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微小RNA-874-3p通过靶向调控斑菲素蛋白3影响肺腺癌细胞生物学行为及机制

解剖学报 2025年第2期56卷 188-201页

作者：陈帆滕召虎房涛任君旭张静李雪王怡璇林旭吴靖芳河北北方学院形态学实验室河北张家口075000 河北张家口市第一医院胸外科河北北方学院基础医学院组织学与胚胎学教研室河北张家口075000

目的探讨微小RNA-874-3p(miR-874-3p)靶向调控斑菲素蛋白3(PKP3)对肺腺癌细胞恶性生物学行为的影响及作用机制。方法免疫组织化学法和免疫细胞化学法分别检测肺腺癌组织芯片与肺腺癌细胞系A549细胞PKP3的表达水平,并分析与肺腺癌患者临... 详细信息

目的探讨微小RNA-874-3p(miR-874-3p)靶向调控斑菲素蛋白3(PKP3)对肺腺癌细胞恶性生物学行为的影响及作用机制。方法免疫组织化学法和免疫细胞化学法分别检测肺腺癌组织芯片与肺腺癌细胞系A549细胞PKP3的表达水平,并分析与肺腺癌患者临床病理特征之间的关系。细胞实验分A549细胞组(空白对照组)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-mimics组(转染miR-874-3p mimics)、sh-NC组(转染PKP3沉默质粒的对照组)、sh-PKP3组(转染PKP3沉默质粒)、miR+pcDNA-PKP3组(转染miR-874-3p mimics+pcDNA-PKP3,挽救组)、miR+pcDNA-NC组(转染miR-874-3p mimics+pcDNA-NC),分别对各组细胞的增殖、侵袭、迁移以及凋亡能力进行检测。用ENCORI数据库预测PKP3的上游基因,双荧光素酶实验检测miR-874-3p与PKP3靶向关系。Western blotting检测MAPK/mTOR通路相关蛋白。结果PKP3在肺腺癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织,PKP3高表达与临床分期、肿瘤大小及淋巴结转移有关(P<0.05),A549细胞中PKP3表达水平显著增高,miR-874-3p表达降低(P<0.05)。过表达miR-874-3p使PKP3表达水平下降(P<0.05)。与对照组相比,过表达miR-874-3p与沉默PKP3均能抑制A549细胞克隆及侵袭能力,引起细胞周期阻滞,降低A549细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、细胞周期蛋白(cyclin)D1、cyclin E1的表达水平(P<0.05),上调Bax蛋白及Caspase-3蛋白表达(P<0.05),增加细胞凋亡。过表达PKP3可以逆转过表达miR-874-3p产生的生物学行为。过表达miR-874-3p与沉默PKP3均显著降低P38 MAPK、mTOR磷酸化蛋白的表达水平。结论MiR-874-3p能够靶向负调控PKP3表达并通过MAPK/mTOR通路抑制A549细胞恶性生物学行为。

关键词：微小RNA-874-3p 斑菲素蛋白3 肺腺癌增殖侵袭免疫印迹法人

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1,25-维生素-D3体外诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的最适浓度

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解剖学报 2019年第5期50卷 580-588,607页

作者：刘洋吕洋王浩宇李娇任君旭王海萍河北北方学院基础医学院组织学胚胎学教研室

目的探讨1,25-维生素D3(1,25-vitamin-D3)体外诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)向心肌样细胞分化的最适浓度。方法采用全骨髓贴壁法结合密度梯度离心法分离培养SD大鼠BMSCs,应用3、6、12、24 nmol/L 1,25-vitamin-D3对第2代BMSCs进行定向诱... 详细信息

