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第十一届中国植物病害化学防治学术研讨会

作者：吴杰韩秀英路粉董晓霞李洋霍静蕾王文桥河北省农林科学院植物保护研究所河北省农业有害生物综合防治工程技术研究中心农业部华北北部作物有害生物综合治理重点实验室保定071000

马铃薯黑痣病是由立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)引起的,以带病菌种薯和土壤传播,在世界马铃薯主产区普遍发生,主要为害马铃薯幼芽、茎基和块茎,造成茎基部铁锈色病斑、植株矮小,叶片翻卷,菌核使新生块茎上带“黑痣”,降低块茎的商品属... 详细信息

马铃薯黑痣病是由立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)引起的,以带病菌种薯和土壤传播,在世界马铃薯主产区普遍发生,主要为害马铃薯幼芽、茎基和块茎,造成茎基部铁锈色病斑、植株矮小,叶片翻卷,菌核使新生块茎上带“黑痣”,降低块茎的商品属性,严重地块芽块不能出芽,缺苗断垄,明显减产.目前生产上马铃薯黑痣病的防治仍然以化学防治为主.噻唑酰胺类杀菌剂噻呋酰胺和甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂嘧菌酯对丝核菌具有较高的室内毒力,对由丝核菌引起的病害(如马铃薯黑痣病)具有较好的田间防效,本课题组前期通过测定噻呋酰胺和嘧菌酯混配对马铃薯黑痣病菌的联合毒力以及对增效组合田间药效研究,表明噻呋酰胺与嘧菌酯有效成分质量比1∶1的混配组合,以240g a.i./hm2剂量沟施可有效防治马铃薯黑痣病.本研究拟在此基础上,开展240g/L噻呋酰胺悬浮剂与250g/L嘧菌酯悬浮剂1∶1混配拌种防治马铃薯黑痣病的田间药效试验,以期明确增效药剂组合拌种防治马铃薯黑痣病的最佳施用剂量,并为使用该药剂组合有效防治马铃薯黑痣病提供依据.噻呋酰胺与嘧菌酯混配拌种防治马铃薯黑痣病田间药效试验共设6个处理,分别为240g/L噻呋酰胺悬浮剂360g a.i./hm2、250g/L嘧菌酯悬浮剂180g a.i./hm2;240 g/L噻呋酰胺悬浮剂与250 g/L嘧菌酯悬浮剂有效成分质量比1∶1桶混300g a.i./hm2、240g a.i./hm2、180g a.i./hm2和清水对照.施药方法为播前药剂拌种,采用随机区组排列播种,每处理3次重复,收获时每小区随机5点取样,调查薯块黑痣病发病情况,统计薯块病薯率、病情指数,计算出各处理薯块黑痣病防效、亩产量和增产率.结果表明240g/L噻呋酰胺悬浮剂与250g/L嘧菌酯悬浮剂有效成分质量比1∶1混配,以240g a.i./hm2剂量拌种防治马铃薯黑痣病的田间防效为76.1％,显著高于其他处理及对照;同时测算亩产量为3 409kg,增产率为27.19％,也明显高于其他处理及对照.综合上述试验结果表明,噻呋酰胺与嘧菌酯有效成分质量比1∶1的混配组合以240g a.i./hm2为推荐剂量拌种同样也可有效防治马铃薯黑痣病.此外,噻呋酰胺为琥珀酸脱氢酶抑制剂,嘧菌酯为线粒体电子传递链抑制剂,二者具有不同的作用机制,混用后不仅表现出增效作用,同时也可避免和延缓病原菌抗药性的产生,二者桶混使用或制成混剂具有良好的推广应用前景.

关键词：噻呋酰胺嘧菌酯马铃薯黑痣病菌田间防效

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马铃薯腐烂茎线虫Dd-mel-26基因的RNAi功能分析

马铃薯腐烂茎线虫Dd-mel-26基因的RNAi功能分析

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第十四届全国植物线虫学学术研讨会

作者：高波马娟王容燕李秀花陈书龙河北省农林科学院植物保护研究所/河北省农业有害生物综合防治工程技术研究中心/农业部华北北部作物有害生物综合治理重点实验室保定071000

马铃薯腐烂茎线虫(Ditylenchus destructor)是重要的迁移性植物内寄生线虫，主要为害植物地下部尤其是块根、块茎和球茎等，也是国内外重要的检疫性线虫。该线虫引起甘薯茎线虫病，给我国的甘薯生产造成严重损失。传统的防治马铃薯腐烂... 详细信息

