检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧兽医学报 2014年第6期45卷 879-884页

作者：李静心王慧利孟春花张庆晓蒋进王婧曹少先江苏省农业科学院畜牧研究所南京210014 南京农业大学动物科技学院南京210095 江苏省农业科学院动物品种改良和繁育重点实验室南京210014

旨在构建基于GFP报告基因的ZFN真核细胞筛选体系,为ZFN的筛选提供一种直观、准确、灵敏的方法。以pEGFP-N1为基础,去除EGFP基因的起始密码子后在多克隆位点上游插入ATG,构建筛选体系的通用载体pEGFP-ATG。将ZFN的靶序列插入到通用载体E... 详细信息

旨在构建基于GFP报告基因的ZFN真核细胞筛选体系,为ZFN的筛选提供一种直观、准确、灵敏的方法。以pEGFP-N1为基础,去除EGFP基因的起始密码子后在多克隆位点上游插入ATG,构建筛选体系的通用载体pEGFP-ATG。将ZFN的靶序列插入到通用载体EGFP基因上游,且使起始密码子和EGFP基因处于不同ORF中,构建筛选载体pEGFP-728。将pEGFP-728转入Hela细胞中,G418筛选Hela-728细胞系,转染ZFN到Hela-728,48h内通过观察荧光判断ZFN是否有效,挑取荧光细胞进行PCR、测序验证靶序列的敲除。测序分析表明,通用载体pEGFP-ATG和含靶序列的筛选载体pEGFP-728序列完全正确;pEGFP-728转入Hela细胞中观察不到绿色荧光,说明靶序列插入后使EGFP发生移框;转染靶序列对应的ZFN到Hela-728中,48h观察到荧光的表达,说明ZFN有效;挑取6个荧光细胞单克隆,PCR、测序表明4个克隆靶序列发生缺失突变。锌指核酸酶真核细胞筛选体系构建成功。相对于其他方法本筛选体系更加准确、直观、灵敏,更适用于动植物等真核细胞的ZFN筛选,同时还可应用于TALEN和CAS9的筛选。

关键词：锌指核酸酶筛选通用载体绿色荧光蛋白真核细胞

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氨化对油菜秸秆营养成分及山羊瘤胃降解特性的影响

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动物营养学报 2016年第6期28卷 1796-1803页

作者：孟春花乔永浩钱勇王子玉王慧利曹少先江苏省农业科学院畜牧研究所南京210014 江苏省农业科学院动物品种改良和繁育重点实验室南京210014 南京农业大学动物科技学院南京210095

本试验旨在研究氨化对油菜秸秆营养成分及山羊瘤胃降解特性的影响。将粉碎的油菜秸秆用30%水和不同比例(10%、15%、20%)碳酸氢铵进行氨化处理,并于处理后7、14和21 d采集样品,与未氨化处理的油菜秸秆(对照)同时进行营养成分分析。然后... 详细信息

本试验旨在研究氨化对油菜秸秆营养成分及山羊瘤胃降解特性的影响。将粉碎的油菜秸秆用30%水和不同比例(10%、15%、20%)碳酸氢铵进行氨化处理,并于处理后7、14和21 d采集样品,与未氨化处理的油菜秸秆(对照)同时进行营养成分分析。然后采用尼龙袋法测定氨化和未氨化处理油菜秸秆的干物质(DM)、粗蛋白质(CP)、中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)的瘤胃降解率。结果表明:氨化后油菜秸秆CP含量增加,粗脂肪(EE)、NDF和ADF含量下降,DM、粗灰分含量基本保持不变。氨化组油菜秸秆DM和CP有效降解率均显著高于对照组(P<0.05);15%、20%碳酸氢铵氨化处理油菜秸秆ADF有效降解率均显著高于对照组(P<0.05)。综合得出,添加15%和20%碳酸氢铵氨化能显著提高油菜秸秆DM、CP和ADF的山羊瘤胃降解率,油菜秸秆经15%碳酸氢铵、30%水分条件下氨化处理效果最好、最经济。

关键词：油菜秸秆氨化瘤胃降解山羊

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波尔山羊黑素皮质素受体4C端基因单核苷酸多态性与体质量的关联分析

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江苏农业学报 2013年第6期29卷 1380-1385页

