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甘薯细菌性软腐病病原鉴定

甘薯细菌性软腐病病原鉴定

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第十一届全国青年植保科技创新学术研讨会

作者：高波王容燕马娟李秀花陈书龙河北省农林科学院植物保护研究所河北省农业有害生物综合防治工程技术研究中心农业部华北北部作物有害生物综合治理重点实验室河北保定071000

经对元氏和雄县采集的样品进行室内病原分离纯化，最终获得了3株代表性菌株DD1,YLT2和XX3,3株菌均能在CVP培养基上产生圆形凹陷。将3株菌分别回接到薯块上，以接种无菌水为对照，28℃灭菌沙土中保湿培养，24h后观察发现所有实验组均有... 详细信息

经对元氏和雄县采集的样品进行室内病原分离纯化，最终获得了3株代表性菌株DD1,YLT2和XX3,3株菌均能在CVP培养基上产生圆形凹陷。将3株菌分别回接到薯块上，以接种无菌水为对照，28℃灭菌沙土中保湿培养，24h后观察发现所有实验组均有腐烂病斑产生且与田间症状一致，而对照组无症状，说明3株菌均为病原菌。通过利用一种专门用于Pectobacterium亚种鉴定的生理生化检测方法最终确定DD1和XX3为Pcc，而YLT2为Pco，即与分子鉴定的结果一致。由此确认导致河北元氏和雄县甘薯软腐状的病原最终被鉴定为Pcc和Pco。

关键词：甘薯软腐病病原菌化学鉴定

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ywbB基因对枯草芽孢杆菌NCD-2菌株菌落形态和芽孢形成的调控

ywbB基因对枯草芽孢杆菌NCD-2菌株菌落形态和芽孢形成的调控

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第十一届全国青年植保科技创新学术研讨会

作者：郭庆港王培培李社增鹿秀云赵卫松张晓云马平河北省农林科学院植物保护研究所河北省农业有害生物综合防治工程技术研究中心农业部华北北部作物有害生物综合治理重点实验室河北保定071001

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)由于能产生多种抑菌活性物质,并且能形成抗逆耐热的芽孢而利于产品储存和制剂的开发,因此,成为开发微生物源农药的重要资源.受到外界营养缺乏或不良环境的刺激,枯草芽孢杆菌通过一个复杂的遗传网络调控... 详细信息

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)由于能产生多种抑菌活性物质,并且能形成抗逆耐热的芽孢而利于产品储存和制剂的开发,因此,成为开发微生物源农药的重要资源.受到外界营养缺乏或不良环境的刺激,枯草芽孢杆菌通过一个复杂的遗传网络调控芽孢的形成.芽孢形成是细菌为了度过营养不足或逆境,维持细菌群体密度的一种重要手段.在枯草芽抱杆菌中，大约有500个基因参与芽抱的形成，占枯草芽抱杆菌全基因组的1/8。枯草芽抱杆菌NCD-2菌株是一株重要的生防细菌，以该菌株为主要活性成份的微生物农药能有效防治作物土传病害。

关键词：微生物农药枯草芽孢杆菌菌落形态芽孢形成基因调控

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马铃薯腐烂茎线虫低温耐性及相关基因分析

马铃薯腐烂茎线虫低温耐性及相关基因分析

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第十三届全国植物线虫学学术研讨会

作者：马娟高波李秀花王容燕陈书龙河北省农林科学院植物保护研究所河北省农业有害生物综合防治工程技术研究中心农业部华北北部作物有害生物综合治理重点实验室保定071000

甘薯茎线虫病是制约我国甘薯生产的主要病害之一,其病原为马铃薯腐烂茎线虫(Ditylenchus destructor Thome,1945).迄今为止,对马铃薯腐烂茎线虫温度耐受力的分子调控机制知之甚少.开展马铃薯腐烂茎线虫对低温胁迫的适应能力研究,明确其... 详细信息

