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中国动物传染病学报 2025年

作者：侯立婷刘昆昆安俊星于晓明秦竹杜露平张元鹏陈瑾郑其升江苏省农业科学院动物免疫工程研究所江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心省部共建国家重点实验室培育基地—江苏省食品质量安全重点实验室南京农业大学动物医学院

本研究旨在研制安全高效的兽用疫苗免疫增强剂，为免疫增强剂的开发奠定基础。首先通过参考伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白基因序列，设计并构建了全长鞭毛蛋白FliC和删除D2和D3高变区的鞭毛蛋白FliC△D2D3的表达载体。然后利用原核表达系统表达... 详细信息

本研究旨在研制安全高效的兽用疫苗免疫增强剂，为免疫增强剂的开发奠定基础。首先通过参考伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白基因序列，设计并构建了全长鞭毛蛋白FliC和删除D2和D3高变区的鞭毛蛋白FliC△D2D3的表达载体。然后利用原核表达系统表达这两种蛋白，并进行纯化与鉴定。获得这两种蛋白后，进一步检测这两种蛋白体外对DC2.4细胞的TLR 5的激活和相关细胞因子的表达情况，并对其在PEDV疫苗上的免疫增强效力进行了评价。结果表明，1)两种蛋白在原核表达系统中均以可溶形式表达；2)添加鞭毛蛋白刺激后，DC 2.4细胞中TLR5及相关细胞因子的表达水平显著提高；3)FliC和FliC△D2D3均能显著提高小鼠和仔猪免疫后的PEDV特异性的IgG抗体水平，其中FliC△D2D3的免疫效果优于全长的FliC。该研究不仅有助于了解鞭毛蛋白FliC在免疫调节中的作用，也为基于鞭毛蛋白的免疫增强剂的开发提供了基础。

关键词：鞭毛蛋白FliC、FliC 免疫增强剂 PEDV

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油莎豆盐土栽培生理初探

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土壤 2017年第6期49卷 1126-1131页

作者：王子臣张兵管永祥吴田乡盛婧张岳芳何任红江苏省农业科学院循环农业研究中心/省部共建国家重点实验室培育基地--江苏省食品质量安全重点实验室南京210014 江苏省耕地质量与农业环境保护站南京210036 江苏省睢宁县沙集镇农业技术推广服务中心江苏睢宁221232 江苏农林职业技术学院江苏句容212400

为研究油莎豆在沿海滩涂开发中的种植与利用技术,通过盆栽模拟试验,探索了不同土壤和肥料对油莎豆生长及生理的影响。结果表明:(1)沙性盐土与常规黏性土壤相比,更适宜油莎豆种子的出苗,单株结实个数及果实干重均高于常规黏性土壤处理;(2... 详细信息

为研究油莎豆在沿海滩涂开发中的种植与利用技术,通过盆栽模拟试验,探索了不同土壤和肥料对油莎豆生长及生理的影响。结果表明:(1)沙性盐土与常规黏性土壤相比,更适宜油莎豆种子的出苗,单株结实个数及果实干重均高于常规黏性土壤处理;(2)日最低气温低于10.0℃不利于油莎豆种子的出苗;(3)沙性盐土+抗盐立苗基质处理(SSM)能够促进油莎豆种子出苗及分株生长,并提高经济产量,播种后85 d油莎豆植株分蘖生长群体数量显著高于其他处理(P<0.05)。根系干重、单株果实数量及果实干重较沙性盐土+化肥处理(SSF)、沙性盐土+有机肥处理(SSOF)均有所增加;(4)抗盐立苗基质有助于油莎豆叶片钾的吸收。SSM处理叶片钾含量高出SSOF处理0.44%,并显著高出SSF处理(P<0.05),平均高出11.65%;(5)与SSF比较,SSM处理显著增加了叶片可溶性糖含量(P<0.05),增加值达0.08mmol/g FW,同时显著降低了叶片相对电导率(P<0.05),降低幅度达35.16%;与SSOF比较,SSM处理更有利于增加油莎豆叶片可溶性糖含量,并降低叶片相对电导率和叶片脯氨酸含量。