马铃薯腐烂茎线虫(Ditylenchus destructor)是重要的迁移性植物内寄生线虫，主要为害植物地下部尤其是块根、块茎和球茎等，也是国内外重要的检疫性线虫。该线虫引起甘薯茎线虫病，给我国的甘薯生产造成严重损失。传统的防治马铃薯腐烂茎线虫的方法主要有轮作、选用抗耐病品种和施用杀线剂等，但是受耕地面积、甘薯遗传上的高度杂合性、易诱发线虫产生抗性和造成环境污染等限制，上述措施的应用受到限制。

关键词：马铃薯腐烂茎线虫 Dd-mel-26 RNA

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对烟粉虱和小菜蛾的高效的球孢白僵菌HFW-05研究进展

对烟粉虱和小菜蛾的高效的球孢白僵菌HFW-05研究进展

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第十三届全国青年植保科技创新学术研讨会暨全国植物保护博士后论坛

作者：曹伟平宋健杜立新河北省农林科学院植物保护研究所河北省农业有害生物综合防治工程技术研究中心农业部华北北部作物有害生物综合治理重点实验室保定071000

白僵菌菌株HFW-05对烟粉虱和小菜蛾有较高的致病力,近年来,评价了HFW-05的杀虫谱、HFW-05对天敌的影响和环境因子对HFW-05致病力的影响,探讨了HFW-05对粉虱、小菜蛾及棉铃虫的致病机制,分析了白僵菌与化学农药的相容性及协同应用模式.

关键词：生物杀虫剂球孢白僵菌烟粉虱小菜蛾致病力

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环渤海暖温带区日光温室越冬长茬黄瓜农药减施技术模式

环渤海暖温带区日光温室越冬长茬黄瓜农药减施技术模式

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第十一届中国植物病害化学防治学术研讨会

作者：路粉王文桥吴杰赵建江毕秋艳韩秀英马志强河北省农林科学院植物保护研究所河北省农业有害生物综合防治工程技术研究中心农业部华北北部作物有害生物综合治理重点实验室保定071000

环渤海暖温带区是中国发展日光温室种植黄瓜的主要地区.据河北(定兴、永清、乐亭、高邑、藁城、徐水、青县)、天津(武清)、山东(寿光)等黄瓜主产区调查,黄瓜病虫害发生呈现新的特点:霜霉病、细菌性角斑病、靶斑病、黑星病、白粉病、灰... 详细信息

环渤海暖温带区是中国发展日光温室种植黄瓜的主要地区.据河北(定兴、永清、乐亭、高邑、藁城、徐水、青县)、天津(武清)、山东(寿光)等黄瓜主产区调查,黄瓜病虫害发生呈现新的特点:霜霉病、细菌性角斑病、靶斑病、黑星病、白粉病、灰霉病、粉虱频发,枯萎病及根结线虫病等土传病害、细菌性流胶病、菌核病、潜叶蝇、蚜虫、蓟马、叶螨、瓜绢螟在局部地区偶尔发生,蝼蛄、金针虫、蛴螬、小地老虎等地下害虫及蜗牛、蛞蝓等少数有害软体动物极为少见.在深冬季节,由于天气经常发生低温寡照,黄瓜及番茄等作物易出现根系欠发达、叶片发黄、植株生长缓慢、化瓜、瓜打顶、花打顶等生理性病症状.化学农药被滥用、低效施用或过量施用的现象时有发生,生防菌剂、害虫天敌、防虫网及悬挂黄板或蓝板仍未得到普遍的应用.高度重视农药过度使用带来的问题,开启农药减量行动,针对环渤海暖温带区设施蔬菜病虫害发生特点及化学防治中存在问题,提出设施蔬菜减施农药、提高农药利用率的途径和农药减施技术与化肥减施技术和高产栽培技术集成应用对实现设施蔬菜生产增效必不可少,对农药减施增效技术模式集成应用进行再思考,供读者参考.