作者：张俊钱勇钟声孟春花王慧利李隐侠曹少先江苏省农业科学院畜牧研究所江苏南京210014 江苏省农业科学院动物品种改良和繁育重点实验室江苏南京210014

为了探讨黑素皮质素受体4(Melanocortin receptor-4,MC4R)基因多态性对波尔山羊生长性状的影响,对波尔山羊MC4R基因进行了克隆和测序,并利用建立的PCR-RFLP检测方法对164只波尔山羊的MC4R基因进行多态性检测。结果显示,在受检波尔山羊中... 详细信息

为了探讨黑素皮质素受体4(Melanocortin receptor-4,MC4R)基因多态性对波尔山羊生长性状的影响,对波尔山羊MC4R基因进行了克隆和测序,并利用建立的PCR-RFLP检测方法对164只波尔山羊的MC4R基因进行多态性检测。结果显示,在受检波尔山羊中,编码区A946C位点检测出2种基因型(AA和AC),且2种基因型间各月龄波尔山羊体质量差异均不显著(P>0.05);C986T位点检测出3种基因型(CC、CT和TT),CT型六月龄体质量和六月龄日增质量均极显著高于CC型(P<0.01),CT型周岁龄体质量和周岁日增质量均显著高于CC型(P<0.05)。表明MC4R基因C986T位点可以作为山羊体质量性状标记辅助选择的候选分子标记。

关键词：波尔山羊黑素皮质素受体4 PCR-RFLP 体质量

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乌骨绵羊NR5A2基因编码区序列克隆及特征分析

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江苏农业学报 2014年第6期30卷 1375-1382页

作者：李隐侠张俊李静心孟春花钱勇王慧利钟声曹少先江苏省农业科学院畜牧研究所江苏南京210014 江苏省农业科学院动物品种改良和繁育重点实验室江苏南京210014

为了研究NR5A2基因在乌骨绵羊中的序列特征,利用PCR和克隆测序技术获得乌骨绵羊NR5A2基因的外显子序列,用DNAMAN软件和DNAStar软件对序列进行比对和拼接、运用Clustal软件与其他物种相应序列进行同源比对分析,MEGA5.1软件用来构建哺乳动... 详细信息

为了研究NR5A2基因在乌骨绵羊中的序列特征,利用PCR和克隆测序技术获得乌骨绵羊NR5A2基因的外显子序列,用DNAMAN软件和DNAStar软件对序列进行比对和拼接、运用Clustal软件与其他物种相应序列进行同源比对分析,MEGA5.1软件用来构建哺乳动物NR5A2蛋白质系统进化树,用DNA池方法对其编码区序列的SNPs位点进行筛选。结果显示:乌骨绵羊NR5A2基因编码区全长1 488 bp,共编码495个氨基酸;乌骨绵羊的NR5A2基因编码区核苷酸序列与湖羊和牛的同源性分别为99.87%和85.51%;氨基酸序列的一致性分别为99.41%和89.66%。与湖羊相比,乌骨绵羊NR5A2基因编码区共发现3个单碱基突变(C1069A、C1419T和G1485A),其中C1069A位点突变引起了氨基酸的改变,从亮氨酸变为异亮氨酸。在乌骨绵羊的编码区现了一个单核苷酸突变位点G999C。

关键词：乌骨绵羊 NR5A2基因基因克隆序列分析单核苷酸多态性

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不同养殖模式对高邮鸭肉品质性状的影响

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江苏农业科学 2015年第12期43卷 232-234页

作者：赵伟林勇施振旦俞新鹏江苏省农业科学院畜牧研究所动物品种改良和繁育重点实验室江苏南京210014 江苏省沛县农业委员会江苏沛县221600

为了研究传统依水圈养、生物发酵床旱养对220日龄高邮鸭鸭肉品质的影响,选取60日龄的高邮鸭180羽,随机分为2组,分别为依水圈养组(对照组)和发酵床旱养组(试验组)。结果表明,与对照组相比,发酵床旱养220日龄高邮鸭胸肌的亮度值、滴水损... 详细信息

