检索结果-内蒙古大学图书馆

郑州大学学报（医学版） 2016年第3期51卷 320-324页

作者：路武豪郭文涛冯龙娄卫华郑州大学第一附属医院咽喉头颈外科郑州450052 漯河医学高等专科学校病原生物学与免疫学教研室漯河462002 河南中医学院基础医学院病原生物学与免疫学科郑州450008

目的:观察稳定感染HPV-16 E6-E7对Fa Du细胞生物学行为的影响和调控。方法:全基因合成HPV-16E6-E7基因,将其与慢病毒载体p LV-EGFP-C在T4连接酶作用下连接。制备重组HPV-16 E6-E7慢病毒并感染Fa Du细胞。将细胞分3组:实验组(重组HPV-16 ... 详细信息

目的:观察稳定感染HPV-16 E6-E7对Fa Du细胞生物学行为的影响和调控。方法:全基因合成HPV-16E6-E7基因,将其与慢病毒载体p LV-EGFP-C在T4连接酶作用下连接。制备重组HPV-16 E6-E7慢病毒并感染Fa Du细胞。将细胞分3组:实验组(重组HPV-16 E6-E7慢病毒稳定感染的Fa Du细胞)、载体对照组(慢病毒空载体稳定感染的Fa Du细胞)和空白对照组(未感染慢病毒的Fa Du细胞)。分别用CCK-8试剂盒检测各组细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况,Transwell侵袭实验检测细胞的体外侵袭能力。结果:获得稳定感染重组HPV-16 E6-E7慢病毒的Fa Du细胞,荧光显微镜下可见明亮的绿色荧光蛋白EGFP表达。整合HPV-16 E6-E7基因的Fa Du细胞增殖能力和侵袭力均增强,细胞凋亡率降低,S期和G_2/M期细胞增加,G_0/G_1期细胞减少(P<0.05)。结论:成功建立了HPV-16 E6-E7基因整合的Fa Du细胞。

关键词：感染 HPV-16 人喉咽鳞癌 Fa Du细胞

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银杏叶提取物对体外培养的人Müller细胞氧化损伤的保护作用

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中华实验眼科杂志 2015年第9期33卷 805-810页

作者：孙艳艳杨旭安慧娟李庆福鲍玉洲河南中医学院基础医学院郑州450008 郑州大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室 450052 河南省眼科研究所河南省立眼科医院郑州450003

背景氧化应激是视网膜损伤中重要的病理生理过程,探讨保护视网膜免受氧化应激损伤的方法具有重要的临床意义.研究证实银杏叶提取物具有抗氧化、抗凋亡、抗血栓、抗炎等多种功能,但其对人Müller细胞的抗氧化作用研究较少. 目的研... 详细信息

