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中国地方病学杂志 2010年第5期29卷 515-518页

作者：童海燕方政张赛楠徐邦生方浩黄为群谢东方石佑琴江苏省南通大学医学院寄生虫学教研室 226001

目的克隆周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂（BmCPI）基因,并通过序列测定、分析及编码产物的B细胞表位预测,为进一步研究该基因的功能奠定基础.方法从周期型马来丝虫虫体中抽提总RNA,以mRNA为模板,采用RT-PCR法体外扩增BmCPI基因,... 详细信息

目的克隆周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂（BmCPI）基因,并通过序列测定、分析及编码产物的B细胞表位预测,为进一步研究该基因的功能奠定基础.方法从周期型马来丝虫虫体中抽提总RNA,以mRNA为模板,采用RT-PCR法体外扩增BmCPI基因,扩增产物经初步鉴定后将其克隆入pGEM-T载体,转化大肠埃希菌（***）DH5α,筛选阳性克隆,进行双酶切及PCR扩增鉴定,获得阳性重组质粒pGEM-TBmCPI,经测序验证,并进行同源性比较.应用5种参数和方法对其编码产物进行B细胞表位预测.结果 RTPCR扩增出一条约621 bp大小的特异性条带,重组质粒双酶切的PCR结果与预期相符,DNA序列分析与GeneBank已知的基因序列同源性为99%.其编码产物经表位预测分析,B细胞表位可能在23～32、50～79、117～126位氨基酸区域.结论成功构建了周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂重组质粒pGEM-T克隆载体,并进行了序列测定及编码产物的B细胞表位预测,达到预期目标,为进一步研究该基因的功能提供条件.

关键词：半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因序列分析丝虫病 B细胞表位

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周期型马来丝虫3-磷酸甘油醛脱氢酶/半胱氨酸蛋白酶抑制剂复合基因真核重组质粒的构建与表达

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中国地方病学杂志 2011年第4期30卷 371-375页

作者：刘晓骏郭晓峰张赛楠陆施娟方浩徐邦生方政江苏省南通大学医学院寄生虫学教研室 226001

目的构建周期型马来丝虫3-磷酸甘油醛脱氰酶/半胱氨酸蛋白酶抑制剂（GAPDH/CPI）复合基因真核重组表达质粒,为研制复合多价疫苗奠定基础.方法依据GenBank中BmGAPDH及BmCPI基因序列设计引物,以周期型马来丝虫总RNA为模板,RT-PCR扩增目... 详细信息

目的构建周期型马来丝虫3-磷酸甘油醛脱氰酶/半胱氨酸蛋白酶抑制剂（GAPDH/CPI）复合基因真核重组表达质粒,为研制复合多价疫苗奠定基础.方法依据GenBank中BmGAPDH及BmCPI基因序列设计引物,以周期型马来丝虫总RNA为模板,RT-PCR扩增目的编码基因.PCR产物经TA克降后,克隆至载体pGEM-T Easy中.取阳性重组质粒pGEM-T/BmGAPDH和pGEM-T/BmCPI以及真核重组表达载体分别双酶切,将酶切后的载体和目的片段进行连接,构建真核重组表达质粒pcDNA3.1（＋）/BmGAPDH/BmCPI.将复合基因重组质粒瞬时转染人HeLa细胞后,进行RT-PCR验证,将表达产物用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）进行分析和鉴定.结果分别克隆了pGEM-T/BmGAPDH和pGEM-T/BmCPI重组质粒,经酶切鉴定分别得到877、621 bp特异性片段,与预期值吻合.成功构建了复合基因重组真核表达载体pcDNA3.1（＋）/BmGAPDH/BmCPI,酶切鉴定所产生的片段大小与预期吻合.复合基因真核重组表达质粒转染HeLa细胞后得到高水平表达,SDS-PAGE分析显示重组蛋白相对分子质量（Mr）约为54×103.结论成功构建了周期型马来丝虫GAPDH/CPI复合基因重组表达质粒,并在哺乳动物细胞内得到正确表达.

