检索结果-内蒙古大学图书馆

中国农业科学 2005年第6期38卷 1264-1269页

作者：李明何孔旺陆承平南京农业大学/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏省农业科学院兽医研究所/农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室南京农业大学/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所/农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室南京210014 南京210014 南京210095

根据猪链球菌2型(Streptococcussuistype2,SS2)溶菌酶释放蛋白(muramidase-releasedprotein,MRP)和胞外蛋白因子(extracellularproteinfactor,EPF)的基因序列,各设计合成一对引物,以猪链球菌2型江苏分离株SS2-1的基因组为模板,扩增mrp基因1801~2513位序列和epf基因1783~2563位序列,分别构建原核表达载体pET32a-mrp、pET32a-epf,确定诱导表达的两种蛋白都具有免疫原性后,提取阳性克隆质粒各自进行双酶切并纯化,通过PCR串联两片段,将目的片段定向克隆到表达载体pET-32a中,重组质粒转化入大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达分子量约为74kD的融合蛋白。用制备的两种抗血清与纯化融合蛋白进行免疫转印,结果显示融合蛋白分别具有MRP与EPF的中和表位。用融合蛋白MRP-EPF免疫新西兰兔,以最小致死量猪链球菌强毒株SS2-1攻击,兔的存活率达50%(2/4),存活率明显高于单个表达产物。证实串联表达的融合蛋白为重要的保护性抗原。

关键词：猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白胞外蛋白因子融合表达中和表位

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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌转铁结合蛋白2基因克隆、序列分析及表达

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农业生物技术学报 2005年第2期13卷 175-178页

作者：王芳何孔旺江苏省农业科学院兽医研究所农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室南京210014

参照猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacilluspleuropneumoniae)血清5型菌株序列Z46774设计1对特异性引物,用PCR方法扩增转铁结合蛋白2(Tbp2)基因,得到1条1624bp的片段,然后克隆到pMD18-T载体中,经测序比较,与参考序列的核苷酸同源性达... 详细信息

参照猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacilluspleuropneumoniae)血清5型菌株序列Z46774设计1对特异性引物,用PCR方法扩增转铁结合蛋白2(Tbp2)基因,得到1条1624bp的片段,然后克隆到pMD18-T载体中,经测序比较,与参考序列的核苷酸同源性达99.8%,从T-载体中切下目的片段后,定向克隆到pET32a(+)中,转化大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21(DE3),经诱导后,SDS-PAGE电泳,Tbp2高效表达,Western-blotting鉴定呈阳性。

关键词：胸膜肺炎放线杆菌转铁结合蛋白2 克隆序列分析表达

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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素I基因的克隆、序列分析及表达

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中国预防兽医学报 2006年第2期28卷 121-123页

作者：王芳何孔旺邱索平彭小华倪艳秀张雪寒郭容利俞正玉江苏省农业科学院兽医研究所农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室江苏南京210014

参照猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清型Ⅰ菌株序列设计了一对特异性引物,用PCR方法扩增毒素Ⅰ基因,得到约920bp的片段,与参考序列的核苷酸同源性达99.3%,定向克隆到pET32a(+)中,转化BL21(DE3)

关键词：胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅰ 表达

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猪链球菌2型溶血素基因的检测及其序列分析

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中国兽医科技 2002年第11期32卷 11-14页

作者：倪艳秀何孔旺何家惠王继春吕立新江苏省农业科学院兽医研究所农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室江苏南京210014

根据猪链球菌 2型的溶血素基因合成了一对可扩增长度为 14 96bp目的片段的引物 ,建立了检测溶血素基因的PCR方法。该方法对猪链球菌 2型参考株SS2 N株的检测结果为阳性 ,对马链球菌兽疫亚种 (C群 )参考株ATCC3 5 2 46、分离株SESZ Y、S... 详细信息

根据猪链球菌 2型的溶血素基因合成了一对可扩增长度为 14 96bp目的片段的引物 ,建立了检测溶血素基因的PCR方法。该方法对猪链球菌 2型参考株SS2 N株的检测结果为阳性 ,对马链球菌兽疫亚种 (C群 )参考株ATCC3 5 2 46、分离株SESZ Y、SESZ T、SESZ C和猪葡萄球菌、大肠埃希氏菌的检测结果均为阴性 ;用EcoRⅠ内切酶进行酶切 ,获得了与预期结果一致的 863bp和 63 3bp的 2个片段。经对SS2 1株的PCR产物进行测序及序列分析 ,表明其与 193 3株、P1/ 7株的核苷酸同源性分别为 99.7%和 10 0 %。

