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中国细胞生物学学报 2012年第8期34卷 789-794页

作者：董丽华舒亚南薛震颖韩梅河北医科大学基础医学研究所生物化学与分子生物学教研室河北省医学生物技术重点实验室神经与血管生物学省部共建教育部重点实验室石家庄050017

血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)表型转化是血管重塑性疾病的细胞病理学基础,血小板源性生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)-BB抑制平滑肌分化标志基因表达、加速其降解,是VSMC表型转化的关键。该研究用P... 详细信息

血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)表型转化是血管重塑性疾病的细胞病理学基础,血小板源性生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)-BB抑制平滑肌分化标志基因表达、加速其降解,是VSMC表型转化的关键。该研究用PDGF-BB刺激VSMC诱导细胞发生表型转化,利用Western blot和免疫共沉淀等技术,检测PDGF-BB对早期分化相关基因平滑肌22 alpha(smooth muscle 22 alpha,SM22α)磷酸化与泛素化的影响。实验结果显示,PDGF-BB促进VSMC增殖;上调增殖相关蛋白PCNA的表达,下调分化相关蛋白SM22α与SMα-actin的表达;诱导SM22α发生磷酸化和泛素化,而且,该过程与SM22α水平下调具有时相相关性;抑制剂阻断分析证实,ERK和PKC参与介导了PDGF-BB诱导的SM22α磷酸化。以上结果提示,在VSMCs表型转化中,PDGF-BB可能是通过激活ERK-PKC信号通路,促进SM22α的磷酸化和泛素依赖的蛋白质降解。

关键词：血管平滑肌细胞表型转化平滑肌22alpha 泛素化降解

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大鼠SM22α的原核表达与纯化

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河北医科大学学报 2007年第5期28卷 354-355页

作者：闫占峰王宇陈娟田吉征董丽华张睿河北医科大学基础医学研究所生物化学与分子生物学研究室河北石家庄050017

目的构建大鼠平滑肌22α(smooth muscle 22α,SM22α)原核表达质粒,使其在原核细胞中高效表达并纯化。方法将SM22αcDNA全长片段插入pGEX-3X载体构建重组子pGEX3X-SM22α,转化宿主菌。经异丙基硫代--βD-半乳糖苷诱导表达SM22α蛋白,谷... 详细信息

目的构建大鼠平滑肌22α(smooth muscle 22α,SM22α)原核表达质粒,使其在原核细胞中高效表达并纯化。方法将SM22αcDNA全长片段插入pGEX-3X载体构建重组子pGEX3X-SM22α,转化宿主菌。经异丙基硫代--βD-半乳糖苷诱导表达SM22α蛋白,谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione-S-transferase,GST)亲和层析纯化。结果重组子经酶切后,电泳分离出预期长度的插入片段。重组子转化的大肠杆菌JM109,经诱导剂诱导和GST亲和层析纯化后,得到纯化的GST-SM22α融合蛋白。结论本实验重组的pGEX3X-SM22α可在大肠杆菌中高效表达GST-SM22α融合蛋白,为进一步研究SM22α的功能奠定了基础。

关键词：平滑肌22α 基因表达大鼠

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黄芪和当归对血管平滑肌细胞表型标志基因表达和细胞增殖的影响

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中国动脉硬化杂志 2004年第2期12卷 147-150页

作者：李琦温进坤韩梅河北医科大学基础医学研究所生物化学室河北省石家庄市050017

为了观察黄芪和当归对血管平滑肌细胞表型转化和增殖的影响 ,采用体外培养的血管平滑肌细胞 ,以碱性成纤维细胞生长因子诱导其表型转化和增殖 ,在此基础上 ,通过Northern和Western印迹法检测平滑肌细胞表型标志基因表达的变化 ,研究黄... 详细信息

为了观察黄芪和当归对血管平滑肌细胞表型转化和增殖的影响 ,采用体外培养的血管平滑肌细胞 ,以碱性成纤维细胞生长因子诱导其表型转化和增殖 ,在此基础上 ,通过Northern和Western印迹法检测平滑肌细胞表型标志基因表达的变化 ,研究黄芪和当归注射液对碱性成纤维细胞生长因子上述效应的抑制作用。结果发现 ,碱性成纤维细胞生长因子可明显下调分化型标志基因平滑肌α 肌动蛋白的表达 ,上调去分化型标志基因平滑肌胚胎型肌球蛋白重链和骨桥蛋白表达 ,诱导原癌基因c jun表达及促进血管平滑肌细胞DNA合成。黄芪和当归可上调分化型标志基因的表达活性 ,下调去分化型标志基因的表达 ,不同程度地抑制碱性成纤维细胞生长因子诱导的血管平滑肌细胞表型转化和DNA合成 ,有效抑制血管平滑肌细胞增殖 ,其作用机制可能与抑制碱性成纤维细胞生长因子诱导的c jun基因表达有关。二者相比 ,当归的作用大于黄芪。结果提示 ,黄芪和当归可从多位点上拮抗碱性成纤维细胞生长因子促血管平滑肌细胞表型转化及细胞增殖。

