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畜牧兽医学报 2016年第3期47卷 574-580页

作者：徐杰赵为民任守文赵芳周艳红李惠侠方晓敏南京农业大学动物科技学院南京210095 江苏省农业科学院畜牧研究所动物品种改良和繁育重点实验室南京210014

为研究猪CYP1A1基因表达变化对肺炎支原体感染的影响,探讨CYP1A1与过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)在肺炎支原体感染炎性反应过程中的作用关系,通过基因克隆及真核表达载体构建,获得猪CYP1A1基因全长编码序列真核载体,借助细胞... 详细信息

为研究猪CYP1A1基因表达变化对肺炎支原体感染的影响,探讨CYP1A1与过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)在肺炎支原体感染炎性反应过程中的作用关系,通过基因克隆及真核表达载体构建,获得猪CYP1A1基因全长编码序列真核载体,借助细胞转染和抗性筛选技术获取稳定表达CYP1A1基因的猪肺泡巨噬细胞系,构建猪肺炎支原体细胞感染实验模型,分析炎症反应前后CYP1A1与PPAR-γ间的表达变化关系。结果显示:在肺炎支原体感染PAM细胞的炎性反应过程中,PPAR-γ与CYP1A1表达呈明显的正相关,并参与炎症调控,揭示猪肺炎支原体感染过程中CYP1A1基因可通过调控PPAR-γ发挥抑炎作用。

关键词：猪 CYP1A1 PPAR-γ 支原体肺炎炎症反应

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肌肉中特异表达真核载体的构建及表达特异性验证

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江苏农业学报 2016年第6期32卷 1359-1366页

作者：赵为民任守文方晓敏李碧侠涂枫付言峰赵芳王学敏江苏省农业科学院畜牧研究所/动物品种改良和繁育重点实验室江苏南京210014

为构建肌肉中特异表达真核载体,本试验以PGL4.10质粒为骨架,利用基因合成、酶切连接方法获得重组载体,同时利用红色荧光蛋白基因DsRed2作为标记基因来检测重组载体在非肌源细胞和肌细胞中的表达情况。结果表明,成功构建了含有肌球蛋白... 详细信息

为构建肌肉中特异表达真核载体,本试验以PGL4.10质粒为骨架,利用基因合成、酶切连接方法获得重组载体,同时利用红色荧光蛋白基因DsRed2作为标记基因来检测重组载体在非肌源细胞和肌细胞中的表达情况。结果表明,成功构建了含有肌球蛋白轻链基因MLC启动子及其增强子的肌肉中特异表达载体,通过mRNA和蛋白水平检测,该表达载体在非肌源性细胞和肌细胞中均不表达DsRed2,只在分化的肌细胞中表达DsRed2。该表达载体的构建为制备肌肉中特异表达的转基因动物奠定了基础。

关键词：肌肉表达载体 MLC 启动子 DsRed2 肌细胞

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益生菌对载鸭水体和产蛋性能的影响及其分子机制

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中国农业科学 2015年第11期48卷 2262-2269页

作者：应诗家许爱红戴子淳郗正林何宗亮匡伟赵伟吴云良施振旦江苏省农业科学院畜牧研究所/动物品种改良和繁育重点实验室南京市畜牧家禽科学研究所

【目的】研究饲粮添加芽孢杆菌和载鸭水体应用光合细菌对载鸭水体和鸭产蛋性能的影响及其分子机制。【方法】采用"地面平养+水池"养殖模式,以2×2因子试验设计,选择同批次连城白鸭和樱桃谷鸭杂交后代蛋鸭240只,随机分为4... 详细信息

