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微小RNA-874-3p通过靶向调控斑菲素蛋白3影响肺腺癌细胞生物学行为及机制

解剖学报 2025年第2期56卷 188-201页

作者：陈帆滕召虎房涛任君旭张静李雪王怡璇林旭吴靖芳河北北方学院形态学实验室河北张家口075000 河北张家口市第一医院胸外科河北北方学院基础医学院组织学与胚胎学教研室河北张家口075000

目的探讨微小RNA-874-3p(miR-874-3p)靶向调控斑菲素蛋白3(PKP3)对肺腺癌细胞恶性生物学行为的影响及作用机制。方法免疫组织化学法和免疫细胞化学法分别检测肺腺癌组织芯片与肺腺癌细胞系A549细胞PKP3的表达水平,并分析与肺腺癌患者临... 详细信息

目的探讨微小RNA-874-3p(miR-874-3p)靶向调控斑菲素蛋白3(PKP3)对肺腺癌细胞恶性生物学行为的影响及作用机制。方法免疫组织化学法和免疫细胞化学法分别检测肺腺癌组织芯片与肺腺癌细胞系A549细胞PKP3的表达水平,并分析与肺腺癌患者临床病理特征之间的关系。细胞实验分A549细胞组(空白对照组)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-mimics组(转染miR-874-3p mimics)、sh-NC组(转染PKP3沉默质粒的对照组)、sh-PKP3组(转染PKP3沉默质粒)、miR+pcDNA-PKP3组(转染miR-874-3p mimics+pcDNA-PKP3,挽救组)、miR+pcDNA-NC组(转染miR-874-3p mimics+pcDNA-NC),分别对各组细胞的增殖、侵袭、迁移以及凋亡能力进行检测。用ENCORI数据库预测PKP3的上游基因,双荧光素酶实验检测miR-874-3p与PKP3靶向关系。Western blotting检测MAPK/mTOR通路相关蛋白。结果PKP3在肺腺癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织,PKP3高表达与临床分期、肿瘤大小及淋巴结转移有关(P<0.05),A549细胞中PKP3表达水平显著增高,miR-874-3p表达降低(P<0.05)。过表达miR-874-3p使PKP3表达水平下降(P<0.05)。与对照组相比,过表达miR-874-3p与沉默PKP3均能抑制A549细胞克隆及侵袭能力,引起细胞周期阻滞,降低A549细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、细胞周期蛋白(cyclin)D1、cyclin E1的表达水平(P<0.05),上调Bax蛋白及Caspase-3蛋白表达(P<0.05),增加细胞凋亡。过表达PKP3可以逆转过表达miR-874-3p产生的生物学行为。过表达miR-874-3p与沉默PKP3均显著降低P38 MAPK、mTOR磷酸化蛋白的表达水平。结论MiR-874-3p能够靶向负调控PKP3表达并通过MAPK/mTOR通路抑制A549细胞恶性生物学行为。

关键词：微小RNA-874-3p 斑菲素蛋白3 肺腺癌增殖侵袭免疫印迹法人

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三叶因子3对甲状腺乳头状癌细胞周期的影响及机制

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解剖学报 2019年第2期50卷 211-219页

作者：代金林旭郭梦姚张静张文静薛刚吴靖芳河北北方学院组织学与胚胎学教研室河北张家口075000

目的探讨三叶因子3 (TFF3)基因沉默对人甲状腺乳头状癌TPC-1和BCPAP细胞增殖及细胞周期的影响及相关分子机制。方法包装TFF3 shRNA慢病毒载体,病毒感染获得TPC-1和BCPAP稳转细胞株;生长曲线和集落形成实验检测沉默TFF3后细胞增殖状况;... 详细信息

