检索结果-内蒙古大学图书馆

扬州大学学报（农业与生命科学版） 2020年第5期41卷 69-74页

作者：张柳明马金亮冯云奎褚长江胡慧茹 TARIQ Sohail 王彦虎李拥军扬州大学动物科学与技术学院/江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

为探究甘油对湖羊精液常温保存效果的影响,在基础稀释液中添加0 (对照组)、2%、4%、6%和8%甘油,检测16℃保存过程中湖羊精子活率、活力、质膜完整率、顶体完整率和直线速率等运动性能指标。结果表明:与对照组相比,保存48~120 h时, 2%甘... 详细信息

为探究甘油对湖羊精液常温保存效果的影响,在基础稀释液中添加0 (对照组)、2%、4%、6%和8%甘油,检测16℃保存过程中湖羊精子活率、活力、质膜完整率、顶体完整率和直线速率等运动性能指标。结果表明:与对照组相比,保存48~120 h时, 2%甘油组精子活率(P>0.05)、质膜完整率(P<0.05)和顶体完整率(P>0.05)提高;保存144~168 h时, 2%和4%甘油组精子活率(P>0.05)、质膜完整率(P<0.05)和顶体完整率(P>0.05)提高;保存192 h时,各甘油组精子活率(P<0.05)提高。随着甘油浓度的增加,直线速率、曲线速率、平均路径速率和侧摆幅度也表现为先升高后降低的趋势。在试验条件下,保存24 h内各甘油组均降低精液品质,保存48~120 h时2%甘油组精液品质提高,保存144~168 h时2%和4%甘油组精液品质提高,保存192 h时各甘油组精液品质均提高。

关键词：湖羊甘油精液常温保存精子运动性能

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猪FUT3基因序列分析及其表达水平与F18大肠杆菌抗性的关系

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农业生物技术学报 2020年第11期28卷 2002-2010页

作者：杨荔周雅静包文斌吴正常吴圣龙扬州大学动物科学与技术学院/江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室

断奶仔猪腹泻(post-weaning diarrhea, PWD)对国内外规模猪场造成了严重的经济损失,其中F18大肠杆菌(Escherichia coli F18, E. coli F18)是引起仔猪(Sus scrofa)细菌性腹泻的主要病原,本课题组前期通过测序和验证分析确定了一个E. coli... 详细信息

断奶仔猪腹泻(post-weaning diarrhea, PWD)对国内外规模猪场造成了严重的经济损失,其中F18大肠杆菌(Escherichia coli F18, E. coli F18)是引起仔猪(Sus scrofa)细菌性腹泻的主要病原,本课题组前期通过测序和验证分析确定了一个E. coli F18受体相关分子—α-1, 3岩藻糖转移酶基因(α-1, 3-fucosyltransferase, FUT3)。为了探究猪FUT3基因的基本结构特征和功能,本研究以梅山猪为实验材料,利用PCR扩增克隆FUT3基因编码区,并结合生物信息学方法预测其蛋白质结构与功能,q RT-PCR检测其组织表达谱,免疫组化方法分析其组织定位与表达分布情况,同时检测E. coli F18菌体感染猪小肠上皮细胞(intestinal porcine epithelial cell line J2, IPEC-J2)前后FUT3 mRNA和蛋白质表达变化。结果显示,梅山猪FUT3基因编码区全长1 068 bp,编码361个氨基酸,为脂溶亲水性、不稳定的非分泌蛋白,其蛋白质序列中包括2个糖基化位点、29个磷酸化位点和2个不同的保守结构域(Glycotran10N和Glycotransf10);组织表达谱显示,FUT3基因在各个组织中均有一定表达,尤其在肠道组织(十二指肠,空肠和回肠)中表达水平较高;免疫组化显示,FUT3在E. coli F18敏感型仔猪十二指肠中表达水平显著高于抗性型(P<0.05),并且FUT3主要分布在小肠上皮细胞黏膜表面;不同E. coli F18菌体刺激IPEC-J2细胞后,FUT3 mRNA和其蛋白质表达水平均表现出极显著的上调(P<0.01);FUT3基因在E. coli F18敏感型断奶仔猪十二指肠中的表达水平极显著高于抗性组(P<0.01)。本研究成功克隆获得了梅山猪FUT3基因编码序列全长,从生物信息学层面了解其蛋白结构和功能,并在个体和细胞水平上初步证实了猪FUT3表达水平对E. coli F18抗性具有重要的调控作用,为今后深入探究猪FUT3基因功能和表达调控机制提供了一定的基础资料。

