检索结果-内蒙古大学图书馆

分析化学 2011年第2期39卷 178-182页

作者：贺江梁颖樊明涛刘贤金西北农林科技大学食品科学与工程学院江苏省食品质量安全重点实验室农业部食品质量安全监控重点开放实验室江苏省食品质量安全重点实验室农业部食品质量安全监控重点开放实验室

抗独特性抗体可用于建立针对农药等小分子物质的非竞争免疫检测模式。本研究将甲氧基有机磷农药通用半抗原(S-羧甲基O-,O-二甲基二硫代磷酸酯,CMP)连接至琼脂糖凝胶,进而对甲氧基有机磷农药广谱特异性抗体进行纯化;以纯化抗体为固相抗原... 详细信息

抗独特性抗体可用于建立针对农药等小分子物质的非竞争免疫检测模式。本研究将甲氧基有机磷农药通用半抗原(S-羧甲基O-,O-二甲基二硫代磷酸酯,CMP)连接至琼脂糖凝胶,进而对甲氧基有机磷农药广谱特异性抗体进行纯化;以纯化抗体为固相抗原,以人源scFv抗体库(Tomlinson I+J)为抗体源,进行抗独特型抗体的筛选;利用所筛选到的抗独特型抗体建立非竞争免疫检测技术。经过鉴定,共筛选出12个阳性克隆,其中D11和B9分别属于β型和α型抗独特型抗体。利用D11和B9建立的非竞争免疫分析法对马拉硫磷的IC50为(113.7±34.2)μg/L,检出限为10.5μg/L。

关键词：抗独特型抗体非竞争免疫分析有机磷农药噬菌体展示技术

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抗独特型抗体在小分子物质免疫检测中的应用

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分析化学 2010年第9期38卷 1366-1370页

作者：贺江樊明涛梁颖刘贤金西北农林科技大学食品科学与工程学院江苏省食品质量安全重点实验室农业部食品质量安全监控重点开放实验室

抗独特型抗体是机体针对抗体可变区所产生的特异性抗体。基于其独有的性质,它在小分子物质免疫检测中可以替代有毒标准品建立无毒化检测技术;也可以用来建立新的免疫检测模式,特别是非竞争模式,从而提高传统免疫检测技术的特性;还能够... 详细信息

抗独特型抗体是机体针对抗体可变区所产生的特异性抗体。基于其独有的性质,它在小分子物质免疫检测中可以替代有毒标准品建立无毒化检测技术;也可以用来建立新的免疫检测模式,特别是非竞争模式,从而提高传统免疫检测技术的特性;还能够在多残留检测中发挥优势。抗独特型抗体制备困难是制约其应用的瓶颈,但噬菌体展示库技术为解决此问题提供了一条有效途径。

关键词：抗独特型抗体小分子免疫分析多残留检测噬菌体展示综述

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脱氧雪腐镰刀菌烯醇降解菌的分离和鉴定

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中国农业科学 2010年第22期43卷 4635-4641页

作者：徐剑宏祭芳王宏杰王建伟林凡云史建荣江苏省农业科学院/农业部食品质量安全监控重点开放实验室/江苏省食品质量安全重点实验室

【目的】分离筛选能够降解脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的细菌,以期能在该毒素的生物解毒处理中得到应用。【方法】用高产毒禾谷镰刀菌F-25接种灭菌的小麦籽粒,培养后获得DON毒素;然后以DON毒素为唯一碳源进行DON毒素降解菌的驯化富集培养,... 详细信息

【目的】分离筛选能够降解脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的细菌,以期能在该毒素的生物解毒处理中得到应用。【方法】用高产毒禾谷镰刀菌F-25接种灭菌的小麦籽粒,培养后获得DON毒素;然后以DON毒素为唯一碳源进行DON毒素降解菌的驯化富集培养,得到能够降解DON毒素的混合菌群,逐一对分离到的细菌进行DON毒素降解能力检测,得到能够降解DON毒素的菌株。【结果】筛选得到的菌株DDS-1对液体培养基中的DON毒素的降解能力达95%以上,显著高于其它菌株;从形态、生理生化特性以及16S rDNA序列进行分析,DDS-1菌株初步鉴定为徳沃斯氏菌Devosia sp.;把DDS-1添加到小麦饲料中后,饲料中的DON毒素降解率达到75.47%。【结论】选出的DON高效降解菌株徳沃斯氏菌,不但对液体培养基中的DON毒素具有很好的降解作用,对饲料中DON毒素也有很好的降解效果。这为真菌毒素的生物脱毒处理提供了可行的方法。

