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脂多糖通过PI3K/AKT和Wnt/β-catenin信号通路对BESCs增殖和凋亡的影响

中国兽医学报 2025年第1期45卷 100-106页

作者：董俊升王梓李汉卿郑芳玲张敏郭龙刘康军崔璐莹王亨李建基扬州大学兽医学院江苏省动物重要疫病与人畜共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏扬州225009 江苏省高校动物重要疫病和重要人兽共患病防控技术国际合作联合实验室江苏扬州225009

通过脂多糖(LPS)处理原代奶牛子宫内膜基质细胞(bovine endometrial stromal cells,BESCs),利用流式细胞术检测细胞凋亡率,利用CCK-法检测细胞活性,利用细胞划痕实验观察细胞迁移能力,利用荧光定量PCR法检测结缔组织生长因子(CTGF)、转... 详细信息

通过脂多糖(LPS)处理原代奶牛子宫内膜基质细胞(bovine endometrial stromal cells,BESCs),利用流式细胞术检测细胞凋亡率,利用CCK-法检测细胞活性,利用细胞划痕实验观察细胞迁移能力,利用荧光定量PCR法检测结缔组织生长因子(CTGF)、转化生长因子-β3(TGF-β3)和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达情况,利用Western blot技术检测PI3K/AKT和Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白的表达情况,探讨了LPS诱导BESCs发生炎性反应时对其修复方面的影响。结果显示,LPS处理BESCs后,细胞活性明显降低(P<0.01);细胞迁移能力明显下降(P<0.05);BESCs凋亡率明显升高(P<0.01);CTGF和TGF-β3 mRNA表达量明显下降(P<0.01),但VEGF mRNA表达量上升(P<0.01);PI3K、AKT和GSK-3β蛋白磷酸化水平下降(P<0.05),c-Myc和Cyclin-D1蛋白表达量下降(P<0.01)。结果表明,LPS可抑制BESCs增殖,促进细胞凋亡,这可能与LPS抑制PI3K/AKT和Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。

关键词：奶牛子宫内膜基质细胞 LPS PI3K/AKT Wnt/β-catenin 凋亡增殖

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针刺对溃疡性结肠炎大鼠氧化应激和内质网应激的影响

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针刺研究 2020年第1期45卷 8-14页

作者：吴阳阳刘明江殷韶杰王安源李金贵扬州大学兽医学院江苏省动物重要疫病与人畜共患病防控协同创新中心

目的:观察针刺治疗2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)大鼠的效应机制。方法:雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、手针组和电针组,每组7只。采用TNBS结肠灌注法建立UC模型。手针组和电针组分别予针刺或电针刺激"曲池&... 详细信息

目的:观察针刺治疗2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)大鼠的效应机制。方法:雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、手针组和电针组,每组7只。采用TNBS结肠灌注法建立UC模型。手针组和电针组分别予针刺或电针刺激"曲池""足三里"穴,20min/次,隔日1次,连续14d。干预14d后,HE染色观察大鼠结肠组织外观及病理变化,ELISA法检测结肠组织中氧化应激相关因子含量,Western blot法检测结肠组织中核转录因子κB通路中关键蛋白和内质网应激(ERS)关键蛋白的表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠结肠组织明显肿胀,大量炎性细胞浸润,肠绒毛缺失,结肠组织形态学评分较空白组显著升高(P<0.01),结肠组织内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、还原型谷胱甘肽(GSH)含量和总抗氧化能力(T-AOC)均显著降低(P<0.01),丙二醛(MDA)含量及磷酸化核因子κB抑制蛋白(p-IκBα)、p-p65、葡萄糖调节蛋白(GRP78)、磷酸化蛋白激酶样内质网激酶(p-PERK)、磷酸化真核转录起始因子2α(p-eIF2α)表达水平均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,电针组大鼠结肠病变明显减轻,肠绒毛较完整,结肠组织形态学评分显著降低(P<0.01),SOD、CAT、GSH含量及T-AOC显著升高(P<0.01,P<0.05),MDA含量及p-IκBα、p-p65、GRP78、p-PERK、p-eIF2α表达水平显著下降(P<0.01,P<0.05);手针组大鼠结肠病变改善显著,结肠组织形态学评分显著降低(P<0.01),SOD、CAT、GSH含量显著升高(P<0.01,P<0.05),MDA含量及p-IκBα、p-p65、GRP78、p-PERK、p-eIF2α表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论:手针或电针刺激"曲池""足三里"均能通过抑制TNBS诱导的氧化应激和内质网应激反应,减轻大鼠结肠炎性病变。