关键词：猪 α-(1,2)岩藻糖转移酶基因3(FUT3) 表达调控 F18大肠杆菌(E. coli F18)

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鸡lncRNA-CEPT8启动子验证及活性核心区域筛选

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中国家禽 2020年第6期42卷 15-20页

作者：金晶余昕健靳锴李婷婷张晨左其生李碧春扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009 江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009 中国科学院昆明动物研究所云南昆明650223

研究旨在筛选鸡lncRNA-CEPT8启动子核心区域并验证其启动活性。采用qRT-PCR检测lncRNA-CEPT8在鸡不同组织中表达情况。生物信息学预测lncRNA-CEPT8启动子区域,PCR扩增启动子并构建pEGFP-lncCEPT8重组载体,转染DF-1细胞后48 h进行荧光观... 详细信息

研究旨在筛选鸡lncRNA-CEPT8启动子核心区域并验证其启动活性。采用qRT-PCR检测lncRNA-CEPT8在鸡不同组织中表达情况。生物信息学预测lncRNA-CEPT8启动子区域,PCR扩增启动子并构建pEGFP-lncCEPT8重组载体,转染DF-1细胞后48 h进行荧光观察。再构建启动子系列缺失载体(pGL3-p1、pGL3-p2、pGL3-p3、pGL3-p4、pGL3-p5),分别转染DF-1细胞后48 h检测双荧光素酶活性,分析缺失载体的启动活性。结果表明,lncRNA-CEPT8在鸡生殖嵴中特异性高表达,pEGFP-lncCEPT8重组载体转染DF-1细胞后有绿色荧光。缺失载体pGL3-p4与pGL3-p3相比,活性极显著下降(P<0.01)。研究明确了lncRNA-CEPT8上游-1174^-1 bp处为启动子,且-627^-429bp是启动子核心区域,为进一步研究其表达调控机制提供理论依据。

关键词：鸡启动子 lncRNA 核心区域

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猪m^6A去甲基化酶FTO、ALKBH5基因表达水平与大肠杆菌F18感染抗性的关系分析

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中国畜牧兽医 2020年第9期47卷 2960-2967页

作者：齐晓艺杨荔吴正常包文斌吴圣龙扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州225009 扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室扬州225009

为了探讨猪6-甲基腺嘌呤(m^6A)去甲基化酶mRNA表达水平与仔猪大肠杆菌F18抗性的关系,本研究运用实时荧光定量PCR方法检测m^6A去甲基化酶FTO和ALKBH5基因在35日龄苏太猪断奶仔猪大肠杆菌F18抗性型和敏感型个体十二指肠和空肠组织中的mRN... 详细信息

为了探讨猪6-甲基腺嘌呤(m^6A)去甲基化酶mRNA表达水平与仔猪大肠杆菌F18抗性的关系,本研究运用实时荧光定量PCR方法检测m^6A去甲基化酶FTO和ALKBH5基因在35日龄苏太猪断奶仔猪大肠杆菌F18抗性型和敏感型个体十二指肠和空肠组织中的mRNA表达差异,同时分别利用F18ab、F18ac大肠杆菌菌体刺激和内毒素LPS诱导猪小肠上皮细胞(IPEC-J2),检测FTO、ALKBH5基因表达变化。结果表明,FTO、ALKBH5基因在抗性型个体十二指肠和空肠中的表达量均极显著或显著高于敏感型个体(P<0.01,P<0.05);不同F18大肠杆菌菌体刺激IPEC-J2细胞后,FTO基因表达水平均无显著变化(P>0.05),而ALKBH5基因在F18ac刺激后表达量显著上调(P<0.05);LPS诱导4 h时,FTO和ALKBH5基因表达量均显著上调(P<0.05)。本研究在细胞和个体水平上初步验证并发现了m^6A去甲基化酶FTO和ALKBH5基因表达水平与大肠杆菌感染仔猪密切相关,为今后深入研究RNA去甲基化修饰在仔猪细菌性腹泻调控中的作用机制提供了理论基础。

关键词：猪 m6A甲基化 FTO基因 ALKBH5基因大肠杆菌

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鸡Wnt5a基因慢病毒干扰载体的构建及其稳定表达的胚胎干细胞系筛选

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农业生物技术学报 2020年第2期28卷 260-269页

作者：周静金晶何娜娜张晨王曼左其生张亚妮李碧春扬州大学动物科学与技术学院/江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室/农业科技发展研究院/教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室

