检索结果-内蒙古大学图书馆

生物技术通报 2024年第5期40卷 38-47页

作者：肖怡梦杨雯程依依罗刚江苏科技大学生物技术学院江苏省蚕桑与畜禽生物技术重点实验室镇江212100

CRISPR-Cas系统是细菌或古细菌内抵御病毒再次入侵的一种适应性免疫系统,能够对靶向核酸进行切割。基于Cas9蛋白及其突变体的特性,科学家开发出多样化的基因编辑工具,能够对细胞内的基因进行敲除或敲入等基因编辑操作,实现生物的遗传变... 详细信息

CRISPR-Cas系统是细菌或古细菌内抵御病毒再次入侵的一种适应性免疫系统,能够对靶向核酸进行切割。基于Cas9蛋白及其突变体的特性,科学家开发出多样化的基因编辑工具,能够对细胞内的基因进行敲除或敲入等基因编辑操作,实现生物的遗传变异;或对DNA或RNA进行表观修饰,调控基因的表达,已广泛地应用于生命科学的研究。禽类是农业中的重要物种,为人类提供优质的蛋白质。在禽类的基因组编辑和修饰中,CRISPR-Cas9技术仍处于研究状态,且只在鸡和鹌鹑两种家禽上取得实质性进展。本文从CRISPR-Cas9系统的组成成分、传递方法、优化策略介绍了CRISPR-Cas9基因编辑技术及其在家禽生产和疾病防控中的应用,为进一步开发适用于家禽体系的CRISPR-Cas9提供理论基础。

关键词：家禽 CRISPR-Cas9 育种诊断

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CRISPR-Cas12a基因编辑技术及其在农业生产中的应用

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中国农业科学 2025年第7期58卷 1434-1450页

作者：罗刚程依依杨雯肖怡梦杨铖熹江苏科技大学生物技术学院/江苏省蚕桑与畜禽生物技术重点实验室农业农村部蚕桑遗传改良重点实验室/中国农业科学院桑蚕科学研究中心

规律间隔成簇短回文重复序列（clustered regularly interspaced short palindromic repeats, CRISPR）相关蛋白（CRISPR-associated protein, Cas）基因编辑技术不仅引发了生命科学领域的革命性发展，还在农业领域带来了翻天覆地的变... 详细信息

规律间隔成簇短回文重复序列（clustered regularly interspaced short palindromic repeats, CRISPR）相关蛋白（CRISPR-associated protein, Cas）基因编辑技术不仅引发了生命科学领域的革命性发展，还在农业领域带来了翻天覆地的变革。作为CRISPR基因编辑系统的重要分支，CRISPR-Cas12a系统凭借其独特的分子特征，在生物育种和疾病诊断领域展现出区别于经典CRISPR-Cas9系统的应用潜力。相较于II型Cas9系统，V型的Cas12a蛋白只有一个RuvC-Nuc核酸酶结构域，与Cas9蛋白的HNH-RuvC双核酸酶结构域形成鲜明对比。Cas12a切割靶DNA产生交错型双链断裂（double-stranded DNA break,DSB），并保留了CRISPR RNA(crRNA)和Cas12a的“R环（R-loop）”。R环的保留是CRISPR-Cas12a基因编辑系统拥有“附带切割”特性和开发核酸和小分子检测技术的结构基础。Cas12a识别富含胸腺嘧啶的原间隔区相邻基序（protospacer adjacent motif,PAM），是CRISPR-Cas基因编辑系统的有效补充，其依赖crRNA的自主加工能力显著区别于Cas9的反式激活CRISPR RNA(tracrRNA)依赖系统，在多基因同步编辑方面展现出更大的优势。Cas12a的以上特性使其在农作物遗传改良中取得突破性进展——已成功培育出抗病、高产的商业化农作物品种。在基础研究方向，失活的Cas12a(dCas12a)与转录调控或表观修饰元件融合表达，可实现不产生DSB的精准基因表达调控；其与等温扩增技术联用可实现疾病的可视化检测。本文从V型Cas蛋白的分类、Cas12a在细菌内的作用原理和Cas12a与crRNA复合体的功能结构域等方面系统地介绍了CRISPR-Cas12a基因编辑系统；从靶向RNA的加工原理、Cas效应蛋白的功能结构、基因编辑的效果和应用4个方面对比了CRISPR-Cas12a和CRISPR-Cas9两套基因编辑系统；从基因调控、表观修饰和碱基编辑3个方面阐述了CRISPR-dCas12a和CRISPR-dCas9激活和抑制系统；从核酸、蛋白质和小分子3个方面阐述了CRISPR-Cas12a系统在分子检测领域的作用原理；从基因调控、碱基编辑、物质检测、疾病诊断和生物育种几个方面系统阐述了CRISPR-Cas12a在农业生产中的应用。随着引物编辑等更加安全的非DSB依赖技术的发展，CRISPR-Cas12a系统将在作物精准育种、畜禽遗传改良和临床快速检测等领域发挥更重要的作用，为应对全球粮食安全挑战和传染病防控提供创新性解决方案。