【目的】研究饲粮添加芽孢杆菌和载鸭水体应用光合细菌对载鸭水体和鸭产蛋性能的影响及其分子机制。【方法】采用"地面平养+水池"养殖模式,以2×2因子试验设计,选择同批次连城白鸭和樱桃谷鸭杂交后代蛋鸭240只,随机分为4组,每组6个重复,每个重复10只,每个重复独立一栏。两处理因子分别为饲粮添加有效活菌含量为8×107 cfu/kg的枯草芽孢杆菌和载鸭水体应用光合细菌至水体有效活菌含量为1.8×1012 cfu/m3。对照组为不应用芽孢杆菌和光合细菌,光合组为只应用光合细菌,芽孢组为只添加芽孢杆菌,联合组为既添加芽孢杆菌又应用光合细菌。预饲7 d,试验期120 d。试验期间统计每10 d的平均产蛋率、平均采食量和平均料蛋比;每10 d采集水样用于检测大肠杆菌和沙门+志贺氏菌数量;每15 d采集水样和血样用于检测内毒素浓度。试验结束时,采集新鲜粪样用于检测大肠杆菌和沙门+志贺氏菌数量;取十二指肠、空肠和回肠黏膜用于检测内毒素水平;取空肠、回肠和脾脏组织用于炎症和凋亡相关基因表达。试验鸭自由饮用池水、自由采食、自然光照。水体和血液内毒素、采食量、产蛋率、料蛋比、水体大肠杆菌和沙门+志贺氏菌数据采用重复测量的线性混合模型分析,LSD修正法多重比较。粪便微生物数量、肠道黏膜内毒素水平和组织基因表达数据采用单因子方差分析,Duncan法多重比较。【结果】芽孢杆菌和光合细菌不显著影响鸭采食量(P>0.05)、空肠Caspase-3和Bcl-2 m RNA表达(P>0.05)、回肠Bcl-2 m RNA表达(P>0.05)、以及脾脏IL-1βm RNA表达(P>0.05),但芽孢杆菌和光合细菌显著提高蛋鸭产蛋率(P<0.001),显著降低蛋鸭料蛋比(P<0.001)、载鸭水体(P<0.001)、十二指肠(P<0.01)和回肠(P<0.01)内毒素浓度、粪便大肠杆菌数(P<0.001)、空肠TLR4(P<0.05)和回肠Caspase-3(P<0.05)m RNA表达水平。采食量、产蛋率、料蛋比、水体大肠杆菌、沙门+志贺氏菌和内毒素水平存在显著的时间效应(P<0.001)。与芽孢组和联合组相比,对照组和光合组血液内毒素和粪便沙门+志贺氏菌数量显著提高,对照组空肠黏膜内毒素水平、载鸭水体沙门+志贺氏菌数量以及脾脏TNF-αm RNA表达水平显著提高。联合组水体大肠杆菌数量显著低于对照组、光合组和芽孢组。仅联合组回肠TLR4 m RNA表达水平显著低于对照组,脾脏IL-10m RNA表达水平显著高于对照组。【结论】芽孢杆菌和光合细菌可能通过降低载鸭水体革兰氏阴性菌数量和内毒素水平、降低肠道和血液内毒素浓度、降低炎症反应和肠道细胞凋亡,提高蛋鸭产蛋性能。

关键词：蛋鸭产蛋性能光合细菌芽孢杆菌内毒素

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湖羊NR5A1基因SNPs筛选及其与产羔数的关联分析

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江苏农业学报 2017年第1期33卷 124-132页

作者：李隐侠张俊钱勇孟春花王慧利钟声曹少先江苏省农业科学院畜牧研究所江苏南京210014 江苏省农业科学院动物品种改良和繁育重点实验室江苏南京210014

为探讨NR5A1基因能否作为湖羊产羔性状的候选基因,同时寻找与湖羊繁殖性能相关的分子标记,以高繁殖力湖羊为研究对象,采用DNA池结合测序方法筛选NR5A1基因在湖羊中的SNPs位点,并利用PCR-RFLP和AS-PCR方法进行多态位点分型,利用SPSS软件... 详细信息

为探讨NR5A1基因能否作为湖羊产羔性状的候选基因,同时寻找与湖羊繁殖性能相关的分子标记,以高繁殖力湖羊为研究对象,采用DNA池结合测序方法筛选NR5A1基因在湖羊中的SNPs位点,并利用PCR-RFLP和AS-PCR方法进行多态位点分型,利用SPSS软件分析不同基因型与湖羊产羔数的相关性。结果表明,在湖羊NR5A1基因中检测到6个SNPs位点,分析发现g.6052A/G位点为Taq I酶切位点,其余5个位点处没有酶切位点存在。在湖羊群体中,g.3362G/C(GG、GC、CC)、g.4342G/A(GG、GA、AA)、g.4666C/T(CC、CT、TT)、g.6052A/G(GG、AG、AA)和g.6991T/G(TT、TG、GG)位点均检测到3种基因型,而g.5699C/G位点在湖羊群体中仅发现2种基因型GG和GC。6个位点的多态信息含量(PIC)从0.306到0.375不等,均属于中度多态(0.25