关键词：脱氧雪腐镰刀菌烯醇降解徳沃斯氏菌生物解毒

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酶联免疫法检测新型除草剂双甲胺草磷

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分析化学 2011年第2期39卷 225-230页

作者：张存政杨春龙刘贤进陈敏俞杰农业部食品安全监控重点开放实验室江苏省食品质量安全重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地南京农业大学理学院

以甲醇与三氯硫磷为原料,人工合成了半抗原结构类似物,与琥珀酸酣反应引入羧基,利用活性酯法使之与载体蛋白偶联,制得完全抗原,免疫动物获得多克隆抗体,建立了新型除草剂双甲胺草磷(H-9201)的间接竞争ELISA检测方法,并进行了水体中除草... 详细信息

以甲醇与三氯硫磷为原料,人工合成了半抗原结构类似物,与琥珀酸酣反应引入羧基,利用活性酯法使之与载体蛋白偶联,制得完全抗原,免疫动物获得多克隆抗体,建立了新型除草剂双甲胺草磷(H-9201)的间接竞争ELISA检测方法,并进行了水体中除草剂H-9201残留的实际样品检测。结果表明:所获得的多克隆抗体可以特异性的识别目标化合物H-9201,抗体的效价为1/102400,抗体的工作浓度为1/18000倍,抗原的工作浓度为1/512倍。在此工作浓度条件下建立的ELISA方法对H-9201的抑制中浓度(IC50)为1.331mg/L;检出限(IC10)为0.017 mg/L;线性范围为0.05～20.0 mg/L。交叉反应表明,该抗体对结构类似化合物2,4-二甲基-6-硝基苯酚、硝基苯酚、甲胺磷、甲拌磷、毒死蜱、对硫磷均无识别作用;微弱识别S-羧乙基-O,O-二甲基二硫代磷酸酯、乐果、马拉硫磷;对半抗原及其结构类似物具有较高的识别作用。对田间水样的添加样本进行检测,方法的回收率范围为(80.5±4.5)%～(95.2±3.2)%,可用于水体样本中H-9201残留的ELISA检测。

关键词：除草剂双甲胺草磷酶联免疫多克隆抗体

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基于分子信标的有机磷农药适配体活性位点分析及改造

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分析化学 2012年第6期40卷 940-944页

作者：王丽张存政刘媛屠康桑宏庆刘贤进南京农业大学食品科技院安徽科技学院食品药品学院江苏省食品质量安全重点实验室农业部食品质量安全监控重点开放实验室

设计了一个长度为20个核苷酸的分子信标,建立了有机磷农药和分子信标竞争结合适配体鉴定其活性的方法,对前期筛选的两条适配体进行了活性位点分析和改造。结果表明,分子信标设计合理,性能稳定,其发夹结构在室温下既可成功闭合也可成功打... 详细信息

设计了一个长度为20个核苷酸的分子信标,建立了有机磷农药和分子信标竞争结合适配体鉴定其活性的方法,对前期筛选的两条适配体进行了活性位点分析和改造。结果表明,分子信标设计合理,性能稳定,其发夹结构在室温下既可成功闭合也可成功打开,最佳的活性鉴定条件为分子信标与适配体添加比例1.25∶1,孵育时间50 min,孵育温度为室温。活性位点分析表明Loop2-4是4种有机磷农药共有的活性位点,Loop2-3及SS4-54适配体5’端和3’端残余的核苷酸是甲拌磷重要的活性位点,Loop2-2和Loop4-2是丙溴磷和水胺硫磷共有的活性位点,Loop4-3是丙溴磷和氧化乐果共有的活性位点,Loop2-1和Loop4-1是水胺硫磷重要的活性位点。通过基因拼接改造的SS24-PJ-35适配体对丙溴磷和水胺硫磷的结合活性明显提高。