关键词： CRISPR-Cas12a 基因编辑疾病诊断分子检测

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槲皮素对高铜诱导的小鼠卵巢氧化损伤的缓解作用分析

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动物营养学报 2025年第2期37卷 1286-1297页

作者：邢文文齐南南葛方才王彬彬李梦轩刘吉英江苏科技大学生物技术学院江苏省蚕桑与畜禽生物技术重点实验室镇江212000 农业农村部蚕桑遗传改良重点实验室中国农业科学院桑蚕科学研究中心镇江212000

本试验旨在探讨槲皮素对高铜诱导的小鼠卵巢氧化损伤的缓解作用。将ICR雌性小鼠随机分为6个组,每组7只。对照组:每天灌胃0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)+口服纯水;高铜组:每天口服200 mg/kg五水硫酸铜(CuSO_(4)·5H_(2)O);槲皮素组:每... 详细信息

本试验旨在探讨槲皮素对高铜诱导的小鼠卵巢氧化损伤的缓解作用。将ICR雌性小鼠随机分为6个组,每组7只。对照组:每天灌胃0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)+口服纯水;高铜组:每天口服200 mg/kg五水硫酸铜(CuSO_(4)·5H_(2)O);槲皮素组:每天灌胃100 mg/kg槲皮素+口服纯水;槲皮素低浓度保护组:每天灌胃25 mg/kg槲皮素+口服200 mg/kg CuSO_(4)·5H_(2)O;槲皮素中浓度保护组,每天灌胃50 mg/kg槲皮素+口服200 mg/kg CuSO_(4)·5H_(2)O;槲皮素高浓度保护组,每天灌胃100 mg/kg槲皮素+口服200 mg/kg CuSO_(4)·5H_(2)O。在试验期间小鼠均饲喂基础饲粮,预试验7 d,正式试验28 d。试验结束后记录小鼠体重并对卵巢称重计算卵巢系数,采集血液测定血清氧化应激指标,实时荧光定量PCR检测卵巢组织中氧化应激相关基因的表达情况,苏木精-伊红(HE)染色观察卵巢组织学变化和Tunel染色观察卵巢颗粒细胞凋亡情况。结果显示:1)与对照组相比,高铜组的卵巢系数显著下降(P<0.05);与高铜组相比,补充50或100 mg/kg槲皮素后卵巢系数显著上升(P<0.05)。2)卵巢组织病理学变化显示,高铜组的卵泡闭锁和凋亡细胞数量明显增多、颗粒细胞与卵母细胞的连接较松散,而补充槲皮素后凋亡细胞和闭锁卵泡数量减少,尤其是补充50 mg/kg槲皮素的小鼠,其卵巢颗粒细胞与卵母细胞的连接更加紧密,凋亡细胞数量明显减少。3)与对照组相比,高铜组小鼠血清中丙二醛(MDA)含量极显著升高(P<0.01),而超氧化物歧化酶(T-SOD)与过氧化氢酶(CAT)总活性显著或极显著下降(P<0.05或P<0.01);补充50 mg/kg槲皮素后极显著降低了因高铜诱导升高的血清中MDA含量(P<0.01),显著或极显著提高了CAT与T-SOD活性(P<0.05或P<0.01)。4)与对照组相比,高铜组小鼠卵巢组织中CAT(P>0.05)、超氧化物歧化酶1(SOD1)(P>0.05)、超氧化物歧化酶2(SOD2)(P<0.05)的mRNA相对表达量均下降,而血红素氧合酶-1(HO-1)的mRNA相对表达量上升(P>0.05);补充50或100 mg/kg槲皮素后小鼠卵巢组织中CAT、SOD1、SOD2、HO-1的mRNA相对表达量虽未产生显著变化(P>0.05),但均向着正常水平恢复。综上所述,补充50或100 mg/kg槲皮素能够缓解高铜诱导的小鼠卵巢氧化损伤。