关键词：黄瓜病虫害化学防治农药减施日光温室

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溴氰虫酰胺亚致死剂量对二点委夜蛾卵巢发育的影响

溴氰虫酰胺亚致死剂量对二点委夜蛾卵巢发育的影响

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第十三届全国青年植保科技创新学术研讨会暨全国植物保护博士后论坛

作者：安静杰邢馨竹李耀发党志红潘文亮高占林河北省农林科学院植物保护研究所河北省农业有害生物综合防治工程技术研究中心农业部华北北部作物有害生物综合治理重点实验室保定071000

目前对于玉米害虫二点委夜蛾Athetis lepigone(M(o)schler)有效的防治方法,主要依靠化学防治.由于药剂在环境中的降解或虫体接触到亚致死剂量的药剂易产生亚致死效应.而且研究证明害虫在亚致死剂量的胁迫下通常会对其繁殖力产生显著影响... 详细信息

目前对于玉米害虫二点委夜蛾Athetis lepigone(M(o)schler)有效的防治方法,主要依靠化学防治.由于药剂在环境中的降解或虫体接触到亚致死剂量的药剂易产生亚致死效应.而且研究证明害虫在亚致死剂量的胁迫下通常会对其繁殖力产生显著影响.因此,研究溴氰虫酰胺亚致死剂量对二点委夜蛾卵巢发育的影响,为探讨亚致死效应影响害虫繁殖力的作用机制提供理论依据.本研究利用溴氰虫酰胺亚致死剂量(LC10和LC25)处理二点委夜蛾3龄幼虫后,发现其雌成虫的单雌产卵量分别为317.89粒和268.32粒,与对照337.83粒相比,单雌产卵量随着亚致死浓度的增加而减少,且LC25处理的单雌产卵量显著低于对照.利用光学显微镜解剖观察二点委夜蛾雌成虫卵巢,发现对照种群的卵巢比重到第6d达到最大值54.00％,显著高于亚致死剂量LC10和LC25处理,随后开始下降.而用亚致死剂量LC10和LC25处理后,卵巢比重均是在第7d达到最大值,分别为45.16％和59.42％,均显著高于对照,随后开始下降.在卵巢管长度方面,对照种群在第3天达到最长值17.07mm,随后逐渐缩短;亚致死剂量LC10和LC25处理二点委夜蛾,羽化后前三天也是随着发育时间而逐渐增长,但在第4天开始萎缩,随后分别在第6天和第7天又有所伸长,达到最长值20.01mm和19.01mm,之后再缩短.未经药剂处理的对照二点委夜蛾卵巢内成熟卵数量在第4天达到高峰136.25粒,随后开始下降.而经亚致死浓度LC10和LC25处理后,卵巢内成熟卵数量则分别在第5天和第6天达到最大值(172.67和178.50).综上所述,亚致死浓度的溴氰虫酰胺(LC10和LC25)处理后与对照相比,前者的卵巢比重、卵巢管长度和成熟卵数量的最大值均明显滞后于后者,表明溴氰虫酰胺亚致死浓度处理后,成虫卵巢发育的高峰期明显滞后,但其成虫寿命并未增加,这可能是导致亚致死剂量处理后二点委夜蛾产卵量下降的主要原因之一.

关键词：二点委夜蛾溴氰虫酰胺亚致死效应卵巢发育

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河北省小麦根腐线虫病的发生与分布

河北省小麦根腐线虫病的发生与分布

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第十四届全国植物线虫学学术研讨会

作者：李秀花马娟高波王容燕陈书龙河北省农林科学院植物保护研究所/河北省农业有害生物综合防治工程技术研究中心/农业部华北北部作物有害生物综合治理重点实验室保定071000

小麦根腐线虫病是一种世界性病害，其病原线虫为根腐线虫.在国外，澳大利亚、加拿大、东南亚、南亚和美国都有根腐线虫的报道，并且在小麦生产上已造成严重的产量损失，对小麦生产构成严重威胁.在澳大利亚，根腐线虫引起产量损失在38％ ... 详细信息