关键词：湖羊 NR5A1基因 SNPs PCR-RFLP AS-PCR 关联分析

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母鸡饲粮添加肌苷酸对种蛋品质、1～21日龄子代肉鸡生长性能和血清生化指标的影响

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动物营养学报 2017年第5期29卷 1610-1617页

作者：刘培峰闫俊书宦海琳周维仁徐良梅徐小明施振旦江苏省农业科学院畜牧研究所动物品种改良与繁育重点实验室南京210014 东北农业大学动物科学技术学院哈尔滨150030

本试验旨在研究母鸡饲粮中添加不同水平肌苷酸(IMP)对种蛋品质、1~21日龄子代肉鸡生长性能和血清生化指标的影响。选取20周龄健康爱拔益加(Arbor Acres)肉鸡480只,随机分为对照组(基础饲粮)、Ⅰ组(基础饲粮+0.2%肌苷酸)、Ⅱ组(基础饲粮+... 详细信息

本试验旨在研究母鸡饲粮中添加不同水平肌苷酸(IMP)对种蛋品质、1~21日龄子代肉鸡生长性能和血清生化指标的影响。选取20周龄健康爱拔益加(Arbor Acres)肉鸡480只,随机分为对照组(基础饲粮)、Ⅰ组(基础饲粮+0.2%肌苷酸)、Ⅱ组(基础饲粮+0.5%肌苷酸)和Ⅲ组(基础饲粮+1.0%肌苷酸)。出壳后的子代肉鸡随机选取480只,根据其母鸡饲粮中肌苷酸添加情况相应分为对照组、Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组,每组6个重复,每个重复20只鸡。试验期21 d。结果表明:与对照组相比,各试验组32周龄末母鸡的种蛋品质指标、1~21日龄子代肉鸡的生长性能指标和血清蛋白质代谢及酶活性相关指标均无显著差异(P>0.05)。与对照组相比,Ⅲ组21日龄子代肉鸡的血清高密度脂蛋白胆固醇(HLD-C)含量显著升高(P<0.05),各试验组的血清总胆固醇(T-CHO)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量无显著差异(P>0.05)。与对照组相比,Ⅱ组和Ⅲ组21日龄子代肉鸡的血清三碘甲状腺原氨酸(T_3)含量显著升高(P<0.05),Ⅱ组的血清甲状腺素(T4)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)含量显著升高(P<0.05),各试验组的血清生长激素(GH)含量无显著差异(P>0.05)。与对照组相比,Ⅲ组21日龄子代肉鸡的血清免疫球蛋白M(Ig M)、白细胞介素2(IL-2)和白细胞介素6(IL-6)含量有上升趋势(P>0.05)。以上结果表明,母鸡饲粮添加肌苷酸增强了子代肉鸡体内的脂质代谢,提高了子代肉鸡血清生长与免疫相关激素水平和免疫因子含量;综合种蛋品质、生长性能及血清生化指标,母鸡饲粮添加0.5%~1.0%肌苷酸效果最佳。

关键词：肌苷酸母体效应生长性能种蛋品质血清生化指标

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山羊Kiss-1基因克隆、表达模式和SNPs筛选

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江苏农业学报 2016年第1期32卷 151-157页

作者：李隐侠张俊钱勇孟春花王慧利钟声曹少先江苏省农业科学院畜牧研究所/江苏省农业科学院动物品种改良和繁育重点实验室江苏南京210014

Kiss-1在雌性动物生殖过程中发挥重要的作用。为了探讨其在山羊中的功能,本研究以波尔山羊、苏淮山羊新品系和海门山羊为研究对象,通过PCR扩增、测序和序列拼接获得Kiss-1基因编码区序列,利用生物信息学软件分析山羊Kiss-1基因序列特征,... 详细信息

