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华中科技大学学报（医学版） 2021年第6期50卷 811-816页

作者：王文华刘洋吕洋赵亚如王海萍河北北方学院干细胞与生殖生物学实验室张家口075000

心肌梗死(myocardial infarction,MI)是心血管疾病中最常见且最严重的疾病,心肌梗死后心肌组织的损伤、凋亡和不能再生的问题一直无法解决。在组织工程的研究中发现,通过干细胞治疗损伤的心肌组织从而改善心脏功能是最理想的选择。骨髓... 详细信息

心肌梗死(myocardial infarction,MI)是心血管疾病中最常见且最严重的疾病,心肌梗死后心肌组织的损伤、凋亡和不能再生的问题一直无法解决。在组织工程的研究中发现,通过干细胞治疗损伤的心肌组织从而改善心脏功能是最理想的选择。骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)具有自我更新、多向分化、获取容易、增殖迅速的生物学特性,同时具有旁分泌、抗炎抗纤维化、免疫抑制、促血管生成等作用,因此,BMSCs是治疗心血管疾病的理想途径。诱导BMSCs向心肌细胞方向分化的方法包括化学、生物、物理等方法。该综述主要对BMSCs的生物特性、作用机制以及在体外诱导BMSCs向心肌细胞方向分化的方法进行了总结。

关键词：骨髓间充质干细胞心肌细胞诱导分化心肌微环境

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FGF-2和三七总皂苷诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化

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陆军军医大学学报 2024年第21期46卷 2415-2423页

作者：董子晗王海萍吕洋刘洋河北北方学院基础医学院组织学与胚胎学教研室河北张家口075000 河北北方学院干细胞与生殖生物学实验室河北张家口075000

目的探究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibro-blast growth factor,FGF-2)和三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)单独或联合诱导对骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)向心肌细胞(cardiomyocytes,CMs)分化的影响以及PNS和FGF-2促分化的作用机制。方法全骨髓贴壁法分离20~30 g 3周龄SD大鼠的骨髓间充质干细胞,通过流式细胞术鉴定骨髓间充质干细胞的纯度。鉴定纯度合格后通过PNS和FGF-2单独或联合诱导以及PNS和FGF-2分别与LY294002(phosphatidylinositol 3 kinase抑制剂)联用诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化。根据培养的相应时间点,分为对照组、三七总皂苷组(PNS组)、碱性成纤维细胞生长因子组(FGF-2组)、三七总皂苷+碱性成纤维细胞生长因子组(PNS+FGF-2组)。通过免疫组织化学检测诱导后Desmin和Cx43的表达水平;Western blot检测心肌特异性蛋白、有关通路蛋白及细胞凋亡有关蛋白的表达水平;采用RT-qPCR检测心肌转录因子表达水平。结果各单独诱导组(FGF-2组、PNS组)或联合诱导组(PNS+FGF-2组)均提高心肌特异性蛋白和基因表达水平(P<0.05),且最高表达水平出现在联合组。PNS和FGF-2分别与LY294002联用,相较于两单独诱导组降低了心肌特异性蛋白和基因的表达水平,降低通路相关蛋白Akt的磷酸化水平,且Bcl-2水平降低,Bax水平升高,Bcl-2/Bax比值减小(P<0.05)。结论PNS和FGF-2均可使骨髓间充质干细胞诱导后向心肌细胞定向分化,且二者的联合诱导是一种更高效的诱导方法。PI3K/Akt信号通路参与了PNS和FGF-2促进骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的过程,且PNS和FGF-2起到减少细胞凋亡的作用。

关键词：碱性成纤维细胞生长因子三七总皂苷骨髓间充质干细胞心肌细胞心肌梗死 PI3K/Akt通路

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bFGF和IGF-1对骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化促进作用及相关机制探讨

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中国药理学通报 2023年第4期39卷 715-722页

作者：王巧敏刘洋吕洋郭蕊高京马聪聪王海萍河北北方学院基础医学院组织学与胚胎学教研室河北张家口075000 河北北方学院干细胞与生殖生物学实验室河北张家口075000