关键词：电针手针溃疡性结肠炎氧化应激内质网应激

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青蒿琥酯对Con A诱导小鼠自身免疫性肝损伤的保护作用研究

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中国中药杂志 2018年第10期43卷 2123-2128页

作者：曹婕赵昕刘明江郑卉李金贵扬州大学兽医学院江苏扬州225009 江苏省动物重要疫病与人畜共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

免疫性肝病是临床上难治性疾病,目前没有特效性药物,因此,研发新的有效干预药物,对防治免疫性肝病有重要的临床价值。为探讨青蒿琥酯（artesunate,Art）对免疫性肝损伤的保护作用,该研究采用不同质量浓度（27,54,108 mg·kg-1）Art... 详细信息

免疫性肝病是临床上难治性疾病,目前没有特效性药物,因此,研发新的有效干预药物,对防治免疫性肝病有重要的临床价值。为探讨青蒿琥酯（artesunate,Art）对免疫性肝损伤的保护作用,该研究采用不同质量浓度（27,54,108 mg·kg-1）Art灌胃小鼠连续7 d,然后尾静脉注射伴刀豆球蛋白A（concanavalin A,Con A）诱导小鼠肝损伤模型。于造模后8 h采血液和肝组织进行血清转氨酶（ALT,AST）、组织病变、炎性细胞因子以及NF-κB关键蛋白表达水平的检测。结果表明,与模型组相比,Art高浓度组显著降低了模型小鼠的肝指数、ALT和AST水平（P〈0.01）,组织病变也明显减轻,同时降低了促炎细胞因子TNF-α,IFN-γ,IL-6,IL-17的水平而增加了炎性抑制因子IL-10的表达（P〈0.05）,并呈现明显的剂量-效应关系。Western blot法检测结果显示108 mg·kg-1Art可显著抑制NF-κB关键蛋白p-p65和p-IκBα的表达（P〈0.01）。NF-κB特异阻断剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯（PDTC）也可显著抑制p-p65和p-IκBα表达并减轻肝损伤。以上结果说明Art主要通过抑制NF-κB信号通路而对Con A诱导的小鼠免疫性肝损伤发挥保护作用。该研究为青蒿琥酯用于自身免疫性肝损伤的防治提供了参考。

关键词：青蒿琥酯 ConA诱导小鼠免疫性肝损伤细胞因子 NF-κB

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针刺对溃疡性结肠炎大鼠结肠炎性细胞因子及细胞凋亡的影响

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针刺研究 2017年第1期42卷 56-61页

作者：施丽薇顾晗刘明江李金贵赵昕焦金英承南扬州大学兽医学院江苏扬州225009 江苏省动物重要疫病与人畜共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

目的:探讨针刺治疗对溃疡性结肠炎(UC)大鼠的效应及其可能的作用机制。方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组、电针组及手针组,每组8只。利用TNBS灌肠诱导大鼠UC。"曲池"穴和"足三里"穴电针或手针20min处理,每日1次,... 详细信息

目的:探讨针刺治疗对溃疡性结肠炎(UC)大鼠的效应及其可能的作用机制。方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组、电针组及手针组,每组8只。利用TNBS灌肠诱导大鼠UC。"曲池"穴和"足三里"穴电针或手针20min处理,每日1次,连续6d。观察结肠病变情况,酶联免疫吸附法检测大鼠结肠组织中炎性细胞因子、同型半胱氨酸(Hcy)和髓过氧化物酶(MPO)的含量;蛋白印迹法测定结肠组织中Bcl-2、Bax、抑制κB蛋白(磷酸化p-IκBα)和p-p 65等蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠结肠肿胀、出血明显,结肠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-10以及MPO和Hcy的含量均显著增加(P<0.01),Bcl-2/Bax比值显著降低,而p-IκBα和p-p 65显著升高(P<0.01);与模型组比较,电针组大鼠结肠病变明显减轻,结肠TNF-α、IL-1β、IL-6、MPO和Hcy水平显著降低(P<0.01),Bcl-2/Bax比值显著升高(P<0.01),而p-IκBα和p-p 65显著下降(P<0.01),手针组除MPO及Hcy外也有类似的变化趋势。结论:穴位电针或手针均能减轻TNBS诱导的结肠病变,该作用与其调节免疫、抑制细胞凋亡以及核转录因子关键蛋白的表达有关。