关键词：丝虫,马来甘油醛-3-磷酸脱氢酶类半胱氨酸蛋白酶抑制剂重组,遗传 HeLa细胞

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周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶基因的扩增、克隆及序列分析

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现代预防医学 2007年第13期34卷 2426-2428页

作者：黄为群方政陈阳姜声扬吴建军谢东方江苏南通大学医学院寄生虫学教研室南通 226001 江苏南通大学医学院寄生虫学教研室

[目的]克隆周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶(cysteine protease of periodic Brugiamalayi,BmCP)基因到原核载体中,测定其序列,为进一步的研究奠定基础。[方法]从周期型马来丝虫虫体中抽提总RNA,以mRNA为模板,采用RT-PCR法体外扩增出BmCP... 详细信息

[目的]克隆周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶(cysteine protease of periodic Brugiamalayi,BmCP)基因到原核载体中,测定其序列,为进一步的研究奠定基础。[方法]从周期型马来丝虫虫体中抽提总RNA,以mRNA为模板,采用RT-PCR法体外扩增出BmCP基因序列,扩增产物经初步鉴定后将其克隆入pMD18-T载体,转化大肠杆菌(***)DH5α,筛选阳性克隆,进行双酶切及PCR扩增鉴定,获得阳性重组质粒pMD18-T-BmCP,经测序验证,并进行同源性比较。[结果]RT-PCR扩增出一条约1201bp大小的特异性条带,重组质粒双酶切和以质粒为模板的PCR结果与预期相符,DNA序列分析与GeneBank已知的基因序列同源性为99%。[结论]成功构建了周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶重组质粒pMD18-T克隆载体,为进一步研究该基因的功能提供了条件。

关键词：周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶基因克隆序列分析

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IL-12对伯氏疟原虫红内期感染小鼠IFN-γ、TNF-α、IL-10水平的影响

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中国人兽共患病杂志 2005年第6期21卷 537-538页

作者：陈姝陆惠民张山鹰高琪唐学恒苏州大学医学院寄生虫学教研室福建省寄生虫病防治研究所江苏省寄生虫病防治研究所

IL-12是一种具有多种生物学活性的细胞因子，可诱导T细胞，NK细胞产生IFN-γ及TNF—α等细胞因子。增强T细胞、NK细胞毒活性并调节CD2Th细胞向Th1分化等。已有报道，IL-12在伯氏疟原虫(***，P．b)感染中具有诱导免疫保护作用和产生毒副... 详细信息

IL-12是一种具有多种生物学活性的细胞因子，可诱导T细胞，NK细胞产生IFN-γ及TNF—α等细胞因子。增强T细胞、NK细胞毒活性并调节CD2Th细胞向Th1分化等。已有报道，IL-12在伯氏疟原虫(***，P．b)感染中具有诱导免疫保护作用和产生毒副反应的双重活性，诱导保护作用而减少毒副反应。剂量是关键。本文拟观察IL-12对伯氏疟原虫红内期感染小鼠IFN-γ、TNF-α、IL-10水平的影响，

关键词： IL-12 疟原虫红内期 IFN-γ TNF-α IL-10 感染小鼠水平 NK细胞毒活性免疫保护作用细胞因子毒副反应生物学活性伯氏疟原虫 Th细胞 T细胞 Th1 CD2

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IL-12在抗伯氏疟原虫感染中的免疫佐剂作用

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中国人兽共患病杂志 2004年第7期20卷 601-604页

作者：陈姝陆惠民张山鹰高琪唐学恒苏州大学医学院寄生虫学教研室苏州215007 福建省寄生虫病防治研究所江苏省寄生虫病防治研究所

目的　探讨IL - 12在抗伯氏疟原虫感染中的免疫佐剂作用。方法　BALB/c小鼠分别皮下用抗原sAg、IL - 12、抗原sAg联合IL - 12或抗原sAg联合弗氏佐剂进行免疫 ,共免疫 3次 ,每次间隔 2wk ,末次免疫后 1wk以 5× 10 5个感染P berghei... 详细信息

目的　探讨IL - 12在抗伯氏疟原虫感染中的免疫佐剂作用。方法　BALB/c小鼠分别皮下用抗原sAg、IL - 12、抗原sAg联合IL - 12或抗原sAg联合弗氏佐剂进行免疫 ,共免疫 3次 ,每次间隔 2wk ,末次免疫后 1wk以 5× 10 5个感染P berghei的RBC攻击感染 ,观察各组小鼠原虫血症变化及存活时间。攻击感染后 1wk收集各组小鼠血清 ,采用ELISA检测血清中IFN -γ、IL - 4、IL - 10及IgG水平。结果　抗原sAg联合IL - 12免疫可较其它各免疫组及未免疫对照组显著延长小鼠存活时间 ,且全部小鼠在原虫血症达 5 0 %时开始死亡 ;而单独抗原sAg、单独IL - 12或抗原sAg联合弗氏佐剂免疫与未免疫比较 ,对小鼠原虫血症及存活时间均无明显影响 ,且半数以上小鼠均在原虫血症小于 2 5 %时死亡。抗原联合IL - 12免疫组小鼠血清中IFN -γ及IgG水平较单独抗原sAg、单独IL - 12及未免疫组显著升高。结论　结果表明 ,IL - 12与sAg抗原共同免疫小鼠可诱导对P berghei攻击感染的部分抵抗力 ,具有一定的免疫佐剂活性。

