检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽药杂志 2014年第9期48卷 40-45页

作者：张金玲孙礼瑞谢恺舟张小杰李凯潍坊出入境检验检疫局山东潍坊261401 扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009 江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

建立了高效液相色谱荧光法检测鸡组织中阿莫西林（AMO）的残留量。鸡组织样品经磷酸二氢钠溶液提取,乙腈去蛋白,正己烷去脂肪,饱和二氯甲烷萃取,上清液经水杨醛在酸性条件下沸水浴衍生化。以0.01 mol/L的磷酸二氢钾溶液和乙腈溶液为流动... 详细信息

建立了高效液相色谱荧光法检测鸡组织中阿莫西林（AMO）的残留量。鸡组织样品经磷酸二氢钠溶液提取,乙腈去蛋白,正己烷去脂肪,饱和二氯甲烷萃取,上清液经水杨醛在酸性条件下沸水浴衍生化。以0.01 mol/L的磷酸二氢钾溶液和乙腈溶液为流动相,梯度洗脱,流速为1 mL/min,高效液相色谱荧光检测,激发波长为358 nm,发射波长为440 nm。阿莫西林在25~1000μg/kg质量浓度范围内,线性关系良好。当阿莫西林添加水平为13~125μg/kg时,鸡组织中AMO的平均回收率在72.82%~88.82%,相对标准偏差在6.21%~9.63%;检测限、定量限分别为5μg/kg（S/N≥3）、13μg/kg（S/N≥10）。该方法操作简便,可适用于鸡组织中阿莫西林的提取和检测,且准确度和精密度均符合残留分析的要求。

关键词：阿莫西林荧光法鸡组织高效液相色谱

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氨苄西林在鸡血浆中的残留消除规律

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上海畜牧兽医通讯 2014年第2期 2-5页

作者：孙礼瑞李爱华谢恺舟郭辉生赵敏谢星王剑锋倪海球张跟喜戴国俊王金玉扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009 江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

为建立鸡血浆中氨苄西林的高效液相色谱检测方法并研究氨苄西林在鸡血浆中残留消除规律。本试验将鸡血浆经乙腈提取、饱和二氯甲烷萃取，在酸性条件下与水杨醛沸水浴衍生化后，进行高效液相色谱荧光检测。结果显示：该方法测定鸡血浆中... 详细信息

为建立鸡血浆中氨苄西林的高效液相色谱检测方法并研究氨苄西林在鸡血浆中残留消除规律。本试验将鸡血浆经乙腈提取、饱和二氯甲烷萃取，在酸性条件下与水杨醛沸水浴衍生化后，进行高效液相色谱荧光检测。结果显示：该方法测定鸡血浆中氨苄西林的检测限为1．0ng／mL（S／N＝3）、定量限为2．5ng／mL（S／N＝10）；血浆样品中氨苄西林的平均回收率在82．46％～88．72％范围内，相对标准差在3．65％～5．10％范围内；试验组鸡分别以60、120mg／kg体重的剂量内服AMP，1次／d，连续5d，给药期间血浆中AMP浓度呈上升趋势，在给药第5d时AMP浓度达到峰值；休药第1d时，AMP浓度急剧下降，到休药第3d，AMP浓度低于检测限（1．0ng／mL）。表明氨苄西林在鸡血浆中的浓度与给药剂量呈正相关。

关键词：鸡血浆氨苄西林残留消除高效液相色谱荧光检测法

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兔白细胞介素-10基因的克隆、原核表达及其多克隆抗体的制备

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畜牧兽医学报 2013年第5期44卷 788-795页

作者：万小颖秦立志施丽娟王文洲李挺李碧春吴信生扬州大学动物科学与技术学院扬州225009 江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州225009

白细胞介素-10(IL-10)是一种多功能的细胞因子,参与免疫调节和抗炎反应。本研究旨在克隆并表达IL-10基因,以制备兔IL-10多克隆抗体。运用RT-PCR技术从新西兰白兔脾脏总RNA中扩增IL-10基因,将该基因亚克隆入原核表达载体pET-32a并转入大... 详细信息

白细胞介素-10(IL-10)是一种多功能的细胞因子,参与免疫调节和抗炎反应。本研究旨在克隆并表达IL-10基因,以制备兔IL-10多克隆抗体。运用RT-PCR技术从新西兰白兔脾脏总RNA中扩增IL-10基因,将该基因亚克隆入原核表达载体pET-32a并转入大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达获得融合蛋白,融合蛋白经纯化后免疫豚鼠制备多克隆抗体,最后分别用间接ELISA和Western blot检测抗体的效价和特异性。结果表明:克隆得到了兔IL-10基因,大小为537bp,经核苷酸测序与GenBank已登录的基因序列(NM_001082045)相似性为99%;重组载体pET-IL-10构建成功;SDS-PAGE电泳结果显示融合蛋白成功表达;制备的多克隆抗体效价高达1∶56 000,且具有很高的特异性。成功实现了兔IL-10基因的原核表达,并制备了豚鼠抗兔IL-10多克隆抗体,为深入研究兔IL-10基因的功能奠定了基础。