关键词：油莎豆抗盐立苗基质可溶性糖脯氨酸相对电导率

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猪肺炎支原体和猪鼻支原体双重荧光定量PCR检测方法的建立

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畜牧兽医学报 2017年第8期48卷 1491-1498页

作者：武昱孜熊祺琰刘蓓蓓张珍珍王佳华利忠韦艳娜邵国青江苏省农业科学院兽医研究所、农业部兽用生物制品工程技术重点实验室、国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 省部共建国家重点实验室培育基地-江苏省食品质量安全重点实验室南京210014

建立同时检测猪肺炎支原体和猪鼻支原体的双重荧光定量PCR方法。根据猪肺炎支原体P97序列和猪鼻支原体P37序列的特异性引物,分别标记FAM和Texas Red荧光报告基团的2条TaqMan探针,建立和优化双重实时荧光定量PCR反应条件和体系,同时检测... 详细信息

建立同时检测猪肺炎支原体和猪鼻支原体的双重荧光定量PCR方法。根据猪肺炎支原体P97序列和猪鼻支原体P37序列的特异性引物,分别标记FAM和Texas Red荧光报告基团的2条TaqMan探针,建立和优化双重实时荧光定量PCR反应条件和体系,同时检测其敏感性、特异性和重复性。建立的双重荧光定量PCR对猪肺炎支原体和猪鼻支原体的最低检测值均为10copies·μL-1;与猪源致病菌、病毒和其他常见细菌均无交叉反应;各浓度标准品的Ct值变异系数小于5%,重复性好。检测72份临床样本,其中猪肺炎支原体的肺阳性率为80%,鼻拭子阳性率22%,支气管肺泡灌洗液阳性率58.33%;猪鼻支原体的肺阳性率为40%,鼻拭子阳性率66%,支气管肺泡灌洗液阳性率41.67%。建立的双重荧光定量PCR方法比普通PCR更加敏感,实用性强,可用于临床样品的检测。该方法能同时快速和定量地检测猪肺炎支原体和猪鼻支原体,在短时间内获得样品的多个信息,快速地解决了多次检测所需的时间以及经济消耗,为猪肺炎支原体和猪鼻支原体的监测和防控提供了新型、可靠的检测技术。

关键词：猪肺炎支原体猪鼻支原体双重荧光定量PCR

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伪狂犬活/灭活病毒接种小鼠诱导免疫效力及差异因子比较

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南京农业大学学报 2023年第1期46卷 106-111页

作者：章晨昕于晓明侯立婷张元鹏乔绪稳侯继波黄克和郑其升陈瑾南京农业大学动物医学院江苏南京210095 江苏省农业科学院动物免疫工程研究所/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地江苏南京210014

[目的]本研究旨在比较活/灭活病毒进入体内后对免疫系统活化的差异,为免疫增强剂的筛选和评价建立高效动物模型。[方法]本试验利用伪狂犬病毒(PRV)Bartha-K61株建立小鼠伪狂犬人工感染模型,筛选活/灭活病毒接种小鼠后免疫相关差异因子。... 详细信息

[目的]本研究旨在比较活/灭活病毒进入体内后对免疫系统活化的差异,为免疫增强剂的筛选和评价建立高效动物模型。[方法]本试验利用伪狂犬病毒(PRV)Bartha-K61株建立小鼠伪狂犬人工感染模型,筛选活/灭活病毒接种小鼠后免疫相关差异因子。将PRV Bartha-K61活毒以不同剂量、不同方式感染小鼠,通过计算小鼠存活率确定最佳感染剂量与感染方式;将筛选的最佳剂量的伪狂犬病毒活毒与相同剂量下灭活病毒按照前述筛选的最佳感染方式接种小鼠,利用ELISA试剂盒检测免疫7 d后小鼠血清中TNF-α、IL-1β、IFN-β和IL-6水平;利用PRV gB ELISA检测免疫7 d后小鼠血清PRV特异性gB抗体水平;利用灭活PRV作为特异性抗原进行淋巴细胞增殖试验并计算各组淋巴细胞刺激指数(SI)。[结果]在保证小鼠存活的前提下,6~8周龄小鼠的PRV的安全感染剂量为5×104TCID50;同等剂量下,相比于肌肉和腹腔注射,皮下注射为最安全的感染方式;同等剂量的活毒和灭活病毒接种小鼠后,与灭活病毒组相比,活病毒感染7 d后小鼠血清中TNF-α、IL-1β和IFN-β水平显著升高(P<0.001,P<0.01),与灭活病毒组相比,活病毒组小鼠血清PRV gB特异性抗体IgG水平和SI也显著升高(P<0.05,P<0.001);不同灭活方式间各细胞因子和SI差异不显著(P>0.05)。[结论]成功建立小鼠伪狂犬人工感染模型,明确活/灭活伪狂犬病毒接种小鼠后,机体早期存在与免疫相关差异因子,为后续免疫增强剂的评价筛选提供依据。

