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中国兽医学报 2012年第4期32卷 556-559页

作者：杨猛张金来陈陆河南农业大学牧医工程学院动物传染病实验室禽病研究所河南郑州450002

用Vero细胞对2010年河南省采集的猪舍蚊虫标本进行病毒分离,对新分离的乙型脑炎病毒(JEV)进行分子生物学鉴定,并对其PrM基因进行克隆、测序及病毒进化分析。结果显示,从采集的蚊虫标本中分离到1株基因Ⅰ型JEV(HN10-1)和1株基因Ⅲ型JEV(H... 详细信息

用Vero细胞对2010年河南省采集的猪舍蚊虫标本进行病毒分离,对新分离的乙型脑炎病毒(JEV)进行分子生物学鉴定,并对其PrM基因进行克隆、测序及病毒进化分析。结果显示,从采集的蚊虫标本中分离到1株基因Ⅰ型JEV(HN10-1)和1株基因Ⅲ型JEV(HN10-2)。结果表明,河南省同时存在Ⅰ、Ⅲ2种基因型JEV的传播和流行。

关键词：乙型脑炎病毒分离鉴定基因分型

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鸭源鸡杆菌对SPF雏鸡的感染特性研究

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中国预防兽医学报 2012年第5期34卷 379-383页

作者：李乔晶张九州杨霞常洪涛王珊皇甫和平姚惠霞迪丽拜尔·阿木提王川庆河南农业大学牧医工程学院/禽病研究所动物传染病实验室河南郑州450002 新疆阿克苏职业技术学院新疆阿克苏843000

为研究鸭源鸡杆菌的流行病学特性,本研究采用从自然病例分离得到的鸭源鸡杆菌人工感染4日龄SPF雏鸡,通过形态学、PCR、荧光定量PCR和组织学等方法分别对感染后SPF雏鸡的组织脏器进行了细菌分离、检测和鉴定,用ELISA对其血清抗体水平进... 详细信息

为研究鸭源鸡杆菌的流行病学特性,本研究采用从自然病例分离得到的鸭源鸡杆菌人工感染4日龄SPF雏鸡,通过形态学、PCR、荧光定量PCR和组织学等方法分别对感染后SPF雏鸡的组织脏器进行了细菌分离、检测和鉴定,用ELISA对其血清抗体水平进行检测。结果表明,人工感染鸡无临床症状,组织学检查感染鸡的肝脏、气管和肺脏组织均有损伤。人工感染后第3 d和同居感染第2 d鸡体内可分离出鸭源鸡杆菌,人工感染后第96 d仍能够分离到鸡杆菌。ELISA方法证实人工感染后47 d和同居后32 d出现抗体高峰,持续2～3周,人工感染组和同居组抗体水平均高于对照组(p<0.05);荧光定量PCR检测病料结果显示人工感染组和同居组的气管组织中细菌含量最高。本研究表明雏鸡在4日龄即可感染鸭源鸡杆菌,并能通过同居传播,长期带菌、排菌;感染后抗体产生缓慢、持续期短。本研究为鸭源鸡杆菌的流行病学、致病机理研究及防治措施的制定等提供了参考依据。

关键词：鸡杆菌 SPF雏鸡人工感染同居感染带菌排菌期

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稳定分泌抗羊种布鲁菌脂多糖单克隆抗体细胞株的筛选与应用

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畜牧兽医学报 2012年第2期43卷 290-298页

作者：王艳王新卫陈陆赵军杨霞王珊王川庆迪丽拜尔.阿木提河南农业大学牧医工程学院动物传染病实验室/禽病研究所郑州450002 新疆维吾尔自治区阿克苏职业技术学院阿克苏843000

研制抗羊种布鲁菌脂多糖抗原的单克隆抗体,并应用其建立检测布病的双夹心ELISA方法。本研究采用热酚水法提纯羊种布鲁菌(16M菌株)的脂多糖抗原,并经SDS-PAGE鉴定。用脂多糖和灭活的羊种布鲁菌16M作为免疫抗原,交替免疫6～8周龄BALB/c雌... 详细信息

研制抗羊种布鲁菌脂多糖抗原的单克隆抗体,并应用其建立检测布病的双夹心ELISA方法。本研究采用热酚水法提纯羊种布鲁菌(16M菌株)的脂多糖抗原,并经SDS-PAGE鉴定。用脂多糖和灭活的羊种布鲁菌16M作为免疫抗原,交替免疫6～8周龄BALB/c雌鼠,第1次免疫用羊种布鲁菌标准菌16M全菌加等量弗氏完全佐剂;第2次免疫用脂多糖加等量弗氏不完全佐剂。将脂多糖作为包被抗原建立间接ELISA方法,筛选针对抗羊种布鲁菌(16M菌株)脂多糖的单克隆抗体杂交瘤细胞株。筛选出3株能稳定分泌抗羊种布鲁菌脂多糖单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为5H3、6B8和3H7,细胞培养上清的ELISA效价在1∶1 000～1∶5 000,小鼠腹水单克隆抗体ELISA效价在1∶10 000～1∶160 000;抗体亚类鉴定表明:5H3、6B8属于IgM亚类,3H7属于IgG3亚类;特异性试验结果显示:3株杂交瘤细胞分泌的抗体不与大肠杆菌O157裂解抗原、鸡白痢沙门氏菌裂解抗原、鸭源鸡杆菌脂多糖抗原以及福氏志贺菌裂解抗原反应,仅与灭活的羊种布鲁菌(16M)发生反应。布鲁菌虎红平板凝集试验和试管凝集试验检测结果显示,获得的单抗可与标准检测抗原形成明显的颗粒凝集物和伞状凝集物。利用所建立的单克隆抗体细胞株,建立了一种检测布鲁菌的双夹心间接ELISA方法,并进行了特异性和敏感性检测。对模拟样品和临床样品进行检测,准确性均很高。