关键词：槲皮素高铜卵巢氧化应激

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桑树根系分泌物鉴定及其主要活性物质对桑树青枯菌生长的影响研究

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植物生理学报 2024年第9期60卷 1475-1485页

作者：史惠聪王思怡刘梦圆邓峻严赵卫国李萍吴福安江苏科技大学生物技术学院江苏省蚕桑与畜禽生物技术重点实验室江苏镇江212100 农业农村部蚕桑遗传改良重点实验室中国农业科学院桑蚕科学研究中心江苏镇江212100

为探讨桑树(Morus alba)根系分泌物对青枯病菌(Ralstonia pseudosolanacearum)的抑菌活性,本研究利用气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术及平板抑菌试验研究了桑树根系分泌物主要活性物质对桑树青枯病菌(Ralstonia pseudosolanacearum)生长... 详细信息

为探讨桑树(Morus alba)根系分泌物对青枯病菌(Ralstonia pseudosolanacearum)的抑菌活性,本研究利用气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术及平板抑菌试验研究了桑树根系分泌物主要活性物质对桑树青枯病菌(Ralstonia pseudosolanacearum)生长的影响。结果表明,桑树根系分泌物中含量最高的3种主要活性物质包括芥酸酰胺、油酸酰胺和溴樟脑,其中芥酸酰胺、油酸酰胺在根系分泌物中的质量占总质量的42.6%,溴樟脑占总质量的18.33%。三种主要的根系分泌物对桑树青枯菌MRS-5的生长均表现出明显的抑制作用,在1.5 g·L^(-1)时的抑菌效果最佳,抑菌率均达到90%以上,并能够显著抑制MRS-5生物膜的形成和运动能力。本研究揭示了桑树根系分泌物中主要活性物质的抑菌效果和潜在的防治机制,对理解和防控桑树青枯病提供科学和实践参考。

关键词：桑树根系分泌物气相色谱-质谱法(GC-MS) 桑树青枯病抑菌作用

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家蚕小茧突变体sc生长发育相关通路差异表达基因转录分析

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昆虫学报 2025年第1期68卷 1-13页

作者：吴赛王闪闪赵巧玲朱娟王梅仙唐顺明沈兴家江苏科技大学生物技术学院江苏省蚕桑与畜禽生物技术重点实验室镇江212100 中国农业科学院桑蚕科学研究中心农业农村部蚕桑遗传改良重点实验室镇江212100

【目的】航天蚕Bombyx mori后代小茧突变体sc的幼虫发育缓慢,食桑量少,推测其生长发育相关通路基因受到基因突变的影响。前期研究表明,sc突变受一对位于家蚕第3连锁群的隐性基因控制,但其控制基因并未被鉴定。本研究拟通过比较分析sc与... 详细信息