本课题组前期通过高通量测序发现无翅型MMTV整合位点家族成员5A (winglesstype MMTV integration site family member 5A, Wnt5a)介导的Wnt/β-catenin信号在鸡(Gallus gallus)雄性生殖细胞形成过程中被显著富集,为研究Wnt5a基因介导的Wnt/β-catenin信号通路在鸡胚胎干细胞(embryonic stem cells, ESCs)向雄性生殖细胞分化过程中的功能,本研究通过慢病毒(Lentivirus)介导的RNA干扰技术,建立稳定干扰Wnt5a基因的鸡胚胎干细胞系。针对Wnt5a基因设计3个干扰靶点序列和1个阴性对照序列,与p GMLV-SC5慢病毒载体重组;将慢病毒重组载体分别转染鸡DF-1细胞,通过q RT-PCR检测Wnt5a基因的表达,以确定各干扰载体的干扰效率,并对干扰效果最好的重组载体进行慢病毒包裹。利用包裹干扰载体的慢病毒感染鸡ESCs,采用q RT-PCR及Western blot检测不同组别Wnt5a及Wnt信号通路下游关键基因轴抑制蛋白2(axis inhibition protein 2, Axin2)、β-链蛋白(beta catenin,β-catenin),磷酯酶C(phospholipase C, PLC)及泛素特异性肽酶54基因(ubiquitin specific peptidase 54, USP54)的表达量变化。同时构建Wnt5a过表达载体(p CDNA3.0-Wnt5a)进行Wnt5a基因的拯救实验。成功构建3条靶向Wnt5a的慢病毒干扰表达载体,分别为Wnt5a-sh RNA1、Wnt5a-sh RNA2和Wnt5a-sh RNA3,Wnt5a-sh RNA2重组质粒对Wnt5a基因的抑制效果最为明显,干扰效率可达80%,将Wnt5a-sh RNA2重组质粒包裹慢病毒,病毒滴度:5×108TU/m L;将Wnt5a-sh RNA2慢病毒转染鸡ESCs后,q RT-PCR和Western blot结果表明,干扰组Wnt5a m RNA表达和蛋白表达水平较对照组显著降低(0.16±0.03 vs 1.03±0.02)(P<0.05),Wnt信号通路下游关键基因Axin2和β-catenin的表达量发生了显著下调(0.41±0.08 vs 1.03±0.05; 0.25±0.04 vs 1.03±0.05)(P<0.05);同时对干扰组转染Wnt5a过表达载体(PCDNA3.0-Wnt5a),结果发现干扰组Wnt5a的表达水平能够恢复(1.19±0.07 vs 1.03±0.02)。本研究成功构建了靶向鸡Wnt5a的sh RNA慢病毒表达载体,可有效沉默Wnt5a基因在鸡DF-1细胞和胚胎干细胞中的表达,并且稳定表达Wnt5a-sh RNA2的胚胎干细胞系可干扰Wnt信号转导,该结果将为进一步在细胞水平开展Wnt5a基因及其介导的Wnt信号通路的功能研究提供理论依据。

关键词：无翅型MMTV整合位点家族成员5A (Wnt5a) shRNA 慢病毒载体鸡胚胎干细胞

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白藜芦醇对体外胚胎生产的作用机制

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安徽农业科学 2020年第6期48卷 20-22页

作者：胡慧茹王健瞿静雯孙晓梅李拥军扬州大学动物科学与技术学院/江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

白藜芦醇是存在于70多种植物中的一种多酚物质,常见于葡萄、桑椹等植物,具有抗炎、抗老、抗癌的效能。近年来,白藜芦醇对卵母细胞、冷冻精液、胚胎质量的影响备受关注。综述了白藜芦醇在体外胚胎生产中的应用情况,为白藜芦醇更广泛地应... 详细信息

白藜芦醇是存在于70多种植物中的一种多酚物质,常见于葡萄、桑椹等植物,具有抗炎、抗老、抗癌的效能。近年来,白藜芦醇对卵母细胞、冷冻精液、胚胎质量的影响备受关注。综述了白藜芦醇在体外胚胎生产中的应用情况,为白藜芦醇更广泛地应用于胚胎工程试验提供参考。

关键词：白藜芦醇卵母细胞冷冻精液胚胎

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原花青素和茶多酚对兔精子获能的影响

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2019年第2期40卷 89-94,106页

作者：瞿静雯王健李拥军王强尹修远扬州大学动物科学与技术学院/江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室

