检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学报 2006年第5期46卷 730-733页

作者：段志涛何孔旺张雪寒倪艳秀陆承平江苏省农科院兽医所农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室南京210014 南京农业大学动物医学院南京210095

根据GenBank猪链球菌2型（SS2）报道序列．对江苏分离株SS2-H部分测序，发现位于已知毒力基因orf2与mrp之间存在两个新的开放阅读框序列。选取可能含有抗原决定簇肽段对应的核酸序列，该阅读框（2738～3694）编码319个氨基酸残基，分子... 详细信息

根据GenBank猪链球菌2型（SS2）报道序列．对江苏分离株SS2-H部分测序，发现位于已知毒力基因orf2与mrp之间存在两个新的开放阅读框序列。选取可能含有抗原决定簇肽段对应的核酸序列，该阅读框（2738～3694）编码319个氨基酸残基，分子量为33．5kDa，与已知任何基因无同源性。通过InterPro、PHD、DNAstar分析阅读框，并定向克隆至pET-32α（＋）载体中，转化至大肠杆菌BL21，表达出分子量为48kDa的融合蛋白，蛋白免疫转印可被SS2的抗血清识别，具有免疫原性；并且含有IMP dehydrogenase结构域，催化IMP生成XMP；流式细胞仪检测该蛋白可明显影响HEp-2细胞周期。

关键词：猪链球菌2型毒力因子 IMPDH

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检测猪链球菌2型胞外因子(EF)的PCR方法的建立

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中国人兽共患病杂志 2001年第4期17卷 57-59页

作者：倪艳秀何孔旺王继春何家惠还红华陆承平姚火春江苏省农科院农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室南京210014 南京农业大学动物医学院

根据猪链球菌 2型的ef基因和ef 基因合成了一对可扩增长度为 6 2 6bp目的片段的引物 ,成功地建立了检测胞外因子 (EF)的PCR方法。用HaeⅡ内切酶进行酶切 ,获得了与预期一致的 35 4bp和 2 72bp的两个片段。并进行了PCR的特异性试验和敏... 详细信息

根据猪链球菌 2型的ef基因和ef 基因合成了一对可扩增长度为 6 2 6bp目的片段的引物 ,成功地建立了检测胞外因子 (EF)的PCR方法。用HaeⅡ内切酶进行酶切 ,获得了与预期一致的 35 4bp和 2 72bp的两个片段。并进行了PCR的特异性试验和敏感性试验。对马腺疫链球菌兽疫亚种、猪丹毒杆菌、猪肺疫巴氏杆菌和猪肺炎霉形体的PCR检测结果均呈阴性 ;检测的敏感度可达 10 0个细菌。另外 ,对 9株猪链球菌 2型菌株进行了检测 ,7株呈EF阳性 ,1株呈EF 阳性 ,1株呈EF阴性 ;对 15份正常屠宰猪扁桃体分离物的检测结果 1份为阳性。实验结果表明此法特异性和敏感性均很高。

关键词：猪链球菌2型胞外因子 PCR

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猪链球菌2型的分子流行病学研究

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中国人兽共患病杂志 2002年第5期18卷 45-47页

作者：何孔旺倪艳秀王继春何家惠王伟峰杨瑛陆承平林继煌江苏省农科院兽所农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室南京210014 江苏省兽医总站南京农业大学动物医学院

目的　了解猪链球菌 2型高发地区 (疫区 )与少发地区 (非疫区 )猪群的带菌率及其毒力因子MRP与EF的分布情况 ,探讨猪链球菌 2型的发生及其流行规律。方法　分别从不同地区采集正常屠宰猪或活体采集成年猪扁桃体 ,经接种马丁汤培养基增... 详细信息