目的探讨1,25-维生素D3(1,25-vitamin-D3)体外诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)向心肌样细胞分化的最适浓度。方法采用全骨髓贴壁法结合密度梯度离心法分离培养SD大鼠BMSCs,应用3、6、12、24 nmol/L 1,25-vitamin-D3对第2代BMSCs进行定向诱导,倒置相差显微镜下动态观察细胞生长状况。运用流式细胞仪对BMSCs进行鉴定。应用免疫细胞化学、免疫荧光及Western blotting法检测诱导后4周的BMSCs原肌球蛋白(TPM)、间隙连接蛋白43(Cx43)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)的表达情况。运用透射电子显微镜观察分化细胞与心肌细胞类似的超微结构。在诱导后1、2和4周这3个时间点,以Real-time PCR法检测细胞心肌早期转录因子GATA结合蛋白4(GATA4)、Nkx2.5的表达。结果 1.倒置相差显微镜下观察,原代细胞培养72 h后,大部分细胞呈短梭形;培养1周后,细胞呈现出多样化的形态;诱导4周的BMSCs,相邻细胞间联系紧密,排列具有明显的方向性。不同浓度1,25-vitamin-D3诱导后的BMSCs,其数量及形态存在差异。2.流式细胞术的鉴定结果显示,CD29、CD45、CD90的阳性表达率分别为97.4%、3.3%和91.4%。3.免疫细胞化学、免疫荧光及Western blotting法检测不同浓度1,25-vitamin-D3诱导4周后的BMSCs均可见TPM、Cx43及cTnT的阳性表达,其中6 nmol/L组的表达均最高,而未诱导组细胞呈弱阳性或阴性表达,差异具有统计学意义(P<0.05)。4.透射电子显微镜观察,细胞诱导培养至4周,胞质内可见较多平行排列的肌丝及线粒体、核糖体、粗面内质网等细胞器。***-time PCR检测结果显示,GATA4及Nkx2.5基因于诱导后1周表达增强,2周表达减弱,4周表达增强;4个诱导组相比较,6 nmol/L组明显优于其他3组(P<0.05)。结论 1,25-vitamin-D3可以诱导BMSCs获得心肌分化表型,其诱导分化最适浓度为6 nmol/L。

关键词：骨髓间充质干细胞 1,25-维生素-D3 心肌样细胞细胞分化免疫印迹法大鼠

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成年大鼠骨髓基质细胞转分化为胰岛样细胞的实验研究

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解剖学报 2007年第1期38卷 65-69页

作者：吴靖芳郑慧娥张耕王志勇王浩宇张小俊任君旭河北北方学院基础医学部组织学与胚胎学教研室张家口075029

目的探讨二甲基亚枫（DMSO）对成年大鼠骨髓基质干细胞（MSC）定向诱导分化为胰岛样细胞团的作用。方法用长骨骨髓腔冲洗的方法对Wistar大鼠MSC进行分离和培养，加入1％DMSO诱导3d后，***培养7—10d。通过形态学观察、双硫棕（DTZ）... 详细信息

目的探讨二甲基亚枫（DMSO）对成年大鼠骨髓基质干细胞（MSC）定向诱导分化为胰岛样细胞团的作用。方法用长骨骨髓腔冲洗的方法对Wistar大鼠MSC进行分离和培养，加入1％DMSO诱导3d后，***培养7—10d。通过形态学观察、双硫棕（DTZ）染色、免疫细胞化学染色、葡萄糖刺激实验和RT-PCR，对诱导细胞进行体外结构和功能鉴定。结果 1％DMSO诱导后第3d有胰岛样结构出现；免疫细胞化学显示，诱导后第1dMSC呈nestin免疫反应阳性，诱导后第10d细胞团表达胰岛素、胰高血糖素，而未诱导组细胞不表达上述蛋白；RT-PCR结果表明，诱导后第10d检测到胰岛素1（Insl）、胰岛素2（Ins2）、胰高血糖素（glu）和生长抑素（SS）基因的表达。结论体外经DMSO诱导，大鼠骨髓基质干细胞可定向分化为胰岛样细胞。

关键词：骨髓基质干细胞转分化免疫细胞化学胰岛

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Smad2/3与Smad7在大鼠化疗性卵巢早衰卵泡中的表达和意义

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解剖学报 2018年第4期49卷 497-505页

作者：丁艳陶然张静陈婧任君旭河北北方学院基础医学院组织学与胚胎学教研室河北张家口075000

目的探讨顺铂对大鼠卵巢结构和功能损伤的影响及其可能的分子机制。方法 3月龄SD雌性大鼠随机分为对照组(C组,5只)和化疗组(H组,5只)。H组给予每只大鼠腹腔注射顺铂2 mg/(kg.d),C组给予腹腔注射等体积生理盐水,连续注射7 d后检测大鼠卵... 详细信息