Kiss-1在雌性动物生殖过程中发挥重要的作用。为了探讨其在山羊中的功能,本研究以波尔山羊、苏淮山羊新品系和海门山羊为研究对象,通过PCR扩增、测序和序列拼接获得Kiss-1基因编码区序列,利用生物信息学软件分析山羊Kiss-1基因序列特征,RT-PCR试验鉴定其在山羊中的组织表达模式,采用DNA池测序筛选Kiss-1基因编码区SNPs位点。结果发现3种山羊Kiss-1基因编码区序列长度均为408 bp,编码135个氨基酸残基;海门山羊与苏淮山羊新品系Kiss-1核苷酸序列一致性为100%,与波尔山羊的一致性为98.80%;系统进化发育分析发现海门山羊与苏淮山羊新品系首先聚在一起,然后再与波尔山羊聚在一起;组织表达谱显示Kiss-1基因在肺脏中表达量相对较高,在其他内脏和肌肉组织中表达量很少;DNA池测序发现2个SNPs位点,其中A175C位点突变引起了苏氨酸到脯氨酸的突变,G256A位点突变引起了丙氨酸到苏氨酸的改变。研究结果为进一步研究山羊Kiss-1基因的进化、功能及其与生产性能特别是繁殖性能的关系提供一定的理论依据。

关键词：山羊 Kiss-1 基因克隆组织表达 SNPs

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生物发酵床对苏邮1号鸭生产性能和蛋品质及肉品质性状的影响

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中国畜牧杂志 2015年第17期51卷 64-69页

作者：林勇施振旦顾洪如汤业潮张胜富赵伟江苏省农业科学院畜牧研究所动物品种改良和繁育重点实验室江苏南京210014 江苏高邮鸭集团江苏高邮225601

试验旨在研究传统依水圈养、生物发酵床旱养2种不同饲养模式对苏邮1号鸭生产性能、鲜蛋与咸蛋品质以及肉品质的影响。选取50日龄苏邮1号鸭600羽,随机分为2组,分别为依水圈养组(对照组),发酵床旱养组(试验组)。结果表明:与对照相比,发酵... 详细信息

试验旨在研究传统依水圈养、生物发酵床旱养2种不同饲养模式对苏邮1号鸭生产性能、鲜蛋与咸蛋品质以及肉品质的影响。选取50日龄苏邮1号鸭600羽,随机分为2组,分别为依水圈养组(对照组),发酵床旱养组(试验组)。结果表明:与对照相比,发酵床旱养的苏邮1号鸭5%产蛋率日龄和50%产蛋率日龄分别极显著或显著提前12 d(P<0.01)和10 d(P<0.05),鸭蛋的平均蛋重显著提高(P<0.05),腿肌的亮度值显著下降(P<0.05),腿肌的红度值显著提高(P<0.05),胸肌剪切力显著提高(P<0.05),胸肌的滴水损失和蒸煮损失显著降低(P<0.05),腿肌的滴水损失显著提高(P<0.05)。研究结果揭示生物发酵床旱养不影响苏邮1号鸭产蛋性能,未对鸭蛋鲜蛋与咸蛋品质产生不利影响,解决了苏邮1号鸭规模饲养带来的环境污染问题。

关键词：鸭生产性能蛋品质肉品质

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波尔山羊MC4R胞内3环基因片段单核苷酸多态性对体重的影响

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江苏农业科学 2014年第3期42卷 13-15页

作者：张俊钱勇钟声孟春花王慧利曹少先江苏省农业科学院畜牧研究所/江苏省农业科学院动物品种改良和繁育重点实验室江苏南京210014

为探讨黑素皮质素受体4(melanocortin receptor-4,MC4R)基因多态性对波尔山羊生长性状的影响,对波尔山羊MC4R基因进行了克隆测序,筛选多态性位点。结果表明:MC4R胞内3环基因片段存在2个碱基颠换,分别是编码区663 bp处C/A颠换、693 bp处... 详细信息

