检索结果-内蒙古大学图书馆

中国农业大学学报 2025年第1期30卷 131-141页

作者：杨利杜露平侯立婷张浩明于晓明李兰乔绪稳张元鹏秦竹王义伟郑其升陈瑾程海卫江苏省农业科学院动物免疫工程研究所/国家兽用生物制品工程技术研究中心/江苏省食品质量与安全重点实验室南京210014 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心江苏泰州225300

为通过将FMDV抗原靶向提呈至猪DC细胞进而提高疫苗免疫效力,本研究利用原核系统表达了猪XCR1目的蛋白,以该蛋白为免疫原免疫羊驼,提取其外周血淋巴细胞的总mRNA并反转录为cDNA,构建噬菌体展示纳米抗体文库,经过3轮亲和筛选获得猪XCR1特... 详细信息

为通过将FMDV抗原靶向提呈至猪DC细胞进而提高疫苗免疫效力,本研究利用原核系统表达了猪XCR1目的蛋白,以该蛋白为免疫原免疫羊驼,提取其外周血淋巴细胞的总mRNA并反转录为cDNA,构建噬菌体展示纳米抗体文库,经过3轮亲和筛选获得猪XCR1特异性纳米抗体;利用SOE-PCR技术将该纳米抗体和猪O型FMDV特异性纳米抗体Nb205连接,构建XCR1/FMDV双特异纳米抗体融合蛋白。结果表明:1)成功原核表达猪XCR1目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot结果显示,其相对分子量大小约35 ku,符合预期。2)羊驼血清效价为1∶64000,满足建库要求;构建的噬菌体展示文库库容量约为1.91×10^(8)CFU/mL,插入率为91.3%,多样性好;经3轮亲和筛选成功获得了纳米抗体Nb75,间接ELISA结果显示该纳米抗体能特异性与XCR1结合。3)利用SOE-PCR技术成功构建XCR1/FMDV双特异纳米抗体融合蛋白Nb75-205;SDS-PAGE和Western blot显示,该蛋白在大肠杆菌中可溶性表达,且呈现二聚体结构,间接ELISA结果显示Nb75-205能同时与XCR1目的蛋白和FMDV抗原结合。综上,本研究采用噬菌体展示技术成功获得猪XCR1特异性纳米抗体,并构建XCR1/FMDV双特异纳米抗体融合蛋白Nb75-205,且该蛋白为天然二聚体结构,与XCR1目的蛋白和FMDV抗原均具有较好的结合活性,为进一步开展FMDV抗原的猪XCR1靶向提呈研究奠定基础。

关键词：趋化因子受体1 双特异纳米抗体二聚体 FMDV

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1株血清2型副猪嗜血杆菌的分离鉴定及致病性研究

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中国畜牧兽医 2025年第2期52卷 901-911页

作者：李倩文华涛常晨颜星宇李军星唐波江苏省农业科学院动物免疫工程研究所南京210014 国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心泰州225300 浙江省农业科学院畜牧兽医研究所杭州310021

[目的]明确浙江地区某猪场副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)感染情况,明确分离株的血清型、生物学特性及致病性,为临床控制副猪嗜血杆菌提供理论参考。[方法]从发病猪的肺脏、心脏血液、关节液等病料中分离、纯化菌株,并对其进... 详细信息