小麦根腐线虫病是一种世界性病害，其病原线虫为根腐线虫.在国外，澳大利亚、加拿大、东南亚、南亚和美国都有根腐线虫的报道，并且在小麦生产上已造成严重的产量损失，对小麦生产构成严重威胁.在澳大利亚，根腐线虫引起产量损失在38％～ 85％，在墨西哥产量损失在10％～40％，在爱尔兰产量损失在70％.国内已有根腐线虫危害其他作物的相关报道.在2006年河南首次发现小麦上有短体线虫危害，对小麦造成产量损失在13.58％～15.46％.河北省是我国的小麦生产大省，其小麦种植面积与产量始终位居全国前三名.在河北省还没有报道在小麦上发现小麦根腐线虫.本研究主要对河北省小麦根腐线虫病的发生与分布区域进行系统调查，通过调查明确河北省小麦根腐线虫病的发生与分布状况，为其综合治理提供理论基础.2014-2017年，在小麦返青后到拔节期间，随机选择小麦地块，每块地随机选择10个点，取小麦根际土样和小麦根系，土样混匀后用浅盘法分离土样中的线虫，小麦根系洗净后用浅盘法分离根系中的线虫，在显微镜下镜检并计数.对根系分离出的根腐线虫初步用分子方法进行鉴定.通过对河北省7个地区38个县486个不同的采样点进行调查，发现小麦根际土壤中的植物寄生线虫种类主要有7个属，数量由多到少依次为小麦孢囊线虫、根腐线虫属、矮化线虫属、螺旋线虫属、垫刃线虫属、盘旋线虫属、茎线虫属，小麦根系中主要的线虫种类有4个属小麦孢囊线虫、根腐线虫属、螺旋线虫属、矮化线虫属.在486个不同的采样点中有315个样点分离出了根腐线虫，总检出率为64.81％.河北省的每个小麦地区都有发生，其中保定地区根腐线虫检出率最高，达96％，检出率最低的是沧州地区，为35.48％，各地区依据根腐线虫检出率大小顺序依次为：保定、邢台、石家庄、唐山(主要玉田和滦南)、衡水、邯郸、沧州.调查中发现在小麦水肥较好的地区，如保定、邢台、石家庄、唐山的玉田和滦南等根腐线虫发生较重，而在贫瘠土壤中根腐线虫的检出率相对较低，如沧州、邯郸、衡水根腐线虫发生相对较轻.不同地区小麦根腐线虫病的发生程度不同，同一地区不同地块的根腐线虫密度差别也较大.在沧州地区，根腐线虫的发生程度最轻，发病地块的根腐线虫数量大多在5个/100mL土以下，其中海兴县8.3％发病地块的根腐线虫数量在15.1～20个/100mL土;衡水地区的根腐线虫发生程度稍重于沧州地区，发病地块的根腐线虫数量大多在10个/100mL土，其中景县有8.3％发病地块的根腐线虫数量在40.1 ～45个/100mL土;其他5个地区发病地块的根腐线虫数量大多在15个/100mL土以下，在唐山地区的滦南有2.7％发病地块的根腐线虫数量在15.1 ～20个/100mL土，邢台地区的柏乡有5％发病地块的根腐线虫数量在15.1～20个/100mL土，邯郸地区的临漳县和肥乡县分别有3.8％和16.7％发病地块的根腐线虫数量分别在15.1 ～20个/100mL土和20.1～30个/100mL土，石家庄地区的藁城有7.1％发病地块的根腐线虫数量在30.1～40个/100mL土，保定地区的清苑县有11.1％发病地块的根腐线虫数量在100～150个/100mL土，而保定地区的安新县分别有19％和9.6％发病地块的根腐线虫数量在20.1～ 30个/100mL土和30.1～50个/100mL土.在这38个县中根腐线虫发生较严重的县是安新、无极、赵县、藁城、高邑和易县.通过分子方法初步鉴定出河北省小麦根腐病原线虫为落选短体线虫(Pratylenchus neglectus)和斯克里布纳根腐线虫(Pratylenchus scribneri).

关键词：根腐线虫发生分布

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对韭菜迟眼蕈蚊高毒力Bt资源的筛选与应用

对韭菜迟眼蕈蚊高毒力Bt资源的筛选与应用

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第十三届全国青年植保科技创新学术研讨会暨全国植物保护博士后论坛

作者：宋健曹伟平杜立新河北省农林科学院植物保护研究所河北省农业有害生物综合防治工程技术研究中心农业部华北北部作物有害生物综合治理重点实验室保定071000

韭菜迟眼蕈蚊(Bradysia odoriphaga Yang et Zhang)俗称韭蛆,属双翅目眼蕈蚊科迟眼蕈蚊属,是影响韭菜产量和品质的重要害虫,每年造成产量损失达30％～80％,经济损失超过30％.该虫主要为害百合科蔬菜的韭菜、大蒜、大葱和洋葱,其次为害... 详细信息