关键词：伪狂犬病毒小鼠模型免疫效力差异因子

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通用型H5亚型禽流感病毒亚单位疫苗抗原表达和免疫效力研究

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病毒学报 2019年第6期35卷 864-872页

作者：张雪花陆吉虎华涛卢宇侯继波梅梅江苏省农业科学院动物免疫工程研究所南京 210014 江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心南京 210014 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州 225009 江苏省食品质量安全重点实验室‐省部共建国家重点实验室培育基地南京 210014 教育部禽类预防医学重点实验室江苏省动物预防医学重点实验室扬州大学兽医院扬州 225009

H5亚型高致病性禽流感病毒因其变异快、感染性和致病性强等特点严重威胁着家禽业和人类健康。为研制具有广谱保护性的H5亚型禽流感病毒通用型亚单位疫苗,本研究分析和对比各分支H5亚型禽流感病毒的HA蛋白基因,获得HA蛋白基因共有序列,... 详细信息

H5亚型高致病性禽流感病毒因其变异快、感染性和致病性强等特点严重威胁着家禽业和人类健康。为研制具有广谱保护性的H5亚型禽流感病毒通用型亚单位疫苗,本研究分析和对比各分支H5亚型禽流感病毒的HA蛋白基因,获得HA蛋白基因共有序列,采用杆状病毒表达系统构建和表达重组HA蛋白。经IFA、Western Blot、微量血凝试验等方法鉴定重组HA蛋白,结果显示重组HA蛋白在昆虫细胞中得到正确表达,血凝效价达13log2,且与禽流感Re6、Re7和Re8阳性血清均具有较好的交叉反应活性。免疫效力试验结果显示,重组HA蛋白疫苗组血清抗体能与H5亚型禽流感病毒Re6、Re7和Re8检测抗原反应,且能诱导机体产生较高水平IFN-γ和IL-4。该研究结果可为H5亚型禽流感通用型亚单位疫苗研发提供试验基础和科学依据。

关键词： H5亚型禽流感病毒亚单位疫苗抗原表达免疫效力

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基于明尼苏达沙门氏菌Re595脂多糖低毒改造的外膜囊泡佐剂活性研究

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微生物学报 2024年第9期64卷 3269-3281页

作者：张嘉雯尹文竹王海燕张金秋邓碧华卢宇周明旭马芳江苏省农业科学院动物免疫工程研究所江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心江苏泰州225300

【目的】外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)是由革兰氏阴性菌和某些革兰氏阳性菌生成和分泌的球形双层膜结构,含有丰富的细菌表面抗原,因此在疫苗相关领域具有重要的研究价值。脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作为OMVs的主要结构... 详细信息

【目的】外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)是由革兰氏阴性菌和某些革兰氏阳性菌生成和分泌的球形双层膜结构,含有丰富的细菌表面抗原,因此在疫苗相关领域具有重要的研究价值。脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作为OMVs的主要结构,在诱导免疫活性的同时,也成为影响OMVs安全性的主要因素。因此,通过基因工程改造细菌LPS以生产安全高效的OMVs,是促进其生产应用的有效途径之一。【方法】以O抗原和大部分核心抗原缺失的明尼苏达沙门氏菌(Salmonella minnesota)Re595为研究对象,通过缺失酰基链编码基因msbB和导入新凶手弗朗西丝氏菌(Francisella novicida)磷酸酶基因lpxE,减少类脂A上的酰基链和磷酸基团,从而获得低毒LPS;提取亲本株与改造株LPS与OMVs,比较其刺激免疫细胞的炎性反应,以OMVs作为免疫增强剂制备口蹄疫灭活疫苗,评价免疫活性。【结果】Re595经LPS低毒改造成功降低该菌OMVs的内毒素活性和炎性反应,进一步评价亲本株Re595与低毒改造株的OMVs免疫活性发现,LPS低毒改造虽降低了OMVs的炎性反应,但其免疫增强活性显著提高。【结论】本研究说明LPS低毒改造后可降低细菌OMVs毒性,并提高其免疫增强活性,该结果将为OMVs作为免疫佐剂的应用提供理论依据。

