检索结果-内蒙古大学图书馆

分析试验室 2013年第1期32卷 35-38页

作者：张志勇单炜力简秋沈燕刘贤金江苏省食品质量安全重点实验室/农业部食品安全监控重点开放实验室南京210014 农业部农药检定所北京100125

建立了水果和土壤样品中四螨嗪的液相色谱-电喷雾串联质谱检测方法。水果或土壤样品用丙酮提取,经弗罗里硅土柱净化,以Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱分离,以电喷雾电离串联质谱正离子多反应监测模式进行测定。对四螨嗪在水果和土壤中在4... 详细信息

建立了水果和土壤样品中四螨嗪的液相色谱-电喷雾串联质谱检测方法。水果或土壤样品用丙酮提取,经弗罗里硅土柱净化,以Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱分离,以电喷雾电离串联质谱正离子多反应监测模式进行测定。对四螨嗪在水果和土壤中在4个不同添加水平下的回收率进行了测定,结果表明,四螨嗪在柑橘(全果)中的添加回收率为86.9%～93.1%(RSD为7.4%～9.4%),在苹果中的添加回收率为84.1%～95.1%(RSD为5.9%～9.7%),在葡萄中的添加回收率为88.8%～93.7%(RSD为8.0%～10.1%),在梨中的添加回收率为88.6%～96.1%(RSD为7.0%～10.2%),在土壤中的添加回收率为83.0%～96.8%(RSD 6.7%～12%)。该方法满足农药残留检测要求,适用于水果和土壤中四螨嗪残留的检测。

关键词：固相萃取液相色谱-串联质谱四螨嗪水果残留

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甲基硫菌灵及其代谢物在不同种植模式黄瓜和土壤中的残留

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农业环境科学学报 2012年第6期31卷 1077-1081页

作者：张志勇单炜力简秋龚勇宋稳成刘贤金江苏省食品质量安全重点实验室农业部食品安全监控重点开放实验室南京210014 农业部农药检定所北京100125

采用液质联用仪比较分析了3个不同种植区域(江苏南京、广西南宁和湖南长沙)露地和大棚两种种植条件下黄瓜和土壤中甲基硫菌灵及其代谢物多菌灵的残留动态,同时对黄瓜中的最终残留量进行了比较分析。施药后,甲基硫菌灵在黄瓜和土壤中均... 详细信息

采用液质联用仪比较分析了3个不同种植区域(江苏南京、广西南宁和湖南长沙)露地和大棚两种种植条件下黄瓜和土壤中甲基硫菌灵及其代谢物多菌灵的残留动态,同时对黄瓜中的最终残留量进行了比较分析。施药后,甲基硫菌灵在黄瓜和土壤中均能很快转化为多菌灵[施药后1d甲基硫菌灵未检出(<0.01mg·kg-1)],多菌灵在露地黄瓜和土壤中的原始沉积量均低于大棚。3个试验点露地黄瓜中的半衰期分别为2.3、1.4d和1.4d,在大棚黄瓜中的半衰期分别为2.6、1.7d和2.0d。在3个试验点露地土壤中的半衰期分别为1.6、1.7d和2.3d,在大棚土壤中的半衰期分别为2.3、2.0d和2.3d。最终残留试验在最后一次施药后1d采样时,大棚、露地黄瓜中的甲基硫菌灵均未检出(<0.01mg·kg-1),多菌灵在3个试验点露地黄瓜中的最终残留量为0.014～0.162mg·kg-1,而在3个试验点大棚黄瓜中的最终残留量为0.121～0.561mg·kg-1。参照我国所制定的黄瓜中多菌灵的MRL(0.5mg·kg-1),露地种植方式下所有处理黄瓜中甲基硫菌灵代谢物多菌灵的最终残留量均符合国家标准的规定,但大棚种植方式下其残留量有超标的风险。

关键词：甲基硫菌灵多菌灵保护地露地残留黄瓜

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我国农药残留限量标准制定最新进展与存在问题

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江苏农业科学 2010年第6期38卷 480-481页

作者：张志勇王冬兰余向阳刘贤进江苏省食品质量安全重点实验室/农业部食品安全监控重点开放实验室江苏南京210014

介绍了目前我国颁布的涉及食品中农药最大残留限量的国家标准和农业行业标准以及农药最大残留限量标准制定最新进展,总结分析了标准制定中存在的主要问题,并提出了我国农药最大残留限量标准研究与制定对策,对于制定和修订我国食品中农... 详细信息