关键词：分子信标适配体有机磷农药竞争抑制法

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人源化抗苏云金芽孢杆菌Cry1Ab毒素单域抗体的筛选及活性鉴定

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中国食品学报 2017年第10期17卷 268-273页

作者：焦凌霞徐茜茜刘媛张宵梁颖刘贤金江苏省食品质量安全重点实验室农业部食用农产品安全监控重点开放实验室南京210014 河南科技学院食品学院河南新乡453003

以Cry1Ab毒素作为抗原,将扩增后的噬菌体单域抗体库与固相化包被的Cry1Ab毒素特异性结合,利用噬菌体展示技术从人源化噬菌体单域抗体库(DAB)中筛选抗Cry1Ab毒素的单域抗体。采用正负筛选方法,经4轮"吸附-洗脱-扩增"后,富集特... 详细信息

以Cry1Ab毒素作为抗原,将扩增后的噬菌体单域抗体库与固相化包被的Cry1Ab毒素特异性结合,利用噬菌体展示技术从人源化噬菌体单域抗体库(DAB)中筛选抗Cry1Ab毒素的单域抗体。采用正负筛选方法,经4轮"吸附-洗脱-扩增"后,富集特异性识别Cry1Ab毒素的噬菌体单域抗体。第4轮筛选得到的单菌落经单克隆ELISA鉴定,获得6株对Cry1Ab毒素具有较强结合活性的阳性单域抗体菌株,经PCR鉴定和DNA测序,均有完整的单域抗体基因片段插入。对6株阳性克隆的氨基酸序列进行比对分析,其序列差异主要存在于单域抗体的CDR区。

关键词： Cry1Ab毒素单域抗体噬菌体展示技术正负筛选 ELISA

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小青菜对土壤中毒死蜱吸收移动特征研究

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土壤学报 2011年第5期48卷 1029-1034页

作者：张志勇余向阳王冬兰张存政刘贤进江苏省食品质量安全重点实验室/农业部食品安全监控重点开放实验室南京210014

以小青菜为供试蔬菜,通过在土壤中添加毒死蜱,进行盆栽试验,研究毒死蜱对小青菜生长的影响、在土壤中的降解速度以及在小青菜中的吸收和转移规律,为蔬菜中农药残留风险评估和蔬菜安全生产提供理论依据。试验结果表明,与对照相比,含有高... 详细信息

以小青菜为供试蔬菜,通过在土壤中添加毒死蜱,进行盆栽试验,研究毒死蜱对小青菜生长的影响、在土壤中的降解速度以及在小青菜中的吸收和转移规律,为蔬菜中农药残留风险评估和蔬菜安全生产提供理论依据。试验结果表明,与对照相比,含有高浓度(>50.0 mg kg-1)毒死蜱土壤对小青菜的生长有显著抑制作用;毒死蜱在不同处理土壤中的半衰期从23.03 d至77.43 d不等;残留于土壤中的毒死蜱能够被种植的小青菜根系吸收并转移至茎叶部分,随着土壤中处理浓度的增加,毒死蜱在小青菜根、茎和叶中的残留量也随之增加,且毒死蜱在小青菜根中的残留量最大,在叶中的残留量最小;土壤中毒死蜱残留量与小青菜根、茎和叶中毒死蜱的含量呈良好的线性关系,线性方程分别为:C根=0.025 1C土壤-0.235 8,C茎=0.012 3C土壤-0.051 7,C叶=0.000 7C土壤+0.011 5。为了实现蔬菜中农药残留从农田到餐桌的全程控制,保证无公害蔬菜的安全生产与供应,首先要对生产基地土壤中的农药残留进行检测,并从源头上进行控制。

关键词：小青菜土壤毒死蜱毒性吸收转移

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转座子挽救法克隆鞘氨醇单胞菌CDS-1中呋喃丹水解酶相关基因

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应用与环境生物学报 2009年第5期15卷 677-681页

作者：徐剑宏洪青武俊严秋香李顺鹏江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所农业部食品质量安全监控重点开放实验室江苏省食品质量安全重点实验室南京210014 南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