韭菜迟眼蕈蚊(Bradysia odoriphaga Yang et Zhang)俗称韭蛆,属双翅目眼蕈蚊科迟眼蕈蚊属,是影响韭菜产量和品质的重要害虫,每年造成产量损失达30％～80％,经济损失超过30％.该虫主要为害百合科蔬菜的韭菜、大蒜、大葱和洋葱,其次为害菊科、藜科、十字花科、葫芦科和伞形科等6科30多种蔬菜,泛分布于我国东北、华北、华中、西北等地,是我国的特有害虫.目前生产上主要依靠化学农药进行防治,一方面,韭蛆繁殖快、隐蔽性强、防治难度大,导致菜农不规范过量使用化学农药进行防治;另一方面,长期大量使用化学农药增强害虫抗药性、污染环境、杀伤鸟类、害虫再猖獗的恶性循环,不能达到对害虫种群的有效控制,同时造成韭菜农药残留超标,使消费者健康受到威胁,并造成恶劣的社会影响.为此,寻找环境友好、安全有效的防治措施,成为防治韭菜迟眼蕈蚊亟待解决的问题.近年来,河北省农林科学院植物保护研究所从河北、河南、山东等韭菜产地,采集土样5 000余份,分离到苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis简称Bt)2 000余株,2013年通过室内生物测定筛选到6株对韭蛆高毒力的Bt菌株,其中JQ23菌株对韭蛆杀虫活性最高,对韭菜迟眼蕈蚊2龄幼虫72h的LC50值为8.38× 106芽胞/mL.经室内盆栽防治试验结果表明,菌株JQ23在1×107芽胞/mL浓度下,采用根部精准滴灌法连续用药3次,间隔7d,对韭菜迟眼蕈蚊的防治效果达到86.28％.目前针对该菌株研制出一套以棉籽饼粉和大豆饼粉为主的中试发酵条件,并制成水剂(7.2× 109芽胞/mL),粉剂(2.07× 1010芽胞/g)和颗粒剂(4.00× 109芽胞/g)三种剂型.通过室内生物活性评价,明确三种剂型对韭蛆2龄幼虫的LC50与原始菌株效果无显著差异,且各剂型在室温条件下均可稳定保存10个月.2014-2017年,在河北韭菜主产区沧州肃宁和邢台南宫建立了试验示范基地,经春季、秋季和扣棚三个栽培期的田间试验,明确JQ23水剂对韭菜迟眼蕈蚊表现出良好的田间防治效果,1×108芽胞/mL浓度时对韭蛆的防治效果达77.67％,防治效果稳定.JQ23菌株能够有效控制韭菜迟眼蕈蚊为害,满足了我国绿色防控、发展生态农业、可持续发展要求,丰富了我国Bt资源,具有良好的应用前景.

关键词：韭菜迟眼蕈蚊苏云金芽胞杆菌资源筛选田间应用

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马铃薯腐烂茎线虫Dd-unc-87基因的RNAi致死效应分析

马铃薯腐烂茎线虫Dd-unc-87基因的RNAi致死效应分析

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第十四届全国植物线虫学学术研讨会

马铃薯腐烂茎线虫(Dttylenchus destructor)引起的甘薯茎线虫病,给我国的甘薯产业生产造成了严重损失.在实际生产中线虫的防治主要为化学防治,药剂主要有机磷类、氨基甲酸酯类等.因马铃薯腐烂茎线虫对不良环境具有很强的耐受力,可选择... 详细信息

马铃薯腐烂茎线虫(Dttylenchus destructor)引起的甘薯茎线虫病,给我国的甘薯产业生产造成了严重损失.在实际生产中线虫的防治主要为化学防治,药剂主要有机磷类、氨基甲酸酯类等.因马铃薯腐烂茎线虫对不良环境具有很强的耐受力,可选择的杀线虫剂品种又很有限,目前茎线虫病的防治非常困难.田间防治中大量的施用化学药剂,不仅会污染环境,还将造成其抗药性水平增加进而其用药量增加的恶性循环.线虫病的防治工作面临严峻形势.因此,急需开发一种新的线虫控制方法,例如通过dsRNA/siRNA介导的基因沉默(RNAi)来开发抗线虫类作物即具有很好的前景.秀丽小杆线虫的UNC-87蛋白是线虫体壁肌肉的重要组成部分,在线虫的运动中发挥着重要的作用.本研究对马铃薯腐烂茎线虫的unc-87同源基因(Dd-unc-87)进行了研究,其cDNA序列长1 471bp,ORF区域长为1134bp,编码一个含377个氨基酸的蛋白质,预测蛋白分子量为42ku,等电点为7.08;UNC-87蛋白含有7个Calponin-like结构域,N端没有信号肽,预测其可能存在于细胞核中.Dd-unc-87的基因组序列长为7 369 bp,基因组结构中包含12个外显子,11个内含子.Southern杂交结果显示用XbaI和EcoRI酶切的基因组泳道中只出现一条带,可得unc-87在基因组中为单拷贝基因.将所得cDNA基因序列进行Blastx比对和系统发育分析结果显示马铃薯腐烂茎线虫与松材线虫的亲缘关系最近,其次为大豆孢囊线虫和根结线虫.用来自unc-87两端和中间的三个靶位点片段dsRNA处理线虫24h后,qPCR结果显示靶基因的沉默效率最高的为2号区段dsRNA处理线虫,所以利用2号段dsRNA来进行下面的实验.受unc-87基因2号区段dsRNA处理的线虫靶基因表达量显著降低;沙柱通过率与对照组差异不显著;在胡萝卜上的繁殖量要显著的低于对照组,下降约49％.说明unc-87基因可能在线虫迁移中的作用不明显,而在线虫的繁殖中发挥正调控的作用.

