检索结果-内蒙古大学图书馆

中华皮肤科杂志 2013年第10期46卷 719-722页

作者：王焱王震英孙建方陈浩周武庆方方张国成中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室南京210042 山东大学附属省立医院皮肤科

目的探讨miR-21抑制物和miR-494模拟物转染A375细胞的最佳有效转染浓度及其对黑素瘤A375细胞增殖的影响。方法取6个浓度梯度的miR-21抑制物和miR-494模拟物转染A375细胞，实时荧光定量PCR法检测相应的miRNA。继而用Cy5标记的miRNA模拟... 详细信息

目的探讨miR-21抑制物和miR-494模拟物转染A375细胞的最佳有效转染浓度及其对黑素瘤A375细胞增殖的影响。方法取6个浓度梯度的miR-21抑制物和miR-494模拟物转染A375细胞，实时荧光定量PCR法检测相应的miRNA。继而用Cy5标记的miRNA模拟物阴性对照转染A375细胞，荧光显微镜下观察转染效率。用流式细胞仪检测转染后细胞增殖的变化。结果从A375细胞中成功提出miRNA。定量PCR结果显示，当转染物miR-21抑制物浓度为120nmol／L时，转染细胞内有miR-21模拟物最大程度的下调表达，2^-△△Cr值为0．80（0．65～0．92），低于对照组；当miR-494模拟物浓度为250nmol／L时，转染细胞内有miR-494模拟物最大程度的上调，2^-△△Cr值为126．82（111．52～144．22），明显高于对照组；miR-21抑制物转染组与miR-494模拟物转染组G。期细胞比率分别为（61．61±3．25）％、（61．05±3．17）％，高于对照组（P〈0．05）；增殖指数分别为（38．39±3．25）％、（38．95±3．17）％，低于对照组（P〈0．05）；细胞凋亡率分别为（27．74±1．39）％、（34．30±2．35）％，高于对照组（P〈0．01），细胞转染效率达90％以上。结论miR-21抑制物和miR-494模拟物促使肿瘤细胞的G，期阻滞和促进凋亡作用，miR-21可增强A375细胞增殖，有原癌基因样功能；miR-494可抑制A375细胞增殖，有抑癌基因样作用。

关键词：黑色素瘤 miRNA-21 miRNA-494 转染细胞周期细胞凋亡

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人类念珠菌感染的基因易感性

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中国真菌学杂志 2017年第2期12卷 120-123页

作者：阚思玥李筱芳刘维达中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所南京210042 江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室南京210042

念珠菌是引起严重黏膜感染和系统性感染的重要真菌,但不是所有个体都有感染念珠菌的风险。随着人类基因组计划的完成以及分子遗传技术的发展,人们开始从基因角度研究真菌感染的易感性。研究发现一些原发性免疫缺陷如STAT1、STAT3或CARD... 详细信息

念珠菌是引起严重黏膜感染和系统性感染的重要真菌,但不是所有个体都有感染念珠菌的风险。随着人类基因组计划的完成以及分子遗传技术的发展,人们开始从基因角度研究真菌感染的易感性。研究发现一些原发性免疫缺陷如STAT1、STAT3或CARD9缺陷与严重的念珠菌感染有关;此外,部分与免疫相关的基因多态性与念珠菌感染(如复发性外阴阴道念珠菌病和念珠菌血症等疾病)的易感性相关。念珠菌易感基因的发现可以更好地了解疾病的发病机制,同时为临床诊治念珠菌感染提供新的检测指标和治疗靶标。

关键词：念珠菌感染基因易感性原发性免疫缺陷病基因多态性

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甲真菌病外用药的治疗现状及研究进展

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中国真菌学杂志 2018年第3期13卷 184-187页

作者：宋娜娜周晓伟李筱芳刘维达中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所南京210042 江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室南京210042