介绍了目前我国颁布的涉及食品中农药最大残留限量的国家标准和农业行业标准以及农药最大残留限量标准制定最新进展,总结分析了标准制定中存在的主要问题,并提出了我国农药最大残留限量标准研究与制定对策,对于制定和修订我国食品中农药最大残留限量标准、提高我国食品安全水平和促进贸易具有重要意义。

关键词：农药残留限量标准现状发展趋势

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小麦和土壤中2甲4氯异辛酯残留的气相色谱-质谱分析

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江苏农业科学 2012年第3期40卷 275-277页

作者：吴长付王冬兰沈燕孙星刘贤进江苏省食品质量安全重点实验室/农业部食品安全监控重点开放实验室江苏南京210014

建立小麦和土壤样品中2甲4氯异辛酯残留的气相色谱-质谱检测方法。对小麦植株、小麦籽粒和土壤中的2甲4氯异辛酯经丙酮溶液匀浆提取,浓缩,丙酮定容后,用GC-MS测定。研究结果表明,小麦植株、籽粒和土壤中2甲4氯异辛酯的最低检出限均为0.0... 详细信息

建立小麦和土壤样品中2甲4氯异辛酯残留的气相色谱-质谱检测方法。对小麦植株、小麦籽粒和土壤中的2甲4氯异辛酯经丙酮溶液匀浆提取,浓缩,丙酮定容后,用GC-MS测定。研究结果表明,小麦植株、籽粒和土壤中2甲4氯异辛酯的最低检出限均为0.02 mg/kg,在添加水平为0.02～0.5 mg/kg时,2甲4氯异辛酯在小麦植株中的回收率为91.2%～104.2%(RSD=4.2%～13.4%),在籽粒中的回收率为85.0%～104.2%(RSD=3.6%～10.9%),在土壤中的回收率为89.0%～100%(RSD=6.1%～9.7%)。表明该检测方法具有操作简单、灵敏度高等特点,完全能够满足小麦和土壤中2甲4氯异辛酯的残留检测。

关键词： 2甲4氯异辛酯小麦土壤残留检测气相色谱-质谱分析

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唑草酮在水稻和稻田中的气相色谱检测

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江苏农业学报 2011年第1期27卷 195-198页

作者：张志勇王冬兰吴长付张存政刘贤进江苏省食品质量安全重点实验室农业部食品安全监控重点开放实验室江苏南京210014

为建立水稻和稻田中除草剂唑草酮的气相色谱检测方法,开展试验。糙米、稻壳、水稻茎秆和土壤中的唑草酮残留物采用丙酮/水提取,石油醚萃取,弗罗里硅土柱净化后,乙酸乙酯洗脱,正己烷定容后采用气相色谱检测;稻田水样品经过滤后石油醚萃取... 详细信息

为建立水稻和稻田中除草剂唑草酮的气相色谱检测方法,开展试验。糙米、稻壳、水稻茎秆和土壤中的唑草酮残留物采用丙酮/水提取,石油醚萃取,弗罗里硅土柱净化后,乙酸乙酯洗脱,正己烷定容后采用气相色谱检测;稻田水样品经过滤后石油醚萃取,弗罗里硅土柱净化后,乙酸乙酯洗脱,正己烷定容后采用气相色谱检测。所有样品均采用外标法定量。结果表明:唑草酮在糙米中的添加回收率为88.7%～102.8%,变异系数3.0%～5.4%;在稻壳中的添加回收率为84.7%～93.5%,变异系数2.0%～5.3%;在水稻茎秆中的添加回收率为81.1%～91.6%,变异系数1.9%～7.0%;在稻田土壤中的添加回收率为83.0%～92.4%,变异系数4.0%～7.6%;在稻田水中的添加回收率为90.9%～100.5%,变异系数3.3%～4.3%。该检测方法具有操作简单、灵敏度高、净化效果好等特点,能够满足水稻、稻田土壤和水样品中唑草酮的残留检测。

关键词：唑草酮水稻稻田残留检测气相色谱

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转座子挽救法克隆鞘氨醇单胞菌CDS-1中呋喃丹水解酶相关基因

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应用与环境生物学报 2009年第5期15卷 677-681页

作者：徐剑宏洪青武俊严秋香李顺鹏江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所农业部食品质量安全监控重点开放实验室江苏省食品质量安全重点实验室南京210014 南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