用含Tn5转座子的自杀性质粒pSC123诱变呋喃丹降解菌Sphingomonas agrestis CDS-1,获得失去呋喃丹降解功能的突变株CDS-M1.以pMD18-T为载体在E. coli DH5α中构建了CDS-M1的基因组文库,采用转座子挽救法对Tn5插入位点两侧翼的序列进行克... 详细信息

用含Tn5转座子的自杀性质粒pSC123诱变呋喃丹降解菌Sphingomonas agrestis CDS-1,获得失去呋喃丹降解功能的突变株CDS-M1.以pMD18-T为载体在E. coli DH5α中构建了CDS-M1的基因组文库,采用转座子挽救法对Tn5插入位点两侧翼的序列进行克隆与测序,根据测序结果(共4551个碱基)设计引物,从CDS-1的基因组中扩增到同样大小的片段,把该片断克隆到广宿主载体pPZP201上,得到重组质粒pCDZ1,通过三亲接合的方法把pCDZ1导入CDS-M1中进行功能互补实验,结果显示CDS-M1的呋喃丹水解功能得到了恢复,表明该片断中包含呋喃丹水解酶相关基因.

关键词： Sphingomonas agrestis CDS-1 呋喃丹转座子挽救法基因克隆

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苯醚甲环唑在水稻和稻田中的残留

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中国水稻科学 2011年第3期25卷 339-342页

作者：张志勇王冬兰张存政吴长付刘贤进江苏省食品质量安全重点实验室/农业部食品安全监控重点开放实验室江苏南京210014

为明确苯醚甲环唑在稻田系统的使用安全性,调查了我国3个不同水稻种植区域(湖南长沙、吉林长春和浙江杭州)苯醚甲环唑在稻田系统中的残留消解动态以及在糙米、稻壳、水稻茎秆和土壤中的最终残留量。按高剂量(112.5g/hm2)施药1次后,苯醚... 详细信息

为明确苯醚甲环唑在稻田系统的使用安全性,调查了我国3个不同水稻种植区域(湖南长沙、吉林长春和浙江杭州)苯醚甲环唑在稻田系统中的残留消解动态以及在糙米、稻壳、水稻茎秆和土壤中的最终残留量。按高剂量(112.5g/hm2)施药1次后,苯醚甲环唑在不同种植区域水稻植株、稻田水和土壤中的半衰期分别为6.1～8.9d,5.3～6.2d和3.8～4.1d。各试验点最终残留结果表明,施药后28d采样时糙米中苯醚甲环唑的最终残留量均<0.01mg/kg,水稻茎秆中含量最高,土壤中均未检出苯醚甲环唑(<0.01mg/kg)。结合生产实际,按该试验设计的施药剂量、施药次数和采收间隔期,糙米、水稻茎秆和稻壳中苯醚甲环唑的残留量是安全的,但若是稻渔共作种植方式,则应尽量避免该农药的使用,以免对鱼类造成不利影响。

关键词：苯醚甲环唑残留水稻稻田系统

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转基因作物对土壤微生物多样性影响研究技术的进展

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江苏农业科学 2010年第4期38卷 362-365页

作者：周艳红丁衬衬史建荣江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所/农业部食品质量安全监控重点开放实验室/江苏省食品质量安全重点实验室江苏南京210014

土壤微生物的多样性是保持农业生态系统稳定的基础,而作物的改变对土壤微生物的多样性结构具有显著的影响。转基因作物被引入到农田后所带来的微生物群落变化及对农业生态系统所带来的不确定因素,已成为研究热点。本文着重介绍了当前土... 详细信息

土壤微生物的多样性是保持农业生态系统稳定的基础,而作物的改变对土壤微生物的多样性结构具有显著的影响。转基因作物被引入到农田后所带来的微生物群落变化及对农业生态系统所带来的不确定因素,已成为研究热点。本文着重介绍了当前土壤微生物多样性研究中常用的3种基于16S rDNA的技术:变性梯度凝胶电泳(DGGE)、扩增性核糖体DNA限制酶切片段分析(ARDRA)和末端限制性酶切片段长度多态性(T-RFLP)技术,分析比较了各种技术的原理、优点及其应用局限性,并简短综述了这些技术近年来的应用。

关键词：土壤生物微生物多样性 16SrDNA DGGE ARDRA T-RFLP

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