关键词：白细胞介素-10基因克隆表达抗体制备

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卡尼鄂拉蜂锌转运蛋白-7相似蛋白(ZnT-7-like)的基因克隆、抗体制备及差异表达

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昆虫学报 2013年第10期56卷 1117-1126页

作者：沈杰刘振国沈芳吉挺扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

【目的】本研究旨在克隆卡尼鄂拉蜂Apis mellifera carnica锌转运蛋白-7相似蛋白(zinc transporter 7-like,ZnT-7-like)基因,制备ZnT-7-like多克隆抗体,了解该基因在卡尼鄂拉蜂王浆腺中不同时期的差异表达情况。【方法】运用RT-PCR法从... 详细信息

【目的】本研究旨在克隆卡尼鄂拉蜂Apis mellifera carnica锌转运蛋白-7相似蛋白(zinc transporter 7-like,ZnT-7-like)基因,制备ZnT-7-like多克隆抗体,了解该基因在卡尼鄂拉蜂王浆腺中不同时期的差异表达情况。【方法】运用RT-PCR法从卡尼鄂拉蜂王浆腺总RNA中扩增ZnT-7-like基因,进行生物信息学分析,为避开跨膜结构的干扰,选择克隆其部分序列(273 bp)作为多肽免疫序列。将其亚克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,转入大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中诱导表达获得融合蛋白,然后将融合蛋白纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,分别用间接ELISA和Western blot检测抗体的效价和特异性,最后采用实时荧光定量RT-PCR以及Western blot技术检测该基因在不同日龄成虫王浆腺中的相对表达量。【结果】克隆得到卡尼鄂拉蜂ZnT-7-like基因,大小为1 065 bp。SDS-PAGE电泳结果显示融合蛋白成功表达;制备的多克隆抗体效价高达1∶64 000,且具有很高的特异性。ZnT-7-like在卡尼鄂拉蜂5个日龄成虫中的转录情况存在较大差异,表现为3日龄成虫中的表达量极显著高于其他日龄(P<0.01),12日龄表达量最低,其他日龄间表达量两两差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01);ZnT-7-like蛋白表达与转录水平基本一致。【结论】成功克隆了卡尼鄂拉蜂ZnT-7-like基因,制备了兔抗蜂ZnT-7-like多克隆抗体,并在转录和翻译两个水平上测定了ZnT-7-like在卡尼鄂拉蜂王浆腺中不同时期的相对表达量。这些结果为深入研究卡尼鄂拉蜂ZnT-7-like基因的功能奠定了基础。

关键词：卡尼鄂拉蜂王浆腺锌转运蛋白-7相似蛋白基因克隆抗体制备差异表达

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兔IL-10重组基因表达及其亚细胞定位的研究

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中国畜牧杂志 2013年第15期49卷 7-12页

作者：万小颖李挺王文洲施丽娟李碧春吴信生扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

本研究旨在克隆新西兰白兔白细胞介素10(IL-10)基因的cDNA,并探讨其生物信息学功能,进一步通过增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白实现该基因亚细胞水平的表达定位。实验采用RT-PCR方法克隆兔IL-10基因的cDNA,初步进行生物信息学分析,构... 详细信息

本研究旨在克隆新西兰白兔白细胞介素10(IL-10)基因的cDNA,并探讨其生物信息学功能,进一步通过增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白实现该基因亚细胞水平的表达定位。实验采用RT-PCR方法克隆兔IL-10基因的cDNA,初步进行生物信息学分析,构建含有EGFP报告基因的融合表达载体pEGFP-IL-10。脂质体(LTX)介导基因转染NIH-3T3细胞,48 h后在荧光倒置显微镜下观察基因表达产物的分布,RT-PCR检测mRNA在体外水平的表达。结果表明:实验成功克隆出兔IL-10基因537 bp长的完整编码区(CDS),共编码178个氨基酸,GenBank登录号为NM_001082045;IL-10蛋白的分子量为20.15 ku,理论等电点为8.20;信号肽区域预测结果显示,IL-10蛋白含有一小段信号肽序列,属于分泌型蛋白,并且信号肽酶的切割位置在第21和第22个氨基酸之间;荧光倒置显微镜观察结果发现,融合蛋白在细胞质中表达,而转染pEGFP-C1后荧光蛋白均匀分布于整个细胞;RT-PCR检测mRNA表达明显。结果显示,融合表达载体pEGFP-IL-10构建成功,并在细胞中明显表达,为进一步研究IL-10的生物学功能奠定基础。