目的探讨三叶因子3 (TFF3)基因沉默对人甲状腺乳头状癌TPC-1和BCPAP细胞增殖及细胞周期的影响及相关分子机制。方法包装TFF3 shRNA慢病毒载体,病毒感染获得TPC-1和BCPAP稳转细胞株;生长曲线和集落形成实验检测沉默TFF3后细胞增殖状况;流式细胞术检测TFF3基因对TPC-1和BCPAP细胞周期的影响;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测P27、P21和cyclin D1、周期蛋白依赖性激酶(CDK) 4 mRNA的表达情况;免疫印迹法(Western blotting)、免疫细胞化学染色检测周期相关蛋白P27、P21、cyclin D1、CDK4和蛋白激酶B(Akt)、p Akt的蛋白表达水平。结果成功包装TFF3 shRNA慢病毒载体,病毒液感染获得TPC-1和BCPAP稳转细胞株;生长曲线和集落形成实验结果显示,沉默TFF3后,细胞增殖能力减弱;流式细胞术结果显示,与对照组相比,TFF3基因沉默组G1期的细胞比例明显增高(*P<0. 05),S和G2期的细胞比例明显下降(*P<0. 05); TFF3沉默组TPC-1和BCPAP细胞中的P27、P21 mRNA和蛋白明显上调(*P<0. 05),而cyclin D1,CDK4mRNA和蛋白表达降低(*P<0. 05); 4株细胞Akt蛋白含量无明显差异,但沉默TFF3组磷酸化蛋白激酶B(p Akt)表达减弱;免疫细胞化学染色显示,cyclin D1阳性蛋白位于癌细胞胞核,P27、P21蛋白表达于胞质和胞核,且沉默TFF3后在细胞核中阳性信号增强,细胞质中阳性表达降低。结论沉默TFF3可明显延长甲状腺癌细胞周期,抑制细胞的增殖,可能与抑制磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路相关蛋白的表达有关。

关键词：三叶因子3 细胞周期慢病毒转染磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B 流式细胞术人

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成纤维细胞生长因子2和丹参酮ⅡA在大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化中的作用

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解剖学报 2020年第4期51卷 520-527页

作者：李娇吕洋刘洋王浩宇赵亚如王雪娇王海萍河北北方学院组织学与胚胎学教研室河北张家口075000

目的探讨成纤维细胞生长因子2(FGF-2)和丹参酮ⅡA(tanshinoneⅡA)在大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向心肌样细胞分化中的作用。方法体外分离、培养BMSCs,利用流式细胞术进行鉴定。实验分组:对照组(不加任何诱导剂)、FGF-2组、丹参酮ⅡA组... 详细信息

目的探讨成纤维细胞生长因子2(FGF-2)和丹参酮ⅡA(tanshinoneⅡA)在大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向心肌样细胞分化中的作用。方法体外分离、培养BMSCs,利用流式细胞术进行鉴定。实验分组:对照组(不加任何诱导剂)、FGF-2组、丹参酮ⅡA组及两者联合诱导组。MTT检测诱导后的活性及增殖情况;Real-time PCR检测早期心肌转录因子GATA-4、Nkx2.5的表达;免疫细胞化学染色法检测缝隙连接蛋白43(Cx43)以及心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)的表达;免疫荧光化学染色法检测结蛋白(desmin)、原肌球蛋白(Tm)的表达;Western blotting检测结蛋白、Tm的表达。结果各诱导组较对照组增殖明显。与对照组相比,诱导组GATA-4和Nkx2.5基因的表达增强,联合组表达量最高,差异具有统计学意义(P<0.05)。联合诱导组各标记物Cx43、cTnI、结蛋白、Tm的阳性表达率高于FGF-2及丹参酮ⅡA单独诱导组,差异具有统计学意义(P<0.05)。Western blotting结果显示,联合诱导组结蛋白、Tm的表达量明显高于其他实验组,差异具有统计学意义(P<0.05)。透射电子显微镜结果显示,诱导后细胞的细胞核居中,细胞质中可见肌丝、粗面内质网、线粒体和核糖体。结论FGF-2和丹参酮ⅡA均能促进BMSCs增殖,诱导BMSCs分化为心肌样细胞,两者联合诱导的效果较其他组更佳。