[目的]明确浙江地区某猪场副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)感染情况,明确分离株的血清型、生物学特性及致病性,为临床控制副猪嗜血杆菌提供理论参考。[方法]从发病猪的肺脏、心脏血液、关节液等病料中分离、纯化菌株,并对其进行革兰染色镜检、16S rRNA基因PCR扩增及测序,明确分离株的血清型,检测分离株携带毒力基因情况、对常见抗菌药物的敏感性及对小鼠的致病性,使用饱和硫酸铵法提取菌株分泌蛋白,并通过电泳分析蛋白主要富集区域。[结果]分离株在TSA培养基上生长出圆形、光滑湿润、颜色灰白、边缘整齐的针尖大小的菌落;接种至TSB培养基后,1~3 h生长缓慢,3~4 h进入对数生长期,4~12 h进入生长稳定期;革兰染色镜检呈红色短杆状、长杆状,长度不等,疑似副猪嗜血杆菌。16S rRNA基因PCR扩增结果显示,出现680 bp的特异性条带,与预期相符。血清型鉴定结果显示,检测到2型血清型副猪嗜血杆菌特异性条带。BLAST比对显示该分离株为血清2型副猪嗜血杆菌。毒力基因检测结果显示,分离株携带cdtA、cdtB、cdtC、vtaA1、rfaD、rfaE、gnd、cpaD、espP2、vacJ、rfaF、vtaA2、htrA和ompP2基因。该菌株以1.0×10^(9) CFU/mL剂量感染BALB/c小鼠,在5~10 h出现死亡,并引起小鼠肝脏细胞核浓缩、坏死,肺泡腔内有大量浆液性渗出物,混有红细胞和菌体,脾脏组织炎性细胞浸润。药敏试验结果显示,分离株对头孢哌酮、头孢呋辛钠、哌拉西林、青霉素等药物耐药,对氯霉素表现中介,对环丙沙星、左氧氟沙星、阿奇霉素等药物敏感。该菌株分泌蛋白大小主要集中在25~180 ku。[结论]本研究分离鉴定获得1株血清2型副猪嗜血杆菌,该分离株编码多种毒力基因,具有致病性,对多种常用抗菌药物有明显的耐药性,并分泌多种蛋白。试验结果提示该猪场可使用喹诺酮类、大环内酯类及氨基糖苷类药物进行防控。

关键词：副猪嗜血杆菌血清型分离鉴定致病性

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鞭毛蛋白的表达及其免疫增强效力评价

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中国动物传染病学报 2025年

作者：侯立婷刘昆昆安俊星于晓明秦竹杜露平张元鹏陈瑾郑其升江苏省农业科学院动物免疫工程研究所江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心省部共建国家重点实验室培育基地—江苏省食品质量安全重点实验室南京农业大学动物医学院

本研究旨在研制安全高效的兽用疫苗免疫增强剂，为免疫增强剂的开发奠定基础。首先通过参考伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白基因序列，设计并构建了全长鞭毛蛋白FliC和删除D2和D3高变区的鞭毛蛋白FliC△D2D3的表达载体。然后利用原核表达系统表达... 详细信息

本研究旨在研制安全高效的兽用疫苗免疫增强剂，为免疫增强剂的开发奠定基础。首先通过参考伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白基因序列，设计并构建了全长鞭毛蛋白FliC和删除D2和D3高变区的鞭毛蛋白FliC△D2D3的表达载体。然后利用原核表达系统表达这两种蛋白，并进行纯化与鉴定。获得这两种蛋白后，进一步检测这两种蛋白体外对DC2.4细胞的TLR 5的激活和相关细胞因子的表达情况，并对其在PEDV疫苗上的免疫增强效力进行了评价。结果表明，1)两种蛋白在原核表达系统中均以可溶形式表达；2)添加鞭毛蛋白刺激后，DC 2.4细胞中TLR5及相关细胞因子的表达水平显著提高；3)FliC和FliC△D2D3均能显著提高小鼠和仔猪免疫后的PEDV特异性的IgG抗体水平，其中FliC△D2D3的免疫效果优于全长的FliC。该研究不仅有助于了解鞭毛蛋白FliC在免疫调节中的作用，也为基于鞭毛蛋白的免疫增强剂的开发提供了基础。

关键词：鞭毛蛋白FliC、FliC 免疫增强剂 PEDV

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两种不同佐剂猪流感灭活疫苗小鼠皮内免疫效果比较

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动物医学进展 2025年第6期46卷 83-90页

作者：阮卓雨陈超阳邓碧华尹文竹马芳卢宇王海燕江苏省农业科学院动物免疫工程研究所/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学江苏南京210095 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心江苏泰州225300 华威特(江苏)生物制药有限公司江苏泰州225300