关键词：针刺溃疡性结肠炎炎性因子

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青蒿素对鸡柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子微线基因mRNA转录及鸡盲肠组织结构的影响

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畜牧兽医学报 2014年第5期45卷 833-838页

作者：莫平华马庆涛纪小霞宋萍陶建平李金贵扬州大学兽医学院扬州225009 江苏省动物重要疫病与人畜共患病防控协同创新中心扬州225009

拟探讨青蒿素抗鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)的作用机制。将试验鸡随机分为空白对照组、攻毒对照组和青蒿素药物组,于攻毒后120h,收集试验鸡的盲肠并提取***第二代裂殖子。通过红细胞计数法计算第二代裂殖子数量;SYBR Green I荧... 详细信息

拟探讨青蒿素抗鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)的作用机制。将试验鸡随机分为空白对照组、攻毒对照组和青蒿素药物组,于攻毒后120h,收集试验鸡的盲肠并提取***第二代裂殖子。通过红细胞计数法计算第二代裂殖子数量;SYBR Green I荧光定量PCR检测第二代裂殖子微线基因(EtMIC1、EtMIC2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC5)mRNA相对转录量及扫描电镜观察试验鸡盲肠组织的病理学变化。结果表明:与攻毒对照组比较,青蒿素组的球虫第二代裂殖子数量降低了25.37%(P<0.05),同时裂殖子中微线基因EtMIC1、EtMIC2、EtMIC4的mRNA转录水平均显著下调(P<0.05),EtMIC3、EtMIC5则极显著下调(P<0.01);青蒿素组盲肠的病理组织结构也得到改善。青蒿素减轻鸡盲肠组织病变可能与其下调EtMICs mRNA转录并使裂殖子数量减少有关。

关键词：鸡青蒿素柔嫩艾美尔球虫盲肠微线基因荧光定量PCR

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液相色谱-质谱联用法研究青蒿素在鸡体内的代谢规律

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中国畜牧兽医 2019年第9期46卷 2778-2786页

作者：韩一晴纪迅陈春琴刘明江李金贵扬州大学兽医学院扬州225009 江苏省动物重要疫病与人畜共患病防控协同创新中心扬州225009

为探究青蒿素(ART)在鸡体内的代谢规律,本研究建立了液相色谱串联三重四级杆质谱检测鸡血浆中ART的方法:即以电喷雾电离源(ESI)作为离子源,以蒿甲醚(ARM)做内标(IS),以ART和ARM的[M+Na]+准离子峰做二级质谱扫描,选择m/z 305.2→151.3(A... 详细信息

为探究青蒿素(ART)在鸡体内的代谢规律,本研究建立了液相色谱串联三重四级杆质谱检测鸡血浆中ART的方法:即以电喷雾电离源(ESI)作为离子源,以蒿甲醚(ARM)做内标(IS),以ART和ARM的[M+Na]+准离子峰做二级质谱扫描,选择m/z 305.2→151.3(ART)、m/z 321.0→163.1(ARM)两对离子以多监测反应方式(MRM)进行定量分析。结果表明,ART在10~1 000 ng/mL范围内线性关系良好(R 2=0.9997),最低检测限为10 ng/mL,回收率在90%~105%之间,日间、日内精密度(RSD)均小于15%。选取30日龄蛋鸡,按照3个剂量(15、40、100 mg/kg)以及口服的次数(1、11次)分成6个组,每组6只,各组分别灌胃给药。给药1次的各组前10次先口服溶剂,第11次按剂量灌服ART,给药11次的各组按剂量换算给药。每组在最后1次给药结束后10、30 min及1、1.5、2、2.5、3、4、6、8 h分别采集300μL血液加入抗凝管中待测。经检测发现,单一剂量(15、40或100 mg/kg)口服给药后ART在鸡血浆中的达峰时间分别为1、1.5、1.5 h;但上述剂量连续多次给药后检测发现药物代谢明显加快,并有剂量依赖性。综合试验结果,本试验建立的ART检测方法操作简单,灵敏,重现性好,可用于鸡血浆中ART的检测;ART在禽类体内存在明显的自身诱导代谢现象,且剂量越高,其代谢速度越快。