关键词：自细胞介素12 伯氏疟原虫免疫佐剂 ELISA

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大鼠源肺孢子菌p55基因片段真核表达质粒的构建及表达

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中国人兽共患病学报 2010年第1期26卷 25-28页

作者：易亮衡秦永伟陈金铃朱丹丹何兴新段义农南通大学医学院寄生虫学教研室南通226001 湖北省黄石市疾病预防控制中心黄石435000

目的构建大鼠源肺孢子菌抗原p55基因片段真核表达质粒,并研究该质粒在真核细胞COS-7中的有效表达。方法以含有p55全长基因的质粒为模板,通过PCR扩增p55基因片段,克隆至pGEM-T载体中,经酶切后再将p55基因重组至真核表达载体pcDNA3.1(+)中... 详细信息

目的构建大鼠源肺孢子菌抗原p55基因片段真核表达质粒,并研究该质粒在真核细胞COS-7中的有效表达。方法以含有p55全长基因的质粒为模板,通过PCR扩增p55基因片段,克隆至pGEM-T载体中,经酶切后再将p55基因重组至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-582,经限制性内切酶酶切分析及测序鉴定正确后,应用脂质体转染技术转染入COS-7细胞,RT-PCR检测其基因转录情况,SDS-PAGE鉴定其表达相应的目的蛋白质情况。结果成功扩增了p55基因片段,酶切和测序证明正确构建了重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-582,RT-PCR和SDS-PAGE方法证实该片段能在COS-7细胞中有效表达目的蛋白质。结论成功构建了大鼠源肺孢子菌p55基因片段的真核表达质粒载体,并在COS-7细胞中表达,为进一步进行核酸疫苗的研究奠定了基础。

关键词：大鼠源肺孢子菌 p55基因真核表达

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影响间日疟原虫红内期短期体外培养的虫源因素研究

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中国血吸虫病防治杂志 2010年第1期22卷 56-58,I0007页

作者：陆凤高琪夏惠曹俊陶志勇朱国鼎周华云 Han Eun-taek 江文才王伟明顾亚萍李菊林江苏省寄生虫病防治研究所、江苏省寄生虫分子生物学重点实验室、江苏省寄生虫病学重点学科无锡214064 蚌埠医学院韩国江原大学医学院寄生虫学教研室

目的探讨影响红内期间日疟原虫短期体外培养的虫源因素。方法在间日疟流行区采集志愿者血样,以Mc-Coy’s5A为培养基,在含5%CO2的37℃培养箱中短期培养,分析间日疟原虫短期体外培养的影响因素。结果培养基可支持间日疟原虫完成1个无性周... 详细信息

目的探讨影响红内期间日疟原虫短期体外培养的虫源因素。方法在间日疟流行区采集志愿者血样,以Mc-Coy’s5A为培养基,在含5%CO2的37℃培养箱中短期培养,分析间日疟原虫短期体外培养的影响因素。结果培养基可支持间日疟原虫完成1个无性周期循环。导致间日疟原虫体外短期培养失败的因素包括含虫血置于室温时间过长(>4h)、期别单一(只见环状体)、病人服用抗疟药、服用抗生素药物、原虫密度过低。结论虫源是影响间日疟原虫短期体外培养的重要因素。

关键词：间日疟原虫培养红内期影响因素

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特异性IgG抗体在同源与异种疟原虫再感染中的作用研究

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中国人兽共患病学报 2009年第4期25卷 358-360页

作者：方强刘军陈光曹雅明高琪苏州大学医学院寄生虫学教研室苏州215123 蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 中国医科大学免疫学教研室沈阳110001 佳木斯大学基础医学院寄生虫学教研室佳木斯154000 江苏省寄生虫病防治研究所、卫生部寄生虫病预防与控制技术重点实验室无锡

目的探讨特异性IgG抗体在同源和异种疟原虫再感染过程中的作用。方法DBA/2小鼠经腹腔感染致死型约氏疟原虫(Py17XL)60d后,采用等量Py17XL、Py17XNL、Pynigeriensis或PbANKA分别再次攻击,计数红细胞感染率;采用ELISA方法动态检测脾细胞... 详细信息