甲真菌病在人群中广泛存在,初次治愈率低,复发率高,再感染率高。常用治疗方法主要包括局部外用药治疗和系统口服药治疗。口服药因不良反应和药物间的相互作用使其临床应用受限,故近年来治疗研究热点主要集中在外用药。该文综述了外用治... 详细信息

甲真菌病在人群中广泛存在,初次治愈率低,复发率高,再感染率高。常用治疗方法主要包括局部外用药治疗和系统口服药治疗。口服药因不良反应和药物间的相互作用使其临床应用受限,故近年来治疗研究热点主要集中在外用药。该文综述了外用治疗甲真菌病的传统药物(环吡酮胺甲涂剂、阿莫罗芬甲涂剂)、新型药物(艾氟康唑溶液、tavaborole溶液)以及正在研发中的药物(特比萘芬脂质体、卢立康唑溶液、ME1111、他扎罗汀凝胶)的作用机制、体内外疗效等最新研究进展。

关键词：甲真菌病局部外用药作用机制研究进展

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白念珠菌诱导小鼠骨髓来源巨噬细胞焦亡的初步研究

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中华皮肤科杂志 2023年第4期56卷 301-308页

作者：杨璐段志敏何艳艳王嘉宁陈青陈旭李岷中国医学科学院、北京协和医学院皮肤病研究所、江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室南京210042 南京医科大学全球健康中心南京211166 南京大学医学院附属鼓楼医院输血科南京210008

目的探讨白念珠菌对小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)焦亡的影响。方法通过活细胞工作站实时观察白念珠菌[感染复数(MOI)=50,下同]体外诱导BMDM后是否发生焦亡;将BMDM分为对照组、白念珠菌组,分别用磷酸盐缓冲液和白念珠菌酵母诱导BMDM 6 h,... 详细信息

目的探讨白念珠菌对小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)焦亡的影响。方法通过活细胞工作站实时观察白念珠菌[感染复数(MOI)=50,下同]体外诱导BMDM后是否发生焦亡;将BMDM分为对照组、白念珠菌组,分别用磷酸盐缓冲液和白念珠菌酵母诱导BMDM 6 h,实时荧光定量PCR检测NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18 mRNA表达水平,Western印迹法检测NLRP3、胱天蛋白酶1(Caspase-1)、Gasdermin D(GSDMD)的表达及剪切水平。用白念珠菌诱导BMDM不同时间(0、10、15、20及25 h)后,酶联免疫吸附试验检测IL-1β、IL-18分泌水平。白念珠菌体外诱导野生型(WT)BMDM及GSDMD敲除(KO)BMDM 15 min,采用流式细胞仪比较WT、GSDMD KO BMDM对白念珠菌的吞噬率;诱导6 h后,采用流式细胞仪及乳酸脱氢酶(LDH)释放法分别检测WT、GSDMD KO BMDM的死亡率。分别设置空白对照组、对照组、样品最大酶活性对照孔组、IL-1β组、白念珠菌组、IL-1β+白念珠菌组,用IL-1β和/或白念珠菌酵母诱导BMDM后用LDH释放法分析WT及GSDMD KO BMDM死亡率。采用非配对t检验、Kruskal-Wallis检验、方差分析等统计学方法进行统计分析。结果白念珠菌体外诱导BMDM后细胞可出现气球样变及出泡现象,证实焦亡发生;与对照组相比,白念珠菌组诱导BMDM 6 h后NLRP3、IL-1β的mRNA表达水平明显升高(t=13.02、17.51,P=或<0.001),而IL-18 mRNA表达水平无明显变化(P=0.486),且白念珠菌诱导可引起炎症小体NLRP3表达增多及Caspase-1、GSDMD剪切。白念珠菌诱导BMDM不同时间(0、10、15、20及25 h)后IL-1β的分泌水平随时间逐渐升高(H=12.90,P=0.012),而IL-18的分泌水平无明显变化(F=0.48,P=0.753),且GSDMD KO组BMDM的IL-1β分泌水平低于WT BMDM组(F=24.22,P=0.008)。白念珠菌体外诱导15 min后,GSDMD KO BMDM[(50.3±1.10)%]对白念珠菌的吞噬率低于WT BMDM[(58.53±1.19)%,t=5.09,P=0.007];白念珠菌体外诱导6 h后,流式细胞仪检测显示GSDMD KO组BMDM的死亡率(38.40%±0.50%)高于WT组BMDM(34.37%±0.52%),t=4.72,P=0.009;LDH检测同样显示GSDMD KO BMDM的死亡率(22.52%±0.18%)高于WT BMDM(12.48%±0.15%),t=42.36,P<0.001;IL-1β预处理后予白念珠菌体外诱导的WT BMDM及GSDMD KO BMDM的细胞死亡率均较单纯白念珠菌诱导组降低(均P<0.001)。结论白念珠菌可诱导BMDM发生焦亡,焦亡的发生可促进IL-1β释放,并通过提高巨噬细胞的免疫活性,降低巨噬细胞死亡率。