关键词：液相色谱-质谱联用鸡青蒿素药代动力学自身诱导

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Box-behnken响应面法优化茶树精油纳米脂质体的制备及其表征与抑菌活性分析

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中国兽医学报 2023年第1期43卷 144-151页

作者：詹轶雯李金贵扬州大学、兽医学院、江苏省动物重要疫病与人畜共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

筛选茶树精油纳米脂质体(TTONL)最佳制备工艺并对其进行表征和抑菌效果评价。采用薄膜水化超声法制备TTONL,Box-behnken响应面法优化TTONL的制备最佳条件,并对其性能和抑菌效果进行测定。结果显示,TTONL的最佳制备条件:卵磷脂和胆固醇... 详细信息

筛选茶树精油纳米脂质体(TTONL)最佳制备工艺并对其进行表征和抑菌效果评价。采用薄膜水化超声法制备TTONL,Box-behnken响应面法优化TTONL的制备最佳条件,并对其性能和抑菌效果进行测定。结果显示,TTONL的最佳制备条件:卵磷脂和胆固醇质量比3.7∶1,茶树精油(tea tree oil,TTO)浓度0.5%,水化介质pH 7.4,包封率为(80.31±0.56)%。透射电镜显示TTONL形状接近球形,平均粒径为(227.8±25.3)nm。红外光谱结果显示TTO被包合到脂质体内腔中。对TTONL的缓释性和稳定性进行考察,TTONL中的药物能在pH 7.4条件下缓慢释放,在42 d内,4℃环境下TTONL的粒径和多散性指数(PDI)变化都不大。体外抑菌试验表明TTONL对大肠杆菌具有很好的抑制和杀灭效果,最低抑菌浓度(MIC)为0.08%,最低杀菌浓度(MBC)为0.16%,较TTO原液相比降低;TTONL的抑菌活性与浓度呈正相关,1 MIC的TTONL处理大肠杆菌后,在8 h已完全达到杀菌效果。经优化后的TTONL形态表征良好,稳定性较好,缓释效果明显,对大肠杆菌具有显著的抑菌活性。

关键词：茶树精油脂质体薄膜水化超声法 Box-behnken响应面法体外表征抑菌活性

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禽致病性大肠杆菌外膜蛋白OmpA对DF-1细胞自噬的影响

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中国畜牧兽医 2023年第5期50卷 1971-1980页

作者：程前高清清王雨禾郇长超高崧扬州大学兽医学院扬州225009 江苏省动物重要疫病与人畜共患病防控协同创新中心扬州225009

【目的】探讨禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)外膜蛋白OmpA对DF-1细胞自噬的影响,为研究OmpA是否协助APEC逃逸宿主细胞自噬介导的清除作用提供依据。【方法】以APEC E058株基因组DNA为模版,通过PCR扩增回收o... 详细信息

