检索结果-内蒙古大学图书馆

江苏农业科学 2010年第4期38卷 362-365页

作者：周艳红丁衬衬史建荣江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所/农业部食品质量安全监控重点开放实验室/江苏省食品质量安全重点实验室江苏南京210014

土壤微生物的多样性是保持农业生态系统稳定的基础,而作物的改变对土壤微生物的多样性结构具有显著的影响。转基因作物被引入到农田后所带来的微生物群落变化及对农业生态系统所带来的不确定因素,已成为研究热点。本文着重介绍了当前土... 详细信息

土壤微生物的多样性是保持农业生态系统稳定的基础,而作物的改变对土壤微生物的多样性结构具有显著的影响。转基因作物被引入到农田后所带来的微生物群落变化及对农业生态系统所带来的不确定因素,已成为研究热点。本文着重介绍了当前土壤微生物多样性研究中常用的3种基于16S rDNA的技术:变性梯度凝胶电泳(DGGE)、扩增性核糖体DNA限制酶切片段分析(ARDRA)和末端限制性酶切片段长度多态性(T-RFLP)技术,分析比较了各种技术的原理、优点及其应用局限性,并简短综述了这些技术近年来的应用。

关键词：土壤生物微生物多样性 16SrDNA DGGE ARDRA T-RFLP

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转座子挽救法克隆鞘氨醇单胞菌CDS-1中呋喃丹水解酶相关基因

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应用与环境生物学报 2009年第5期15卷 677-681页

作者：徐剑宏洪青武俊严秋香李顺鹏江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所农业部食品质量安全监控重点开放实验室江苏省食品质量安全重点实验室南京210014 南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

用含Tn5转座子的自杀性质粒pSC123诱变呋喃丹降解菌Sphingomonas agrestis CDS-1,获得失去呋喃丹降解功能的突变株CDS-M1.以pMD18-T为载体在E. coli DH5α中构建了CDS-M1的基因组文库,采用转座子挽救法对Tn5插入位点两侧翼的序列进行克... 详细信息

用含Tn5转座子的自杀性质粒pSC123诱变呋喃丹降解菌Sphingomonas agrestis CDS-1,获得失去呋喃丹降解功能的突变株CDS-M1.以pMD18-T为载体在E. coli DH5α中构建了CDS-M1的基因组文库,采用转座子挽救法对Tn5插入位点两侧翼的序列进行克隆与测序,根据测序结果(共4551个碱基)设计引物,从CDS-1的基因组中扩增到同样大小的片段,把该片断克隆到广宿主载体pPZP201上,得到重组质粒pCDZ1,通过三亲接合的方法把pCDZ1导入CDS-M1中进行功能互补实验,结果显示CDS-M1的呋喃丹水解功能得到了恢复,表明该片断中包含呋喃丹水解酶相关基因.

关键词： Sphingomonas agrestis CDS-1 呋喃丹转座子挽救法基因克隆

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抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇噬菌体单链抗体库的构建与鉴定

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江苏农业学报 2010年第5期26卷 1093-1097页

作者：周艳红祭芳丁衬衬史建荣江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所农业部食品质量安全监控重点开放实验室江苏省食品质量安全重点实验室江苏南京210014

从抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON毒素)杂交瘤细胞株中扩增出VH和VL基因片段,再经重叠延伸PCR拼接扩增得到单链抗体基因(ScFv),克隆到pCANTAB-5E噬菌粒载体上。然后转化感受态大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体超感染,构建成抗DON毒素噬菌体单链抗体... 详细信息

从抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON毒素)杂交瘤细胞株中扩增出VH和VL基因片段,再经重叠延伸PCR拼接扩增得到单链抗体基因(ScFv),克隆到pCANTAB-5E噬菌粒载体上。然后转化感受态大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体超感染,构建成抗DON毒素噬菌体单链抗体库,库容约为1.1×105,滴度为1.3×108pfu。随机选取10个克隆进行双酶切鉴定,结果显示均有ScFv基因片段插入。抗DON毒素单链抗体库的构建,为进一步富集筛选并表达抗DON毒素单链抗体奠定了基础。