【目的】航天蚕Bombyx mori后代小茧突变体sc的幼虫发育缓慢,食桑量少,推测其生长发育相关通路基因受到基因突变的影响。前期研究表明,sc突变受一对位于家蚕第3连锁群的隐性基因控制,但其控制基因并未被鉴定。本研究拟通过比较分析sc与航天蚕后代正常茧品系TG的转录组数据,为sc突变体相应基因的鉴定及分子机制的解析提供参考。【方法】分别取sc和TG 5龄第4天幼虫的头部和中肠组织进行转录组测序(RNA-seq),并通过比较转录组分析获得差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),对DEGs进行GO注释和KEGG富集分析。利用qRT-PCR验证随机选取的DEGs在sc和TG中的表达量。此外,利用qRT-PCR调查感兴趣基因在sc中的表达量。【结果】TG vs sc比较组头部检测到1528个DEGs,其中820个上调表达,708个下调表达;TG vs sc比较组中肠检测到1401个DEGs,其中683个上调表达,718个下调表达。GO分析表明头部和中肠DEGs在生物学过程中,大多数DEGs参与细胞过程、代谢过程、生物调节和刺激反应等;在分子功能中,大多数DEGs参与结合、催化活性、结构分子活性、转运蛋白活性和ATP依赖活性等。头部和中肠DEGs均涉及Hippo,Insulin和mTOR等与家蚕生长发育相关的信号通路。qRT-PCR分析显示,基因的表达趋势与转录组测序结果一致;与TG相比,sc中生长发育相关通路中BMSK0008105,BMSK0009907,BMSK0002689,BMSK0000286,BMSK0012340和BMSK00083629等关键基因差异表达。【结论】sc和TG中生长发育相关的信号通路关键基因的差异表达,通过影响生长发育过程中的能量代谢、器官发生和细胞生长、增殖及凋亡等生理过程,进而影响小茧突变体sc的体型发育。研究结果有助于阐明sc突变体形成的分子机制,并为家蚕体型调控研究积累实验数据。

关键词：家蚕航天蚕小茧突变体转录组测序差异表达基因功能注释

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桑蟥聚瘤姬蜂毒液注入对大蜡螟磷脂酶A2基因及黑化反应相关基因的表达调控研究

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蚕业科学 2025年

作者：朱涵奇梁鑫浩陶锐朱媛媛李萍周卫红吴福安盛晟江苏科技大学生物技术学院江苏省蚕桑与畜禽生物技术重点实验室农业农村部蚕桑遗传改良重点实验室中国农业科学院桑蚕科学研究中心

寄生蜂雌蜂通常会向寄主体内注入毒液、多分DNA病毒寄生因子，为子代蜂生长发育营造良好的生理环境，顺利实现寄生。相应地，寄主启动先天免疫防御系统应对寄生蜂寄生因子注入。其中，酚氧化酶原级联反应介导的黑化反应在昆虫免疫系统... 详细信息

寄生蜂雌蜂通常会向寄主体内注入毒液、多分DNA病毒寄生因子，为子代蜂生长发育营造良好的生理环境，顺利实现寄生。相应地，寄主启动先天免疫防御系统应对寄生蜂寄生因子注入。其中，酚氧化酶原级联反应介导的黑化反应在昆虫免疫系统中发挥核心作用。磷脂酶A2(phospholipase A2，PLA2)是一类脂肪酸代谢相关的催化酶，催化与磷脂sn-2位点相连的脂肪酸特异性水解。研究发现，三类PLA2中，分泌型PLA2(secretory PLA2，sPLA2)与细胞内Ca2+非依赖型(Ca2+-independent PLA2，iPLA2)参与了昆虫的免疫反应，但PLA2是否在寄主昆虫响应寄生蜂寄生发挥作用尚未报道。桑蟥聚瘤姬蜂毒液注入诱导大蜡螟模式识别蛋白（peptidoglycan recognition protein）基因PGRP、丝氨酸蛋白酶（serine protease）基因SP显著上调表达、抑制酚氧化酶原（prophenoloxidase）基因PPO表达，并且在毒液注入前期（48 h内）诱导丝氨酸蛋白酶抑制剂（serpin）基因上调表达。此外，利用RNAi干扰技术沉默GmPLA2后，serpin、酚氧化酶激活酶（phenoloxidase-activating enzyme）基因、酚氧化酶激活因子（phenoloxidase-activating factor）基因等通路基因的表达量显著下调，表明桑蟥聚瘤姬蜂可能利用毒液诱导GmPLA2表达，进而调控寄主幼虫的酚氧化酶级联反应。本研究为深入揭示PLA2在寄主响应寄生蜂毒液注入的免疫反应中的功能提供了基础数据，也为有效发挥桑园寄生蜂的控害潜能提供重要参考。