目的探讨特异性IgG抗体在同源和异种疟原虫再感染过程中的作用。方法DBA/2小鼠经腹腔感染致死型约氏疟原虫(Py17XL)60d后,采用等量Py17XL、Py17XNL、Pynigeriensis或PbANKA分别再次攻击,计数红细胞感染率;采用ELISA方法动态检测脾细胞培养上清中IFN-γ及其血清中特异性IgG抗体水平的变化。结果Py17XNL和Pynigeriensis再感染小鼠出现一过性低水平的原虫血症;再感染后第4d脾细胞培养上清中IFN-γ水平与正常小鼠相比无显著性差异(P>0.05),而血清中特异性IgG抗体水平明显升高(P<0.01),小鼠全部存活。相比,PbANKA再感染小鼠出现高水平的原虫血症,与其初次感染水平相近,再感染后第4d脾细胞培养上清中IFN-γ水平出现明显升高(P<0.01),而血清中特异性的IgG抗体水平却无明显变化,与正常小鼠水平接近,小鼠全部死亡。结论特异性IgG抗体可在宿主抗同源疟原虫再感染中发挥着重要作用,而对异种疟原虫再感染无保护性。

关键词：特异性IgG 啮齿类疟原虫再感染

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弓形虫SAG1、SAG3基因的克隆和复合基因SAG1/SAG3真核表达重组质粒的构建

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医学动物防制 2008年第11期24卷 809-811页

作者：陈晓燕马济宏南通大学医学院免疫学教研室江苏省226001 南通大学医学院人体寄生虫学教研室江苏省226001

目的构建弓形虫表面抗原SAG1、SAG3复合基因的真核表达重组质粒,为弓形虫疫苗的研制作准备。方法提取弓形虫基因组DNA;用PCR技术扩增出表面抗原SAG1、SAG3的基因,再分别重组入pGEM-T克隆载体;将pGEM-SAG1和pGEM-SAG3重组质粒分别经酶切... 详细信息

目的构建弓形虫表面抗原SAG1、SAG3复合基因的真核表达重组质粒,为弓形虫疫苗的研制作准备。方法提取弓形虫基因组DNA;用PCR技术扩增出表面抗原SAG1、SAG3的基因,再分别重组入pGEM-T克隆载体;将pGEM-SAG1和pGEM-SAG3重组质粒分别经酶切、纯化后定向亚克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体,经PCR、酶切及测序等方法对重组子进行鉴定。结果从弓形虫基因组DNA中扩增出SAG1、SAG3基因;构建了pGEM-SAG1、pGEM-SAG3克隆质粒;成功构建pcDNA3.1(+)-SAG1-SAG3真核表达复合基因质粒,测序表明目的基因定向正确连接。结论构建了pcDNA3.1(+)-SAG1-SAG3复合基因表达质粒,为今后研制弓形虫复合多价疫苗提供候选抗原奠定了实验基础。

关键词：弓形虫 SAG1基因 SAG3基因克隆基因重组

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间日疟原虫不同MSP-1等位基因型形态学观察

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中国人兽共患病杂志 2005年第3期21卷 234-236,205页

作者：张山鹰许龙善张莹珍谢汉国高琪陆惠民福建省疾病预防控制中心福州35000 江苏省寄生虫病防治研究所苏州大学医学院寄生虫学教研室

目的　比较两种不同等位基因型间日疟原虫生物学形态特征。方法　现场采集间日疟病人血样并进行基因分型 ,镜下观察形态并测量大小。结果与结论　 72份现场分离株基因分型为Sal- 1型 4 0份 ,Belem型 2 5份 ,混合感染 7份 ,均查到典型的... 详细信息

目的　比较两种不同等位基因型间日疟原虫生物学形态特征。方法　现场采集间日疟病人血样并进行基因分型 ,镜下观察形态并测量大小。结果与结论　 72份现场分离株基因分型为Sal- 1型 4 0份 ,Belem型 2 5份 ,混合感染 7份 ,均查到典型的间日疟原虫 ,6例多重感染病例均发现在海南分离株 ,多重感染与基因型混合感染无关联。测量正常红细胞、寄生红细胞、环状体以及核大小差别有显著意义 ,Belem型比Sal- 1型大。

关键词：间日疟原虫裂殖子表面蛋白1 基因型形态学

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