关键词：脱氧雪腐镰刀菌烯醇单链抗体噬菌体抗体库

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呋喃丹降解菌CFDS-1的筛选鉴定及降解特性

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应用与环境生物学报 2011年第2期17卷 237-242页

作者：徐剑宏洪青洪源范李顺鹏江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所农业部食品质量安全监控重点开放实验室南京210014 南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

为有效治理呋喃丹的污染,从受呋喃丹长期污染的土壤中分离筛选到一株高效降解呋喃丹的菌株CFDS-1,经形态、生理生化、16S rDNA(GenBank accession ***702969)同源性及系统发育地位等分析,将其初步鉴定为Sphingomonas sp.当接种量为5%时,... 详细信息

为有效治理呋喃丹的污染,从受呋喃丹长期污染的土壤中分离筛选到一株高效降解呋喃丹的菌株CFDS-1,经形态、生理生化、16S rDNA(GenBank accession ***702969)同源性及系统发育地位等分析,将其初步鉴定为Sphingomonas sp.当接种量为5%时,CFDS-1能在48 h内降解100 mg L-1的呋喃丹,对于高达300 mg L-1的呋喃丹依然有降解效果;CFDS-1对呋喃丹的降解率与起始接种量呈正相关;降解呋喃丹的最适pH是8.0～9.0;在20～42℃范围内,温度对CFDS-1降解呋喃丹没有显著影响;该菌在250 mL三角瓶中装液量为100 mL时,对呋喃丹的降解效果最好.土壤实验表明,该菌株同样能有效地降解土壤中的呋喃丹残留.

关键词： Sphingomonas sp. 呋喃丹生物降解生物修复

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抗-Cry2Aa单链抗体分子互作及荧光免疫检测研究

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现代食品科技 2017年第6期33卷 309-312,292页

作者：王耘武爱华张存政刘贤金金陵科技学院园艺学院江苏南京210038 江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所农业部食品质量安全监控重点开放实验室江苏南京210014

Cry2Aa毒素是一种新型生物农药,分析该毒素与特异性单链抗体分子互作,并建立快速检测毒素残留的方法对保障食品和生态安全有重要意义。本研究以同源蛋白为模板对单链抗体进行建模,并进行了Cry2Aa毒素与单链抗体的分子对接模拟,确定关键... 详细信息

Cry2Aa毒素是一种新型生物农药,分析该毒素与特异性单链抗体分子互作,并建立快速检测毒素残留的方法对保障食品和生态安全有重要意义。本研究以同源蛋白为模板对单链抗体进行建模,并进行了Cry2Aa毒素与单链抗体的分子对接模拟,确定关键结合位点,以此为基础将单链抗体作为检测抗体,建立了间接竞争时间分辨荧光免疫分析方法,对大米样品中Cry2Aa毒素进行了检测。利用生物信息学工具模拟获得单链抗体三维结构模型,分子对接结果显示重链可变区81NY82和121SGNY124区域及轻链可变区的245YSSN248氨基酸残基在与毒素结构Ⅱ区识别过程中起关键作用,为建立高效检测方法奠定基础,进一步基于该单链抗体建立的时间分辨检测方法灵敏度(IC10)为0.08 ng/m L,中抑制浓度(IC50)为7.99 ng/m L,线性检测范围(IC20~IC80)为0.24~263.77 ng/m L,且与常规双抗夹心ELISA法检测呈良好线性关系。

关键词： Cry2Aa毒素单链抗体时间分辨荧光免疫分析同源模建分子对接

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间接ELISA法检测苏云金芽孢杆菌(Bt)Cry1Ab毒蛋白抗体方法的建立

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江苏农业学报 2010年第4期26卷 894-896页

作者：张霄纪炜王耘温爽刘贤进南京农业大学植物保护学院江苏南京210094 江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所农业部食品质量安全监控重点开放实验室江苏南京210014 江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所省部共建江苏省食品质量安全重点实验室江苏南京210014

苏云金芽孢杆菌(Bt)为革兰氏阳性菌,是一类对害虫毒力强、致死速度快且对害虫天敌无毒性的昆虫病原微生物[1-2].菌体在稳定生长期可形成伴胞晶体蛋白,又称杀虫晶体蛋白(ICP)或δ-内毒素.