背景氧化应激是视网膜损伤中重要的病理生理过程,探讨保护视网膜免受氧化应激损伤的方法具有重要的临床意义.研究证实银杏叶提取物具有抗氧化、抗凋亡、抗血栓、抗炎等多种功能,但其对人Müller细胞的抗氧化作用研究较少. 目的研究银杏叶提取物（EGb）对氧化剂三氧化二砷（As2O3）诱导的人Müller细胞氧化应激损伤的保护作用及其机制. 方法人Müller细胞株用含体积分数10％胎牛血清（FBS）、2μmol/L谷氨酰胺和质量分数1％青链霉素双抗的DMEM/F12培养液进行培养和传代,取对数生长期的Müller细胞分为5个组,阴性对照组细胞采用常规培养法进行培养,在培养基中加入终质量浓度为5 mg/L的As2 O3处理细胞24 h以建立细胞氧化损伤模型,然后将5、10和20 mg/L EGb分别加入模型细胞培养液中作用24 h,采用MTT法检测各组细胞的活力;采用CM-H2DCFDA荧光探针法测定各组细胞活性氧簇（ROS）含量;采用逆转录PCR（RT-PCR）法检测细胞中easpase-3 mRNA的相对表达量;采用Western blot法分别检测细胞质和细胞核中Nrf2蛋白的表达. 结果 Müller细胞接种至培养瓶后24 h,倒置显微镜下可见接种细胞贴壁良好,培养6～7d时Müller细胞的细胞体积较大,细胞质丰富,呈镶嵌样排列.As2O3处理组部分细胞凋亡,呈卵圆形悬浮在培养液中.MTT法测定结果表明,阴性对照组细胞活力（A值）最高,As2 O3处理组细胞活力最低,而As2O3 ＋5 mg/L EGb组、As2O3＋10 mg/L EGb组和As2O3＋20 mg/L EGb组A值随着EGb质量浓度的增加而逐渐增加,各组间总体比较差异有统计学意义（F=163.57,P=0.00）.阴性对照组细胞中ROS荧光强度最弱,As2O3处理组最强,As2O3 ＋5 mg/L EGb组、As2O3＋10 mg/L EGb组和As2 O3 ＋20 mg/L EGb组细胞中ROS荧光强度值随着EGb质量浓度的升高而逐渐减弱,各组间细胞中ROS荧光强度值的总体比较差异有统计学意义（F=4 013.61,P=0.00）.细胞内caspase-3 mRNA的相对表达量随EGb质量浓度的升高逐渐下降,各组间总体比较差异有统计学意义（F=2 199.72,P=0.00）.各组细胞质中Nrf2蛋白的表达比较,差异无统计学意义（F=15.42,P=0.40）;阴性对照组、As2O3处理组及As2O3＋5 mg/L EGb组、As2O3＋ 10 mg/L EGb组和As2 O3 ＋20 mg/L EGb组细胞核Nrf2蛋白表达量（灰度值）分别为100.01±0.04、46.59±0.63、54.51 ±0.62、59.93±0.17和67.60±0.24,总体比较差异有统计学意义（F=7271.72,P=0.00）,其中阴性对照组细胞核Nrf2蛋白表达量最低,而As2O3处理组最高,差异均有统计学意义（均P＜0.05）. 结论 EGb以剂量依赖的方式减轻体外培养的人Müller细胞的氧化应激损伤,其机制与抗氧化和抗凋亡作用有关,其减轻Müller细胞氧化应激损伤的调控主要发生在细胞核。

关键词：银杏科植物提取物/药理细胞株 Müller细胞/药物作用细胞缺氧氧化应激细胞生存/药物作用凋亡/药物作用人

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叶黄素对H2O2诱导的人视网膜Muller细胞氧化应激干预的作用机制

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中华实验眼科杂志 2015年第11期33卷 1009-1014页

作者：杨旭王明臣孙艳艳安慧娟李庆福鲍玉洲郑州大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室 450001 河南中医学院基础医学院郑州450008 河南省立眼科医院河南省眼科研究所郑州450003

背景氧化应激是年龄相关性黄斑变性（AMD）的主要因素之一。研究表明叶黄素对AMD有预防作用，但是其抗氧化机制仍不明确。Mμller细胞是视网膜氧化应激反应的靶细胞之一，研究叶黄素对MUller细胞的氧化应激是否具有保护作用及其作用机... 详细信息