关键词：白色念珠菌巨噬细胞焦亡白细胞介素1β 白细胞介素18 Gasdermin D

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中国大陆地区暗色丝孢霉病(1987～2017年)回顾性分析

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中国真菌学杂志 2018年第5期13卷 272-276页

作者：贺赟郑海林李筱芳吕桂霞沈永年刘维达北京协和医学院中国医学科学院皮肤病研究所南京210042 江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室南京210042 宜兴市皮肤病医院皮肤科宜兴214200

目的了解中国大陆地区近30年暗色丝孢霉病的流行病学和诊治状况。方法通过CNKI、万方、维普、Embase和Pubmed检索1987～2017年中国大陆地区暗色丝孢霉病相关文献,进行数据分析和总结。结果共纳入文献106篇,共计有115例患者。感染类型以... 详细信息

目的了解中国大陆地区近30年暗色丝孢霉病的流行病学和诊治状况。方法通过CNKI、万方、维普、Embase和Pubmed检索1987～2017年中国大陆地区暗色丝孢霉病相关文献,进行数据分析和总结。结果共纳入文献106篇,共计有115例患者。感染类型以皮肤及皮下组织型为主,继发于皮肤屏障被破坏、特发性免疫功能异常最多。诊断主要依据真菌镜检、组织病理、真菌培养和分子鉴定。治疗以系统抗真菌药物为主,伊曲康唑为首选用药。107例患者中因该病死亡10例,占9.35%;其中以中枢神经系统型死亡率最高,达75%。结论中国大陆地区暗色丝孢霉病感染数有明显上升趋势。临床医生应提高该病各型临床及病原诊断水平,并积极开展分子鉴定和体外药物敏感性试验,为临床治疗提供更为有效的依据。

关键词：暗色丝孢霉病诊断治疗

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慢病毒介导的靶向沉默HPV16 E7-shRNA对SiHa细胞DNA甲基转移酶表达的影响

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中华皮肤科杂志 2017年第2期50卷 81-85页

作者：杨佳李黎明许翠龙嘉王尧杨雪源蒋明军中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所中心实验室江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室南京210042 南京农业大学生命科学与技术基地班

的探讨慢病毒携带的靶向人乳头瘤病毒16（HPV16）E7基因的短发夹干扰RNA（shRNA）对HPV16阳性宫颈癌SiHa细胞中4种甲基转移酶（DNMT1、DNMT3A、DNMT3B、DNMT3L）表达水平的影响。方法构建HPV16 E7基因靶序列的shRNA重组质粒，用BLOCK-... 详细信息