关键词： Cry1Ab毒素抗体间接ELISA

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高效液相色谱-串联质谱法测定小麦和土壤中氨氯吡啶酸的残留量

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农药学学报 2013年第5期15卷 546-550页

作者：孙星杨邦保丁悦王冬兰沈燕刘贤金江苏省农业科学院食品安全与检测研究所/江苏省食品质量安全重点实验室/农业部食品安全监控重点开放实验室南京210014

建立了小麦植株、麦粒、面粉、麦麸和土壤样品中氨氯吡啶酸的高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS／MS）检测方法。样品用丙酮提取，经N-丙基乙二胺（primary secondary amine，PSA）串联石墨化炭黑柱净化，以Agilent ZORBAXSB-C18色谱柱分... 详细信息

建立了小麦植株、麦粒、面粉、麦麸和土壤样品中氨氯吡啶酸的高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS／MS）检测方法。样品用丙酮提取，经N-丙基乙二胺（primary secondary amine，PSA）串联石墨化炭黑柱净化，以Agilent ZORBAXSB-C18色谱柱分离，以电喷雾电离串联质谱正离子多反应监测（multiple reaction monitoring，MRM）模式进行测定。结果表明：在0．01、O．1、0．5、1mg／kg4个添加水平下，氨氯吡啶酸在小麦植株、麦粒、面粉、麦麸和土壤中的平均回收率在78．9％～97．9％之间，相对标准偏差在3．6％～9．6％之间。该方法样品前处理简单、快速、分析时间短，灵敏度、准确度和精密度均符合农药残留检测要求，适用于小麦和土壤中氨氯吡啶酸残留的检测。

关键词：氨氯吡啶酸高效液相色谱-串联质谱固相萃取小麦残留

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亲和短肽用于快速检测转基因蛋白Cry3Bb

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江苏农业学报 2017年第3期33卷 690-694页

作者：王耘武爱华刘贤金谢雅晶闫娜张存政金陵科技学院园艺学院江苏南京210038 江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所/农业部食品质量安全监控重点开放实验室江苏南京210014

本研究利用竞争洗脱法淘选与Cry3Bb毒素具有亲和力的特异性短肽,以此建立间接竞争酶联免疫吸附检测方法(IC-ELISA)。经过4轮淘选、富集,获得与靶蛋白具有较高亲和力的B10克隆(ACIHSPTALCGGG)。所建立的检测方法稳定性较好,变异系数在5%... 详细信息

本研究利用竞争洗脱法淘选与Cry3Bb毒素具有亲和力的特异性短肽,以此建立间接竞争酶联免疫吸附检测方法(IC-ELISA)。经过4轮淘选、富集,获得与靶蛋白具有较高亲和力的B10克隆(ACIHSPTALCGGG)。所建立的检测方法稳定性较好,变异系数在5%以内;线性检测范围为0.03~29.95μg/ml,线性回归方程为(Y=20.044x+50.407,R2=0.983 4),检测限为0.009 6μg/ml,在玉米样品中提取回收率为92.26%~101.22%。本研究所建立的ELISA检测方法为粮食中Cry3Bb蛋白的定量检测提供了有效的手段,在转基因产品的检验检疫中有较高的应用价值。

关键词： Cry3Bb毒素转基因植物噬菌体展示肽间接竞争ELISA

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不同种植年限设施地土壤养分和重金属含量的变化特征

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水土保持学报 2011年第4期25卷 125-130页

作者：薛延丰石志琦江苏省农业科学院食品质量安全检测研究所江苏南京210094 江苏省食品质量安全重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地江苏南京210094 农业部食品安全监控重点开放实验室江苏南京210094

