检索结果-内蒙古大学图书馆

江苏农业科学 2019年第10期47卷 22-25页

作者：瞿静雯王健李拥军王强尹修远扬州大学动物科学与技术学院/江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室

卵母细胞培养是胚胎工程的重要组成部分,是体外受精、胚胎移植及转基因技术的基础。不断完善卵母细胞成熟培养条件,可以大大提高卵母细胞体外成熟的质量,充分发挥绵羊卵母细胞的繁殖潜力。绵羊卵母细胞体外成熟培养受到多种因素的限制,... 详细信息

卵母细胞培养是胚胎工程的重要组成部分,是体外受精、胚胎移植及转基因技术的基础。不断完善卵母细胞成熟培养条件,可以大大提高卵母细胞体外成熟的质量,充分发挥绵羊卵母细胞的繁殖潜力。绵羊卵母细胞体外成熟培养受到多种因素的限制,其中培养液成分包括基础培养基、血清、激素、卵泡液、生长因子、抗氧化物和维生素等6个方面。笔者对绵羊卵母细胞成熟培养的培养液成分相关研究进展进行综述,旨在提高绵羊卵母细胞体外成熟培养的质量和促进体外胚胎技术研究。

关键词：绵羊卵母细胞成熟培养研究进展培养液成分

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维生素C对兔精子获能的影响及其获能相关基因的表达

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黑龙江畜牧兽医 2018年第9期 202-205,252,253页

作者：郭海燕王强李拥军尹修远扬州大学动物科学与技术学院/江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室

为了探讨不同浓度维生素C对兔精子获能的影响以及与获能有关的关键基因在获能前后的表达差异,在获能液中加入不同浓度的维生素C（0,0.5,1.0,1.5 mg/m L）,精子获能后通过涂片染色镜检得到其顶体反应率,并通过RT-PCR得到与获能相关基因... 详细信息

为了探讨不同浓度维生素C对兔精子获能的影响以及与获能有关的关键基因在获能前后的表达差异,在获能液中加入不同浓度的维生素C（0,0.5,1.0,1.5 mg/m L）,精子获能后通过涂片染色镜检得到其顶体反应率,并通过RT-PCR得到与获能相关基因在获能前后的表达。结果表明：维生素C浓度为1.0 mg/m L的获能液中精子顶体反应率最高,为（0.500±0.057）%。说明添加维生素C浓度为1.0 mg/m L时,兔精子获能效果较好。获能后克隆人c AMP依赖性蛋白激酶催化亚单位β（PRKAB）、酸性磷酸酶（ACP）6基因相对表达量显著高于获能前（P〈0.05）。

关键词：维生素C 精子获能基因表达兔顶体反应率

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长江三角洲白山羊优质笔料毛关键基因CMTM3启动子区甲基化分析

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2018年第1期39卷 31-35,60页

作者：郭海燕王强李拥军尹修远瞿静雯张浩施建飞扬州大学动物科学与技术学院/江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

为进一步明确趋化素样因子3(CMTM3)基因在优质笔料毛性状形成过程中的调控作用,以长江三角洲白山羊为研究对象,采用亚硫酸氢盐处理后测序法,研究关键基因CMTM3在优质笔料毛羊群体中的表达水平,分析CMTM3基因甲基化状况与优质笔料毛性状... 详细信息

为进一步明确趋化素样因子3(CMTM3)基因在优质笔料毛性状形成过程中的调控作用,以长江三角洲白山羊为研究对象,采用亚硫酸氢盐处理后测序法,研究关键基因CMTM3在优质笔料毛羊群体中的表达水平,分析CMTM3基因甲基化状况与优质笔料毛性状之间的相关性。结果表明:CMTM3基因在优质笔料毛羊群体中的表达量极显著低于非优质笔料毛羊群体,而优质笔料毛羊群体的甲基化水平则高于非优质笔料毛羊群体,优质笔料毛羊群体的甲基化水平为84.7%~87.4%,非优质笔料毛羊群体为80.0%~81.6%;CMTM3基因的甲基化水平与其表达量呈负相关,相关性达显著或极显著水平。这一研究提示CMTM3基因参与了优质笔料毛性状的形成过程。

关键词：长江三角洲白山羊笔料毛 CMTM3基因 DNA甲基化

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气相色谱-串联质谱法检测鸭组织中哌嗪的残留

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中国兽医学报 2018年第7期38卷 1375-1380页

作者：王雅娟王波张杨杨崔璐璐赵霞郭亚文谢恺舟张跟喜戴国俊吴海清王金玉扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009 江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