的探讨慢病毒携带的靶向人乳头瘤病毒16（HPV16）E7基因的短发夹干扰RNA（shRNA）对HPV16阳性宫颈癌SiHa细胞中4种甲基转移酶（DNMT1、DNMT3A、DNMT3B、DNMT3L）表达水平的影响。方法构建HPV16 E7基因靶序列的shRNA重组质粒，用BLOCK-iT^TM Lentiviral RNAi Expression System试剂盒进行慢病毒包装，分别转染293T细胞48、72 h后收集病毒上清液。分别用含靶向HPV16 E7-shRNA重组质粒的病毒上清液与完全培养基（1∶1）的混合液（shRNA组）、含空白质粒（即不含靶向HPV16 E7-shRNA序列）的病毒上清液与完全培养基（1∶1）的混合液（阴性对照组）、完全培养基（空白对照组）培养SiHa细胞。感染0、48、96 h后，用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测3组SiHa细胞中HPV16 E7和4种甲基转移酶mRNA的表达，Western印迹检测4种甲基转移酶的蛋白表达。结果感染0 h时，shRNA组、阴性对照组、空白对照组SiHa细胞HPV16 E7、DNMT1、DNMT3A、DNMT3B、DNMT3L mRNA相对表达量比较，差异无统计学意义（均P 〉 0.05）；感染48、96 h时，3组细胞间HPV16 E7和4种DNMT mRNA相对表达量比较，差异有统计学意义（均P 〈 0.05）。shRNA组HPV16 E7、DNMT1、DNMT3A、DNMT3B和DNMT3L mRNA表达水平在48 h时的沉默效率分别为71.13%、50.53%、13.72%、46.27%和17.92%，96 h时分别为83.50%、74.2%、47.8%、64.7%和48.9%；而阴性对照组和空白对照组各时间点表达水平差异无统计学意义（均P 〉 0.05）。慢病毒感染48、96 h时，3组细胞间上述4种DNMT蛋白表达量差异有统计学意义（均P 〈 0.01）。shRNA组4种DNMT蛋白表达水平随感染时间的延长而逐渐下降，感染48 h时DNMT1、DNMT3A、DNMT3B和DNMT3L蛋白表达抑制率分别为84%、37.2%、59.8%、49.3%，96 h时分别为73.1%、68.7%，55.5%、65.5%。结论靶向沉默HPV16阳性宫颈癌SiHa细胞E7基因能够干扰DNMT1、DNMT3A、DNMT3B、DNMT3L mRNA及蛋白的表达。

关键词：人乳头瘤病毒16 乳头瘤病毒E7蛋白质类 RNA 小分子干扰甲基转移酶类细胞系,肿瘤

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α-硫辛酸对UVB诱导的角质形成细胞氧化应激的影响

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中国麻风皮肤病杂志 2019年第1期35卷 1-5页

作者：黄丹鞠梅陈崑吴敏智顾恒中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所理疗科江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室南京210042 苏州市第五人民医院苏州215007

目的:明确抗氧化剂α-硫辛酸(α-lipoic acid, LA)对UVB辐射后人原代角质形成细胞氧化应激的影响。方法:建立UVB辐射和外源性H_2O_2诱导的氧化应激模型,倒置显微镜下观察UVB和H_2O_2刺激后细胞形态和显微结构的变化,2’7’-二氯荧光乙... 详细信息

目的:明确抗氧化剂α-硫辛酸(α-lipoic acid, LA)对UVB辐射后人原代角质形成细胞氧化应激的影响。方法:建立UVB辐射和外源性H_2O_2诱导的氧化应激模型,倒置显微镜下观察UVB和H_2O_2刺激后细胞形态和显微结构的变化,2’7’-二氯荧光乙酰乙酸钠(2’7’-dichlorofluorescein etheric acid,DCFH-DA)荧光探针对细胞内活性氧片段(Reactive oxygen species,ROS)进行染色,倒置荧光显微镜下观察荧光强度的变化,并用流式细胞术对绿色荧光进行定量。运用化学法检测各组细胞内脂质过氧化物(Malonaldehyde, MDA)和总抗氧化能力(Total antioxidant capacity, TAOC)。结果:UVB照射后4h细胞的荧光强度为35311±3072.3,MDA为(11.61±0.68)nmol/mg·prot,较阴性对照组明显升高[(24465±2085.3,(8.25±1.21)nmol/mg·prot],差异均具有统计学意义(P<0.05)。UVB照射加LA干预4 h后荧光强度下降至26926±3502.7,(9.14±1.12)nmol/mg·prot。TAOC在各组间无统计学差异。结论:LA能够减轻UVB照射后相关的氧化应激损伤。