关键词：猪链球菌2型溶血素基因检测序列分析人畜共患病 PCR方法

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肠毒素性大肠杆菌mSTⅠ-linker-LTB融合蛋白的表达及免疫保护试验

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农业生物技术学报 2007年第3期15卷 383-387页

作者：倪艳秀何孔旺俞正玉张雪寒王芳郭容利江苏省农业科学院兽医研究所农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室南京210014

用分子生物学方法拼接成肠毒素性大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)mSTⅠ-linker-LTB融合基因,并定向克隆到pET-32α(+)中,转化宿主菌(***)BL21(DE3)。重组菌经1mmolLIPTG诱导,在30℃下,5h时表达产物(分子量约为37kD)达到高峰,表达量约占菌体总蛋白30%。表达产物主要存在包涵体中,经Westernblot鉴定呈阳性。乳鼠胃内接种实验证明,融合蛋白无野生型STⅠ的生物毒性。将融合蛋白与矿物油乳化后免疫ICR小鼠,对K88、K99、987P和F41的保护率分别为83.3%、100%、66.7%和66.7%。

关键词：肠毒素性大肠杆菌 mSTⅠ-linker-LTB融合基因表达免疫保护

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流行性乙型脑炎病毒E基因的克隆、表达及初步应用

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中国病毒学 2005年第5期20卷 494-497页

作者：张雪寒何孔旺郭容利倪艳秀王芳俞正玉江苏省农业科学院兽医研究所农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室江苏南京210014

参照GenBank中的日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)SA14-14株序列设计了一对特异性引物,用PCR方法从SA14-14扩增E基因全长,然后克隆到pMD18-T载体中,转化宿主菌DH5a,提取阳性克隆质粒进行双酶切鉴定,将目的片段定向克... 详细信息

参照GenBank中的日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)SA14-14株序列设计了一对特异性引物,用PCR方法从SA14-14扩增E基因全长,然后克隆到pMD18-T载体中,转化宿主菌DH5a,提取阳性克隆质粒进行双酶切鉴定,将目的片段定向克隆到pET32a(+)中,转化入BL21(DE3),经IPTG诱导可表达分子量约73ka的蛋白,Western blotting试验呈阳性,表明E基因得到表达。以纯化的表达产物为核心抗原,猪抗JEV血清为一抗,HRP标记羊抗猪IgG抗体为二抗建立间接ELISA方法,并初步检测了一些血清样品,结果提示表达的蛋白具有很好的应用开发价值。

关键词：乙型脑炎病毒 E基因表达间接ELISA

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鸡腺胃型传染性支气管炎病毒金坛分离株核蛋白基因分析及与标准强毒株同源性比较

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中国兽医学报 2002年第2期22卷 111-113页

作者：凌雯钱建飞李银张则斌潘杰彦陈溥言江苏省农业科学院畜牧兽医研究所农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

根据已发表的鸡传染性支气管炎病毒 (infectious bronchitis virus,IBV) Beau株、M41株的核苷酸序列 ,设计并合成 1对引物。应用该引物 ,通过 RT- PCR扩增出 IBV金坛分离株 (JT株 )的核蛋白基因 (N基因 ) ,片段大小为 82 8bp,与设计相... 详细信息

根据已发表的鸡传染性支气管炎病毒 (infectious bronchitis virus,IBV) Beau株、M41株的核苷酸序列 ,设计并合成 1对引物。应用该引物 ,通过 RT- PCR扩增出 IBV金坛分离株 (JT株 )的核蛋白基因 (N基因 ) ,片段大小为 82 8bp,与设计相符。对 JT株的 N基因进行序列测定 ,并与标准毒株 KB85 2 3、CU - T2、Beau和 M41的 N基因进行同源性比较 ,结果表明 ,JT株与 KB85 2 3、CU- T2、Beau和 M41毒株的 N基因同源性分别为 87%、87%、86 %和 85 %,说明 JT株与标准毒株在 N基因上存在一定的差异。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒核蛋白基因序列测定同源性鸡腺胃型标准强毒株

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猪链球菌病双重PCR诊断方法的建立

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中国兽医科学 2007年第8期37卷 700-704页

作者：马清霞何孔旺陆承平南京农业大学动物医学院江苏省农业科学院兽医研究所农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室江苏南京210014