皮内免疫是一种高效的疫苗免疫途径,亟需安全高效的皮内免疫佐剂。将佐剂Gel02和ISA15分别与猪流感抗原配成疫苗,免疫接种小鼠,分别于免疫后不同时间对小鼠接种部位皮肤反应和抗体水平进行检测,评估其作为皮内免疫佐剂的潜力。结果显示... 详细信息

皮内免疫是一种高效的疫苗免疫途径,亟需安全高效的皮内免疫佐剂。将佐剂Gel02和ISA15分别与猪流感抗原配成疫苗,免疫接种小鼠,分别于免疫后不同时间对小鼠接种部位皮肤反应和抗体水平进行检测,评估其作为皮内免疫佐剂的潜力。结果显示,两种佐剂均无红肿破损等皮肤副反应,可引起皮肤短暂性的炎性因子上调和炎性细胞聚集,Gel02相较ISA15皮肤吸收性更快。两种佐剂均能显著提升血清中血凝抑制和IgG及其亚类抗体效价。Gel02倾向诱导IgG2a和IgG2c反应,ISA15则诱导IgG1反应。Gel02能提升肺泡灌洗液中IgG表达,不能提升IgA表达,ISA15均不能提升。因此,Gel02皮内免疫安全性、吸收性和效力均良好,更适用于猪流感皮内免疫,为猪流感灭活苗皮内免疫新技术研究奠定了基础。

关键词：皮内免疫佐剂猪流感安全性效力

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3株猪丹毒丝菌流行株的分离鉴定

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畜牧与兽医 2025年第4期57卷 107-112页

作者：符雪艳张传健王灵果陈赛赛宋建隆郭容利熊富强王继春西藏农牧学院动物科学学院西藏林芝860000 江苏省农业科学院动物免疫工程研究所江苏南京210014 江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心江苏泰州225300 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所江苏南京210014

旨在探究猪丹毒丝菌流行株的耐药性、致病性以及传统疫苗株对其的免疫保护效力。从安徽、浙江、江苏南京等地的发病猪病料中分离出3株细菌,显微镜下观察菌株的形态特征,可见革兰阳性短杆菌,结合16S rDNA基因序列,确定3株细菌均为猪丹毒... 详细信息

旨在探究猪丹毒丝菌流行株的耐药性、致病性以及传统疫苗株对其的免疫保护效力。从安徽、浙江、江苏南京等地的发病猪病料中分离出3株细菌,显微镜下观察菌株的形态特征,可见革兰阳性短杆菌,结合16S rDNA基因序列,确定3株细菌均为猪丹毒丝菌,分别命名为AH-6、ZJ-JX和NJ-2。SpaA基因分析发现,AH-6株存在195和257两个氨基酸位点的替换,ZJ-JX和NJ-2株存在203和257两个氨基酸位点的替换,表明3个分离株可分为2个SpaA型。药敏试验发现,菌株AH-6、ZJ-JX和NJ-2均对氨苄西林敏感,对庆大霉素、环丙沙星、诺氟沙星、四环素、氯霉素等抗生素耐药。小鼠致病性试验表明,分离菌株均对小鼠具有较强致病力,AH-6、ZJ-JX和NJ-2株对小鼠的最小致死量(MLD)分别为4×10^(1)、1×10^(3)和6×10^(1)CFU/mL。免疫效力试验表明,弱毒疫苗G4T10可对3株流行株提供有效的保护。本研究可为猪丹毒的防控提供参考。

关键词：猪丹毒丝菌分离鉴定免疫保护猪

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包裹有CTA1-DD蛋白的OCS-DS纳米颗粒的制备及佐剂活性

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江苏农业学报 2024年第1期40卷 141-148页

作者：秦竹陈瑾侯立婷乔绪稳李兰杨利杜露平于晓明张元鹏郑其升江苏省农业科学院动物免疫工程研究所/国家兽用生物制品工程技术研究中心/江苏省食品质量与安全重点实验室江苏南京210014 兽用生物制品国泰技术创新中心江苏泰州225300