关键词：骨髓间充质干细胞心肌样细胞成纤维细胞生长因子2 丹参酮ⅡA 流式细胞术免疫印迹法大鼠

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大鼠实验性胃溃疡自愈期间胃黏膜三叶因子2的变化

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解剖学报 2010年第4期41卷 581-586页

作者：张静吕洋吴靖芳郑慧娥王志勇任君旭张耕河北北方学院组织学与胚胎学教研室河北张家口075000

目的探讨大鼠实验性胃溃疡自愈期间胃黏膜三叶因子2(TFF2)的表达变化。方法胃前壁黏膜下注射冰乙酸,制备大鼠胃溃疡模型,免疫组织化学法及RT-PCR法分别从蛋白水平及基因水平检测正常组(6只)、溃疡组(42只)和盐水组(42只)大鼠胃黏膜组织T... 详细信息

目的探讨大鼠实验性胃溃疡自愈期间胃黏膜三叶因子2(TFF2)的表达变化。方法胃前壁黏膜下注射冰乙酸,制备大鼠胃溃疡模型,免疫组织化学法及RT-PCR法分别从蛋白水平及基因水平检测正常组(6只)、溃疡组(42只)和盐水组(42只)大鼠胃黏膜组织TFF2的表达变化。结果免疫组织化学结果显示,正常组大鼠胃黏膜TFF2蛋白呈弱阳性表达。溃疡术后1d组TFF2阳性细胞即显著增多,至溃疡术后6dTFF2积分吸光度值达到高峰,阳性细胞以靠近黏膜肌层信号较强,壁细胞阳性表达较多。溃疡术后10d及14dTFF2积分吸光度值低于溃疡术后6d组,但仍维持于较高水平;溃疡术后23dTFF2积分吸光度值显著降低,但高于对照组(P<0.05或P<0.01)。RT-PCR结果显示,TFF2mRNA变化趋势与免疫组织化学结果基本一致,以溃疡术后4d和6d表达较为强烈。结论 TFF2在维持胃黏膜的完整性和促进其快速修复过程中起重要作用。

关键词：胃溃疡三叶因子2 免疫组织化学反转录-聚合酶链式反应大鼠

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1,25-维生素-D3体外诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的最适浓度

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解剖学报 2019年第5期50卷 580-588,607页

作者：刘洋吕洋王浩宇李娇任君旭王海萍河北北方学院基础医学院组织学胚胎学教研室

目的探讨1,25-维生素D3(1,25-vitamin-D3)体外诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)向心肌样细胞分化的最适浓度。方法采用全骨髓贴壁法结合密度梯度离心法分离培养SD大鼠BMSCs,应用3、6、12、24 nmol/L 1,25-vitamin-D3对第2代BMSCs进行定向诱... 详细信息