背景氧化应激是年龄相关性黄斑变性（AMD）的主要因素之一。研究表明叶黄素对AMD有预防作用，但是其抗氧化机制仍不明确。Mμller细胞是视网膜氧化应激反应的靶细胞之一，研究叶黄素对MUller细胞的氧化应激是否具有保护作用及其作用机制对于视网膜疾病的治疗具有重要意义。目的研究叶黄素对视网膜Mμller细胞核因子E2相关转录因子2／抗氧化反应原件（Nrf2／ARE）信号途径的影响。方法人Muller细胞株进行常规培养，将对数生长期的细胞接种于96孔培养板，在培养液中分别加入不同浓度（40、80、160、320、640ixmol／L）HO2，绘制Mμller细胞的凋亡曲线，取H2O2的半数致死量，即160μmol／L制备Mμller细胞氧化应激模型。将模型细胞分为模型对照组和不同质量浓度（12．5、25．0、50．0mg／L）叶黄素组，根据分组情况分别在培养液中加入相应质量浓度的叶黄素，用常规培养的细胞作为空白对照组。采用MTT比色法测定各组中Maller细胞增生值（吸光度，A值）和凋亡率；采用流式细胞仪检测各组细胞中活性氧簇（ROS）的荧光强度；采用实时荧光定量PCR检测细胞中Nrf2mRNA和血红素加氧酶-1（HO-1）mRNA的相对表达量；采用Westernblot法检测各组细胞中Nrf2和HO-1蛋白的表达水平（灰度值）。结果MTT比色法检测显示，随着H2O2浓度的增加，细胞增生抑制率逐渐增加，各组间总体比较差异有统计学意义（F=43．890，P〈0．01）。空白对照组、模型对照组及12．5、25．0、50．0mg／L叶黄素组细胞凋亡率的总体比较差异有统计学意义（F=346．770，P=0．000），其中随着叶黄素质量浓度的增加，细胞凋亡率逐渐下降，组间比较差异均有统计学意义（均P〈0．05）。空白对照组、模型对照组及12．5、25．0、50．0mg／L叶黄素组细胞中ROS含量分别为1．92±0．18、64．89±2．86、52．70±2．80、32．61±4．20和5．68±1．35，随着叶黄素质量浓度的增加，ROS含量逐渐下降，组间总体比较差异有统计学意义（F=324．900，P=0．000）。各质量浓度叶黄素组细胞中Nrf2和HO一1mRNA相对表达量及细胞中HO-1和细胞核中Nrf2蛋白表达量均明显高于模型对照组，各组间总体比较差异均有统计学意义（F=236．960、242．620、186．830、263．120，均P=0．000），随着叶黄素质量浓度的增加，Nrf2mRNA和HO-1mRNA及其蛋白的表达量逐渐增加，组间比较差异均有统计学意义（均P〈0．05），但各组间Muller细胞的细胞质中Nrf2蛋白表达量总体比较差异无统计学意义（F=1．790，P=0．210）。结论叶黄素通过上调Nrf2的表达和核转位诱导抗氧化酶的表达，从而抑制Mailer细胞的氧化应激反应。

关键词：氧化应激/生理叶黄素/药理 Muller细胞年龄相关性黄斑变性核因子E2相关转录因子2/代谢血红素加氧酶-1/代谢

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结核分枝杆菌RD12区T细胞表位分布情况预测及分析

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上海交通大学学报（医学版） 2014年第1期34卷 7-12页

作者：叶娟张舒林刘文第河南中医学院医学免疫学重点实验室郑州450008 上海交通大学基础医学院免疫学与微生物学系上海200025

目的预测并分析结核分枝杆菌(MTB)RD12区4个抗原的CD4+T和CD8+T细胞表位分布情况。方法在NCBI数据库上查询并获得各个抗原的氨基酸序列,用Blast分析其与MTB复合群及人类蛋白的同源性。利用SYFPEITHI、NETCTL、BIMAS和NetMHC数据库预测... 详细信息

目的预测并分析结核分枝杆菌(MTB)RD12区4个抗原的CD4+T和CD8+T细胞表位分布情况。方法在NCBI数据库上查询并获得各个抗原的氨基酸序列,用Blast分析其与MTB复合群及人类蛋白的同源性。利用SYFPEITHI、NETCTL、BIMAS和NetMHC数据库预测并分析MTB的RD12区抗原CD8+T细胞表位的分布情况;利用NetMHC数据库预测并分析MTB的RD12区抗原的CD4+T细胞表位的分布情况。然后,综合CD4与CD8表位预测,筛选出优势表位肽段。结果通过预测与分析,初步筛选出MTB的RD12区4个抗原的CD8+T细胞候选表位16个;CD4+T细胞的强结合候选表位234个,弱结合候选表位505个,综合CD4与CD8表位预测并分析,最终筛选出13个优势表位肽段。结论预测出来的T细胞候选表位将为结核病的特异性诊断及新的抗结核多表位疫苗的研究奠定基础。

关键词：结核分枝杆菌 RD12区 T细胞表位分析

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敲除DNA聚合酶β基因的人食管癌Eca9706细胞系的建立及其细胞生物学特性分析

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郑州大学学报（医学版） 2014年第5期49卷 605-608页

作者：冯龙郭文涛路武豪孙萨迦董子明河南中医学院基础医学院病原生物学与免疫学科郑州450008 漯河医学高等专科学校病原生物学与免疫学教研室漯河462002 郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450001

目的：建立敲除DNA聚合酶β（ DNA polβ）基因的人食管癌Eca 9706细胞株，观察基因敲除细胞生物学行为的变化。方法：采用同源重组基因敲除方法，首先构建食管癌Eca9706细胞DNA polβ基因敲除载体，并将其导入Eca9706细胞，构建DNA po... 详细信息