关键词：中药学黄芪和当归对血管平滑肌细胞的作用 Northern印迹分析细胞表型转化细胞增殖

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骨桥蛋白与心血管疾病

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中国动脉硬化杂志 2000年第4期8卷 371-373页

作者：杨淑莉韩梅温进坤河北医科大学基础医学研究所生物化学室河北省石家庄市050017

骨桥蛋白是细胞外基质中一种重要的功能蛋白 ,由多种组织细胞合成与分泌。在心血管系统中 ,骨桥蛋白通过与血管内皮和平滑肌细胞表面的受体integrinαvβ3 相互作用而介导细胞粘附、增殖和迁移 ,进而参与血管内皮损伤所导致的心血管病... 详细信息

骨桥蛋白是细胞外基质中一种重要的功能蛋白 ,由多种组织细胞合成与分泌。在心血管系统中 ,骨桥蛋白通过与血管内皮和平滑肌细胞表面的受体integrinαvβ3 相互作用而介导细胞粘附、增殖和迁移 ,进而参与血管内皮损伤所导致的心血管病的发生与发展过程。本文从分子生物学角度对骨桥蛋白的结构、功能。

关键词：骨桥蛋白动脉粥样硬化再狭窄

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黄芪、当归对粘着斑激酶表达和活化的抑制作用及其在防治血管内皮剥脱后再狭窄中的作用

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河北医科大学学报 2002年第6期23卷 352-353页

作者：杨长春温进坤韩梅河北省医学生物技术实验室河北医科大学基础医学研究所生物化学研究室河北石家庄050017

经皮腔内冠状动脉成形术(percutaneous transluminal coronary angioplasty, PTCA)后血管再狭窄的发生与血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖、迁移以及细胞外基质(extracellular matrix, ECM)的大量合成和重构有关.粘着斑激酶(focal adhesion kinase, FAK)是一种非受体酪氨酸蛋白激酶,介导细胞外信号由整合素向细胞内转导的过程.FAK的磷酸化激活以及由此产生的下游一系列蛋白质的磷酸化,是ECM与细胞相互作用并产生一系列生物学效应的关键环节,参与细胞增殖、迁移与凋亡的调节过程.本实验应用形态学、RT-PCR 和 Western blot方法,观察黄芪、当归注射液防治血管再狭窄与FAK表达和活化之间的关系.

关键词：防治血管内皮剥脱后再狭窄蛋白激酶类活血祛瘀黄芪当归中药药理

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基质金属蛋白酶-2及其组织抑制剂与大肠癌侵袭和转移的关系

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河北医科大学学报 2004年第5期25卷 294-295页

作者：赵鹏李秉慧韩梅温进坤河北医科大学第四医院外二科河北石家庄050011 河北医科大学基础医学研究所生物化学研究室河北石家庄050017

大肠癌是我国常见的消化道恶性肿瘤之一,肿瘤的侵袭和转移是患者死亡的主要原因.近年来对肿瘤侵袭和转移机制的研究发现,细胞外基质(extracellular matrix ECM)的降解是肿瘤侵袭和转移过程中关键的一步,而基质金属蛋白酶(matrixmetallop... 详细信息

大肠癌是我国常见的消化道恶性肿瘤之一,肿瘤的侵袭和转移是患者死亡的主要原因.近年来对肿瘤侵袭和转移机制的研究发现,细胞外基质(extracellular matrix ECM)的降解是肿瘤侵袭和转移过程中关键的一步,而基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases MMPs)在这一过程中起了十分重要的作用.国外研究表明,多种肿瘤组织中存在MMPs的高表达和高活性现象.

关键词：结肠直肠肿瘤基质金属蛋白酶—2 肿瘤转移

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精神分裂症脑脊液中相对分子质量130 ku 蛋白质含量增加的免疫学及临床意义

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河北医科大学学报 1999年第1期20卷 8-9页

作者：曾丽萍温进坤魏素珍冯方波中国人民解放军第261医院河北医科大学基础医学研究所生物化学研究室

目的研究精神分裂症脑脊液中存在的特异性ＩｇＧ抗体。方法应用ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳及蛋白印迹（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）技术对精神分裂症脑脊液与对照脑脊液同时进行检查。结果精神分裂症脑脊液中相对分子质量１３０ｋｕ的蛋... 详细信息

目的研究精神分裂症脑脊液中存在的特异性ＩｇＧ抗体。方法应用ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳及蛋白印迹（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）技术对精神分裂症脑脊液与对照脑脊液同时进行检查。结果精神分裂症脑脊液中相对分子质量１３０ｋｕ的蛋白质含量显著增加，在蛋白印迹分析中发现此蛋白质可与羊抗人ＩｇＧ抗体发生免疫结合反应。