重组CTA1-DD蛋白具有与完整CT分子相当的全身性和黏膜佐剂功能,但在复杂的生理环境中易被酶或酸降解。本研究以同样具有佐剂活性的O-羧甲基壳聚糖(OCS)和硫酸葡聚糖(DS)为载体,通过离子交联形成纳米颗粒,将CTA1-DD蛋白嵌入其中,使其得... 详细信息

重组CTA1-DD蛋白具有与完整CT分子相当的全身性和黏膜佐剂功能,但在复杂的生理环境中易被酶或酸降解。本研究以同样具有佐剂活性的O-羧甲基壳聚糖(OCS)和硫酸葡聚糖(DS)为载体,通过离子交联形成纳米颗粒,将CTA1-DD蛋白嵌入其中,使其得到稳定保护。包裹有CTA1-DD蛋白的OCS-DS纳米颗粒的粒径为50~150 nm,Zeta电位约-50 mV,质量浓度1.0 mg/ml的CTA1-DD蛋白投入制备的包裹有CTA1-DD蛋白的OCS-DS纳米颗粒载药率25.33%,包封率86.56%。体外模拟释放试验结果显示CTA1-DD蛋白可在7 d内缓慢释放。将CTA1-DD蛋白与PRV灭活抗原混合后,接种至小鼠鼻腔,结果表明,包裹有CTA1-DD蛋白的OCS-DS纳米颗粒能够同时诱导更高的血清IgG抗体和黏膜IgA抗体表达,证明了其作为黏膜佐剂的高效性。

关键词： CTA1-DD蛋白 O-羧甲基壳聚糖硫酸葡聚糖纳米颗粒佐剂活性

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基于双特异纳米抗体FMDV血凝检测方法的建立

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江苏农业学报 2024年第3期40卷 514-521页

作者：杨利张浩明乔绪稳陈瑾郑其升程海卫江苏省农业科学院动物免疫工程研究所/国家兽用生物制品工程技术研究中心/江苏省食品质量与安全重点实验室江苏南京210014 兽用生物制品<泰州>国泰技术创新中心江苏泰州225300

本研究利用基因工程方法将抗口蹄疫病毒(FMDV)纳米抗体Nb205和抗鸡醛化红细胞(cRBC)纳米抗体NbRBC48的基因片段连接,构建双特异纳米抗体Nb205-48,其相对分子质量为3.5×10^(4),能同时与FMDV和cRBC反应。利用Nb205-48成功建立了可用... 详细信息

本研究利用基因工程方法将抗口蹄疫病毒(FMDV)纳米抗体Nb205和抗鸡醛化红细胞(cRBC)纳米抗体NbRBC48的基因片段连接,构建双特异纳米抗体Nb205-48,其相对分子质量为3.5×10^(4),能同时与FMDV和cRBC反应。利用Nb205-48成功建立了可用于FMDV抗原检测的血凝方法,该方法检测灵敏度为1μg/ml,与其他病毒无交叉反应,且批内和批间重复性好。分别采用血凝法和夹心ELISA方法对3批次FMDV抗原进行了检测,二者检测结果基本吻合。本研究建立了基于双特异纳米抗体Nb205-48的血凝检测方法,该方法具有较好的灵敏度、特异性和重复性,且简便、快捷、成本低,其检测结果与传统的FMDV定量检测方法的检测结果相关性好,为检测口蹄疫疫苗生产过程中FMDV抗原的含量提供了新方法。

关键词：口蹄疫病毒双特异性纳米抗体血凝检测法

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肠出血性大肠杆菌O157:H7Tir基因的克隆、表达及生物学活性研究

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中国农业科学 2010年第12期43卷 2570-2577页

作者：张雪寒何孔旺茅爱华周俊明俞正玉温立斌倪艳秀郭容利吕立新江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心