目的　了解猪链球菌 2型高发地区 (疫区 )与少发地区 (非疫区 )猪群的带菌率及其毒力因子MRP与EF的分布情况 ,探讨猪链球菌 2型的发生及其流行规律。方法　分别从不同地区采集正常屠宰猪或活体采集成年猪扁桃体 ,经接种马丁汤培养基增菌培养后 ,用PCR方法进行 2型猪链球菌的检测 ,同时检测各 2型菌的主要毒力因子溶菌酶释放蛋白 (MRP)与细胞外蛋白因子 (EF)基因 (mrp和epf)。结果　除少数猪群外正常猪群中猪链球菌 2型的带菌率普遍较高 ,为 31 6 %～77% ,平均为 4 0 9% ,且疫区 (39% )与非疫区 (42 % )差异不明显。但毒力因子mrp和epf的阳性率疫区与非疫区存在明显差异 ,非疫区的 2型菌株除极少数表现为mrp+ epf-(5 % )或mrp-epf+ (5 % )外 ,绝大多数 (90 % )都表现为对猪无毒力的mrp-epf-表现型 ,无一株表现为mrp+ epf+ ;来自疫区的所有 16株 2型菌株均为对猪有强毒力的mrp+ epf+ 表现型。结论　正常猪群中 2型猪链球菌的带菌率与猪群是否暴发流行该病可能并无直接关系 ,但疫区猪群mrp+ epf+ 表现型菌株检出比率较高 ,提示携带mrp+ epf+

关键词：猪链球菌2型 mrp epf PCR 流行病学

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检测猪链球菌2型的溶菌酶释放蛋白(MRP)的PCR方法的建立

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中国预防兽医学报 2001年第1期23卷 20-22页

作者：倪艳秀何孔旺王继春何家惠还红华陆承平姚火春江苏省农科院农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室南京210014 南京农业大学动物医学院

根据猪链球菌 2型的mrp基因自行设计和合成了一对可扩增长度为 885bp目的片段的引物 ,成功地建立了检测溶菌酶释放蛋白 (MRP)的PCR方法。用XbaⅠ内切酶进行酶切 ,获得了与预期一致的 5 78bp和 30 7bp的 2个片段。并进行了PCR的特异性试... 详细信息

根据猪链球菌 2型的mrp基因自行设计和合成了一对可扩增长度为 885bp目的片段的引物 ,成功地建立了检测溶菌酶释放蛋白 (MRP)的PCR方法。用XbaⅠ内切酶进行酶切 ,获得了与预期一致的 5 78bp和 30 7bp的 2个片段。并进行了PCR的特异性试验和敏感性试验。对马链球菌兽疫亚种、猪丹毒杆菌、猪肺疫巴氏杆菌和猪肺炎支原体的PCR检测结果均呈阴性 ;检测的敏感度可达 10 0个细菌。另外 ,对 9株从病猪体内分离的猪链球菌 2型菌株进行了检测 ,8株呈阳性 ;对 15份正常屠宰猪扁桃体分离物的检测结果是 1份为阳性。结果表明此法特异性和敏感性均很高 ,可作为MRP快速诊断和流行病学调查的手段。

关键词：猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白 PCR 检测方法

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猪链球菌2型次黄嘌呤核苷酸脱氢酶单克隆抗体的制备及其识别表位分析

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微生物学通报 2008年第12期35卷 1915-1919页

作者：周俊明何孔旺张雪寒倪艳秀陆承平江苏省农科院兽医所农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室南京210014 南京农业大学动物医学院南京210095

用纯化的硫氧还蛋白-IMPDH融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经4次有限稀释法克隆,成功获得1A8、1F2、2D2和2D12共4株能稳定传代并分泌抗IMPDH的单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。4... 详细信息