关键词：角质形成细胞中波紫外线 α-硫辛酸氧化应激

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皮肤影像技术在寻常痤疮诊疗中的应用进展

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中华皮肤科杂志 2024年第8期57卷 757-760页

作者：谢媛媛刘宇甄曾荣北京协和医学院中国医学科学院皮肤病医院皮肤病研究所南京210042 南京医科大学附属江宁医院皮肤科南京211100 中国医学科学院北京协和医学院皮肤病医院激光科南京210042 江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室南京210042

寻常痤疮是一种临床常见的慢性炎症性皮肤疾病。目前的分级及疗效评估方法主要依靠医生的临床经验评价。近年来皮肤影像技术因其无创、实时、客观、可重复等优点在皮肤病的诊治方面得到极大的关注。本文综述多种皮肤影像技术在寻常痤疮... 详细信息

寻常痤疮是一种临床常见的慢性炎症性皮肤疾病。目前的分级及疗效评估方法主要依靠医生的临床经验评价。近年来皮肤影像技术因其无创、实时、客观、可重复等优点在皮肤病的诊治方面得到极大的关注。本文综述多种皮肤影像技术在寻常痤疮研究领域的应用进展,包括皮肤镜、反射式共聚焦显微镜、光学相干断层显像技术、高频超声影像技术等,以期为痤疮的基础研究和临床诊疗的评估方法提供新思路。

关键词：痤疮寻常诊断皮肤镜检查显微镜检查共焦光学相干断层显像技术超声疾病分级疗效评估

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氨基酮戊酸孵育不同时间对光动力疗法抑制痤疮丙酸杆菌生物膜效应的影响

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中华皮肤科杂志 2022年第3期55卷 208-212页

作者：刘宇甄曾荣郑娜娜段志敏徐浩翔吴秋菊林彤李岷南京医科大学附属江宁医院皮肤科南京211100 中国医学科学院、北京协和医学院皮肤病医院激光科江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室南京210042 中国医学科学院、北京协和医学院皮肤病医院真菌科南京210042

目的探讨氨基酮戊酸(ALA)孵育不同时间对ALA光动力疗法(ALA-PDT)抑制痤疮丙酸杆菌生物膜效应的影响。方法在预先放置细胞爬片的24孔和96孔细胞培养板中构建痤疮丙酸杆菌生物膜,使用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察生物膜的形成情况,用... 详细信息

目的探讨氨基酮戊酸(ALA)孵育不同时间对ALA光动力疗法(ALA-PDT)抑制痤疮丙酸杆菌生物膜效应的影响。方法在预先放置细胞爬片的24孔和96孔细胞培养板中构建痤疮丙酸杆菌生物膜,使用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察生物膜的形成情况,用甲基四氮盐(XTT)法观察生物膜生长活力情况。确定生物膜体外模型构建成功后,分成6组,阴性对照组不加入ALA、不照光;ALA组仅予ALA孵育30 min,不照光;LED组仅予照光但不加入ALA;ALA-PDT1组、ALA-PDT2组、ALA-PDT3组分别与ALA孵育15、30、60 min后,接受LED光照射。处理完成后采用CLSM检测生物膜结构、死菌/活菌比例,XTT法观察生物膜生长活力差异。组间差异比较采用单因素方差分析及LSD-t检验。结果CLSM观察显示,痤疮丙酸杆菌生物膜体外模型构建成功。ALA-PDT1组、ALA-PDT2组、ALA-PDT3组死菌/活菌比值分别为0.90±0.16、1.75±0.19和2.57±0.32,均显著高于阴性对照组(0.31±0.01,t值分别为55.56、138.62、74.64,均P<0.001);生物膜活力值分别为0.35±0.02、0.26±0.02和0.18±0.01,均显著低于阴性对照组(0.43±0.00;t值分别为35.66、2.64、110.96,均P<0.001)。CLSM显示,痤疮丙酸杆菌生物膜在ALA-PDT作用下结构被破坏,且随着ALA孵育时间延长,生物膜破坏越严重。结论ALA孵育时间延长会增强ALA-PDT抑制痤疮丙酸杆菌生物膜效应。