关键词：白介素10基因绿色荧光蛋白 NIH-3T3细胞亚细胞定位细胞外及细胞膜兔

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白细胞介素-10研究进展

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畜牧与兽医 2013年第3期45卷 90-94页

作者：万小颖李挺秦立志吴信生扬州大学动物科学与技术学院/江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

白细胞介素-10(IL-10)是一种重要的抑炎性细胞因子,主要由Th2类细胞产生,抑制IFN-γ等细胞因子的产生。IL-10对机体的免疫功能和炎症过程均具有重要的调节活性,并且国内外最新研究均表明IL-10基因的多态性与多种疾病相关。本文综合近年... 详细信息

白细胞介素-10(IL-10)是一种重要的抑炎性细胞因子,主要由Th2类细胞产生,抑制IFN-γ等细胞因子的产生。IL-10对机体的免疫功能和炎症过程均具有重要的调节活性,并且国内外最新研究均表明IL-10基因的多态性与多种疾病相关。本文综合近年来国内外有关IL-10的应用研究状况作一综述,阐述其在不同疾病方面的应用。

关键词： IL-10 免疫多态性疾病

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扬州鹅及其杂交配套组合肌肉中硫胺素和胆固醇含量的比较

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中国畜牧杂志 2013年第15期49卷 26-29页

作者：谢恺舟孙瑛瑛陈学森陈书琴戴国俊赵万里扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

为比较扬州鹅及其杂交配套组合肌肉中硫胺素和胆固醇含量,以70日龄扬州鹅(A×A)及其4个杂交配套组合(K×B、K×A、C×A、S×A)共5个群体,分别取其胸肌和腿肌,采用高效液相色谱和气相色谱法分别测定鹅肌肉中硫胺素... 详细信息

为比较扬州鹅及其杂交配套组合肌肉中硫胺素和胆固醇含量,以70日龄扬州鹅(A×A)及其4个杂交配套组合(K×B、K×A、C×A、S×A)共5个群体,分别取其胸肌和腿肌,采用高效液相色谱和气相色谱法分别测定鹅肌肉中硫胺素和胆固醇含量。结果表明:5个群体中,同一群体鹅肌肉中的硫胺素含量在部位和性别间均无显著差异(P>0.05);公、母鹅混合后,A×A群体胸肌、腿肌中的硫胺素含量均显著高于其他4个群体(P<0.05)。5个鹅群体中,胸肌中胆固醇含量显著高于腿肌(P<0.05);K×A和A×A群体公鹅腿肌中的胆固醇含量显著小于母鹅腿肌(P<0.05);公、母鹅混合后,5个鹅群体胸肌中胆固醇含量差异不显著(P>0.05)。

关键词：杂交配套组合肌肉硫胺素胆固醇扬州鹅

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京海黄鸡及其杂交配套组合肉用性能和肉品质的研究

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中国畜牧杂志 2013年第9期49卷 1-5页

作者：谢恺舟孙瑛瑛陈学森黄玉萍戴国俊王金玉扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

以112日龄京海黄鸡(J×J)、70日龄京海黄鸡杂交配套组合(B×J)、70日龄B×B 3个鸡群体为试验素材,测定其屠宰性能、常规肉品质和化学指标。结果表明:3个鸡群体中,屠宰率为88.39%～92.31%,全净膛率为65.63%～70.01%;肌肉肉色... 详细信息

以112日龄京海黄鸡(J×J)、70日龄京海黄鸡杂交配套组合(B×J)、70日龄B×B 3个鸡群体为试验素材,测定其屠宰性能、常规肉品质和化学指标。结果表明:3个鸡群体中,屠宰率为88.39%～92.31%,全净膛率为65.63%～70.01%;肌肉肉色(OD值)为0.43～2.46,且胸肌肉色均较腿肌浅;嫩度在性别间差异不显著,但胸肌的嫩度均比腿肌好;胸肌中的校正肌苷酸(IMPc)含量均极显著高于腿肌(P<0.01),B×B群体公鸡胸肌中校正肌苷酸含量显著高于J×J及B×J群体(P<0.05)。B×B公母鸡混合群体胸肌中水分含量极显著高于B×J群体(P<0.01),J×J公母鸡混合群体胸肌中粗灰分含量显著高于B×J群体(P<0.05);3个公母鸡混合群体肌肉中粗脂肪、粗蛋白和校正肌苷酸含量差异均不显著。