目的探讨1,25-维生素D3(1,25-vitamin-D3)体外诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)向心肌样细胞分化的最适浓度。方法采用全骨髓贴壁法结合密度梯度离心法分离培养SD大鼠BMSCs,应用3、6、12、24 nmol/L 1,25-vitamin-D3对第2代BMSCs进行定向诱导,倒置相差显微镜下动态观察细胞生长状况。运用流式细胞仪对BMSCs进行鉴定。应用免疫细胞化学、免疫荧光及Western blotting法检测诱导后4周的BMSCs原肌球蛋白(TPM)、间隙连接蛋白43(Cx43)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)的表达情况。运用透射电子显微镜观察分化细胞与心肌细胞类似的超微结构。在诱导后1、2和4周这3个时间点,以Real-time PCR法检测细胞心肌早期转录因子GATA结合蛋白4(GATA4)、Nkx2.5的表达。结果 1.倒置相差显微镜下观察,原代细胞培养72 h后,大部分细胞呈短梭形;培养1周后,细胞呈现出多样化的形态;诱导4周的BMSCs,相邻细胞间联系紧密,排列具有明显的方向性。不同浓度1,25-vitamin-D3诱导后的BMSCs,其数量及形态存在差异。2.流式细胞术的鉴定结果显示,CD29、CD45、CD90的阳性表达率分别为97.4%、3.3%和91.4%。3.免疫细胞化学、免疫荧光及Western blotting法检测不同浓度1,25-vitamin-D3诱导4周后的BMSCs均可见TPM、Cx43及cTnT的阳性表达,其中6 nmol/L组的表达均最高,而未诱导组细胞呈弱阳性或阴性表达,差异具有统计学意义(P<0.05)。4.透射电子显微镜观察,细胞诱导培养至4周,胞质内可见较多平行排列的肌丝及线粒体、核糖体、粗面内质网等细胞器。***-time PCR检测结果显示,GATA4及Nkx2.5基因于诱导后1周表达增强,2周表达减弱,4周表达增强;4个诱导组相比较,6 nmol/L组明显优于其他3组(P<0.05)。结论 1,25-vitamin-D3可以诱导BMSCs获得心肌分化表型,其诱导分化最适浓度为6 nmol/L。

关键词：骨髓间充质干细胞 1,25-维生素-D3 心肌样细胞细胞分化免疫印迹法大鼠

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活化白细胞黏附分子、E-钙黏蛋白和β-连环蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

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解剖学报 2016年第2期47卷 221-227页

作者：孙琳张文静张静吴靖芳河北北方学院人体解剖学教研室河北北方学院组织学与胚胎学教研室河北张家口075000

目的通过对甲状腺乳头状癌(PTC)、结节性甲状腺肿和癌旁正常组织中活化白细胞黏附分子(ALCAM)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和β-连环蛋白(β-catenin)蛋白表达水平的检测,分析三者在PTC发生、发展过程中的作用及三者之间的相关性,探讨ALCAM... 详细信息

目的通过对甲状腺乳头状癌(PTC)、结节性甲状腺肿和癌旁正常组织中活化白细胞黏附分子(ALCAM)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和β-连环蛋白(β-catenin)蛋白表达水平的检测,分析三者在PTC发生、发展过程中的作用及三者之间的相关性,探讨ALCAM、E-cadherin和β-catenin在PTC中的作用机制。方法采用免疫组织化学法、Western blotting法检测ALCAM、E-cadherin和β-catenin在PTC中的表达并分析三者的变化与临床病理特征的关系。结果 PTC组织中ALCAM的阳性率明显高于结节性甲状腺肿和癌旁正常组织(P<0.05);PTC组织中E-cadherin的阳性表达率明显低于结节性甲状腺肿和癌旁正常组织(P<0.05);PTC样本中β-catenin的异位表达率明显高于结节性甲状腺肿和癌旁正常组织(P<0.05)。三者的阳性率在结节性甲状腺肿和癌旁正常组织中无明显差异(P>0.05)。三者的异常表达与PTC淋巴结转移有关(P<0.05),与患者年龄、性别、肿瘤大小无关(P>0.05)。结论在PTC组织中ALCAM、β-catenin高表达,E-cadherin呈现低表达,三者的异常表达与淋巴结转移相关。三者在PTC的发生、发展和转移的过程中起重要的作用。

关键词：活化白细胞黏附分子 E-钙黏蛋白 β-连环蛋白甲状腺乳头状癌免疫印迹法人

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大鼠舌下腺TFF2、TFF3在实验性胃溃疡愈合过程中表达的变化

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第二军医大学学报 2010年第10期31卷 1081-1085页