目的探讨顺铂对大鼠卵巢结构和功能损伤的影响及其可能的分子机制。方法 3月龄SD雌性大鼠随机分为对照组(C组,5只)和化疗组(H组,5只)。H组给予每只大鼠腹腔注射顺铂2 mg/(kg.d),C组给予腹腔注射等体积生理盐水,连续注射7 d后检测大鼠卵巢指数(卵巢湿重/体重);酶联免疫吸附法检测血清雌二醇(E2)和促卵泡刺激素(FSH)水平;苏木素-伊红染色观察卵泡发育并计数各级卵泡;免疫组织化学和Real-time PCR法检测各组Smad2、磷酸化Smad2(p-Smad2)、Smad3、磷酸化Smad3(p-Smad3)、Smad4和Smad7的蛋白和mRNA表达。结果与C组相比,H组大鼠卵巢体积减小,生长卵泡数明显减少(P<0.05),大鼠卵巢指数下降(P<0.05),血清中E2水平降低和FSH水平上升(P<0.05)。免疫组织化学和Real-time PCR结果显示,Smad2(p-Smad2)、Smad3(p-Smad3)、Smad4和Smad7蛋白在卵巢各级卵泡均有表达,H组Smad2蛋白和mRNA表达增加(P<0.05),Smad2磷酸化水平(p-Smad2)表达增高(P<0.05);Smad3、Smad4和Smad7蛋白和mRNA表达减少(P<0.05),p-Smad3表达降低(P<0.05)。结论顺铂诱导大鼠卵泡损伤并促进卵巢早衰,引起卵泡细胞内Smad2表达增加,Smad3、Smad7表达降低,Smad细胞内信号通路参与了化疗性卵巢损伤的过程。

关键词：顺铂卵巢早衰 Smad2(p-Smad2)/Smad3(p-Smad3) Smad4 Smad7 免疫组织化学实时定量聚合酶链反应大鼠

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FGF-2和三七总皂苷诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化

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陆军军医大学学报 2024年第21期46卷 2415-2423页

作者：董子晗王海萍吕洋刘洋河北北方学院基础医学院组织学与胚胎学教研室河北张家口075000 河北北方学院干细胞与生殖生物学实验室河北张家口075000

目的探究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibro-blast growth factor,FGF-2)和三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)单独或联合诱导对骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)向心肌细胞(cardiomyocytes,CMs)分化的影响以及PNS和FGF-2促分化的作用机制。方法全骨髓贴壁法分离20~30 g 3周龄SD大鼠的骨髓间充质干细胞,通过流式细胞术鉴定骨髓间充质干细胞的纯度。鉴定纯度合格后通过PNS和FGF-2单独或联合诱导以及PNS和FGF-2分别与LY294002(phosphatidylinositol 3 kinase抑制剂)联用诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化。根据培养的相应时间点,分为对照组、三七总皂苷组(PNS组)、碱性成纤维细胞生长因子组(FGF-2组)、三七总皂苷+碱性成纤维细胞生长因子组(PNS+FGF-2组)。通过免疫组织化学检测诱导后Desmin和Cx43的表达水平;Western blot检测心肌特异性蛋白、有关通路蛋白及细胞凋亡有关蛋白的表达水平;采用RT-qPCR检测心肌转录因子表达水平。结果各单独诱导组(FGF-2组、PNS组)或联合诱导组(PNS+FGF-2组)均提高心肌特异性蛋白和基因表达水平(P<0.05),且最高表达水平出现在联合组。PNS和FGF-2分别与LY294002联用,相较于两单独诱导组降低了心肌特异性蛋白和基因的表达水平,降低通路相关蛋白Akt的磷酸化水平,且Bcl-2水平降低,Bax水平升高,Bcl-2/Bax比值减小(P<0.05)。结论PNS和FGF-2均可使骨髓间充质干细胞诱导后向心肌细胞定向分化,且二者的联合诱导是一种更高效的诱导方法。PI3K/Akt信号通路参与了PNS和FGF-2促进骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的过程,且PNS和FGF-2起到减少细胞凋亡的作用。

关键词：碱性成纤维细胞生长因子三七总皂苷骨髓间充质干细胞心肌细胞心肌梗死 PI3K/Akt通路

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bFGF和IGF-1对骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化促进作用及相关机制探讨

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中国药理学通报 2023年第4期39卷 715-722页

作者：王巧敏刘洋吕洋郭蕊高京马聪聪王海萍河北北方学院基础医学院组织学与胚胎学教研室河北张家口075000 河北北方学院干细胞与生殖生物学实验室河北张家口075000