目的探讨成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)和胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)单独或联合使用对骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells, BMSCs)向心肌细胞(cardiomyocytes, CMs)分化的影响,以及IGF-1和bFGF促分化的作用机制。方法 IGF-1和bFGF单独或联合使用,以及IGF-1和bFGF分别与LY294002联用,诱导4周后,采用免疫细胞化学、免疫荧光检测心肌特异性蛋白表达水平;Western blot检测心肌特异性蛋白和通路相关蛋白表达水平;透射电镜观察细胞的超微结构。诱导1、2和4周后,采用RT-qPCR检测心肌转录因子表达水平。结果 IGF-1和bFGF单独或联合组,均提高心肌特异性蛋白和基因表达水平,且最高表达水平出现在IGF-1和bFGF联合组。IGF-1和bFGF联用组,透射电镜可观察到平行排列的肌丝,以及线粒体和内质网等丰富细胞器。IGF-1和bFGF分别与LY294002联用组,相较于IGF-1和bFGF单独诱导组降低心肌特异性蛋白和基因的表达水平,降低通路相关蛋白Akt磷酸化水平。结论 IGF-1和bFGF均可诱导BMSCs向CMs的定向分化,且两种生长因子的联合是一种更加高效的诱导方法。PI3K/Akt信号通路参与了IGF-1和b FGF促进BMSCs向CMs分化的过程。

关键词：成纤维细胞生长因子骨髓间充质干细胞心肌细胞胰岛素样生长因子-1 心肌梗死 PI3K/Akt

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5-氮胞苷联合骨形态发生蛋白2诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化

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中国组织工程研究 2022年第19期26卷 2958-2963页

作者：王文华刘洋王巧敏吕洋赵亚如王海萍河北北方学院基础医学院组织学与胚胎学教研室河北省张家口市075000 河北北方学院干细胞与生殖生物学实验室河北省张家口市075000

背景:干细胞已成为组织工程中理想的种子细胞,为细胞移植治疗心肌梗死提供了研究方向。目的:探讨骨形态发生蛋白2联合5-氮胞苷体外诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的可行性。方法:采用全骨髓贴壁法培养骨髓间充质干细胞,将第3代... 详细信息

背景:干细胞已成为组织工程中理想的种子细胞,为细胞移植治疗心肌梗死提供了研究方向。目的:探讨骨形态发生蛋白2联合5-氮胞苷体外诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的可行性。方法:采用全骨髓贴壁法培养骨髓间充质干细胞,将第3代骨髓间充质干细胞进行分组诱导,分别为对照组(普通IMDM培养基)、骨形态发生蛋白2组(200 ng/L)、5-氮胞苷组(10μmol/L)、5-氮胞苷+骨形态发生蛋白2组。诱导3 d后更换正常培养基继续培养4周,免疫细胞化学法检测cTnI的表达,免疫荧光化学法检测Desmin、cTnT的表达,Western blot检测cTnT和cTnI的表达;诱导3 d后更换正常培养基继续培养1,2,4周,采用RT-qPCR检测心肌早期转录因子GATA-4、Nkx2.5 mRNA的表达。结果与结论:(1)Western blot检测诱导组均表达cTnT、cTnI,联合诱导组cTnT、cTnI的表达高于单独诱导组(P<0.01);(2)免疫细胞化学法检测诱导组cTnI均呈阳性表达,联合诱导组高于单独诱导组(P<0.05);免疫荧光细胞化学法检测诱导组Desmin、cTnT均呈阳性表达,联合诱导组高于单独诱导组(P<0.05);(3)RT-qPCR检测诱导组均有GATA-4、Nkx2.5 mRNA的表达,联合诱导组高于单独诱导组(P<0.05);(4)结果表明,骨髓间充质干细胞经5-氮胞苷和骨形态发生蛋白2联合诱导后可以提高心肌样细胞的分化效率。

关键词：干细胞骨髓间充质干细胞心肌样细胞骨形态发生蛋白2 5-氮胞苷 SD大鼠

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线粒体自噬在心肌缺血/再灌注损伤中的作用研究进展

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基础医学与临床 2023年第11期43卷 1723-1727页

作者：马聪聪刘洋吕洋王海萍河北北方学院干细胞与生殖生物学实验室河北张家口075000

心肌缺血/再灌注损伤(MI/RI)时,可通过多种分子机制激活线粒体自噬。适度的线粒体自噬有助于维持线粒体膜电位,保护细胞膜结构和功能,从而减少MI/RI的发生。当线粒体功能出现紊乱,受损的线粒体不能充分清除或者线粒体自噬过度激活时,都... 详细信息