作者：顾彩霞吴靖芳张静王浩宇张江兰任君旭河北北方学院组织学与胚胎学教研室张家口075029

目的探讨舌下腺三叶因子2(TFF2)和三叶因子3(TFF3)在大鼠实验性胃溃疡自愈期间表达的变化。方法雄性SD大鼠分为溃疡组(42只)和正常对照组(6只)。溃疡组在胃前壁近胃窦处将0.01ml冰醋酸注入黏膜下层制作实验性胃溃疡模型,对照组不作任何... 详细信息

目的探讨舌下腺三叶因子2(TFF2)和三叶因子3(TFF3)在大鼠实验性胃溃疡自愈期间表达的变化。方法雄性SD大鼠分为溃疡组(42只)和正常对照组(6只)。溃疡组在胃前壁近胃窦处将0.01ml冰醋酸注入黏膜下层制作实验性胃溃疡模型,对照组不作任何处理。分别以免疫组织化学S-P法和RT-PCR检测溃疡组和正常组舌下腺TFF2及TFF3基因和多肽表达情况。结果 TFF2及TFF3免疫反应阳性物质主要位于纹状管、闰管和肌上皮细胞,管腔内亦有阳性物质表达。TFF2的积分光密度在溃疡第1天时与正常组相比明显增高,第2天最低,第4、第6天逐渐升高(P<0.01),第10～23天均维持在较高水平(P<0.05);而TFF3的积分光密度在溃疡第1、第2天时接近正常组,第4、第6天逐渐增强并高于正常组(P<0.05),到第10天达高峰(P<0.01),至第23天仍高于正常组(P<0.05)。RT-PCR显示TFF2mRNA和TFF3mRNA的转录情况与相应多肽的表达趋势相似。结论舌下腺TFF2和TFF3基因在大鼠实验性胃溃疡自愈期间表达增高,可能参与胃溃疡愈合过程的调节。

关键词：胃溃疡三叶因子2 三叶因子3 舌下腺

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Axl及配体Gas6在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

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解剖学报 2015年第6期46卷 785-790页

作者：张文静孙琳张静吴靖芳河北北方学院组织学与胚胎学教研室河北张家口075000 河北北方学院解剖学教研室河北张家口075000

目的通过检测Axl、Gas6在甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达,分析和探讨两者在甲状腺乳头状癌发生、发展中的作用及相关性。方法采用免疫组织化学法、Western blotting及Real-time PCR法检测Axl、Gas6在甲状腺乳头状癌中的表达并分析两者的... 详细信息

目的通过检测Axl、Gas6在甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达,分析和探讨两者在甲状腺乳头状癌发生、发展中的作用及相关性。方法采用免疫组织化学法、Western blotting及Real-time PCR法检测Axl、Gas6在甲状腺乳头状癌中的表达并分析两者的变化与临床病理特征的关系。结果与结节性甲状腺肿(NG)及瘤旁正常组织相比,甲状腺乳头状癌组织中Axl、Gas6的mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05),且蛋白表达量与淋巴结转移、临床病理分期有关,与患者年龄、性别、肿瘤大小无关。结论 Axl和Gas6两者在PTC中的表达量高于结节性甲状腺肿。在PTC中Axl、Gas6的高表达与肿瘤的淋巴结转移和临床病理分期呈正相关,两者在PTC的发生、发展、转移的过程中起重要的作用。

关键词： Axl Gas6 甲状腺乳头状癌免疫印迹法实时定量聚合酶链反应人

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骨形态蛋白2体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞

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解剖学报 2009年第2期40卷 260-264,306页

作者：王海萍张雷王立轩赵静河北北方学院组织学与胚胎学教研室河北张家口075000 河北医科大学组织学与胚胎学教研室石家庄050017

目的应用骨形态蛋白2（BMP-2）体外诱导骨髓间充质干细胞（MSCs）向心肌样细胞分化,探索MSCs向心肌细胞分化的诱导方法。方法取SD大鼠四肢骨骨髓,分离培养MSCs,应用BMP-2定向诱导,相差显微镜观察细胞形态学变化,应用免疫细胞化学、激光... 详细信息