建立了气相色谱-串联质谱法检测鸭组织（肌肉、肝脏、肾脏以及皮肤和脂肪）中哌嗪残留的新方法。样品通过加速溶剂萃取（ASE）和固相萃取（SPE）提取、净化，乙酸酐法衍生化后用气相色谱-串联质谱（GC-MS／MS）检测和确证。采用EI模式，... 详细信息

建立了气相色谱-串联质谱法检测鸭组织（肌肉、肝脏、肾脏以及皮肤和脂肪）中哌嗪残留的新方法。样品通过加速溶剂萃取（ASE）和固相萃取（SPE）提取、净化，乙酸酐法衍生化后用气相色谱-串联质谱（GC-MS／MS）检测和确证。采用EI模式，SCAN和SIM扫描定性，Auto SRM结合外标法定量。在定量限（LOQs），50，100,500，1000和2000μg／kg的加标水平上，鸭组织中哌嗪的平均回收率为84．24％-95．49％，相对标准偏差（RSDs）为2．03％-5．30％，日内相对标准偏差为1．72％-5．01％，日间相对标准偏差为2．11％-7．35％。哌嗪在鸭组织的检测限（LODs）为1．4-1．5μg／kg（S／N≥3），LOQs为4.8-5.2μg／kg（S／N≥10），其显著低于最大残留限量（MRL）。此方法灵敏度高。定性、定量准确，适用于鸭组织中哌嗪残留的确证检测。

关键词：哌嗪鸭组织残留气相色谱-串联质谱法

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猪miRNA-215前体序列突变对miRNA-215表达及大肠杆菌抗性的调控作用分析

猪miRNA-215前体序列突变对miRNA-215表达及大肠杆菌抗性的调控作...

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江苏省畜牧兽医学会首届“青年科技论坛”

作者：王海飞孙丽郜重丞吴圣龙包文斌扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州 225009 扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州 225009 扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室扬州 225009

(目的)microRNAs 在动物生长发育与疾病发生过程中均发挥着重要的调控作用,其功能序列区的遗传变异能够造成其相关功能的变化.本课题组前期通过高通量测序并结合荧光定量验证筛选出miR-215 是与断奶仔猪*** F18 抗性有关的microRNA.本... 详细信息

(目的)microRNAs 在动物生长发育与疾病发生过程中均发挥着重要的调控作用,其功能序列区的遗传变异能够造成其相关功能的变化.本课题组前期通过高通量测序并结合荧光定量验证筛选出miR-215 是与断奶仔猪*** F18 抗性有关的microRNA.本研究旨在探究miRNA-215 前体序列突变对miRNA-215 调控网络以及大肠杆菌抗性的影响.(方法)本研究运用聚合酶链式反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分别对苏太猪和梅山猪miR-192 和-215 前体序列进行遗传变异检测,同时构建miR-215 前体野生型和突变型表达载体,研究miRNA-215 前体序列遗传变异对miRNA-215 表达水平、靶基因(DLG5、ALCAM)表达水平、细胞因子表达水平以及粘附水平的影响.(结果)本文研究发现miR-192前体序列不存在突变,而miR-215 前体序列存在两处突变,分别是6 bp 处的AT 碱基插入突变(从miR-215 前体的第一个碱基开始)和43 bp 处的C/T 突变,两个突变在两个群体中均存在3 种基因型.细胞水平研究结果显示,相对于野生型载体转染组,C/T 突变型载体转染组细胞的miRNA-215 表达水平显著下调、靶基因表达水平显著上升,细胞因子水平升高,且其大肠杆菌粘附水平显著上升;而AT 插入突变型载体转染细胞组未发生显著变化.(结论)miRNA-215 前体序列变异可能对miRNA-215 调控网络产生影响,进而改变小肠上皮细胞稳定性,影响了机体对大肠杆菌的抗性.研究成果可为今后进一步开展miR-215 对仔猪F18 大肠杆菌抗性的调控机制的研究提供指导,同时也为寻找适合中国地方猪种抗F18 大肠杆菌病的有效遗传标记的奠定科学基础.