关键词：痤疮丙酸杆菌生物膜光化学疗法氨基酮戊酸孵育时间

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依维莫司对顺铂产生抗人皮肤鳞状细胞癌COLO-16细胞效应的增效作用研究

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中华皮肤科杂志 2017年第6期50卷 421-425页

作者：丁敏徐松李莉毕素云周之海李岷杨海平陈旭顾恒天津医科大学总医院皮肤性病科 300052 中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所理疗科江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室解放军第454医院皮肤科

目的探讨依维莫司是否增加顺铂对人皮肤鳞状细胞癌COLO-16细胞的杀伤效应。方法分别用50、100、200nmol／L的依维莫司和25μmol／L顺铂处理人皮肤鳞状细胞癌系COLO-16细胞12、24h，用AO标记自噬体囊泡并结合溶酶体酶抑制剂分析自噬和自... 详细信息

目的探讨依维莫司是否增加顺铂对人皮肤鳞状细胞癌COLO-16细胞的杀伤效应。方法分别用50、100、200nmol／L的依维莫司和25μmol／L顺铂处理人皮肤鳞状细胞癌系COLO-16细胞12、24h，用AO标记自噬体囊泡并结合溶酶体酶抑制剂分析自噬和自噬流水平。Western印迹分析自噬标记性分子LC3．Ⅰ→LC3-Ⅱ转化、Caspase3和PARP剪切；LDH释放实验分析细胞死亡；***染色分析细胞凋亡。结果50、100、200nmol／L的依维莫司处理COLO．16细胞后，12hLC3．Ⅰ→Lc3-Ⅱ转换值分别为3．52±0．21、4．03±0．39、5．05±0．22，两两之间比较，差异无统计学意义（P〉0．05），与未用药物处理的对照组（2．07±0．05）比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。24hLC3-Ⅰ→LC3-Ⅱ转换值分别为3．38±0．26、3．29±0．06、6．57±0．16，两两之间比较，差异无统计学意义（P〉0．05），与对照组（2．61％±0．16％）比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。50、100、200nmol／L的依维莫司联合E64d、pepstatin处理COLO-16细胞12h后，LC3-Ⅱ与B肌动蛋白的比值分别为1．26±0．40、1．16±0．34、1．21±0．39，与E64d、pepstatin单独处理细胞组（1．19±0．27）比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。100nmol／L依维莫司联合E64d、pepstatin自噬体囊泡表达阳性率2．06-4-0．61，与E64d、pepstatin单独处理细胞组（1．68±0．62）比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。依维莫司与顺铂联合处理24h细胞死亡率42．58％±0．93％，高于顺铂单独处理的细胞（死亡率18．20％±1．46％），差异有统计学意义。依维莫司联合顺铂处理与顺铂单独处理细胞相比，Caspase3和PARP剪切、AnnexinV标记细胞数以及LC3-Ⅱ形成均无统计学差异（P〉0．05）。结论依维莫司增强顺铂诱导COLO-1细胞死亡，这种效应不依赖于凋亡和自噬调控。

关键词：顺铂细胞凋亡自噬 COLO-16细胞依维莫司

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