关键词：外膜囊泡免疫佐剂脂多糖内毒素活性基因编辑

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CVC1302通过小鼠骨髓源树突状细胞对免疫反应的调控

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江苏农业学报 2023年第6期39卷 1380-1385页

作者：侯立婷于晓明杜露平张元鹏程海卫陈瑾郑其升侯继波江苏省农业科学院动物免疫工程研究所江苏南京210014 江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 兽用生物制品<泰州>国泰技术创新中心江苏泰州225300 省部共建国家重点实验室培育基地——江苏省食品质量安全重点实验室江苏南京210014

为获得C57BL/6小鼠骨髓源树突状细胞(DC)的体外制备方法并探讨免疫增强剂CVC1302对DC免疫调控的影响,取8周龄的C57BL/6小鼠骨髓细胞,在体外经过重组鼠源粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子(Recombinant mouse granulocyte-macrophage colony-s... 详细信息

为获得C57BL/6小鼠骨髓源树突状细胞(DC)的体外制备方法并探讨免疫增强剂CVC1302对DC免疫调控的影响,取8周龄的C57BL/6小鼠骨髓细胞,在体外经过重组鼠源粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子(Recombinant mouse granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, rm GM-CSF)诱导分化为DC。诱导当天与诱导第3 d、第7 d时,用倒置显微镜观察细胞形态;诱导第7 d时,收获细胞,鉴定表型。利用流式细胞术评价CVC1302对DC表面分子表达水平的影响,用超高分辨率显微镜评价CVC1302对DC递呈抗原的影响,采用流式细胞术检测T淋巴细胞的活化数量,利用酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)方法检测T淋巴细胞活化后干扰素γ(IFN-γ)的分泌水平。结果表明,体外诱导的DC在显微镜下具有非常典型的树突状细胞形态,流式细胞术检测结果表明,经典的1型树突状细胞(Conventional type 1 dendritic cell, cDC1)和经典的2型树突状细胞(Conventional type 2 dendritic cell, cDC2)亚群均可检测到。CVC1302能够显著促进DC表面分子活化并且增强DC对鸡卵清白蛋白(OVA)抗原的递呈;CVC1302能够显著活化T淋巴细胞并且提高T淋巴细胞活化后IFN-γ的分泌水平。本研究利用rm GM-CSF成功在体外刺激诱导DC的产生,并证实了CVC1302在体外同样具有促进DC成熟、DC对OVA抗原的递呈及T淋巴细胞活化的能力。

关键词： C57BL/6小鼠树突状细胞 CVC1302 抗原递呈 T淋巴细胞活化

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猪圆环病毒2型标签重组病毒构建和免疫试验

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中国农业科技导报 2018年第4期20卷 36-43页

作者：华涛唐波常晨刘国阳张雪花于漾侯继波张道华江苏省农业科学院动物免疫工程研究所省部共建国家重点实验室培育基地-江苏省食品质量安全重点实验室南京210014 江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009

猪圆环病毒2型(PCV2)能引起断奶仔猪衰竭综合症,为了获得利于纯化的病毒和新型标记疫苗,采用病毒重组技术,选择利于纯化的6个氨基酸His标签作为标记表位,插入PCV2 Cap蛋白C端,拯救获得重组标记病毒rPCV2-His。间接免疫荧光和Western blo... 详细信息