关键词：猪 miR-215 miR-192 前体序列大肠杆菌

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IL-6基因启动子区单核苷酸多态对京海黄鸡柔嫩艾美尔球虫抗性指标的影响

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2018年第1期39卷 36-41页

作者：王诗琴辛世杰王晓慧戴国俊安婷婷张菁菁张涛张跟喜谢恺舟王金玉王宏胜扬州大学动物科学与技术学院/江苏省动物遗传育种与分子设计重点实验室江苏扬州225009 江苏京海禽业集团有限公司江苏海门226100

为探究白介素6(IL-6)基因5′启动子区单核苷酸突变对鸡柔嫩艾美尔球虫抗性指标的影响,以京海黄鸡为试验材料,对IL-6基因5′调控区单核苷酸多态性(SNPs)进行检测,根据感染组与对照组血浆抗性指标酶联免疫吸附试验检测结果,分析SNPs突变... 详细信息

为探究白介素6(IL-6)基因5′启动子区单核苷酸突变对鸡柔嫩艾美尔球虫抗性指标的影响,以京海黄鸡为试验材料,对IL-6基因5′调控区单核苷酸多态性(SNPs)进行检测,根据感染组与对照组血浆抗性指标酶联免疫吸附试验检测结果,分析SNPs突变形成的基因型与抗性指标的关联。结果表明:感染组与对照组间过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量差异极显著,超氧化物歧化酶(SOD)活性及IL-2、IL-16、IL-17、γ干扰素(IFN-γ)水平和体增重差异显著;通过京海黄鸡IL-6基因启动子区基因序列与GenBank上的SNPs数据库比对,发现3个新的SNPs(A-663G、C-447G和G-357A),其中A-663G位点只有1种基因型GG,C-447G和G-357A位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态且多态性丰富;C-447G突变位点各基因型间比较发现,血浆CAT、SOD、GSH-Px活性及IL-2、IL-16、IL-17水平和体增重差异极显著,MDA含量差异显著;G-357A突变位点各基因型间比较发现,血浆CAT、SOD活性及IL-16水平和体增重差异极显著,GSH-Px活性和IL-17水平差异显著。就主要抗性指标而言,C-447G和G-357A2个突变位点的CC和AA纯合型个体优于其他基因型个体,CC和AA基因型分别为2个突变位点鸡球虫抗性有利基因型,这一结果为京海黄鸡鸡球虫抗性分子标记辅助育种提供了参考。

关键词：京海黄鸡柔嫩艾美尔球虫白介素6基因单核苷酸多态性抗性指标

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13种哺乳动物MUC4基因密码子使用模式分析

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农业生物技术学报 2018年第9期26卷 1546-1556页

作者：冯海悦张羽吴正常吴圣龙包文斌扬州大学动物科学与技术学院/江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏省种猪繁育和健康养殖工程技术研究中心

大肠杆菌(Escherichia coli)是导致人类和初生幼畜腹泻的重要人畜共患型病原体,而产肠毒素大肠杆菌F4是引起腹泻最常见的病原之一。前期已有研究表明4型黏蛋白基因(Mucin 4 gene,MUC4)可能作为大肠杆菌F4ab/F4ac的重要受体基因。研究密... 详细信息

大肠杆菌(Escherichia coli)是导致人类和初生幼畜腹泻的重要人畜共患型病原体,而产肠毒素大肠杆菌F4是引起腹泻最常见的病原之一。前期已有研究表明4型黏蛋白基因(Mucin 4 gene,MUC4)可能作为大肠杆菌F4ab/F4ac的重要受体基因。研究密码子的使用特性有助于进一步了解某一特定基因的分子机制和进化关系。为了揭示MUC4基因密码子的使用模式,本研究选取13种哺乳动物MUC4基因的编码序列,计算其碱基组成、有效密码子数、同义密码子相对使用度(relative synonymous codon usage,RSCU)等相关参数,同时分析了影响MUC4基因密码子使用偏好性的因素。结果表明:不同物种MUC4基因偏好使用以G或C结尾的密码子,RSCU值分析发现,不同物种中CUG、AGG、GCC、AUC、GUG、ACA为最优密码子(RSCU值>1.6);此外,MUC4基因密码子偏好性主要受密码子第3位碱基的GC含量(GC3s)的影响;聚类分析发现,猪(Sus scrofa)与家猫(Felis catus)聚为一类,人(Homo sapiens)与家犬(Canis lupus familiaris)聚为一类,与系统分类关系不一致。本研究系统揭示了MUC4基因密码子的使用模式,为今后MUC4基因在动物遗传改良中选择合适的受体动物,以及通过基因工程和密码子优化途径提高外源基因表达水平进而提高机体对大肠杆菌F4ab/F4ac病原菌感染的抗性提供理论依据。

关键词： 4型黏蛋白基因(MUC4) 密码子偏好性外源表达

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F18大肠杆菌抗性型与敏感型苏太断奶仔猪十二指肠组织比较转录组分析