关键词：桑蟥聚瘤姬蜂毒液大蜡螟磷脂酶A 黑化反应 RNAi

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单种营养物质赖氨酸添食对家蚕生长发育和茧质性状的影响

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蚕业科学 2025年

作者：李慕秋简雯杰袁紫萱李木旺孙霞江苏科技大学生物技术学院江苏省蚕桑与畜禽生物技术重点实验室农业农村部蚕桑遗传改良重点实验室中国农业科学院桑蚕科学研究中心

赖氨酸是家蚕生长发育过程中的一种必需氨基酸，需从桑叶中摄取。对5龄期家蚕幼虫添食0.01 g/mL和0.02 g/mL赖氨酸，分析赖氨酸对家蚕生长发育和茧质性状的影响。研究结果显示，0.01 g/mL添食组家蚕从5龄第4天起质量显著增加，到第7天... 详细信息

赖氨酸是家蚕生长发育过程中的一种必需氨基酸，需从桑叶中摄取。对5龄期家蚕幼虫添食0.01 g/mL和0.02 g/mL赖氨酸，分析赖氨酸对家蚕生长发育和茧质性状的影响。研究结果显示，0.01 g/mL添食组家蚕从5龄第4天起质量显著增加，到第7天时相比于对照组（2.03 g），平均每头蚕体质量（2.14 g）增加5.41%。0.01 g/mL添食组雌雄家蚕的茧层率分别提高5.39%、5.05%。对赖氨酸降解过程关键酶α-氨基半醛合酶（α-aminoadipic semialdehyde synthase，AASS）的编码基因BmAASS进行不同组织表达水平分析，发现随着添食赖氨酸浓度升高，在5龄第3天幼虫的中肠和丝腺中BmAASS的表达量逐渐增加，而在脂肪体中的表达量逐渐降低。同时，分析添食赖氨酸对丝蛋白基因表达的影响，结果显示添食赖氨酸能够促进Fib-H和Sericin1的表达，同时抑制Fib-L和p25表达。以上结果表明，添食0.01 g/mL赖氨酸对家蚕的生长发育及茧层率等具有促进作用。因此，认为0.01 g/mL赖氨酸可以作为单种营养物质添加剂，这为家蚕人工饲料的品质优化和改善提供了实验基础和数据参考。

关键词：赖氨酸家蚕生长发育茧质性状

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家蚕尿苷二磷酸-糖基转移酶x1亚型(BmUGTx1)的基因鉴定及亚细胞定位分析

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蚕业科学 2025年第1期51卷 25-32页

作者：曹烨庆李奕竺郭丹郭会朵钱荷英李刚江苏科技大学生物技术学院江苏省蚕桑与畜禽生物技术重点实验室江苏镇江212100 农业农村部蚕桑遗传改良重点实验室中国农业科学院桑蚕科学研究中心江苏镇江212100

尿苷二磷酸-糖基转移酶(UDP-glucuronosyltransferase,UGT)是一类重要的代谢酶家族,广泛分布于动物、植物、细菌及真菌等,在解毒代谢和生长发育过程中发挥重要作用。在家蚕基因组中鉴定出38个UGT基因,这些UGT主要分布在8条染色体上,CDS... 详细信息

尿苷二磷酸-糖基转移酶(UDP-glucuronosyltransferase,UGT)是一类重要的代谢酶家族,广泛分布于动物、植物、细菌及真菌等,在解毒代谢和生长发育过程中发挥重要作用。在家蚕基因组中鉴定出38个UGT基因,这些UGT主要分布在8条染色体上,CDS长度从255 bp到3615 bp不等,亚细胞定位预测其编码的蛋白质大多数分布在质膜和细胞质中。构建BmUGTx 1-pIZT/V5-His-mCherry重组质粒,转染BmN细胞后发现BmUGTx1定位于细胞质中,与计算模型预测一致。qRT-PCR检测BmUGTx 1基因在家蚕各发育时期和各组织中均有转录,其中在幼虫期的表达量相对较高,在蛹期较低,组织中以气管丛、血淋巴、脂肪体中的表达量较高,生殖腺、丝腺、头部等组织中的表达量较低。BmUGTx 1在经口感染BmNPV后12 h、24 h、48 h的家蚕中肠和脂肪体中均表现出诱导性上调,暗示可能与BmNPV感染机制有关。

关键词：家蚕 BmUGTx 1基因表达分析亚细胞定位

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家蚕酰基-甘油-3-磷酸酰基转移酶基因BmAGPATγ的表达特征分析