猪圆环病毒2型(PCV2)能引起断奶仔猪衰竭综合症,为了获得利于纯化的病毒和新型标记疫苗,采用病毒重组技术,选择利于纯化的6个氨基酸His标签作为标记表位,插入PCV2 Cap蛋白C端,拯救获得重组标记病毒rPCV2-His。间接免疫荧光和Western blot鉴定结果证明重组病毒所含的标签能稳定表达。通过镍柱纯化重组病毒,该病毒获得了纯化。纯化的重组病毒灭活后免疫小鼠,PCV2特异抗体显著提升,且能产生标记免疫抗体,小鼠攻毒显著降低体内PCV2含量。该重组病毒可作为PCV2新型疫苗研究重要材料。

关键词： PCV2 重组病毒纯化标记免疫

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乙型脑炎病毒感染猪睾丸细胞的miRNA表达谱差异分析

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南京农业大学学报 2019年第4期42卷 734-739页

作者：张元鹏杨占娜杨利李兰于晓明杜露平陈瑾侯立婷乔绪稳侯继波郑其升江苏省农业科学院动物免疫工程研究所/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京市栖霞区动物卫生监督所江苏南京210046 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 江苏省食品质量安全重点实验室/省部共建国家重点实验室培育基地江苏南京210014

[目的]本试验旨在分析乙型脑炎病毒(JEV)感染猪睾丸(ST)细胞和正常ST细胞miRNA差异表达谱,以探索miRNA在JEV感染过程中的作用及其调控机制。[方法]分别提取正常ST细胞和JEV感染8h后的ST细胞总RNA,利用高通量测序技术检测分析ST细胞中的m... 详细信息

[目的]本试验旨在分析乙型脑炎病毒(JEV)感染猪睾丸(ST)细胞和正常ST细胞miRNA差异表达谱,以探索miRNA在JEV感染过程中的作用及其调控机制。[方法]分别提取正常ST细胞和JEV感染8h后的ST细胞总RNA,利用高通量测序技术检测分析ST细胞中的miRNA表达谱并进行差异分析。使用miRanda软件对表达差异显著miRNA的靶基因进行预测并对靶基因进行GO分析。选取6个显著性差异表达的miRNA通过RT-qPCR进行验证。[结果]与正常ST细胞相比,JEV感染后的ST细胞有112个差异表达miRNA,其中80个miRNA上调表达,32个miRNA下调表达。经RT-qPCR方法验证6个差异表达的miRNA结果与高通量测序结果一致。差异表达miRNA靶基因的生物学功能相对集中在细胞代谢、细胞黏附等生物过程。[结论]检测和分析JEV感染后猪睾丸细胞的miRNA表达谱,获得了大量的与JEV感染相关的miRNA表达谱数据,为揭示JEV感染生殖系统致病机制提供了有效的数据和理论基础。

关键词：乙型脑炎病毒猪睾丸细胞 miRNA 高通量测序

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育秧基质与土配比对水稻秧苗素质及光合生理的影响

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江苏农业科学 2017年第13期45卷 57-59页

作者：陈虞雯王子臣周炜王鑫朱普平丁艳峰南京农业大学江苏南京210095 江苏省农业科学院种质资源与生物技术研究所江苏南京210014 江苏省农业科学院循环农业研究中心/省部共建国家重点实验室培育基地-江苏省食品质量安全重点实验室江苏南京210014 江苏省现代作物生产协同创新中心江苏南京210095

为研究育秧基质与土不同配比对水稻秧苗素质的影响,采用盆栽试验,设置了100%基质、75%基质+25%土壤、50%基质+50%土壤、25%基质+75%土壤、100%土壤5个处理,测定不同处理水稻秧苗素质,并从生理角度和光合作用层面进行了秧苗健壮程度对比... 详细信息

为研究育秧基质与土不同配比对水稻秧苗素质的影响,采用盆栽试验,设置了100%基质、75%基质+25%土壤、50%基质+50%土壤、25%基质+75%土壤、100%土壤5个处理,测定不同处理水稻秧苗素质,并从生理角度和光合作用层面进行了秧苗健壮程度对比分析。结果表明:75%基质+25%土壤处理秧苗素质最佳,其成秧率、叶龄、叶宽、株高、地上部干质量、根系干质量等均高于其他处理,秧苗综合生理指标及光合作用功能也表现为75%基质+25%土壤处理优于其他处理。

关键词：育秧基质秧苗素质光合作用水稻

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