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畜牧兽医学报 2018年第10期49卷 2112-2123页

作者：吴正常冯海悦黄焱杰吴丽思吴圣龙包文斌扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州225009 扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室扬州225009

旨在揭示培育品种—苏太猪(杜洛克×梅山猪)F18大肠杆菌抗性的调控通路和重要候选基因,同时进一步探究中外猪品种F18大肠杆菌抗性调控遗传基础的差异。本研究以课题组前期获得的苏太猪和梅山猪F18大肠杆菌抗性型与敏感型断奶仔猪全... 详细信息

旨在揭示培育品种—苏太猪(杜洛克×梅山猪)F18大肠杆菌抗性的调控通路和重要候选基因,同时进一步探究中外猪品种F18大肠杆菌抗性调控遗传基础的差异。本研究以课题组前期获得的苏太猪和梅山猪F18大肠杆菌抗性型与敏感型断奶仔猪全同胞个体为研究对象,通过转录组测序筛选苏太猪F18大肠杆菌抗性相关的调控通路以及重要候选基因,并在细胞水平,利用qPCR和Western blot分析F18大肠杆菌刺激小肠上皮细胞IPEC-J2后重要候选基因(蛋白)的表达变化,同时利用qPCR检测重要候选基因在苏太和梅山断奶仔猪F18大肠杆菌抗性型与敏感型个体十二指肠组织中的差异表达情况。结果显示:1)在苏太断奶仔猪F18大肠杆菌抗性型与敏感型个体中筛选出238个差异表达基因,主要参与Toll样受体信号通路(toll-like receptor signaling pathway)和糖脂类通路(glycosphingolipid biosynthesis-lacto and neolacto series),其中TLR5、IL-1β、FUT2为重要候选基因;2)不同血清型F18大肠杆菌(F18ac、F18ab)菌体分别刺激小肠上皮细胞IPEC-J2后,FUT2、IL-1β、TLR5基因mRNA表达水平显著上调(P<0.05),并且其蛋白表达水平也表现为明显的上调,由此表明,TLR5、IL-1β和FUT2在断奶仔猪F18大肠杆菌感染过程中发挥重要的调控作用;3)组织差异表达分析显示,TLR5、IL-1β和FUT2在苏太猪抗性型与敏感型个体十二指肠组织中表达差异均达到显著水平(P<0.05),而梅山猪中TLR5、IL-1β表达差异达到极显著水平(P<0.01),FUT2表达水平差异不显著(P>0.05)。结合课题组前期关于梅山猪及外来引进品种F18大肠杆菌抗性相关分子机制研究及报道,本研究进一步证明中外猪品种F18大肠杆菌抗性调控的遗传基础确实存在差异,Toll样受体信号通路及CD14、TLR5等基因可能在中国地方品种—梅山猪抵抗F18大肠杆菌感染过程中发挥着免疫调控作用,而鞘糖脂合成通路及FUT2等基因可能在外来猪品种F18大肠杆菌受体形成过程中起关键作用。

关键词：猪 F18大肠杆菌抗性基因调控通路

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白王鸽骨骼肌生长发育ceRNA调控网络构建及关键ceRNA鉴定

白王鸽骨骼肌生长发育ceRNA调控网络构建及关键ceRNA鉴定

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江苏省遗传学会2019年学术研讨会

作者：张闪闪陈兰张涛扬州大学动物科学与技术学院动物遗传繁育与分子设计江苏省重点实验室教育部农业与农产品安全国际联合实验室

在我国,鸽肉一直作为珍贵的滋补食品深入人心,素有"一鸽胜九鸡"的美誉。目前,我国已经成为国际上肉鸽生产和消费大国。目前,我国肉鸽的消费以30日龄乳鸽为主,而乳鸽30日龄体重与骨骼肌的生长发育密切相关。不同于其它禽类,鸽... 详细信息