心肌缺血/再灌注损伤(MI/RI)时,可通过多种分子机制激活线粒体自噬。适度的线粒体自噬有助于维持线粒体膜电位,保护细胞膜结构和功能,从而减少MI/RI的发生。当线粒体功能出现紊乱,受损的线粒体不能充分清除或者线粒体自噬过度激活时,都会使MI/RI更严重。

关键词：线粒体自噬心肌缺血/再灌注损伤(MI/RI) 分子机制信号通路

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内蒙古绒山羊皮肤毛囊差异表达序列标签的筛选及分析

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畜牧兽医学报 2012年第9期43卷 1499-1503页

作者：苏立宁李华刘东军旭日干内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室呼和浩特010021 佛山科学技术学院佛山528231 河北北方学院张家口075000

旨在筛选和分析内蒙古绒山羊与毛和绒生长相关的差异基因,本研究采用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)研究内蒙古绒山羊胎儿期不同日龄皮肤中控制初级毛囊和次级毛囊不同分化的差异表达序列标签。结果,共筛选了15条差异表达序列标签(dbEST登... 详细信息

旨在筛选和分析内蒙古绒山羊与毛和绒生长相关的差异基因,本研究采用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)研究内蒙古绒山羊胎儿期不同日龄皮肤中控制初级毛囊和次级毛囊不同分化的差异表达序列标签。结果,共筛选了15条差异表达序列标签(dbEST登录号JK711022-JK711036),其中3条ESTs与毛囊发育有关,5条ES-Ts与次级毛囊和皮脂腺的发育有关。生物信息分析显示,JK711036与甲状腺激素受体相互作用蛋白12(TRIP12)基因有关,其他ESTs功能未知。结果表明,胎儿期初级毛囊和次级毛囊在多种代谢途径上都存在差异表达的基因,这将为进一步研究山羊毛和绒的形成分子机制奠定基础。

关键词：绒山羊毛囊 DDRT-PCR 表达序列标签

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内蒙古绒山羊CRABPI基因的克隆及表达

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中国农业科学 2012年第13期45卷 2743-2750页

作者：李华苏立宁刘东军李雪峰旭日干内蒙古大学生命科学院/哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室佛山科学技术学院华南师范大学生命科学学院河北北方学院

【目的】克隆内蒙古绒山羊视黄酸结合蛋白Ⅰ(cellular retinoic acid binding proteinⅠ,CRABPⅠ)基因的cDNA,进行蛋白结构的预测和表达分析,为绒山羊毛和绒形成的分子机理奠定基础。【方法】利用RT-PCR方法克隆内蒙古绒山羊CRABPⅠ基... 详细信息

【目的】克隆内蒙古绒山羊视黄酸结合蛋白Ⅰ(cellular retinoic acid binding proteinⅠ,CRABPⅠ)基因的cDNA,进行蛋白结构的预测和表达分析,为绒山羊毛和绒形成的分子机理奠定基础。【方法】利用RT-PCR方法克隆内蒙古绒山羊CRABPⅠ基因序列,利用生物信息学方法预测其蛋白结构,采用实时荧光定量PCR探讨该基因在绒山羊4个胎儿日龄皮肤中的表达。【结果】内蒙古绒山羊CRABP I基因cDNA长679 bp(JN936490),其开放阅读框为414 bp,氨基酸序列与其它物种相比具有较高的序列相似性。CRABPⅠ蛋白无明显的信号肽和跨膜区域,不存在N糖基化位点和O糖基化位点;蛋白二级结构主要由α螺旋、β折叠和少量的转角及无规则卷曲构成。胎儿皮肤中CRABPⅠ基因在90 d的表达量明显高于100、120和130 d(P<0.05)。【结论】绒山羊的CRABPⅠ基因cDNA中的开放阅读框(open reading frame,ORF)在不同物种间较为保守,但种属特异性集中表现在第33和123氨基酸残基处,该基因在胎儿期的90 d表达量最大。

关键词：绒山羊 CRABPⅠ基因克隆基因表达生物信息学

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