甘薯茎线虫病是制约我国甘薯生产的主要病害之一,其病原为马铃薯腐烂茎线虫(Ditylenchus destructor Thome,1945).迄今为止,对马铃薯腐烂茎线虫温度耐受力的分子调控机制知之甚少.开展马铃薯腐烂茎线虫对低温胁迫的适应能力研究,明确其抗逆性形成机制,可为制定相应的防治措施提供理论依据.本研究对马铃薯腐烂茎线虫的耐低温能力进行了测定.将线虫置于25％甘油溶液中,在不同温度下处理不同时间.结果表明,-80℃放置1h、-40℃放置5h、-25℃放置5d后线虫几乎全部死亡;-15℃处理15 d后线虫死亡率为69％;-10℃处理15 d后线虫死亡率为41％;在-5℃放置15 d后线虫死亡率低于15％.但是将干燥薯块中的线虫置于-80℃,60 d后线虫死亡率仍低于50％.利用高通量测序技术平台Illumina对不同低温条件胁迫和非胁迫条件下马铃薯腐烂茎线虫样品进行转录组测序.共完成6个样品的转录组测序,获得41.36Gb Clean *** novo组装后共获得105 247条Unigene.其中长度在1 kb以上的Unigene有19 891条.对Unigene进行功能注释,包括与NR、Swiss-Prot、KEGG、COG、KOG、GO和Pfam数据库的比对,共获得42 675条Unigene的注释结果.进行基于Unigene库的基因结构分析,其中SSR分析共获得1 463个SSR标记,同时还进行了CDS预测和SNP分析.对所试6个样品进行比较分析,共得到差异基因18 587个(FDR＜0.01,FC＞2).用RT-qPCR对16个低温处理后大量表达的基因的表达模式进行验证,结果与转录组测序得到的结果基本一致.HSP90、HSP21基因在-10℃处理5d后显著上调表达;HSP70基因在经过不同低温处理后均大量上调表达;HSP12基因经低温处理后显著下调表达.马铃薯腐烂茎线虫经不同低温处理后,LEA基因、谷胱甘肽硫转移酶(GSTs)、细胞色素P450基因及Catalase、Glutathione peroxidase等线虫抗性基因均显著上调表达.对3个分别编码热激蛋白HSP21、Fatty acid desaturase、Sodium/potassiumtransporting ATPase alpha-3 chain的基因进行Southern杂交分析.结果显示马铃薯腐烂茎线虫基因组经EcoR Ⅰ、HindⅢ和EcoRV酶切后与3个探针分别杂交,均显示多条条带,从而表明马铃薯腐烂茎线虫中存在该基因,且为多拷贝基因.本研究揭示了马铃薯腐烂茎线虫低温处理过程中转录组水平上的复杂变化,为进一步研究线虫低温抗性的分子调控机制提供了一组全面的数据.

关键词：甘薯茎线虫病低温胁迫转录组测序差异基因

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梨小食心虫在保定桃园的种群动态变化

梨小食心虫在保定桃园的种群动态变化

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第十一届全国青年植保科技创新学术研讨会

作者：冉红凡马爱红路子云刘文旭李建成河北省农林科学院植物保护研究所河北省农业有害生物综合防治工程技术研究中心农业部华北北部作物有害生物综合治理重点实验室河北保定071000

本文对梨小食心虫在保定桃园的种群动态、发生期、每盆每日诱蛾量、梨小食心虫每代高峰期进行了分析。提出秋季要清洁果园，及时剪除被害果实.集中处理果实收获后，要及时处理果筐、果箱中的幼虫;果实收获后，树干绑草诱集幼虫并销毁;... 详细信息

本文对梨小食心虫在保定桃园的种群动态、发生期、每盆每日诱蛾量、梨小食心虫每代高峰期进行了分析。提出秋季要清洁果园，及时剪除被害果实.集中处理果实收获后，要及时处理果筐、果箱中的幼虫;果实收获后，树干绑草诱集幼虫并销毁;刮除老翘皮，去除树枝上的附着物并销毁;冬季深翻土壤，将入土越冬的幼虫冻死;浇冻水，可以消灭一批越冬幼虫和卵;重视果园秋季用药。

关键词：桃树梨小食心虫种群动态虫害防治

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微生物挥发物在昆虫定位寄主中的作用

微生物挥发物在昆虫定位寄主中的作用

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第十一届全国青年植保科技创新学术研讨会

作者：张晓芳张涛河北省农林科学院植物保护研究所河北省农业有害生物综合防治工程技术研究中心农业部华北北部作物有害生物综合治理重点实验室河北保定071001

微生物挥发物与昆虫定位寄主、食物源等行为密切相关。近年来，研究表明，果蝇寻找水果，最主要依靠酵母菌所产生的挥发物，然后才是水果本身的气味;进一步研究也证实接种了酵母菌的十字花科蔬菜能够强烈吸引果蝇。雌性葱蝇也更倾向于... 详细信息