为了研究传统依水圈养、生物发酵床旱养对220日龄高邮鸭鸭肉品质的影响,选取60日龄的高邮鸭180羽,随机分为2组,分别为依水圈养组(对照组)和发酵床旱养组(试验组)。结果表明,与对照组相比,发酵床旱养220日龄高邮鸭胸肌的亮度值、滴水损失、蒸煮损失与腿肌的滴水损失均显著升高(P<0.05),腿肌的剪切力显著下降(P<0.05)。研究结果揭示了生物发酵床旱养模式对220日龄高邮鸭胸肌的肉色、系水力产生不利影响,可显著改善腿肌的嫩度值,但对其他肉品质性状未产生不利影响。

关键词：依水圈养发酵床旱养高邮鸭肉品质指标胸肌腿肌

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鸽子瘦素基因成熟肽重组蛋白的表达及多克隆抗体的制备

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江苏农业学报 2017年第1期33卷 155-158页

作者：雷明明邵西兵施振旦江苏省农业科学院畜牧研究所动物品种改良与繁育重点实验室江苏南京210014 广东省家禽研究所广东广州510643

根据鸽子瘦素基因(leptin)编码区序列(Gen Bank:HG797022)设计并合成鸽子leptin基因编码胞外域成熟肽的c DNA序列,然后将这段序列克隆到表达载体p GEX-4T-1的Eco R I与Not I酶切位点之间,构建重组表达载体(p GEX-4T-1-leptin)并将该载... 详细信息

根据鸽子瘦素基因(leptin)编码区序列(Gen Bank:HG797022)设计并合成鸽子leptin基因编码胞外域成熟肽的c DNA序列,然后将这段序列克隆到表达载体p GEX-4T-1的Eco R I与Not I酶切位点之间,构建重组表达载体(p GEX-4T-1-leptin)并将该载体转化到大肠杆菌Arctic Express中。转化菌经IPTG诱导后表达了分子量为44 270的鸽子leptin重组蛋白。经镍柱亲和层析纯化后的重组蛋白质与矿物油佐剂混合,免疫日本大耳白兔,制备抗leptin多克隆抗体。经过4次免疫之后,获得高效价的抗leptin多克隆抗体。

关键词：鸽子瘦素成熟肽序列克隆表达多克隆抗体

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鸡瘦素受体胞外域成熟肽重组蛋白质的表达以及多克隆抗体的制备

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江苏农业学报 2015年第5期31卷 1105-1109页

作者：雷明明吴思谦李孝伟施振旦江苏省农业科学院畜牧研究所动物品种改良和繁育重点实验室江苏南京210014 华南农业大学动物科学学院广东广州510642

根据鸡瘦素受体基因(LEPR)编码区序列(Gen Bank:NM_AB033383)设计并合成2对引物,以鸡肝脏c DNA为模板扩增鸡LEPR胞外域2段c DNA序列。然后将这2段序列克隆到表达载体pRSET-A的Bam H I和Hind III酶切位点之间,构建重组表达载体(pR-LEPR1... 详细信息

根据鸡瘦素受体基因(LEPR)编码区序列(Gen Bank:NM_AB033383)设计并合成2对引物,以鸡肝脏c DNA为模板扩增鸡LEPR胞外域2段c DNA序列。然后将这2段序列克隆到表达载体pRSET-A的Bam H I和Hind III酶切位点之间,构建重组表达载体(pR-LEPR1和pR-LEPR2)并转化大肠杆菌*** BL21(DE3)。转化菌在IPTG诱导后分别表达了分子量为2.62×104的LEPR1和分子量为2.86×104的LEPR2重组蛋白质。经凝胶NiNTA纯化后的重组蛋白质与矿物油佐剂混合免疫生长鸡,经过3次免疫之后,获得高效价的抗LEPR1和抗LEPR2抗血清。

关键词：瘦素受体成熟肽序列克隆和表达多克隆抗体

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发酵床对舍内环境质量和肉番鸭生产性能的影响

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畜牧兽医学报 2016年第6期47卷 1180-1188页

作者：应诗家张甜蓝赐华肖文权赵伟吴云良林勇施振旦江苏省农业科学院畜牧研究所动物品种改良和繁育重点实验室南京210014 华南农业大学动物科学学院广州510642 莆田广东温氏家禽有限公司莆田351254

旨在探究发酵床结合网床架养模式对舍内环境质量和肉番鸭生产性能的影响。本研究选择同批次30日龄番鸭6 000只,随机等份放入发酵床平养、网床架养和发酵床网养3种鸭舍。每隔10d分别在08:00、14:00和20:00时检测舍内有害气体、粉尘、气... 详细信息