目的：建立敲除DNA聚合酶β（ DNA polβ）基因的人食管癌Eca 9706细胞株，观察基因敲除细胞生物学行为的变化。方法：采用同源重组基因敲除方法，首先构建食管癌Eca9706细胞DNA polβ基因敲除载体，并将其导入Eca9706细胞，构建DNA polβ基因敲除细胞株。 PCR、RT-PCR、Western blot法检测DNA polβ基因敲除区段DNA存在及表达情况。流式细胞术和MTT法检测基因敲除细胞的细胞周期和生长速度。结果：筛选得到具有neo抗性的DNA polβ基因敲除Eca9706细胞，其基因组中DNA polβ基因区段已被敲除；RT-PCR和Western blot 检测不到DNA polβmRNA和蛋白表达。敲除DNA polβ基因的细胞生长速度缓慢，G2～M期细胞增多，S期细胞减少（ t＝3．882、3.869，P均＜0．05）。结论：成功构建了食管癌Eca9706 DNA polβ基因敲除细胞模型。

关键词： DNA聚合酶β 基因敲除食管癌 Eca9706细胞

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医学微生物学实验教学的改革与探索

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中国科教创新导刊 2014年第7期 40-40,42页

作者：冯龙江华梅雪孙颖张小莉河南中医学院基础医学院病原生物学与免疫学教研室

以中西医结合专业学生作为研究对象,通过完善与改进实验教学方法、内容与考核方法等,创建出适合本专业的研究性教学模式.通过实践表明,研究性教学模式能够有效提高学生对微生物学的学习积极性,帮助其掌握更扎实的专业技能与知识,并能培... 详细信息

以中西医结合专业学生作为研究对象,通过完善与改进实验教学方法、内容与考核方法等,创建出适合本专业的研究性教学模式.通过实践表明,研究性教学模式能够有效提高学生对微生物学的学习积极性,帮助其掌握更扎实的专业技能与知识,并能培养学生对问题的分析与解决能力.所以,研究性教学模式能够有效提升学生的综合素养,值得推广应用.

关键词：医学微生物学研究性教学实验教学

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浅谈如何提高中医院校医学免疫学课堂教学效果

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中国科教创新导刊 2014年第5期 59-59,61页

作者：冯龙梅雪江华冯黎张小莉河南中医学院基础医学院病原生物学与免疫学教研室

医学免疫学是一门重要的医学基础学科.由于该课程内容抽象、难懂,医学免疫学已成为中医院校教学难度较大的一门课程之一.笔者结合学生特点,分析影响教学质量的主要问题,提出以激发学生的学习兴趣为宗旨；采用多媒体等多种教学模式,将临... 详细信息

医学免疫学是一门重要的医学基础学科.由于该课程内容抽象、难懂,医学免疫学已成为中医院校教学难度较大的一门课程之一.笔者结合学生特点,分析影响教学质量的主要问题,提出以激发学生的学习兴趣为宗旨；采用多媒体等多种教学模式,将临床病例分析融入理论教学,有效的提高学生学习的主动性和创新性,显著提高了课堂教学效果.

关键词：医学免疫学教学模式教学效果

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案例教学法在临床专业医学微生物学教学中的应用

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中国科教创新导刊 2014年第8期 48-48,50页

作者：冯龙梅雪江华张小莉河南中医学院基础医学院病原生物学与免疫学教研室

在临床专业医学微生物学的教学过程中应用案例教学法,案例的科学设计以及相关问题的合理提出与讨论是实施的关键.案例教学法能够有效的提高学生的学习兴趣,增强其对问题的分析与解决能力,同时还能提高教师的专业素养.本文主要介绍了案... 详细信息

在临床专业医学微生物学的教学过程中应用案例教学法,案例的科学设计以及相关问题的合理提出与讨论是实施的关键.案例教学法能够有效的提高学生的学习兴趣,增强其对问题的分析与解决能力,同时还能提高教师的专业素养.本文主要介绍了案例教学法在临床医学微生物学教学中的应用方法,分析其应用效果与存在的不足,并提出有效的解决对策,以为医学微生物学教学工作的顺利开展提供借鉴.