目的应用骨形态蛋白2（BMP-2）体外诱导骨髓间充质干细胞（MSCs）向心肌样细胞分化,探索MSCs向心肌细胞分化的诱导方法。方法取SD大鼠四肢骨骨髓,分离培养MSCs,应用BMP-2定向诱导,相差显微镜观察细胞形态学变化,应用免疫细胞化学、激光扫描共焦显微镜技术检测结蛋白（desmin）、α-横纹肌肌动蛋白（α-sarcomeric actin）、心肌特异性肌钙蛋白（C-TnT）的表达,透射电镜鉴定。在诱导后7d、21d和28d3个时间点以半定量RT-PCR方法检测细胞心肌早期转录因子（GATA4）和心肌特异性α-肌凝蛋白重链（α-MHC）的表达。结果BMP-2诱导后的MSCs细胞伸出伪足,排列方向渐趋一致。MSCs体外经BMP-2诱导后分化的细胞结蛋白、α-横纹肌肌动蛋白、C-TnT均表达阳性,结蛋白、α-横级肌肌动蛋白阳性率较高,分别为37.28%和63.94%,而C-TnT阳性率较低为34.66%。透射电镜下可见到平行排列的肌丝,大量的粗面内质网和线粒体,富含糖原和核糖体。RT-PCR结果显示,GATA4于诱导后7d弱表达,21d表达增强,28d表达减弱。α-MHC在诱导后7d不表达,21d弱表达,28d表达明显。结论骨髓间充质干细胞在BMP-2诱导下可定向分化为心肌样细胞,是自体心肌细胞的一种良好供体来源。

关键词：骨髓间充质干细胞骨形态蛋白2 心肌细胞分化细胞培养大鼠

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大鼠实验性胃溃疡自愈期间垂体三叶因子3的变化

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解剖学报 2012年第2期43卷 262-267页

作者：张小俊吕洋张文静张静邵素霞吴靖芳河北北方学院组织学胚胎学教研室河北张家口075000 河北医科大学组织学胚胎学教研室石家庄050017

目的通过观察大鼠实验性胃溃疡形成和愈合过程中垂体和血清三叶因子3(TFF3)的改变,探讨垂体TFF3在实验性胃溃疡愈合中的作用。方法以免疫组织化学染色检测溃疡组(42只)、盐水组(21只)和正常组(6只)大鼠垂体TFF3蛋白的表达;RT-PCR检测TFF... 详细信息

目的通过观察大鼠实验性胃溃疡形成和愈合过程中垂体和血清三叶因子3(TFF3)的改变,探讨垂体TFF3在实验性胃溃疡愈合中的作用。方法以免疫组织化学染色检测溃疡组(42只)、盐水组(21只)和正常组(6只)大鼠垂体TFF3蛋白的表达;RT-PCR检测TFF3mRNA的转录;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清TFF3含量变化,原位杂交技术显示TFF3mRNA的定位。结果大鼠实验性胃溃疡自愈期间TFF3免疫反应阳性物质存在于腺垂体部分细胞和神经垂体,而TFF3 mRNA仅存在于腺垂体。与对照组相比,溃疡第1～6天,腺垂体内阳性信号平均吸光度值明显增大,6d达高峰,10d略有下降,14d复增高,23d下降,但仍高于对照组(P<0.01或P<0.05);神经垂体TFF3平均吸光度值在2～23d高水平波动,14d达高峰(P<0.01或P<0.05)。RT-PCR显示,各组垂体均检测到TFF3 mRNA转录,溃疡组TFF3/GAPDH吸光度比值在溃疡2～23d均高于对照组(P<0.01或P<0.05);血清TFF3含量在溃疡组明显高于正常组(P<0.01)。结论垂体TFF3在溃疡期间高表达,可能通过释放入血发挥促进溃疡愈合的作用。

关键词：三叶因子3 垂体实验性胃溃疡反转录-聚合酶链式反应免疫组织化学大鼠

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