旨在探究发酵床结合网床架养模式对舍内环境质量和肉番鸭生产性能的影响。本研究选择同批次30日龄番鸭6 000只,随机等份放入发酵床平养、网床架养和发酵床网养3种鸭舍。每隔10d分别在08:00、14:00和20:00时检测舍内有害气体、粉尘、气载内毒素和细菌浓度以及鸭生产性能。结果显示,鸭36、46、56和66日龄时,发酵床网养舍内NH_3、内毒素、总菌、大肠杆菌和"沙门+志贺"氏菌浓度显著低于发酵床平养(P<0.05)或网床架养(P<0.05),56日龄时的PM10浓度低于发酵床平养(P<0.05);08:00、14:00和20:00时,发酵床网养舍内NH_3、总菌、大肠杆菌和"沙门+志贺"氏菌浓度显著低于发酵床平养(P<0.05)或网床架养(P<0.05),14:00时的内毒素以及20:00时的CO_2和内毒素浓度低于发酵床平养(P<0.05)。发酵床网养番鸭的日增重高于发酵床平养(P<0.05),成活率和饲料利用率(P<0.05)均高于网床架养和发酵床平养。结果表明,发酵床网上养鸭模式比单纯的发酵床平养或网床架养模式能更好地改善舍内空气环境质量以及提高番鸭健康和生产性能。

关键词：肉番鸭舍内环境发酵床网养发酵床平养网床架养

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发酵床网养在肉鹅完全舍内饲养的应用研究

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中国家禽 2017年第18期39卷 40-44页

作者：戴子淳尉传坤杨智青金崇福施振旦江苏省农业科学院畜牧研究所动物品种改良和繁育重点实验室江苏南京210014 江苏沿海地区农业科学研究所江苏盐城224002

为研发肉鹅舍内养殖新技术,避免传统水禽生产造成的公共水体污染问题,研究开展了肉鹅的发酵床网上养殖试验,并与地面发酵床平养在舍内环境因子、生产性能和经济效益方面进行了对比。试验期为70 d。结果显示:随着肉鹅生长,舍内空气质量... 详细信息

为研发肉鹅舍内养殖新技术,避免传统水禽生产造成的公共水体污染问题,研究开展了肉鹅的发酵床网上养殖试验,并与地面发酵床平养在舍内环境因子、生产性能和经济效益方面进行了对比。试验期为70 d。结果显示:随着肉鹅生长,舍内空气质量逐渐下降;同一采样时间点,气载活菌数、空气脂多糖浓度以及粉尘含量,发酵床网养均显著或极显著低于地面发酵床平养(P<0.05或P<0.01)。出栏时,发酵床网上养殖鹅群死亡率为4.13%、体重变异系数为10.67%,分别低于地面发酵床平养的6.16%和13.57%,且前者净利润率高出发酵床平养9.47个百分点。研究表明:在较低的饲养密度下,发酵床网上养殖模式能提供更好的养殖环境,可成为肉鹅旱养的一种新模式。

关键词：地面发酵床平养发酵床网养空气质量生产性能

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家禽肌肉肌苷酸含量影响因素及其相关基因的研究进展

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中国家禽 2017年第10期39卷 41-46页

作者：闫俊书刘培峰施振旦江苏省农业科学院畜牧研究所动物品种改良与繁育重点实验室江苏南京210014 东北农业大学动物科学技术学院黑龙江哈尔滨150030

肌苷酸是影响肉质风味的重要物质基础,其鲜味呈味作用显著。家禽的品种、饲养方式、屠宰后的储藏条件以及日粮蛋能水平和饲料添加剂等是影响肌苷酸的含量主要因素。文章就肌苷酸的形成机理、影响因素及其相关基因的研究进展进行全面综述... 详细信息

肌苷酸是影响肉质风味的重要物质基础,其鲜味呈味作用显著。家禽的品种、饲养方式、屠宰后的储藏条件以及日粮蛋能水平和饲料添加剂等是影响肌苷酸的含量主要因素。文章就肌苷酸的形成机理、影响因素及其相关基因的研究进展进行全面综述,为家禽肉质风味研究提供借鉴与参考。

关键词：肌苷酸影响因素相关基因家禽

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