小鼠卵母细胞中组蛋白H3S10/H3S28的磷酸化状态进行了检测,在利用Aurora激酶广谱抑制剂ZM447439处理并检测卵母细胞成熟质量的基础上,进一步检测了处理后卵母细胞H3S10/H3S28磷酸化状态、染色体排列形态及Aurora激酶自身磷酸化水平的变化情况。[结果]小鼠卵母细胞减数分裂期间,组蛋白H3S10/H3S28持续磷酸化;ZM447439处理浓度依赖性地损害了卵母细胞的成熟能力,并相应导致H3S10/H3S28磷酸化减弱直至消失、染色体排列异常及Aurora激酶A/B/C自身磷酸化水平的改变。[结论]小鼠卵母细胞减数分裂过程中组蛋白H3S10/H3S28呈磷酸化状态,ZM447439处理引起组蛋白磷酸化减弱和染色体排列异常及Aurora激酶磷酸化水平的变化并导致了卵母细胞成熟能力损害。

关键词：卵母细胞组蛋白磷酸化 H3S10 H3S28 Aurora激酶

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高温环境下湖羊直肠温度和血液生化指标的监测

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中国畜牧兽医 2018年第1期45卷 271-277页

作者：李隐侠王慧利邓维张莉张俊钱勇孟春花曹少先江苏省农业科学院畜牧研究所江苏省农业科学院动物品种改良和繁育重点实验室南京210014

本研究以南方特色绵羊品种湖羊为研究对象,在夏季高温环境下,连续监测10d湖羊直肠温度变化,测定血常规指标,并比较不同年龄、不同性别的湖羊在高温环境下血常规指标的差异;以湖羊高温环境下直肠温度的变化为基础,结合血常规指标,在湖羊... 详细信息

本研究以南方特色绵羊品种湖羊为研究对象,在夏季高温环境下,连续监测10d湖羊直肠温度变化,测定血常规指标,并比较不同年龄、不同性别的湖羊在高温环境下血常规指标的差异;以湖羊高温环境下直肠温度的变化为基础,结合血常规指标,在湖羊群体内鉴别高温应激敏感和高温应激抗性湖羊个体。结果显示,湖羊最高直肠温度出现在环境温度最高的时段(11∶00~15∶00),最低温度一般出现在03∶00左右,且以24h为周期循环;平均最高直肠温度和最低直肠温度差在湖羊个体间差异显著(P<0.05);高温暴露后湖羊群体淋巴细胞(LYM)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)数量及平均血红蛋白浓度(MCHC)均超出了绵羊正常参考值,且在不同性别和年龄上有一定的差异:母羊嗜碱性细胞、红细胞、血红蛋白、红细胞压积均有高于公羊的趋势,但差异不显著(P>0.05);1周岁湖羊淋巴细胞(P>0.05)、嗜碱性细胞计数(P<0.01)及百分比(P<0.05)均高于半岁湖羊;依据温度变化结合血常规指标变化在湖羊群体中鉴别了高温应激敏感和抗性的湖羊个体,在测试的母羊群体中高温应激敏感湖羊占35.3%,高温应激抗性湖羊占26.5%。肌酸激酶(CK)含量在高温应激敏感和抗性湖羊个体间差异显著(P<0.05)。综合以上结果,高温环境下湖羊不同个体间直肠温度变化差异显著;从血常规指标来看,高温应激对母羊和1岁湖羊的影响比较大。试验结果为深入研究夏季高温应激对湖羊的影响及抗高温应激差异的分子机制提供了一定的依据。

关键词：湖羊高温直肠温度血液生化指标监测

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湖羊NR5A1基因SNPs筛选及其与产羔数的关联分析

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江苏农业学报 2017年第1期33卷 124-132页

作者：李隐侠张俊钱勇孟春花王慧利钟声曹少先江苏省农业科学院畜牧研究所江苏南京210014 江苏省农业科学院动物品种改良和繁育重点实验室江苏南京210014

为探讨NR5A1基因能否作为湖羊产羔性状的候选基因,同时寻找与湖羊繁殖性能相关的分子标记,以高繁殖力湖羊为研究对象,采用DNA池结合测序方法筛选NR5A1基因在湖羊中的SNPs位点,并利用PCR-RFLP和AS-PCR方法进行多态位点分型,利用SPSS软件... 详细信息