关键词：杂交配套组合肉用性能肉品质京海黄鸡

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神经氨酸酶基因联合抗黏液病毒基因的抗病毒作用

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畜牧兽医学报 2013年第1期44卷 78-86页

作者：傅德智张亚妮陈昊李伟郑蒙蒙王丹张振韬施青青李碧春扬州大学动物科学与技术学院/江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州225009 苏州大学第一附属医院苏州215006

拟构建神经氨酸酶(NA)基因和抗黏液病毒(Mx)基因双基因真核共表达载体,并检测基因表达以及转染鸡成纤维(CEF)细胞后的抗病毒效果。克隆了NA基因和突变型Mx基因的cDNA;分别定向插入真核细胞双顺反子载体pVITRO2中,酶切和测序鉴定双基因... 详细信息

拟构建神经氨酸酶(NA)基因和抗黏液病毒(Mx)基因双基因真核共表达载体,并检测基因表达以及转染鸡成纤维(CEF)细胞后的抗病毒效果。克隆了NA基因和突变型Mx基因的cDNA;分别定向插入真核细胞双顺反子载体pVITRO2中,酶切和测序鉴定双基因共表达载体pVITRO2-Mx-NA的正确性。用pVITRO2-Mx-NA转染NIH-3T3细胞,通过RT-PCR和间接免疫荧光(IFA)方法检测目的基因的表达。随后用pVITRO2-Mx-NA转染CEF细胞,利用RT-PCR及微量细胞病变抑制法测定重组蛋白抗新城疫病毒(NDV)的效果。结果:酶切和测序分析表明成功构建了双基因真核共表达载体pVITRO2-Mx-NA,在转染后的NIH-3T3和CEF细胞中同时检测到了NA和Mx基因的表达。联合基因表达的重组蛋白可保护CEF细胞在孵育的72h内免受NDV的感染,而转染了突变型Mx或者NA单基因真核表达载体的CEF细胞在孵育的48h内亦未受到NDV的侵染;与单基因转染组相比,联合基因转染组明显延迟NDV感染CEF细胞的时间,差异显著(P<0.05)。构建的双基因真核表达载体pVITRO2-Mx-NA转染CEF细胞后,其表达的重组蛋白Mx-NA在细胞水平上具有协同延缓NDV感染的能力,且优于单个基因。

关键词： NA Mx 双基因表达载体抗病毒活性抗NDV

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猪脂多糖结合蛋白基因(LBP)的密码子偏好性分析

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农业生物技术学报 2013年第10期21卷 1135-1144页

作者：吴正常王靖赵乔辉朱世平訾臣吴圣龙包文斌扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏省现代种猪分子选育工程技术研究中心

脂多糖结合蛋白(lipopolysaccharide-binding protein,LBP)是机体识别革兰氏阴性菌内毒素并启动免疫反应的关键因子。为了了解LBP基因的密码子使用特性,为其选择合适的受体动物以及最佳外源表达系统提供依据,本研究运用CHIPS、CUSP和Cod... 详细信息

脂多糖结合蛋白(lipopolysaccharide-binding protein,LBP)是机体识别革兰氏阴性菌内毒素并启动免疫反应的关键因子。为了了解LBP基因的密码子使用特性,为其选择合适的受体动物以及最佳外源表达系统提供依据,本研究运用CHIPS、CUSP和CodonW在线程序分析自主电子克隆的猪(Sus scrofa)LBP基因(GenBank登录号:NM-001128435.1)的密码子偏好性,并与猪8种抗病相关基因、模式生物基因组以及其他物种LBP基因相比较。结果表明,猪LBP基因大部分偏好使用以G/C结尾的密码子,27种偏好密码子(相对使用度(RSCU)>1)中偏好性较强的有GCC、CAC、CTG和TCC(RSCU≥2),而猪8种抗病相关基因有23种偏好密码子,全部以G/C结尾,并且偏好性较强的密码子有GCC、ATC、CTG和GTG;通过比较14种动物的LBP基因密码子偏好性,发现14个物种的LBP基因表达水平一般,并且都偏好以G/C结尾的密码子;聚类分析发现,偶蹄目猪与2种食肉目动物(猫(Felis catus)和狗(Canis))聚为一类,与系统分类关系不一致;在密码子的使用频率上,猪LBP基因与小鼠(Mus musculus)基因组的差异小于大肠杆菌(Escherichia coli)和酵母菌(Saccharomyces)等2种模式生物基因组,故小鼠更适合作为该LBP基因的外源表达宿主。本研究结果为LBP基因在动物遗传改良中选择合适的受体动物、选择最佳的外源表达系统以及提高其表达水平提供一定的理论依据。

关键词：猪脂多糖结合蛋白基因(LBP) 密码子偏好性

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