用纯化的硫氧还蛋白-IMPDH融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经4次有限稀释法克隆,成功获得1A8、1F2、2D2和2D12共4株能稳定传代并分泌抗IMPDH的单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。4株腹水型单克隆抗体间接ELISA效价分别为100×211、100×211、100×210和100×28。经Western-blot分析表明,4株单抗与硫氧还蛋白-IMPDH融合蛋白均具有特异性反应,并且通过4种IMPDH全基因分片段缺失表达的融合蛋白,分析了4株单抗所识别抗原决定簇的差异性,发现1A8、1F2、2D2识别表位的编码基因集中在IMPDH基因片段的627bp^790bp之间,2D12识别表位的编码基因则集中在IMPDH基因片段的411bp^790bp之间。猪链球菌2型中IMPDH单克隆抗体的获得及相应表位分析为研究IMPDH蛋白的生物学活性及免疫学活性奠定了基础。

关键词：猪链球菌2型 IMPDH 单克隆抗体表位

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猪胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅳ部分基因片段的体外表达与初步应用

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农业生物技术学报 2005年第5期13卷 63-66页

作者：彭小华何孔旺陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095 江苏省农科院兽医研究所农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210014

参照GenBank中的猪胸膜肺炎放线杆菌(A ctinobacillus pleuropeum oniae,App)血清1和3型菌株序列设计了1对特异性引物,用PCR方法扩增毒素Ⅳ(A pxⅣ)基因3’端1096bp的目的片段,然后克隆到pM D18-T载体中,转入大肠杆菌(Es-cherichia coli... 详细信息

参照GenBank中的猪胸膜肺炎放线杆菌(A ctinobacillus pleuropeum oniae,App)血清1和3型菌株序列设计了1对特异性引物,用PCR方法扩增毒素Ⅳ(A pxⅣ)基因3’端1096bp的目的片段,然后克隆到pM D18-T载体中,转入大肠杆菌(Es-cherichia coli)的宿主菌D H5α中,提取阳性克隆质粒进行双酶切和测序鉴定,将T-载体中切下目的片段定向克隆到pET32a(+)中,转入*** BL21(D E3),经IPTG诱导可表达分子量约60kD的蛋白,免疫转印鉴定呈阳性,A pxⅣ基因体外成功表达。以纯化的表达产物包被ELISA板,初步检测了一些血清样品,结果预示表达的蛋白可用于区分灭活疫苗免疫和野毒感染。

关键词：胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅳ 表达间接ELISA

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PCR检测和定型猪链球菌2型的研究

PCR检测和定型猪链球菌2型的研究

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第五届理事会第二次全体会议暨防检疫专业委员会第7次学术交流会

作者：倪艳秀何孔旺王继春何家惠吕立新陆承平姚火春江苏省农科院农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室江苏省农科院农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室江苏省农科院农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室江苏省农科院农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室江苏省农科院农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室江苏省农科院农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室江苏省农科院农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室

猪链球菌可引起猪脑膜炎、关节炎、心内膜炎、败血症、肺炎和突然死亡,严重危害养猪业的发展。根据荚膜多糖抗原的差异,可将猪链球菌分为35个血清型,即1-34以及1/2型。对猪致病性较强的为猪链球菌1型、2型和9型,尤其是猪链球菌2型(*** t... 详细信息

猪链球菌可引起猪脑膜炎、关节炎、心内膜炎、败血症、肺炎和突然死亡,严重危害养猪业的发展。根据荚膜多糖抗原的差异,可将猪链球菌分为35个血清型,即1-34以及1/2型。对猪致病性较强的为猪链球菌1型、2型和9型,尤其是猪链球菌2型(*** type 2),不仅对猪的致病性最强,而且可感染特定人群并致死,是一种重要的人畜共患病病原。

关键词：猪链球菌巴氏杆菌猪肺疫马链球菌兽疫亚种标准株猪肺炎霉形体 PCR 猪葡萄球菌

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猪传染性胸膜肺炎快速PCR诊断

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中国兽医学报 2005年第6期25卷 591-593页

作者：彭小华何孔旺陆承平南京农业大学动物医学院江苏南京210095 江苏省农科院兽医研究所农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室江苏南京210014