为探究原花青素和茶多酚对新西兰大白兔精子获能效果及其获能相关基因在获能前后表达差异的影响,在获能液中加入不同浓度(分别为0、0.5、1.0、1.5、2.0mg·mL^-1)的原花青素或茶多酚,与精液悬浮培养,以孕酮诱导顶体反应,并采用实时... 详细信息

为探究原花青素和茶多酚对新西兰大白兔精子获能效果及其获能相关基因在获能前后表达差异的影响,在获能液中加入不同浓度(分别为0、0.5、1.0、1.5、2.0mg·mL^-1)的原花青素或茶多酚,与精液悬浮培养,以孕酮诱导顶体反应,并采用实时荧光定量PCR技术检测获能相关基因--蛋白激酶A催化亚单位β(PRKACB)和酸性磷酸酶6(ACP6)在获能前后的表达差异。结果表明:兔精子获能液中原花青素的最适添加量为1-0mg·mL^-1,在此浓度下精子顶体反应率显著高于其他处理,以对照组获能后相关基因ACP6和PRKACB的表达量为1,则原花青素最佳处理组ACP6和PRKACE的相对表达量分别为1.41和3.12,显著高于对照组;茶多酚的最适添加量为1.0mg·mL^-1,在此浓度下精子顶体反应率显著高于其他处理组,以对照组获能后相关基因ACP6和PRKACB的表达量为1,则茶多酚最佳处理组ACP6和PRKACB的相对表达量分别为1.81和1.88,显著高于对照组。综合而言,兔精子获能液中原花青素或茶多酚的适宜添加量均为1.0mg·mL^-1时,在此浓度下,精子顶体反应率较高,ACP和PKA活性增强。

关键词：新西兰大白兔原花青素茶多酚精子获能基因表达

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京海黄鸡柔嫩艾美尔球虫感染对脾脏和盲肠IL-6、IL-8、CCLi2基因表达量的影响及其相关性

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浙江农业学报 2019年第1期31卷 39-46页

作者：辛世杰王晓慧戴国俊安婷婷张涛张跟喜谢恺舟王金玉王宏胜扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009 江苏省动物遗传育种与分子设计重点实验室江苏扬州225009 江苏京海禽业集团有限公司江苏海门226100

白介素6(IL-6)、白介素8(IL-8)和CC趋化因子配体2(CCLi2) 3种细胞因子在炎症反应以及机体免疫方面发挥重要作用。为了揭示球虫感染对脾脏和盲肠中IL-6、IL-8和CCLi2的表达量的影响,以京海黄鸡(Gallus gallus)为试验材料,设球虫感染组和... 详细信息

白介素6(IL-6)、白介素8(IL-8)和CC趋化因子配体2(CCLi2) 3种细胞因子在炎症反应以及机体免疫方面发挥重要作用。为了揭示球虫感染对脾脏和盲肠中IL-6、IL-8和CCLi2的表达量的影响,以京海黄鸡(Gallus gallus)为试验材料,设球虫感染组和非感染的对照组,利用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测了脾脏与盲肠组织中IL-6、IL-8和CCLi2的m RNA的相对表达量,比较同一组织感染组与对照组间3个基因表达量的差异,同时分析同一处理组的同一组织内、不同组织间3个基因表达量的相关性。研究结果表明:感染组脾脏组织IL-6、IL-8和CCLi2三个基因的表达量均显著高于对照组(P <0. 05),其中IL-6基因达极显著水平(P <0. 01);感染组盲肠组织中IL-6、IL-8和CCLi2的表达量均极显著地高于对照组(P <0. 01)。相关性分析结果表明,感染组脾脏组织中IL-6、IL-8和CCLi2的表达量之间均存在极显著的正相关(P <0. 01);在感染组盲肠组织中IL-8、CCLi2与IL-6基因的表达量存在极显著的正相关(P <0. 01),但IL-8与CCLi2基因表达量相关不显著(P> 0. 05);在对照组脾脏组织中,IL-6、IL-8与CCLi2间存在极显著的正相关(P <0. 01),其他基因间相关均不显著(P> 0. 05);对照组盲肠组织中IL-6、IL-8和CCLi2之间均存在极显著的正相关(P <0. 01);此外,无论感染组还是对照组,脾脏和盲肠组织间3个基因的表达量相关性均不显著(P> 0. 05)。以上结果表明,IL-6、IL-8和CCLi2可能在京海黄鸡球虫感染过程中发挥重要作用,研究结果对进一步探讨这3个基因在球虫病抗病育种中的作用提供了依据,对京海黄鸡球虫病抗病育种具有重要意义。