目的探讨成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)和胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)单独或联合使用对骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells, BMSCs)向心肌细胞(cardiomyocytes, CMs)分化的影响,以及IGF-1和bFGF促分化的作用机制。方法 IGF-1和bFGF单独或联合使用,以及IGF-1和bFGF分别与LY294002联用,诱导4周后,采用免疫细胞化学、免疫荧光检测心肌特异性蛋白表达水平;Western blot检测心肌特异性蛋白和通路相关蛋白表达水平;透射电镜观察细胞的超微结构。诱导1、2和4周后,采用RT-qPCR检测心肌转录因子表达水平。结果 IGF-1和bFGF单独或联合组,均提高心肌特异性蛋白和基因表达水平,且最高表达水平出现在IGF-1和bFGF联合组。IGF-1和bFGF联用组,透射电镜可观察到平行排列的肌丝,以及线粒体和内质网等丰富细胞器。IGF-1和bFGF分别与LY294002联用组,相较于IGF-1和bFGF单独诱导组降低心肌特异性蛋白和基因的表达水平,降低通路相关蛋白Akt磷酸化水平。结论 IGF-1和bFGF均可诱导BMSCs向CMs的定向分化,且两种生长因子的联合是一种更加高效的诱导方法。PI3K/Akt信号通路参与了IGF-1和b FGF促进BMSCs向CMs分化的过程。

关键词：成纤维细胞生长因子骨髓间充质干细胞心肌细胞胰岛素样生长因子-1 心肌梗死 PI3K/Akt

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大鼠胚胎成纤维细胞与胰岛共培养的实验研究

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解剖学报 2007年第5期38卷 581-584页

作者：吴靖芳薛刚张耕王浩宇王志勇张小俊郑慧娥任君旭河北北方学院医学院组织学胚胎学教研室河北北方学院附属第一医院张家口075029

目的探讨大鼠胚胎成纤维细胞(EFCs)与胰岛共培养对胰岛活性与功能的影响。方法制备SD大鼠胚胎饲养层;分离SD大鼠胰岛。实验分为单纯胰岛培养组、EFCs与胰岛共培养组和EFCs单纯培养组。胰岛活性以AO/PI、DTZ染色、线粒体活性检测,以胰岛... 详细信息

目的探讨大鼠胚胎成纤维细胞(EFCs)与胰岛共培养对胰岛活性与功能的影响。方法制备SD大鼠胚胎饲养层;分离SD大鼠胰岛。实验分为单纯胰岛培养组、EFCs与胰岛共培养组和EFCs单纯培养组。胰岛活性以AO/PI、DTZ染色、线粒体活性检测,以胰岛素释放试验评价其功能。结果共培养组中,AO/PI双染显示胰岛活性高于95%,MTT显示共培养3、5、7、14d胰岛细胞吸光度明显高于单纯培养组(P<0.05或P<0.01),刺激指数SI也明显高于对照组。结论新鲜分离的胰岛与EFCs饲养层共培养可明显改善胰岛功能。

关键词：胚胎成纤维细胞胰岛培养胰岛移植大鼠

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大鼠胃溃疡自愈期间三叶因子2的变化

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第三军医大学学报 2011年第13期33卷 1358-1361页

作者：张静吴靖芳任君旭王志勇王浩宇张耕河北北方学院基础医学院组织学与胚胎学教研室河北张家口075000

目的研究大鼠实验性胃溃疡自愈期间三叶因子2(trefoil factor family 2,TFF2)在血清、胃液和胃黏膜组织中的变化及意义。方法 SD大鼠按随机数字表法分为溃疡组(n=42)、盐水组(n=42)、正常组(n=6),胃前壁黏膜下注射冰乙酸制备大鼠胃溃疡... 详细信息

目的研究大鼠实验性胃溃疡自愈期间三叶因子2(trefoil factor family 2,TFF2)在血清、胃液和胃黏膜组织中的变化及意义。方法 SD大鼠按随机数字表法分为溃疡组(n=42)、盐水组(n=42)、正常组(n=6),胃前壁黏膜下注射冰乙酸制备大鼠胃溃疡模型,免疫组织化学法检测各组大鼠胃黏膜组织TFF2的表达变化;ELISA法检测各实验组大鼠血清及胃液TFF2变化趋势。结果胃黏膜、血液及胃液检测结果显示在溃疡术后早期(1、2、4、6 d)TFF2增多较为明显。胃黏膜TFF2原位表达以溃疡术后6 d阳性细胞最多(24.50±5.68)(P<0.01),表达强度较强,可见以壁细胞、颈黏液细胞为主的阳性表达;血清TFF2以溃疡2 d含量最高(338.62±58.72)pmol/L(P<0.01);胃液TFF2含量以溃疡术后1 d最高(5 021.65±291.69)pmol/L。胃黏膜、血液、胃液TFF2表达量自溃疡术后10 d有所下降,但均高于相应盐水组及正常组(P<0.05,P<0.01)。结论在胃溃疡自愈早期,TFF2在胃黏膜、血液和胃液表达水平均较高,其通过不同的表达途径参与了胃溃疡修复过程。