根据猪链球菌2型荚膜多糖和马链球菌兽疫亚种类M蛋白的保守区序列分别设计了2对简并引物,建立了一种能同时检测猪链球菌2型和马链球菌兽疫亚种的双重PCR方法。结果显示,该双重PCR能从100个细菌的混合纯培养物中扩增出2条目的片段。而且... 详细信息

根据猪链球菌2型荚膜多糖和马链球菌兽疫亚种类M蛋白的保守区序列分别设计了2对简并引物,建立了一种能同时检测猪链球菌2型和马链球菌兽疫亚种的双重PCR方法。结果显示,该双重PCR能从100个细菌的混合纯培养物中扩增出2条目的片段。而且可以直接从病料组织中检测到相应的病原菌。用建立的双重PCR方法和细菌分离培养法平行检测人工感染的组织病料,PCR方法与细菌培养法的阳性检出率基本一致,但PCR方法的特异性好、敏感性高,简便易行,可以用于猪链球菌病的流行病学调查和实验室的快速鉴别诊断。

关键词：猪链球菌2型马链球菌兽疫亚种双重PCR

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Ghrelin对大鼠胃黏膜上皮细胞胃酸分泌的调节作用

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世界华人消化杂志 2009年第34期17卷 3486-3490页

作者：杜改梅刘茂军陈钟鸣金陵科技学院动物科学与技术学院江苏省南京市210038 江苏省农业科学院兽医研究所农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室江苏省南京市210014

目的:探讨Ghrelin对胃外分泌功能的作用.方法:从断奶大鼠中获得新鲜胃黏膜组织.分离培养胃黏膜上皮细胞,培养30h后,实验组换为分别含有1×10-4、1×10-3、1×10-2和1×10-1μmol/LGhrelin的新鲜培养液,对照组换为不含Gh... 详细信息

目的:探讨Ghrelin对胃外分泌功能的作用.方法:从断奶大鼠中获得新鲜胃黏膜组织.分离培养胃黏膜上皮细胞,培养30h后,实验组换为分别含有1×10-4、1×10-3、1×10-2和1×10-1μmol/LGhrelin的新鲜培养液,对照组换为不含Ghrelin的正常新鲜培养液.继续培养4h,收集培养液和细胞,分别测定细胞的相对活性(MTT法)、培养液中胃蛋白酶活性、细胞中H+-K+-ATPasemRNA表达和活性.结果:实验组中细胞的相对活性与对照组相比没有发生明显的变化;1×10-3μmol/LGhrelin可显著提高胃蛋白酶的活性(P<0.05).1×10-3μmol/LGhrelin可显著增加细胞中H+-K+-ATPasemRNA的表达(P<0.05),1×10-4和1×10-3μmol/LGhrelin明显增加了胃黏膜上皮细胞中H+-K+-ATPase的活性(均P<0.05).结论:Ghrelin体外作用于胃黏膜上皮细胞可刺激胃蛋白酶和胃酸的分泌.

关键词： Ghrelin 胃黏膜上皮细胞大鼠胃蛋白酶 H+-K+-ATPase

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4株猪链球菌2型分离株主要毒力因子(MRP、EF)的全基因序列分析

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江苏农业学报 2007年第3期23卷 204-207页

作者：倪艳秀段志涛何孔旺陆承平江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物畜禽疫病诊断重点开放实验室江苏南京210014 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

猪链球菌2型（SS2）是一种重要的人兽共患病病原菌，溶菌酶释放蛋白（MRP）和胞外因子（EF）是其重要的2种毒力因子。参照GenBank上已发表的MRP和EF基因序列，设计引物，对4株国内SS2分离株进行MRP和EF全基因序列测定并进行分析。结果... 详细信息

猪链球菌2型（SS2）是一种重要的人兽共患病病原菌，溶菌酶释放蛋白（MRP）和胞外因子（EF）是其重要的2种毒力因子。参照GenBank上已发表的MRP和EF基因序列，设计引物，对4株国内SS2分离株进行MRP和EF全基因序列测定并进行分析。结果表明：4株SS2国内分离株MRP基因的完整开放阅读框（ORF）都为3771bp、编码1256个氨基酸，EF基因的完整ORF都为2532bp，编码843个氨基酸；与国外参考株D282之间的MRP核苷酸和蛋白质的同源性都为99．9％。EF核苷酸的同源性为99．9％、蛋白质的同源性为99．5％～100．0％。

关键词：猪链球菌2型 MRP基因 EF基因序列分析

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