在我国,鸽肉一直作为珍贵的滋补食品深入人心,素有"一鸽胜九鸡"的美誉。目前,我国已经成为国际上肉鸽生产和消费大国。目前,我国肉鸽的消费以30日龄乳鸽为主,而乳鸽30日龄体重与骨骼肌的生长发育密切相关。不同于其它禽类,鸽虽属于晚成雏,在出生后不具有自我觅食能力,但是其出生后早期生长速度快,强度大,7-10日龄既可达到生长拐点,4周龄体重可达初生重的29-36倍,因此,解析肉鸽早期高生长速度的遗传机理,对于肉鸽生长性状的改良具有十分重要的意义。近年来,非编码RNA功能受到广泛关注,大量研究表明,circRNA和lncRNA等非编码RNA作为ceRNA在畜禽骨骼肌生长发育过程中发挥重要的调控作用,但是鸽骨骼肌生长发育相关的ceRNA调控机制尚未见报道。本研究利用高通量测序技术分析了鸽骨骼肌生长发育过程中circRNA、lncRNA、mi RNA和m RNA的表达趋势,筛选了鸽骨骼肌生长发发育过程中的差异表达circRNAs、lncRNAs、mi RNAs和m RNAs,并基于靶基因预测、基因表达关系和超几何分布检验构建鸽骨骼肌生长发育相关的ceRNA调控网络。结果共鉴定到4918条lncRNAs、10346条circRNAs和2363条mi RNAs,基因表达相关性分析显示,鸽骨骼肌8胚龄和13胚龄基因表达模式高度相关,而胚胎期和生长早期基因表达模式相关性较低,表明鸽骨骼肌胚胎期和生长早期生长发育的调控机制存在较大差异。表达趋势分析结果显示,33个显著趋势中,24个为下调,表明鸽骨骼肌在生长期的基因调控活动要弱于胚胎期,胚胎期非编码RNA的调控活动更为活跃。最终,基于ceRNA假说,本研究成功构建了鸽骨骼肌相关的ceRNA调控网络,并从中筛选出5个重要的circRNA-miRNA-mRNA关系对和15个重要的lncRNA-miRNA-mRNA关系对。我们推测,非编码RNA Novelirc09286、Novelirc06689、Novelirc09211、Novelirc06689、Novelirc00030、TCONS0020696、TCONS0056927、TCONS0062175、TCONS0025283、TCONS0071495、TCONS0041483、TCONS0026594、TCONS0041482、TCONS0074320可能分别通过竞争性吸附cli-miR-499-5p、cli-miR-1b-3p、cli-miR-1a-3p,cli-miR-206-5p和cli-miR-133a-3p,调控MAPK6、BDNF、RARB、FSTL1和FZD7基因表达,进而参与调控鸽骨骼肌生长发育调控,但是上述基因调控鸽骨骼肌生长发育的具体分子机制尚待进一步研究。

关键词：鸽 circRNA lncRNA ceRNA 骨骼肌

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猪TLR5基因表达水平与F18大肠杆菌侵染关系分析

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中国畜牧兽医 2018年第5期45卷 1163-1169页

作者：赵呈祥戴开宇杜雨露包文斌吴圣龙扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州225009 江苏省种猪繁育和健康养殖工程技术研究中心扬州225009

为了探究猪Toll样受体(Toll-like receptor 5,TLR5)基因表达水平与F18大肠杆菌抗性的关系,试验通过不同血清型产肠毒素大肠杆菌(F18ab和F18ac)侵染猪小肠上皮细胞(IPEC-J2),同时通过脂多糖(LPS)分别诱导IPEC-J2细胞4和8h,利用实时荧光定... 详细信息

为了探究猪Toll样受体(Toll-like receptor 5,TLR5)基因表达水平与F18大肠杆菌抗性的关系,试验通过不同血清型产肠毒素大肠杆菌(F18ab和F18ac)侵染猪小肠上皮细胞(IPEC-J2),同时通过脂多糖(LPS)分别诱导IPEC-J2细胞4和8h,利用实时荧光定量PCR检测TLR5基因表达水平变化,并利用Western blotting进行蛋白表达分析。结果显示,不同血清型大肠杆菌(F18ab和F18ac)菌体侵染IPEC-J2细胞后,TLR5基因表达水平均极显著上调(P<0.01);LPS诱导IPEC-J2细胞4和8h后,TLR5基因表达水平均极显著上调(P<0.01),且在LPS诱导IPEC-J2细胞8h后,TLR5基因表达水平明显高于诱导4h。与对照组相比,细胞中TLR5蛋白的表达水平极显著上调(P<0.01),与LPS诱导及F18大肠杆菌菌体刺激IPEC-J2细胞后mRNA表达水平结果相一致。本研究在细胞水平上分析了TLR5表达水平和F18大肠杆菌侵染的相关性,进一步证实猪TLR5基因的表达水平在细胞抵抗F18大肠杆菌的侵染过程中发挥了重要的调控作用,为今后关于TLR5基因功能及其在大肠杆菌腹泻遗传育种应用的研究奠定基础。

关键词：猪 TLR5基因大肠杆菌 mRNA表达 Western blotting

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