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蚕业科学 2025年第1期51卷 33-40页

作者：马达周思顾颖时佳园秦笙李木旺孙霞江苏科技大学生物技术学院江苏省蚕桑与畜禽生物技术重点实验室江苏镇江212100 农业农村部蚕桑遗传改良重点实验室中国农业科学院桑蚕科学研究中心江苏镇江212100

家蚕作为鳞翅目昆虫遗传与分子生物学研究的重要模式生物,甘油三酯(triglyceride,TG)代谢在其生长发育中具有重要作用。1-acyl-sn-glycero-3-phosphoacyltransferase(AGPAT)是催化溶血磷脂酸(LPA)和脂肪酰基辅酶A生成磷脂酸(PA)的关键... 详细信息

家蚕作为鳞翅目昆虫遗传与分子生物学研究的重要模式生物,甘油三酯(triglyceride,TG)代谢在其生长发育中具有重要作用。1-acyl-sn-glycero-3-phosphoacyltransferase(AGPAT)是催化溶血磷脂酸(LPA)和脂肪酰基辅酶A生成磷脂酸(PA)的关键酶。通过SilkDB 3.0数据库和序列比对鉴定了家蚕5个BmAGPAT成员。生物信息学分析表明,BmAGPATγ是一个包含33个磷酸化位点的跨膜蛋白,并且与人和果蝇中的脂滴蛋白AGPAT3/4有较强的保守性。通过qRT-PCR技术对BmAGPATγ的组织时期表达模式进行分析发现,BmAGPATγ在家蚕各个组织均有表达,并且其表达水平受到蜕皮激素正调控。过表达和干扰BmAGPATγ的表达能够促进或抑制TG代谢通路下游基因的表达。以上研究结果显示BmAGPATγ具有高度保守性,可能参与家蚕生长发育、TG合成等生物学过程。

关键词：家蚕 AGPAT蛋白甘油三酯生物信息学分析蜕皮激素

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桑树伤口诱导去分化因子MafcWIND1的基因表达分析及其在子叶不定芽发育过程中的功能初探

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蚕业科学 2024年第6期50卷 481-488页

作者：冯禹铭张杰刘利潘刚江苏科技大学生物技术学院江苏省蚕桑与畜禽生物技术重点实验室江苏镇江212100 农业农村部蚕桑遗传改良重点实验室中国农业科学院桑蚕科学研究中心江苏镇江212100

桑树体外不定芽发生是桑树基因工程的上游环节,在不定芽发生过程中大量转录因子参与细胞命运的转变。AP2/ERF家族中的伤口诱导去分化因子1(wound induced dedifferentiation 1,WIND1)是参与伤口信号介导植物再生的关键转录调控因子,能... 详细信息

桑树体外不定芽发生是桑树基因工程的上游环节,在不定芽发生过程中大量转录因子参与细胞命运的转变。AP2/ERF家族中的伤口诱导去分化因子1(wound induced dedifferentiation 1,WIND1)是参与伤口信号介导植物再生的关键转录调控因子,能够促进细胞去分化和增殖,为不定芽的形成提供组织基础,同时激活下游转录因子参与植物再生过程。以桑树品种丰驰桑为试验材料,克隆得到桑树WIND 1基因,将其命名为MafcWIND 1(GenBank登录号:OQ420538)。MafcWIND 1的CDS序列全长1071 bp,其编码的蛋白质由356个氨基酸组成,包含一个AP2结构域,属于AP2/ERF转录因子家族中的DREB亚家族。对MafcWIND 1基因上游1000 bp的转录调控区进行分析,筛选到响应光信号、茉莉酸和外界胁迫等刺激的顺式作用元件。表达谱分析表明,MafcWIND 1在叶片和果实发育初期的表达量高,可以快速响应伤口刺激并在桑树子叶不定芽发生中发挥转录激活作用。在烟草中过表达MafcWIND 1可以显著提高叶片外植体的不定芽诱导率。上述结果为阐明桑树体外再生的分子机制和提高桑树体外诱导不定芽发生率提供了理论基础。

关键词：桑树子叶不定芽诱导 MafcWIND 1基因

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