【目的】探讨禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)外膜蛋白OmpA对DF-1细胞自噬的影响,为研究OmpA是否协助APEC逃逸宿主细胞自噬介导的清除作用提供依据。【方法】以APEC E058株基因组DNA为模版,通过PCR扩增回收ompA基因片段,经Eco RⅠ和XhoⅠ双酶切后克隆至真核表达载体pEGFP-N1,通过酶切及测序鉴定筛选阳性的重组表达质粒pEGFP-N1-ompA;随后将质粒转染至鸡胚成纤维细胞DF-1并通过Western blotting和免疫荧光试验检测OmpA蛋白的表达情况;通过透射电子显微镜、免疫荧光试验及Western blotting方法检测OmpA对DF-1细胞自噬的影响。【结果】测序鉴定正确的重组质粒pEGFP-N1-ompA经Eco RⅠ和XhoⅠ双酶切,获得大小分别为1038和4700 bp的条带,大小与载体和目的片段相符,表明真核表达质粒pEGFP-N1-ompA构建成功。将重组质粒经脂质体转染DF-1细胞后,通过免疫荧光试验可观察到大量绿色荧光,Western blotting检测到大小为65 ku的蛋白条带,表明成功转染pEGFP-N1-ompA至DF-1细胞中并大量表达ompA-EGFP融合蛋白。同时Western blotting结果显示,过表达OmpA可引起自噬标志性蛋白LC3Ⅱ的表达量增加;通过透射电子显微镜可观察到DF-1细胞中的自噬小体。将单荧光GFP-LC3质粒转染DF-1细胞,OmpA蛋白处理组呈现绿色荧光点的聚集,说明OmpA引发DF-1细胞自噬。进一步研究发现,OmpA影响自噬标志蛋白p62降解,转染双荧光mRFP-GFP-LC3质粒检测显示OmpA可阻断自噬流的发生。【结论】APEC外膜蛋白OmpA可引起DF-1细胞发生自噬,但其抑制自噬流的发生,引发DF-1细胞的不完全自噬,这将为进一步探讨APEC逃逸宿主细胞的清除作用提供参考。

关键词：禽致病性大肠杆菌 OmpA DF-1细胞系不完全自噬

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青蒿琥酯对鸡柔嫩艾美尔球虫子孢子侵入DF-1细胞的影响

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中国预防兽医学报 2018年第2期40卷 147-151页

作者：焦金英赵昕承南刘明江李金贵夏前贤扬州大学兽医学院江苏扬州225009 江苏省动物重要疫病与人畜共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

为研究青蒿琥酯(ARS)对柔嫩艾美耳球虫子孢子(SP)侵入DF-1细胞的影响,本实验利用ARS分别处理SP和DF-1细胞,前者经特定荧光标记后,流式细胞仪检测细胞凋亡、SP线粒体膜电位和侵入率。结果显示,ARS(2.5μmol/L)处理DF-1细胞12 h与未处理... 详细信息

为研究青蒿琥酯(ARS)对柔嫩艾美耳球虫子孢子(SP)侵入DF-1细胞的影响,本实验利用ARS分别处理SP和DF-1细胞,前者经特定荧光标记后,流式细胞仪检测细胞凋亡、SP线粒体膜电位和侵入率。结果显示,ARS(2.5μmol/L)处理DF-1细胞12 h与未处理组相比,细胞凋亡率无明显差异。与空白对照组相比,ARS直接处理SP 2 h,可使SP线粒体膜电位下降33.97±8.40%,并使其对细胞的侵入率下降4.13±3.97%。ARS直接处理细胞2 h和12 h后,再加入SP,则其侵入率分别下降7.23±2.74%和53.67±0.74%。细胞和SP混合后用ARS处理12 h,其侵入率下降56.30±1.81%。若在ARS处理的同时加入凋亡抑制剂米酵菌酸,可以使SP的侵入率提高9.70±0.60%(p<0.01)。这表明ARS作用于细胞后对SP侵入的抑制作用更为明显,并具有显著的时间效应。本研究为青蒿素类药物抗球虫作用机理研究提供实验依据。

关键词：青蒿琥酯柔嫩艾美尔球虫子孢子侵入率

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奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌免疫逃避机制研究进展

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畜牧兽医学报 2020年第12期51卷 2964-2971页

作者：刘丹丹崔常勇张弛刘明江扬州大学兽医学院扬州225009 龙口海关烟台265700 江苏省动物重要疫病与人畜共患病防控协同创新中心扬州225009

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)型奶牛乳腺炎是一种较难控制的慢性、亚临床型传染病,给奶牛养殖业带来巨大的经济损失。多种SA免疫逃避机制在乳腺炎发生、发展过程中起重要作用,且SA的免疫逃避机制多与菌体毒力因子相关。本... 详细信息

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)型奶牛乳腺炎是一种较难控制的慢性、亚临床型传染病,给奶牛养殖业带来巨大的经济损失。多种SA免疫逃避机制在乳腺炎发生、发展过程中起重要作用,且SA的免疫逃避机制多与菌体毒力因子相关。本文对近年研究的奶牛乳腺炎SA的免疫逃避机制进行了综述,以期为SA型奶牛乳腺炎的防治研究提供参考。

关键词：奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌免疫逃避

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