关键词：胃溃疡三叶因子2 免疫组织化学酶联免疫吸附实验大鼠

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三叶因子3在实验性胃溃疡大鼠脾脏中的定位及作用

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中国老年学杂志 2014年第4期34卷 989-991页

作者：张江兰邵素霞邢琛琨张静张文静张耕吴靖芳河北北方学院基础医学院组织学与胚胎学教研室河北张家口075000 河北医科大学组织学与胚胎学教研室河北北方学院

目的研究三叶因子3(TFF3)在实验性胃溃疡大鼠大鼠脾脏中的定位和表达变化。方法胃前壁黏膜下注射冰乙酸制备大鼠胃溃疡模型,免疫组织化学法分别检测盐水组(49只)和溃疡组(49只)雄性大鼠脾脏TFF3的定位和表达变化。结果①TFF3阳性反应物... 详细信息

目的研究三叶因子3(TFF3)在实验性胃溃疡大鼠大鼠脾脏中的定位和表达变化。方法胃前壁黏膜下注射冰乙酸制备大鼠胃溃疡模型,免疫组织化学法分别检测盐水组(49只)和溃疡组(49只)雄性大鼠脾脏TFF3的定位和表达变化。结果①TFF3阳性反应物呈棕黄色颗粒状分布于胞质中。经临片免疫组化结果证实,脾脏中部分TFF3阳性细胞为树突细胞。②盐水组大鼠脾脏各部位TFF3表达较弱。TFF3在不同时期胃溃疡大鼠脾脏中各部位的表达不同。白髓:1 d、2 d组TFF3表达增强,4 d、6 d组稍有降低,10 d组TFF3达高峰,然后逐渐降低,其中2~23 d各组明显高于盐水组(P<0.01);边缘区:1 d组TFF3表达逐渐增强增强,2 d、4 d组略有降低,6 d达峰值,10 d、14 d逐渐降低,23 d有所升高,但维持在一个较高的水平,其中6 d组与盐水组相比明显增高(P<0.01);红髓:1 d、2 d TFF3表达逐渐增强,4 d降低,6 d达高峰,10~23 d有所下降,6 d组与盐水组相比明显增高。结论脾脏能够表达TFF3,且部分由S-100阳性树突细胞合成。TFF3在胃溃疡大鼠脾脏各部位呈高水平表达,可通过提高脾脏免疫反应性促进胃溃疡的愈合。

关键词：实验性胃溃疡脾脏 TFF3 免疫组织化学

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实验性胃溃疡大鼠自愈期间胰腺组织三叶因子3水平的变化

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郑州大学学报（医学版） 2012年第4期47卷 459-463页

作者：魏亚伟吴靖芳连雅君张慧芹蔡倩楠王志勇张静任君旭河北北方学院基础医学院组织学与胚胎学教研室张家口075000

目的:探讨实验性胃溃疡(GU)期间大鼠胰腺组织中三叶因子3(TFF3)的表达及变化。方法:SD大鼠共30只,随机分为GU1、GU4、GU10、GU23和正常组5组,每组6只。GU1、GU4、GU10和GU23组通过胃前壁黏膜下注射冰乙酸制备GU模型,并分别于造模后1、4... 详细信息

目的:探讨实验性胃溃疡(GU)期间大鼠胰腺组织中三叶因子3(TFF3)的表达及变化。方法:SD大鼠共30只,随机分为GU1、GU4、GU10、GU23和正常组5组,每组6只。GU1、GU4、GU10和GU23组通过胃前壁黏膜下注射冰乙酸制备GU模型,并分别于造模后1、4、10和23d取材。正常组不做任何处理。应用免疫组化SP法检测胰腺组织TFF3蛋白和胰岛素的表达,RT-PCR法检测胰腺TFF3mRNA,ELISA法检测血清TFF3水平。结果:5组大鼠胰腺组织TFF3蛋白和胰岛素的表达水平、胰腺TFF3mRNA和血清TFF3水平差异有统计学意义(F分别为9.276、12.362,166.600,21.316,P均<0.001)。造模4、10d后胰腺组织TFF3蛋白表达水平升高,23d时仍处于较高水平(P<0.05);胰岛素变化趋势与TFF3一致;造模4d后,胰腺组织中TFF3与胰岛素的表达存在正相关(r=0.826,P<0.05)。胰腺TFF3mRNA和血清TFF3水平在造模4d后达最高,10d时略有下降,23d时进一步降低但仍高于正常组(P<0.05)。结论:胰岛TFF3与胰岛素共同释放入血,参与GU自愈期间胃黏膜的修复。

关键词：大鼠胰腺组织三叶因子3 胃溃疡胰岛素

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