【目的】克隆、表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7转位紧密素受体(Tir)基因,并研究其抗原性。【方法】选用pET28原核表达载体,体外构建Tir原核表达重组菌,并在大肠杆菌中获得高效表达。选用家兔制备高滴度多克隆抗体,Western blot分析... 详细信息

【目的】克隆、表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7转位紧密素受体(Tir)基因,并研究其抗原性。【方法】选用pET28原核表达载体,体外构建Tir原核表达重组菌,并在大肠杆菌中获得高效表达。选用家兔制备高滴度多克隆抗体,Western blot分析其免疫原性。选用HEp-2细胞进行粘附和粘附抑制试验,通过光镜、电镜和荧光显微镜进行观察。选用Balb/c小鼠进行免疫试验。【结果】成功获得高效表达重组Tir蛋白,并制备了兔源Tir多克隆抗体,Western blot分析此抗体能与Tir发生特异性抗原抗体反应。表达Tir蛋白能够抑制O157:H7对HEp-2细胞的粘附和A/E损伤。二免后Balb/c小鼠保护率高达75%以上。【结论】在大肠杆菌中成功克隆表达了Tir基因,所获重组Tir蛋白具有良好的抗原性,可能用于肠出血性大肠杆菌O157基因工程疫苗的研究。

关键词：肠出血性大肠杆菌O157:H7 转位紧密素受体表达粘附 A/E损伤免疫保护

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猪链球菌2型次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(IMPDH)重组蛋白的酶活性和免疫原性检测

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农业生物技术学报 2009年第6期17卷 943-947页

作者：张雪寒何孔旺周俊明倪艳秀俞正玉吕立新江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

通过PCR方法从猪链球菌2型(Streptococcus suis)05ZYH33分离株基因组中扩增出次黄嘌呤核苷酸脱氢酶基因(in-osine5-monophosphate dehydrogenase,impdh),长度1064bp。PCR产物和pET28a载体分别经过EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切,连接,成功地构建了重组表达质粒pET28a-impdh,并转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中,经过1mmol/LIPTG诱导获得表达,蛋白大小35kD。表达蛋白具有良好的抗原性和酶活性。蛋白经过亲和层析纯化后,在37℃,pH7.0~9.0表现出较强酶活性,NADHA340介于0.662~0.816之间。

关键词：猪链球菌次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(IMPDH) 克隆酶活性

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检测兔出血症病毒抗体胶体金试纸条的研制及初步应用

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畜牧兽医学报 2018年第3期49卷 614-619页

作者：魏后军范志宇王芳宋艳华胡波仇汝龙陈萌萌徐为中薛家宾江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014

利用免疫层析技术建立快速检测兔出血症病毒(RHDV)抗体的方法,将胶体金标记重组RHDV VP60蛋白,抗VP60单抗A3C和金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)分别包被质控线(C线)和检测线(T线),通过检测强阳性、阳性、弱阳性、阴性血清优化试纸条制备条件,... 详细信息

利用免疫层析技术建立快速检测兔出血症病毒(RHDV)抗体的方法,将胶体金标记重组RHDV VP60蛋白,抗VP60单抗A3C和金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)分别包被质控线(C线)和检测线(T线),通过检测强阳性、阳性、弱阳性、阴性血清优化试纸条制备条件,并验证其性能及与血凝抑制试验的符合率。结果显示,试纸条检测阳性血清时T线、C线颜色深度相同,强阳性血清T线比C线颜色深,弱阳性血清T线比C线颜色浅,阴性血清T线不显色、C线显色,检测强阳性、阳性、弱阳性、阴性血清与血凝抑制试验的符合率分别为93.75%、88.75%、91.25%、95.00%,总的符合率为91.54%;该试纸条具有较好的特异性、敏感性、重复性和稳定性,为兔病毒性出血症流行病学调查和抗体水平监测提供了有力的检测工具。

关键词：兔病毒性出血症兔出血症病毒 VP60 胶体金试纸条抗体

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