用含Tn5转座子的自杀性质粒pSC123诱变呋喃丹降解菌Sphingomonas agrestis CDS-1,获得失去呋喃丹降解功能的突变株CDS-M1.以pMD18-T为载体在E. coli DH5α中构建了CDS-M1的基因组文库,采用转座子挽救法对Tn5插入位点两侧翼的序列进行克... 详细信息

用含Tn5转座子的自杀性质粒pSC123诱变呋喃丹降解菌Sphingomonas agrestis CDS-1,获得失去呋喃丹降解功能的突变株CDS-M1.以pMD18-T为载体在E. coli DH5α中构建了CDS-M1的基因组文库,采用转座子挽救法对Tn5插入位点两侧翼的序列进行克隆与测序,根据测序结果(共4551个碱基)设计引物,从CDS-1的基因组中扩增到同样大小的片段,把该片断克隆到广宿主载体pPZP201上,得到重组质粒pCDZ1,通过三亲接合的方法把pCDZ1导入CDS-M1中进行功能互补实验,结果显示CDS-M1的呋喃丹水解功能得到了恢复,表明该片断中包含呋喃丹水解酶相关基因.

关键词： Sphingomonas agrestis CDS-1 呋喃丹转座子挽救法基因克隆

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基因突变技术在抗体亲和力体外成熟中的应用

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浙江大学学报（农业与生命科学版） 2016年第1期42卷 1-7页

作者：刘媛林曼曼张霄徐重新焦凌霞仲建锋武爱华刘贤金江苏省食品质量安全重点实验室和农业部食用农产品安全监控重点开放实验室南京210014

从天然抗体库中筛选得到的抗体通常亲和力较低,在微摩尔水平;同时,经过多次免疫获得的天然抗体也存在100 pmol/L的亲和力极限。然而,以抗体亲和力体内成熟为理论基础的亲和力体外成熟技术,可以模拟体细胞高频突变和克隆选择过程。该技... 详细信息

从天然抗体库中筛选得到的抗体通常亲和力较低,在微摩尔水平;同时,经过多次免疫获得的天然抗体也存在100 pmol/L的亲和力极限。然而,以抗体亲和力体内成熟为理论基础的亲和力体外成熟技术,可以模拟体细胞高频突变和克隆选择过程。该技术可以解决库来源抗体亲和力不高、实际应用难的问题,也可以帮助天然抗体突破其亲和力极限。抗体基因体外突变技术可以模拟自体高频突变过程,是抗体亲和力体外成熟的重要手段,常见的抗体基因体外突变技术可以分为易错聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)、DNA改组、突变株、定点突变和链替换等方法。易错PCR可以在抗体基因全长或部分区域随机引入突变,但随着突变率的增加,阳性克隆数量呈指数性递减。DNA改组包括抗体片段随机化切割和重组步骤,可以加快抗体的体外进化速度。突变株法易于构建超大容量的抗体库,但有害突变和突变率难以控制。定点突变的区域通常选择与抗原直接接触的互补决定区(complementary determination region,CDR)或自体突变热点进行操作。链替换通常保留母体抗体的一条重链或轻链,而对另一条链进行随机化组合。这些基因突变方法在提高抗体亲和力中获得了不同程度的应用,但也存在效率不高,且方法选择较为盲目等问题。可是,采用抗体X射线晶体衍射和计算机模拟等方法,却可以帮助预测抗体结合部位,为突变位点的理性设计和方法选择提供有效信息,因而成为亲和力体外成熟技术未来发展的趋势之一。

关键词：抗体亲和力成熟易错PCR DNA改组突变株定点突变链替换

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高效液相色谱-串联质谱法测定小麦和土壤中氨氯吡啶酸的残留量

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农药学学报 2013年第5期15卷 546-550页

作者：孙星杨邦保丁悦王冬兰沈燕刘贤金江苏省农业科学院食品安全与检测研究所/江苏省食品质量安全重点实验室/农业部食品安全监控重点开放实验室南京210014

建立了小麦植株、麦粒、面粉、麦麸和土壤样品中氨氯吡啶酸的高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS／MS）检测方法。样品用丙酮提取，经N-丙基乙二胺（primary secondary amine，PSA）串联石墨化炭黑柱净化，以Agilent ZORBAXSB-C18色谱柱分... 详细信息