为探讨黑素皮质素受体4(melanocortin receptor-4,MC4R)基因多态性对波尔山羊生长性状的影响,对波尔山羊MC4R基因进行了克隆测序,筛选多态性位点。结果表明:MC4R胞内3环基因片段存在2个碱基颠换,分别是编码区663 bp处C/A颠换、693 bp处C/T颠换;其中693 bp处C/T存在于Csp6Ⅰ酶切位点内,以此建立了基于Csp6Ⅰ酶切的PCR-RFLP检测方法,并对163只波尔山羊进行检测分析;在受检波尔山羊中检测到CC、CT 2种基因型,2种基因型在波尔山羊各月龄体重方面差异均不显著,且在群体中表现为低度多态,群体遗传杂合度较低,表明C693T位点在波尔山羊群体中的遗传一致性较高。

关键词：黑素皮质素受体4 克隆 PCR-RFLP 波尔山羊生长

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激活素A对大鼠肌细胞增殖分化的作用

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江苏农业科学 2016年第12期44卷 287-289页

作者：赵为民涂枫任守文方晓敏李碧侠赵芳付言峰王学敏江苏省农业科学院畜牧研究所/江苏省农业科学院动物品种改良和繁育重点实验室江苏南京210014

激活素A（ActivinA）是转化生长因子β（transforming/mLgrowthfactor-β,TGF-β）超家族中的-员,具有重要的生物学功能.为研究ActivinA在肌肉发育中的作用,以大鼠肌细胞L6为研究模型,通过时空表达谱、CCK-8以及流式细胞周期分析等方法... 详细信息

激活素A（ActivinA）是转化生长因子β（transforming/mLgrowthfactor-β,TGF-β）超家族中的-员,具有重要的生物学功能.为研究ActivinA在肌肉发育中的作用,以大鼠肌细胞L6为研究模型,通过时空表达谱、CCK-8以及流式细胞周期分析等方法来进行研究.结果表明ActivinA随着肌细胞由增殖转向分化状态,其表达量呈下降趋势.添加不同浓度的ActivinA（5～25ng/mL）均能显著促进L6细胞的增殖速度,且这种促进细胞增殖的效应随着ActivinA浓度的增大而逐渐增强.ActivinA能显著增加S期在细胞周期中的比例,同时缩短G1和G2期在细胞周期中所占的比例.此外,通过添加ActivinA显著抑制了肌肉分化标记基因Myog的表达.以上结果为进一步研究ActivinA在肌肉发育中的作用机制奠定了基础.

关键词：大鼠激活素A(ActivinA) 肌细胞增殖细胞周期

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重组猪抑制素的高密度发酵生产条件优化

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江苏农业科学 2015年第8期43卷 207-210页

作者：李辉翟颖超施振旦江苏省农业科学院畜牧研究所/江苏省农业科学院动物品种改良和繁育重点实验室江苏南京210014

抑制素(INH)是性腺组织分泌的一种糖蛋白,可通过抑制促卵泡素分泌和性腺组织发育,在动物繁殖活动中起着重要的调控作用。通过对INHα亚基免疫,中和动物体内的INH,可解除INH对动物繁殖活动的抑制作用,从而提高动物的繁殖力。为获得大量... 详细信息

抑制素(INH)是性腺组织分泌的一种糖蛋白,可通过抑制促卵泡素分泌和性腺组织发育,在动物繁殖活动中起着重要的调控作用。通过对INHα亚基免疫,中和动物体内的INH,可解除INH对动物繁殖活动的抑制作用,从而提高动物的繁殖力。为获得大量重组的INHα亚基蛋白,满足生产的需要,本研究对发酵罐高密度发酵工艺进行探索,并分别对发酵培养基的类型、乳糖诱导浓度、诱导时间进行优化。结果表明,采用TB培养基发酵至20 h,菌体D600 nm值达到最大,为22.84,菌体总湿质量为25.48 g/L,显著高于其他2种培养基,综合比较细菌生长趋势、菌体总湿质量以及培养基成本等因素,TB培养基较适用于重组INH的发酵罐生产;终浓度为10 g/L的乳糖诱导5 h可达到最高蛋白表达量,占菌体总蛋白的50%以上,发酵结束时D600 nm值达到36,细菌总湿质量达到28.66 g/L。

关键词：抑制素高密度发酵乳糖诱导发酵罐

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