关键词：精神分裂症脑脊液免疫球蛋白蛋白质免疫学

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CD3εY171点突变对CD8ε/CD3ε融合分子介导的T淋巴细胞功能影响及bcl-2基因的抗凋亡作用

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河北医科大学学报 1999年第6期20卷 331-334页

作者：杨学辉郑德先刘彦信河北医科大学基础医学院生物化学教研室石家庄050017 中国医学科学院协和基础医学研究所生物化学与分子生物学研究室北京100073

目的观察ＣＤ３εＹ１７１／Ｐ１７１点突变及ｂｃｌ－２基因对Ｔ淋巴细胞凋亡的影响。方法通过电穿孔对ＣＤ８阴性的人ＪｕｒｋａｔＴ（ＪＫ）淋巴细胞转染ＣＤ３εＹ１７１／Ｐ１７１点突变的ＣＤ８ε融合分子，对表达野生... 详细信息

目的观察ＣＤ３εＹ１７１／Ｐ１７１点突变及ｂｃｌ－２基因对Ｔ淋巴细胞凋亡的影响。方法通过电穿孔对ＣＤ８阴性的人ＪｕｒｋａｔＴ（ＪＫ）淋巴细胞转染ＣＤ３εＹ１７１／Ｐ１７１点突变的ＣＤ８ε融合分子，对表达野生型ＣＤ８ε融合分子的人ＴＪＫ转染ｂｃｌ－２基因分别获得稳定表达细胞株（Ｔ１ＪＫ，ＴＪＫ／ｂｃｌ－２），利用ＣＤ８ε单克隆抗体刺激细胞，流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果ＣＤ３εＹ１７１／Ｐ１７１点突变或ｂｃｌ－２表达增强后，细胞凋亡率均明显降低。结论本文结果表明ＣＤ３εＹ１７１／Ｐ１７１是ＣＤ８ε激活诱导细胞凋亡过程中的一个关键位点，ｂｃｌ－２

关键词： T细胞代谢 CD3εY171 点突变细胞凋亡

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国人CYP2D6*10基因多态性研究

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河北医科大学学报 2010年第2期31卷 128-131页

作者：翟晓艳崔炜张亚楠韩梅郑斌温进坤河北医科大学第二医院心内科河北省心脑血管病研究所河北石家庄050000 河北医科大学基础医学研究所生物化学与分子生物学研究室河北石家庄050017

目的研究较大样本的国人CYP2D6*10的基因多态性,了解C188T位点上的基因型频率和基因突变频率。方法随机选取门诊体检的健康人491例,检测其CYP2D6*0基因多态性。结果 CYP2D6*10基因野生型纯合子C/C、杂合子C/T、突变型纯合子T/T基因型频... 详细信息

目的研究较大样本的国人CYP2D6*10的基因多态性,了解C188T位点上的基因型频率和基因突变频率。方法随机选取门诊体检的健康人491例,检测其CYP2D6*0基因多态性。结果 CYP2D6*10基因野生型纯合子C/C、杂合子C/T、突变型纯合子T/T基因型频率分别为16.7%、43.4%、39.9%。C、T等位基因频率分别为38.4%和61.6%。结论 CYP2D6*10等位基因突变频率在东西方不同人群中有显著不同,在东方人和华人人群中大致相同。

关键词：基因多态现象,遗传肾上腺素能β受体拮抗剂

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重组人巨噬细胞集落刺激因子受体胞外区蛋白的纯化及单抗的制备

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河北医科大学学报 2000年第4期21卷 196-198页

作者：杨学辉刘彦信陈永春李恩河北医科大学基础医学院生物化学教研室石家庄050017 中国医学科学院协和基础研究所分子生物学生物化学研究室北京100073

目的重组人巨噬细胞集落刺激因子受体 (macrophagecolony -stimulatingfactorreceptor,M -CSFR)胞外区蛋白的分离纯化及单抗的制备。方法用pET2 8(+)a构建的c -fms重组体转化大肠杆菌 ,IPTG诱导其表达 ,采用亲和层析进行复性纯化目的蛋... 详细信息

目的重组人巨噬细胞集落刺激因子受体 (macrophagecolony -stimulatingfactorreceptor,M -CSFR)胞外区蛋白的分离纯化及单抗的制备。方法用pET2 8(+)a构建的c -fms重组体转化大肠杆菌 ,IPTG诱导其表达 ,采用亲和层析进行复性纯化目的蛋白 ,利用细胞融合技术制备并筛选M -CSFR胞外区蛋白的单克隆抗体。结果经转化的大肠杆菌IPTG诱导后可大量表达目的蛋白 ,但形成不溶性的包涵体 ,亲和层析柱上复性可获得可溶性较纯的目的蛋白 ,经细胞融合技术筛选出 1株M -CSFR的单抗细胞。结论柱上复性可获得可溶性复性蛋白。

关键词： M-CSFR 胞外区蛋白纯化制备单克隆抗体

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