微生物挥发物与昆虫定位寄主、食物源等行为密切相关。近年来，研究表明，果蝇寻找水果，最主要依靠酵母菌所产生的挥发物，然后才是水果本身的气味;进一步研究也证实接种了酵母菌的十字花科蔬菜能够强烈吸引果蝇。雌性葱蝇也更倾向于在因被细菌侵染而腐烂的植物上取食产卵。微生物也存在于花蜜中，并能在发酵过程中改变花蜜释放的挥发物成分，这些挥发物是花朵吸引蚂蚁、夜蛾、尺镬等昆虫的主要因素之一。甚至蚊子，也是根据人类皮肤上的细菌散发的气味来定位寄主的，它们能从众多散发出的挥发物中鉴别出特定的气味或气味组合，以便找到合适的食物源。微生物发酵过程中，同时会产生昆虫所必须的营养物质。在协同进化过程中，很多昆虫已掌握了利用微生物气味寻找合适寄主的技能，微生物-昆虫之间跨界信号系统也更加精准。

关键词：生物防治微生物挥发物食物源寄主选择

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梨黑星病菌对嘧菌酯敏感基线建立及与不同杀菌剂的交互抗性

梨黑星病菌对嘧菌酯敏感基线建立及与不同杀菌剂的交互抗性

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第十一届全国青年植保科技创新学术研讨会

作者：赵建江王文桥路粉马志强韩秀英河北省农林科学院植物保护研究所河北省农业有害生物综合防治工程技术研究中心农业部华北北部作物有害生物综合治理重点实验室河北保定071000

本研究采用抱子萌发法，测定了采自河北省不同地区的79株梨黑星病菌对嘧菌酯的敏感性，采用抱子芽管长度法测定了8个相对敏感菌株和8个相对抗性菌株对氟硅哇、苯醚甲环唑和甲基硫菌灵的敏感性。结果显示:嘧菌酯有望成为梨黑星病防治的... 详细信息

本研究采用抱子萌发法，测定了采自河北省不同地区的79株梨黑星病菌对嘧菌酯的敏感性，采用抱子芽管长度法测定了8个相对敏感菌株和8个相对抗性菌株对氟硅哇、苯醚甲环唑和甲基硫菌灵的敏感性。结果显示:嘧菌酯有望成为梨黑星病防治的替代药剂。

关键词：梨黑星病菌嘧菌酯杀菌剂交互抗性

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一种二点委夜蛾人工接虫方法的建立和种衣剂防治效果评价

一种二点委夜蛾人工接虫方法的建立和种衣剂防治效果评价

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第十一届全国青年植保科技创新学术研讨会

作者：张海剑郭宁石洁河北省农林科学院植物保护研究所河北省农业有害生物综合防治工程技术研究中心农业部华北北部作物有害生物综合治理重点实验室河北保定071001

二点委夜蛾(Proxenus lepigone Moschler)是近年来耕作制度变革后(麦收后免耕或贴茬播种)中国黄淮海夏玉米种植区玉米苗期新发生的重要害虫.二点委夜蛾幼虫咬食玉米幼苗茎基部是其主要为害方式,其幼虫食性复杂,具有多食性和腐食性,研究... 详细信息

二点委夜蛾(Proxenus lepigone Moschler)是近年来耕作制度变革后(麦收后免耕或贴茬播种)中国黄淮海夏玉米种植区玉米苗期新发生的重要害虫.二点委夜蛾幼虫咬食玉米幼苗茎基部是其主要为害方式,其幼虫食性复杂,具有多食性和腐食性,研究表明,在麦茬玉米田,玉米幼苗并不是其最喜欢取食的作物,只有在适宜条件下,达到一定虫龄和虫口数量,有较大几率接触到玉米幼苗时,才会取食为害.通过随机区组双因素分析，在接入虫龄、苗龄2个因素组合变化的情况下，四龄幼虫二叶期植株被害率最高，为86.11％，三龄幼虫二叶期植株被害率为80.56%，两者之间差异不显著，其他虫龄苗龄的组合植株被害率均低于这两个组合。由于三龄幼虫敏感性和生活周期更适宜人工接虫试验，选择三龄幼虫二叶期接虫为最适宜的接虫虫龄和苗龄。人工接虫条件设置研究表明，布置了PVC管围棵保护和在幼苗茎基部覆盖人工介质的处理，接虫5d后其幼虫逃逸率较低为18.33%，植株被害率最高可达91.67%。

关键词：玉米二点委夜蛾人工接虫种衣剂防治试验

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苏云金芽孢杆菌辅助蛋白ORF1对cry8E基因表达的影响