根据G enB ank中猪胸膜肺炎放线杆菌(A ctinobacillus p leurop eum on iae,A pp)外膜蛋白(om l)基因序列,设计合成1对特异性引物,进行PCR检测。对A pp 1、2、3、4、5a、5b、6、7、9型参考株均扩增出大小为1 010 bp左右的片段,而对马链... 详细信息

根据G enB ank中猪胸膜肺炎放线杆菌(A ctinobacillus p leurop eum on iae,A pp)外膜蛋白(om l)基因序列,设计合成1对特异性引物,进行PCR检测。对A pp 1、2、3、4、5a、5b、6、7、9型参考株均扩增出大小为1 010 bp左右的片段,而对马链球菌兽疫亚种、多杀性巴氏杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、副猪嗜血杆菌、产肠毒素大肠杆菌等均未扩增出任何条带。用相应的限制性内切酶分别酶切PCR扩增产物,均得到与预期一致的结果;PCR检测的敏感度达10 CFU。将建立的PCR方法初步应用于6头人工发病猪的鼻拭子和病死猪的肺组织,均得到较好的检测结果。

关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白聚合酶链反应

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用免疫金技术检测猪繁殖与呼吸综合征病毒

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畜牧与兽医 2001年第2期33卷 1-2页

作者：李军林继煌姜平何孔旺倪艳秀还红华江苏省农科院农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室南京农业大学动物医学院江苏南京210095

用胶体金标记提纯后的兔抗猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)IgG ,建立了一种以微孔滤膜为固相载体 ,以红色胶体金为标记物的检测PRRSV的斑点免疫金渗滤法 (DIGFA)。特异性阻断试验与交叉试验证明DIGFA检测PRRSV有较高的特异性。检测 1 5... 详细信息

用胶体金标记提纯后的兔抗猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)IgG ,建立了一种以微孔滤膜为固相载体 ,以红色胶体金为标记物的检测PRRSV的斑点免疫金渗滤法 (DIGFA)。特异性阻断试验与交叉试验证明DIGFA检测PRRSV有较高的特异性。检测 1 5份临床样本 ,其中 3份DIG FA及细胞培养均为阳性。

关键词：猪繁殖呼吸综合征斑点免疫金渗滤试验繁殖-呼吸综合征病毒检测

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2种猪源链球菌对猪、兔的致病性试验

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畜牧与兽医 2005年第7期37卷 3-5页

作者：王继春何孔旺陆承平江苏省农科院兽医所农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

检测了4株猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2, SS2)和2株马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equi subsp. zooepidemicus, SEZ)对猪、兔的致病性.SS2-1、SS2-H及SS2-006444株均分离自发病猪内脏,前2株毒力因子表现型为MRP+EF+SLY+,后者为MRP-EF-SLY-;SS2-D株为国外引进的SS2人源株,作为对照,其毒力因子的表现型为MRP+EF·SLY+;SEZ-CY和SEZ-CN株均分离自发病猪并经鉴定.SS2-1、SS2-H、SEZ-CY和SEZ-CN株对猪(2～3头/组)的最小致死量分别为106、107、104和108 cfu;对兔(2～3只/组)的最小致死量分别为100～1 000、1 000、 100和105 cfu;SS2-D株108 cfu对猪不致死,对兔的最小致死量为108 cfu,而SS2-006444对猪、兔无致病性.显示SS2毒力因子与其对猪、兔的致病性有关;SS2与SEZ菌株对兔或猪的致病性一致,可用兔取代猪做试验;SS2和SEZ菌株通过腹腔、皮下、肌肉或静脉注射均可感染兔(2～4只/组),并致死,SEZ还可经口、鼻感染;SEZ与SS2静脉感染猪后10 min即可检出细菌,此后2～4 h为无菌血症阶段,之后重新出现.

关键词：猪链球菌2型马链球菌兽疫亚种动物致病性毒力因子

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