关键词：马铃薯腐烂茎线虫 Dd-unc-87基因 RNAi致死效应

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甘薯象耳豆根结线虫的初报

甘薯象耳豆根结线虫的初报

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第十四届全国植物线虫学学术研讨会

作者：高波马娟王容燕李秀花陈书龙河北省农林科学院植物保护研究所河北省农业有害生物综合防治工程技术研究中心农业部华北北部作物有害生物综合治理重点实验室保定071000

甘薯寄生线虫病是甘薯生产上严重病害之一,特别是在中国长江中下游和南方薯区,根结线虫为害较重,本研究应用分子生物学手段对来自广东湛江和重庆甘薯上的根结线虫种类进行了鉴定.通过利用根结线虫属通用引物MF/MR,以及南方根结线虫特异... 详细信息

甘薯寄生线虫病是甘薯生产上严重病害之一,特别是在中国长江中下游和南方薯区,根结线虫为害较重,本研究应用分子生物学手段对来自广东湛江和重庆甘薯上的根结线虫种类进行了鉴定.通过利用根结线虫属通用引物MF/MR,以及南方根结线虫特异引物Mi-F/Mi-R,爪哇根结线虫特异引物Fjav/Rjav和象耳豆根结线虫特异引物Me-F/Me-R初步鉴定结果表明两地的根结线虫均为象耳豆根结线虫,进一步对28S rRNA D2D3区域和rDNA-IGS2区域进行Blast比对和系统发育分析,最终确定来自两地的发病薯块的病原线虫均为象耳豆根结线虫.

关键词：甘薯象耳豆根结线虫病害防控

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列当生防菌Br-2的DsRed红色荧光标记及定殖

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植物保护学报 2017年第4期44卷 664-670页

作者：王亚娇纪莉景栗秋生王连生孔令晓河北省农林科学院植物保护研究所河北省有害生物综合防治工程技术研究中心农业部华北北部作物有害生物综合治理重点实验室保定071000

为探明生防菌Br-2在分枝列当体内及番茄根围的定殖能力,采用PEG-CaCl_2介导的原生质体转化体系将红色荧光蛋白基因DsRed转入到菌株Br-2中,并构建其生长曲线,测定其对分枝列当种子萌发的抑制率,通过共聚焦显微镜观察其在分枝列当茎内及... 详细信息

为探明生防菌Br-2在分枝列当体内及番茄根围的定殖能力,采用PEG-CaCl_2介导的原生质体转化体系将红色荧光蛋白基因DsRed转入到菌株Br-2中,并构建其生长曲线,测定其对分枝列当种子萌发的抑制率,通过共聚焦显微镜观察其在分枝列当茎内及番茄根围的定殖情况。结果表明:通过原生质体转化体系得到了标记菌株Br-2-DsRed,继代培养5代后,其在共聚焦显微镜下仍可观察到亮红色荧光,经PCR检测带有DsRed基因,证明其稳定性好。标记菌株Br-2-DsRed与野生菌株Br-2的生长曲线基本一致,对分枝列当种子萌发的抑制率分别为75.86%和74.14%,无显著差异。显微观察发现,标记菌株Br-2-DsRed接种1 d后即能够侵染分枝列当的茎部表皮,3 d后主要分布在茎表皮和厚壁细胞间隙,5 d后侵染到厚壁细胞及维管束细胞内部并导致茎部腐烂;而标记菌株Br-2-DsRed不能侵染番茄根尖的内部,主要定殖在番茄根尖表面。

关键词：列当生防菌红色荧光蛋白原生质体转化定殖

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