苏云金芽孢杆菌辅助蛋白ORF1对cry8E基因表达的影响

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第十一届全国青年植保科技创新学术研讨会

作者：杜立新曹伟平宋健河北省农林科学院植物保护研究所河北省农业有害生物综合防治工程技术研究中心农业部华北北部作物有害生物综合治理重点实验室河北保定071000

通过构建orf1基因缺失和orf1基因起始密码子突变的转录分析载体，测定orf1基因缺失或突变后启动子的β-半乳糖苷酶活性，结果发现，HD-73的转录活性在TO到T10之间没有差异，而orf1基因完全缺失HD-73的转录活性在T5以后就显著高于前两者... 详细信息

通过构建orf1基因缺失和orf1基因起始密码子突变的转录分析载体，测定orf1基因缺失或突变后启动子的β-半乳糖苷酶活性，结果发现，HD-73的转录活性在TO到T10之间没有差异，而orf1基因完全缺失HD-73的转录活性在T5以后就显著高于前两者，SDS-PAGE分析了orf1基因缺失后CryBE蛋白的表达情况发现，orf1基因缺失的菌株所表达的CryBE蛋白产量明显多于orf1基因存在的HDcry8E菌株，综合说明，orf1基因的可在转录水平上抑制cry8E启动子的转录。

关键词：苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因表达辅助蛋白杀虫活性

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温度条件对小麦孢囊线虫孵化的影响

温度条件对小麦孢囊线虫孵化的影响

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第十三届全国植物线虫学学术研讨会

作者：李秀花马娟高波王容燕陈书龙河北省农林科学院植物保护研究所河北省农业有害生物综合防治工程技术研究中心农业部华北北部作物有害生物综合治理重点实验室保定071000

小麦孢囊线虫(Heterodera avenae)是小麦等禾谷类作物上的重要线虫病害,目前已证实该线虫分布遍及我国16个省市,给小麦的安全生产造成巨大威胁.不同地域小麦孢囊线虫的孵化特征具有一定差异,研究不同时期小麦孢囊线虫的孵化特征,对于了... 详细信息

小麦孢囊线虫(Heterodera avenae)是小麦等禾谷类作物上的重要线虫病害,目前已证实该线虫分布遍及我国16个省市,给小麦的安全生产造成巨大威胁.不同地域小麦孢囊线虫的孵化特征具有一定差异,研究不同时期小麦孢囊线虫的孵化特征,对于了解其侵染规律、依据其孵化与侵染特点制定相应的防治策略和实现小麦的高产与稳产具有重要意义.于小麦刚收获后(6月21日)、小麦播种前(10月2日)和土壤冰冻前(12月20日)分别在河北省任丘市小麦孢囊线虫重病田大量取样,采用漂浮过筛法分离孢囊,在体式显微镜下挑取大小相对一致孢囊,首先用无菌水冲洗5次,然后将孢囊放于24孔细胞培养板内,每孔放3个孢囊并加入1 mL无菌水,对于6月份采集的孢囊分别置于-5℃、0℃、5℃、10℃、15℃、20℃、25℃和30℃条件下,对小麦播种前和土壤冰冻前采集的孢囊则分别置于5℃和15℃,每处理重复10次.每隔1周检查1次线虫孵化数量,然后将孵化幼虫吸出,并加入等量的无菌水.试验结果表明,不同温度对孢囊线虫的孵化具有显著影响,对于6月份采集的新鲜孢囊,在试验周期内(42周),在恒温条件下5℃是其最佳孵化温度,9周后线虫开始孵化,至23周接近最高孵化率(61.1％);而10℃处理,11周后线虫开始孵化;在15℃处理中,9周后开始孵化,20周时孵化率为0.6％,且10℃和15℃处理在试验周期内孵化率显著低于5℃处理;0℃处理仅在试验42周后有少量线虫孵化;但在-5℃、20℃、25℃和30℃处理中无孢囊孵化.对于小麦播种前采集的孢囊,15℃处理的孢囊线虫孵化速度高于5℃处理,在15℃条件下,35 d后开始大量孵化,56 d后接近最高孵化率;而5℃处理,线虫在56 d后开始大量孵化,但其总孵化率要高于15℃处理.对于土壤冰冻前采集的孢囊,在2个不同温度处理中,孢囊线虫均能够快速孵化,其中处理两周后,15℃处理的孢囊线虫孵化率达到76.2％,5℃处理的孢囊线虫孵化率达到41.9％,但15℃处理的孢囊线虫总孵化率高于5℃处理.