为探讨NR5A1基因能否作为湖羊产羔性状的候选基因,同时寻找与湖羊繁殖性能相关的分子标记,以高繁殖力湖羊为研究对象,采用DNA池结合测序方法筛选NR5A1基因在湖羊中的SNPs位点,并利用PCR-RFLP和AS-PCR方法进行多态位点分型,利用SPSS软件分析不同基因型与湖羊产羔数的相关性。结果表明,在湖羊NR5A1基因中检测到6个SNPs位点,分析发现g.6052A/G位点为Taq I酶切位点,其余5个位点处没有酶切位点存在。在湖羊群体中,g.3362G/C(GG、GC、CC)、g.4342G/A(GG、GA、AA)、g.4666C/T(CC、CT、TT)、g.6052A/G(GG、AG、AA)和g.6991T/G(TT、TG、GG)位点均检测到3种基因型,而g.5699C/G位点在湖羊群体中仅发现2种基因型GG和GC。6个位点的多态信息含量(PIC)从0.306到0.375不等,均属于中度多态(0.25

关键词：湖羊 NR5A1基因 SNPs PCR-RFLP AS-PCR 关联分析

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肌肉中特异表达真核载体的构建及表达特异性验证

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江苏农业学报 2016年第6期32卷 1359-1366页

作者：赵为民任守文方晓敏李碧侠涂枫付言峰赵芳王学敏江苏省农业科学院畜牧研究所/动物品种改良和繁育重点实验室江苏南京210014

为构建肌肉中特异表达真核载体,本试验以PGL4.10质粒为骨架,利用基因合成、酶切连接方法获得重组载体,同时利用红色荧光蛋白基因DsRed2作为标记基因来检测重组载体在非肌源细胞和肌细胞中的表达情况。结果表明,成功构建了含有肌球蛋白... 详细信息

为构建肌肉中特异表达真核载体,本试验以PGL4.10质粒为骨架,利用基因合成、酶切连接方法获得重组载体,同时利用红色荧光蛋白基因DsRed2作为标记基因来检测重组载体在非肌源细胞和肌细胞中的表达情况。结果表明,成功构建了含有肌球蛋白轻链基因MLC启动子及其增强子的肌肉中特异表达载体,通过mRNA和蛋白水平检测,该表达载体在非肌源性细胞和肌细胞中均不表达DsRed2,只在分化的肌细胞中表达DsRed2。该表达载体的构建为制备肌肉中特异表达的转基因动物奠定了基础。

关键词：肌肉表达载体 MLC 启动子 DsRed2 肌细胞

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山羊Kiss-1基因克隆、表达模式和SNPs筛选

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江苏农业学报 2016年第1期32卷 151-157页

作者：李隐侠张俊钱勇孟春花王慧利钟声曹少先江苏省农业科学院畜牧研究所/江苏省农业科学院动物品种改良和繁育重点实验室江苏南京210014

Kiss-1在雌性动物生殖过程中发挥重要的作用。为了探讨其在山羊中的功能,本研究以波尔山羊、苏淮山羊新品系和海门山羊为研究对象,通过PCR扩增、测序和序列拼接获得Kiss-1基因编码区序列,利用生物信息学软件分析山羊Kiss-1基因序列特征,... 详细信息

Kiss-1在雌性动物生殖过程中发挥重要的作用。为了探讨其在山羊中的功能,本研究以波尔山羊、苏淮山羊新品系和海门山羊为研究对象,通过PCR扩增、测序和序列拼接获得Kiss-1基因编码区序列,利用生物信息学软件分析山羊Kiss-1基因序列特征,RT-PCR试验鉴定其在山羊中的组织表达模式,采用DNA池测序筛选Kiss-1基因编码区SNPs位点。结果发现3种山羊Kiss-1基因编码区序列长度均为408 bp,编码135个氨基酸残基;海门山羊与苏淮山羊新品系Kiss-1核苷酸序列一致性为100%,与波尔山羊的一致性为98.80%;系统进化发育分析发现海门山羊与苏淮山羊新品系首先聚在一起,然后再与波尔山羊聚在一起;组织表达谱显示Kiss-1基因在肺脏中表达量相对较高,在其他内脏和肌肉组织中表达量很少;DNA池测序发现2个SNPs位点,其中A175C位点突变引起了苏氨酸到脯氨酸的突变,G256A位点突变引起了丙氨酸到苏氨酸的改变。研究结果为进一步研究山羊Kiss-1基因的进化、功能及其与生产性能特别是繁殖性能的关系提供一定的理论依据。

关键词：山羊 Kiss-1 基因克隆组织表达 SNPs

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