关键词：京海黄鸡盲肠脾脏 IL-6 IL-8 CCLi 2 基因表达相关性分析

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原鸡DMRT1基因密码子偏好性与进化分析

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中国畜禽种业 2025年第3期21卷 31-44页

作者：李泽宇李国辉靳锴孙红艳李碧春扬州大学农业科技发展研究院/教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏扬州225009 扬州大学动物科学与技术学院/江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009 江苏省家禽科学研究所江苏扬州225003

为了研究原鸡DMRT1基因密码子偏好性及其影响因素以及物种间遗传进化和密码子偏好关系,试验选取了原鸡以及另外15个代表性物种的DMRT1基因作为研究对象,通过Codon W软件和EMBOSS在线网站,系统分析这些基因密码子偏好性相关的7个关键指... 详细信息

为了研究原鸡DMRT1基因密码子偏好性及其影响因素以及物种间遗传进化和密码子偏好关系,试验选取了原鸡以及另外15个代表性物种的DMRT1基因作为研究对象,通过Codon W软件和EMBOSS在线网站,系统分析这些基因密码子偏好性相关的7个关键指标。使用ENC-plot和PR2-plot等方法对碱基突变等潜在影响因素进行了分析,基于各物种DMRT1基因的CDS序列信息构建了系统发育树;通过同义密码子相对使用度(RSCU)构建了不同物种的密码子使用偏好性热图,以直观展示各物种间密码子使用的差异和相似性。结果显示,DMRT1基因偏好使用以G/C结尾的密码子,而碱基突变是导致DMRT1基因偏好性产生的主要影响因素,系统发育树和热图表明,虽然密码子使用具有种属特异性,但由于受其他因素影响,亲缘关系相近的物种间密码子使用模式也会有差异。该文发现原鸡DMRT1基因的偏好性弱,其密码子在使用度上也与近缘物种有较大差异。

关键词：原鸡 DMRT1基因密码子偏好性遗传进化碱基突变

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京海黄鸡IL-6基因启动子区多态性的生物信息学分析

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农业生物技术学报 2018年第1期26卷 113-122页

作者：辛世杰安婷婷戴国俊张菁菁王诗琴王晓慧张跟喜谢凯舟王金玉扬州大学动物科学与技术学院扬州大学江苏省动物遗传育种与分子设计重点实验室

前炎性细胞因子白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)在许多慢性炎症和自身免疫性疾病的发病机制中起着至关重要的作用,尤其是炎症性肠病。为了从分子水平上探讨IL-6基因的表达调控,本研究以京海黄鸡(Gallus gallus)为素材,通过基因组DNA测... 详细信息

前炎性细胞因子白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)在许多慢性炎症和自身免疫性疾病的发病机制中起着至关重要的作用,尤其是炎症性肠病。为了从分子水平上探讨IL-6基因的表达调控,本研究以京海黄鸡(Gallus gallus)为素材,通过基因组DNA测序技术,检测IL-6基因上游-2 200 bp至下游500 bp区域中的单核苷酸多态(single nucleotide polymorphism,SNP),同时运用生物信息学软件预测IL-6基因核心启动子区转录因子以及CpG岛(CpG islands),分析所测SNPs以及该基因启动子区SNP突变前后转录因子和CpG岛的变化。测序结果表明,京海黄鸡中共检测到28个SNPs位点,其中位于5'调控区有19个,外显子区2个(均为同义突变),内含子区2个,3'区5个;在28个突变位点中,发现有4个为Gen Bank中未标注的SNPs,其中3个(G-357 A、C-447 G和A-663 G)位于5'调控区,1个位于3'区(C3177T)。生物信息学分析表明,有11个SNPs位于IL-6基因核心启动子区,并导致转录因子发生了改变;同时由于启动子区C-939G的突变,导致CpG岛区域由原来的3个变为2个,由此推测上述SNPs可能通过影响IL-6基因的启动子区转录因子以及甲基化区域的改变影响IL-6基因的表达调控。研究结果对进一步探讨IL-6基因的功能和作用,以及这些SNPs与鸡肠道炎症的抗性及生产性能的关系具有十分重要的意义。

关键词：京海黄鸡白介素6基因(IL-6) SNPs 转录因子 CpG岛生物信息学

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