为了解设施地土壤的理化性质,以江苏省苏北地区大棚土壤为例,研究种植年限分别为1,3,5,7 a大棚土壤含水量、全N、全P、全K和重金属含量的变化情况。结果表明,随着种植年限的增加,设施地土壤含水量显著降低,随着土层深度的增加,土壤含水... 详细信息

为了解设施地土壤的理化性质,以江苏省苏北地区大棚土壤为例,研究种植年限分别为1,3,5,7 a大棚土壤含水量、全N、全P、全K和重金属含量的变化情况。结果表明,随着种植年限的增加,设施地土壤含水量显著降低,随着土层深度的增加,土壤含水量进一步降低。设施地土壤全N、全P和全K含量比大田高,特别是全N和全K积累量大,且分布于耕作层,随着土层深度的增加全N和全K含量变化较大;同时,随着种植年限增加,设施地土壤全N、全P和全K含量显著增加,7 a左右的设施地土壤20 cm耕作层中的全N含量分别为1.99,1.87,2.40 g/kg;全P含量分别为1.03,1.01,1.74 g/kg;全K含量分别为1.94,3.52,4.40 g/kg,且全N和全K含量随着土层深度的增加而逐渐降低,与土层深度的变化呈显著负相关关系。随着种植年限的增加重金属含量增加,7 a左右大棚种植年限扬州和连云港地区20 cm土层中的Pb含量分别为194,225 mg/kg;淮安地区不同种植年限20 cm土层的Cd含量分别为0.80,0.93,1.14,2.49 mg/kg;扬州和连云港地区无论种植年限多久,Cr含量均大于120 mg/kg;扬州地区As含量均大于25 mg/kg,Pb、Cr和As含量随着土层深度的增加而逐渐降低,与土层深度的变化呈显著负相关关系。所以设施地随着种植年限的增加,土壤理化性质会发生变化,应采取措施保持土壤含水量,防止土壤板结、盐渍化,消除重金属累积。

关键词：设施土壤土壤养分土壤肥力重金属

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粪源金霉素暴露对土壤微生物毒性效应的田间试验研究

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安全与环境学报 2012年第5期12卷 13-16页

作者：王冉魏瑞成李维包红朵江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所农业部食品安全监控重点开放实验室江苏省畜禽产品安全性研究重点实验室南京210014 江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所农业部食品安全监控重点开放实验室江苏省畜禽产品安全性研究重点实验室南京210014

通过田间小区试验,研究了含金霉素残留的鸡粪施用于农田对农田土壤中微生物的毒性效应。选取蔬菜试验田,划分4个2m×2m试验小区,除对照组(不施用任何肥料)外,其他3块分别施用不含金霉素的鸡粪和含46.4mg/kg、97.6mg/kg金霉素的鸡粪... 详细信息

通过田间小区试验,研究了含金霉素残留的鸡粪施用于农田对农田土壤中微生物的毒性效应。选取蔬菜试验田,划分4个2m×2m试验小区,除对照组(不施用任何肥料)外,其他3块分别施用不含金霉素的鸡粪和含46.4mg/kg、97.6mg/kg金霉素的鸡粪。在试验期内,分别在不同时间采集土壤样品,测定土壤中微生物数量(细菌、真菌和放线菌)、土壤的呼吸强度、土壤中金霉素抗性细菌数量及土壤中微生物多样性变化等指标。结果表明,两个质量比的粪源金霉素(46.4mg/kg和97.6mg/kg)暴露分别降低了土壤中细菌数量24.1%和27.2%,降低了放线菌12.1%和22.9%,减少了真菌数量1.92%和2.52%,并且影响了土壤微生物多样性,同时增加了土壤中金霉素抗性细菌数量及其比率。同时发现,粪源金霉素的暴露随时间延长对土壤微生物的毒性影响有减缓趋势。这可能与随时间延长金霉素被降解或土壤微生物对金霉素产生了适应有关。

关键词：畜牧兽医科学其他学科粪源金霉素土壤微生物生态毒性

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