建立了小麦植株、麦粒、面粉、麦麸和土壤样品中氨氯吡啶酸的高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS／MS）检测方法。样品用丙酮提取，经N-丙基乙二胺（primary secondary amine，PSA）串联石墨化炭黑柱净化，以Agilent ZORBAXSB-C18色谱柱分离，以电喷雾电离串联质谱正离子多反应监测（multiple reaction monitoring，MRM）模式进行测定。结果表明：在0．01、O．1、0．5、1mg／kg4个添加水平下，氨氯吡啶酸在小麦植株、麦粒、面粉、麦麸和土壤中的平均回收率在78．9％～97．9％之间，相对标准偏差在3．6％～9．6％之间。该方法样品前处理简单、快速、分析时间短，灵敏度、准确度和精密度均符合农药残留检测要求，适用于小麦和土壤中氨氯吡啶酸残留的检测。

关键词：氨氯吡啶酸高效液相色谱-串联质谱固相萃取小麦残留

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玉米赤霉醇特异性单克隆抗体及其胶体金检测试纸的研制

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核农学报 2015年第6期29卷 1101-1107页

作者：刘媛文孟棠张霄徐重新杨晶祎张留娟王恒何鑫梁颖郑勤夏兴霞刘贤金江苏省食品质量安全重点实验室/农业部食用农产品安全监控重点开放实验室江苏南京210014

为了研究国内制备的玉米赤霉醇单克隆抗体,与其同系物玉米赤霉烯酮交叉反应严重,实际检测存在假阳性的问题,本试验开展了玉米赤霉醇特异性识别单克隆抗体及其胶体金检测试纸的研制工作。试验采用玉米赤霉醇-16-羧丙基醚与牛血清白蛋白偶... 详细信息

为了研究国内制备的玉米赤霉醇单克隆抗体,与其同系物玉米赤霉烯酮交叉反应严重,实际检测存在假阳性的问题,本试验开展了玉米赤霉醇特异性识别单克隆抗体及其胶体金检测试纸的研制工作。试验采用玉米赤霉醇-16-羧丙基醚与牛血清白蛋白偶联,免疫雌性Balb/c系小鼠;利用单克隆抗体技术完成杂交瘤融合,并用非竞争及竞争ELISA法,对阳性克隆进行鉴定。杂交瘤诱生腹水后,经亲和纯化,用于15 nm胶体金标记,制作玉米赤霉醇胶体金检测试纸。融合细胞经筛选,最终对3株杂交瘤细胞建株,结果均为Ig G1型。其中Mab-1A8诱生腹水效价高达1∶1.28×10^7,对玉米赤霉醇抑制中浓度（I50）为10.25 ng·m L^-1,检测灵敏度（I10）为1.96 ng·m L^-1,线性检测范围在2.96-35.46 ng·m L^-1,对同系物玉米赤霉烯酮的交叉反应率小于0.1%。试验研制的玉米赤霉醇胶体金试纸,检测阈值为2.5μg·m L-1,检测时间为10 min。本研究制备了一种新型玉米赤霉醇特异性单克隆抗体,并研制了以单抗为基础的玉米赤霉醇胶体金快速检测试纸,为玉米赤霉醇残留快速检测提供了灵敏、便捷的新方法。

关键词：玉米赤霉醇单克隆抗体玉米赤霉醇-16-羧丙基醚玉米赤霉烯酮胶体金检测试纸

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转基因作物对土壤微生物多样性影响研究技术的进展

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江苏农业科学 2010年第4期38卷 362-365页

作者：周艳红丁衬衬史建荣江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所/农业部食品质量安全监控重点开放实验室/江苏省食品质量安全重点实验室江苏南京210014

土壤微生物的多样性是保持农业生态系统稳定的基础,而作物的改变对土壤微生物的多样性结构具有显著的影响。转基因作物被引入到农田后所带来的微生物群落变化及对农业生态系统所带来的不确定因素,已成为研究热点。本文着重介绍了当前土... 详细信息

土壤微生物的多样性是保持农业生态系统稳定的基础,而作物的改变对土壤微生物的多样性结构具有显著的影响。转基因作物被引入到农田后所带来的微生物群落变化及对农业生态系统所带来的不确定因素,已成为研究热点。本文着重介绍了当前土壤微生物多样性研究中常用的3种基于16S rDNA的技术:变性梯度凝胶电泳(DGGE)、扩增性核糖体DNA限制酶切片段分析(ARDRA)和末端限制性酶切片段长度多态性(T-RFLP)技术,分析比较了各种技术的原理、优点及其应用局限性,并简短综述了这些技术近年来的应用。

关键词：土壤生物微生物多样性 16SrDNA DGGE ARDRA T-RFLP

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