关键词：案例教学法医学微生物学教学

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中医药院校医学免疫学实验教学的改革与探讨

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中医药管理杂志 2014年第4期22卷 529-530页

作者：冯龙江华梅雪李晓娟张小莉河南中医学院基础医学院病原生物学与免疫学教研室河南郑州450008

医学免疫学不仅是医学生必修的主干课程,由于医学免疫学理论知识更新快,许多新理论和新技术层出不穷,并且随着免疫学新技术不断发展,这些新知识在现有的医学免疫学实验教学中就显现出内容滞后、教学模式和教学手段单一的弊端。为了培养... 详细信息

医学免疫学不仅是医学生必修的主干课程,由于医学免疫学理论知识更新快,许多新理论和新技术层出不穷,并且随着免疫学新技术不断发展,这些新知识在现有的医学免疫学实验教学中就显现出内容滞后、教学模式和教学手段单一的弊端。为了培养创新型医学人才,结合本课程特点,以及学生的个性发展,文章提出了一套理论与实践相结合,通过具体操作解决实际问题,自我创新设计实验的新的医学免疫学实验教学模式。实践证明,新实验教学模式的实施对于学生综合能力的培养起到了一定作用。

关键词：医学免疫学实验教学教学模式教学改革

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分枝杆菌脂聚糖的分离、纯化及其结构和功能分析

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微生物学通报 2014年第1期41卷 96-103页

作者：玄松花赵俊伟孙战强周业成张朝宝余晓丽郭晓奎刘文第张舒林河南中医学院医学免疫学重点实验室河南郑州450008 上海交通大学基础医学院病原生物学教研室上海200025 四川大学生命科学学院四川成都610065 武汉工业学院生物与制药工程学院湖北武汉430023

【目的】建立分离、纯化分枝杆菌脂聚糖的方法,初步比较分析不同菌株来源的脂阿拉伯甘露聚糖(Lipoarabinomannan,LAM)和脂甘露聚糖(Lipomannan,LM)的结构差异及研究脂聚糖刺激对巨噬细胞环氧合酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)蛋白表达的... 详细信息

【目的】建立分离、纯化分枝杆菌脂聚糖的方法,初步比较分析不同菌株来源的脂阿拉伯甘露聚糖(Lipoarabinomannan,LAM)和脂甘露聚糖(Lipomannan,LM)的结构差异及研究脂聚糖刺激对巨噬细胞环氧合酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)蛋白表达的影响。【方法】应用Triton X-114液相法提取脂聚糖,电洗脱法分离纯化,基质辅助激光解析电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)进行分子量鉴定;基于特异性识别非还原性末端α-D-甘露糖基的刀豆球蛋白(Concanavalin A,Con A)分析新诺分枝杆菌JDM601、结核分枝杆菌H37Rv标准株和耻垢分枝杆菌mc2155脂聚糖的结构差异;进一步用Western blot检测脂聚糖刺激的RAW 264.7巨噬细胞COX-2蛋白的表达。【结果】通过电洗脱法成功纯化出3种菌株脂聚糖;MALDI-TOF/TOF-MS鉴定发现,分子量从小到大依次为新诺分枝杆菌JDM601、耻垢分枝杆菌mc2155和结核分枝杆菌H37Rv来源的脂聚糖。Western blot显示,Con A能与结核分枝杆菌H37Rv标准株来源的LAM相互作用,而不能与新诺分枝杆菌JDM601和耻垢分枝杆菌来源的LAM相互作用;并且发现Con A与新诺分枝杆菌JDM601来源的LM有很强的反应,然而与其余两种来源的LM反应很弱。3种菌株来源的脂聚糖均能刺激RAW 264.7巨噬细胞COX-2蛋白的表达。【结论】首次成功对来源于中国临床分枝杆菌分离株的脂聚糖进行了分离纯化,初步探讨了不同菌株来源分枝杆菌脂聚糖的结构差异,并表明LAM和LM均能刺激巨噬细胞诱导COX-2蛋白的表达,为进一步研究其对宿主的毒力和免疫机制奠定了基础。

关键词：分枝杆菌脂阿拉伯甘露聚糖脂甘露聚糖基质辅助激光解析电离串联飞行时间质谱

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