关键词：禾谷孢囊线虫温度孵化新鲜孢囊

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马铃薯腐烂茎线虫pat-10和unc-87基因的克隆与分析

马铃薯腐烂茎线虫pat-10和unc-87基因的克隆与分析

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第十三届全国植物线虫学学术研讨会

作者：高波马娟王容燕李秀花陈书龙河北省农林科学院植物保护研究所河北省农业有害生物综合防治工程技术研究中心农业部华北北部作物有害生物综合治理重点实验室保定071000

马铃薯腐烂茎线虫(Ditylenchus destructor)是重要的迁移性植物内寄生线虫,主要为害植物地下部尤其是块根、块茎和球茎等,也是国内外重要的检疫性线虫.该线虫引起甘薯茎线虫病,给我国的甘薯生产造成严重损失.目前防治甘薯茎线虫病的方... 详细信息

马铃薯腐烂茎线虫(Ditylenchus destructor)是重要的迁移性植物内寄生线虫,主要为害植物地下部尤其是块根、块茎和球茎等,也是国内外重要的检疫性线虫.该线虫引起甘薯茎线虫病,给我国的甘薯生产造成严重损失.目前防治甘薯茎线虫病的方法主要有轮作、选用抗耐病品种和化学防治等,鉴于我国耕种面积有限,抗线甘薯品种品质多不佳,在实际生产中甘薯茎线虫病的防治主要以化学防治为主,并且防治该病的主要药剂多为涕灭威之类的高毒药剂.长期使用化学药剂导致农药残留、环境污染以及线虫抗药性的产生.近几年,随着RNAi技术在植物转基因领域的广泛应用,利用该技术培育抗病品种,已成为防治线虫和保护生态环境最具有发展前景的措施之一.近年来基于转录组测序对植物寄生线虫寄生、致病以及致死相关基因的研究越来越多,这些基因的获得为基于RNAi技术培育甘薯茎线虫的抗病品种奠定了基础.PAT-10和UNC-87蛋白是线虫体壁肌肉的重要组成部分,在线虫的运动中发挥着重要的作用.秀丽小杆线虫(Caenorhabditis elegans)的pat-10基因被沉默后,会导致线虫麻痹僵直(walking stick)、幼虫或胚胎致死和雌性不育.而其unc-87基因被沉默后,线虫表型为卷曲(coil)运动力下降.在迁移性线虫短体线虫(Pratylenchus spp.)中该两个基因被沉默后会导致其僵直、卷曲、迁移力和繁殖力下降.而在营固着生活的线虫如大豆孢囊线虫(Heterodera glycines)和南方根结线虫(Meloidogyne incognita)中unc-87基因在二龄幼虫阶段以及雄虫中的表达量最大.因此,对马铃薯腐烂茎线虫pat-10和unc-87基因的研究对于开发抗茎线虫甘薯新品种具有潜在的应用价值.根据已有的马铃薯腐烂茎线虫的转录组数据中pat-10和unc-87基因的EST序列信息,利用RACE技术克隆获得了马铃薯腐烂茎线虫at-10和unc-87基因(D d-pat-10,Dd-unc-87)的全长cDNA,并对克隆片段序列进行了分析.unc-87 cDNA序列长1 471 bp,ORF区域长为1 134 bp,编码一个含377个氨基酸的蛋白质,预测蛋白分子量为42 kDa,等电点为7.08;pat-10 cDNA序列长842 bp,ORF区域长483 bp,可以编码一个含161个氨基酸的蛋白质,预测蛋白分子量为18.46 kDa,等电点为4.26.将所得两个基因序列进行Blastx比对,结果显示马铃薯腐烂茎线虫的UNC-87蛋白氨基酸序列与松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)的同源性最高为91％,与咖啡短体线虫(***)的同源性次之为88％,与大豆孢囊线虫、南方根结线虫以及秀丽小杆线虫的同源性也较高均为87％,而PAT-10蛋白氨基酸序列则与秀丽小杆线虫的同源性最高为91％,与南方根结线虫的同源性为88％,与咖啡短体线虫的同源性为88％.说明unc-87和pat-10基因在营固着和迁移性生活的线虫中均具有较高的同源性.体外合成了unc-87及pat-10的dsRNA,以2 mg/mL dsRNA浸泡线虫24 h后,受试线虫均出现明显的卷曲,活动力严重减弱,而阴性对照组dsGFP与空白对照组H2O基本一致并未表现出明显异常,说明该两个基因在马铃薯腐烂茎线虫中也具有类似的功能,该结果与之前的报道相似.d-pat-10和Dd-unc-87基因的克隆和分析为深入研究其功能及其对马铃薯腐烂茎线虫的致病力、繁殖力和环境适应性等方面的分子作用机制奠定了重要的基础,为其他迁移性线虫的研究提供参考,也为进一步利用转基因植株防治甘薯茎线虫病提供了依据.

关键词：马铃薯腐烂茎线虫 pat-10基因 unc-87基因基因克隆

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