关键词：羊布鲁菌脂多糖抗原酶联免疫吸附试验单克隆抗体杂交瘤细胞

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河北省鸡群鸭源鸡杆菌血清流行病学调查

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河南农业科学 2012年第2期41卷 132-135页

作者：李乔晶张九州姬郭彪韩庆安王川庆河南农业大学牧医工程学院/动物传染病实验室禽病研究所河南郑州450002 河北省畜牧局动物疾控中心河北石家庄050030

为了解鸭源鸡杆菌(Gallibacterium anatis)在河北省鸡群中的感染状况,采用乳胶凝集试验对河北省10个不同地市的677份鸡血清样品进行了鸭源鸡杆菌的血清流行病学调查,对鸭源鸡杆菌的感染率进行分析。结果表明:河北省不同地区鸡群均存在... 详细信息

为了解鸭源鸡杆菌(Gallibacterium anatis)在河北省鸡群中的感染状况,采用乳胶凝集试验对河北省10个不同地市的677份鸡血清样品进行了鸭源鸡杆菌的血清流行病学调查,对鸭源鸡杆菌的感染率进行分析。结果表明:河北省不同地区鸡群均存在鸭源鸡杆菌感染,平均阳性率为48.60%,其中血清Ⅰ型抗体阳性率为29.54%,血清Ⅱ型抗体阳性率为29.69%,血清Ⅳ型抗体阳性率为22.16%。不同地市的鸡群血清阳性率存在一定差异,其中张家口和石家庄的鸭源鸡杆菌血清阳性率较高,分别为72.73%和80.95%。

关键词：河北省鸡群鸭源鸡杆菌流行病学调查乳胶凝集试验血清阳性率

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河南省猪场蚊虫中Ⅰ、Ⅲ型乙型脑炎病毒的分离及鉴定

河南省猪场蚊虫中Ⅰ、Ⅲ型乙型脑炎病毒的分离及鉴定

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会

作者：杨猛张金来赵军常洪涛王川庆陈陆河南农业大学牧医工程学院动物传染病实验室禽病研究所

目的对2010年河南省采集的猪舍蚊虫标本进行乙型脑炎病毒(JEV)的分离、鉴定并确定其基因分型。方法用Vero细胞对2010年采集的蚊虫标本进行病毒分离,对新分离的乙型脑炎病毒进行分子生物学鉴定,并对其PrM基因进行克隆、测序及病毒进化分... 详细信息

目的对2010年河南省采集的猪舍蚊虫标本进行乙型脑炎病毒(JEV)的分离、鉴定并确定其基因分型。方法用Vero细胞对2010年采集的蚊虫标本进行病毒分离,对新分离的乙型脑炎病毒进行分子生物学鉴定,并对其PrM基因进行克隆、测序及病毒进化分析。结果从采集的蚊虫标本中分离到一株基因Ⅰ型乙型脑炎病毒(HN10-1)和一株基因Ⅲ型乙型脑炎病毒(HN10-2)。结论河南省同时分离到基因Ⅰ型和Ⅲ型乙型脑炎病毒。

关键词：乙型脑炎病毒分离鉴定基因分型

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鸭源鸡杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

鸭源鸡杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十六次学术研讨会

作者：李乔晶杨霞王珊赵军张九州常洪涛姬郭彪王新卫王川庆河南农业大学牧医工程学院动物传染病实验室禽病研究所

引言鸭源鸡杆菌(***)是巴氏杆菌科、鸡杆菌属的代表种。有报道表明鸭源鸡杆菌与鸡的输卵管囊肿密切相关,能引起开产鸡蛋质和产蛋量的下降。国内外对于鸭源鸡杆菌的血清学研究较少。目前检测鸡血清中鸭源鸡杆菌的抗体方法有乳胶凝集实验... 详细信息

引言鸭源鸡杆菌(***)是巴氏杆菌科、鸡杆菌属的代表种。有报道表明鸭源鸡杆菌与鸡的输卵管囊肿密切相关,能引起开产鸡蛋质和产蛋量的下降。国内外对于鸭源鸡杆菌的血清学研究较少。目前检测鸡血清中鸭源鸡杆菌的抗体方法有乳胶凝集实验,平板凝集实验等,虽然这些方法操作简单,但受多种因素影响敏感性低。ELISA具有特异、灵敏、稳定、快速等优点,已被越广泛用于各种病原及抗体的检测。本研究以超声裂解分离株菌液作为包被抗原,建立检测抗体的间接ELISA方法,为临床诊断、流行病学调查及相关研究提供有效检测手

关键词：鸭源鸡杆菌微量凝集试验 ELISA 检测方法

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河北省鸡群鸭源鸡杆菌血清流行病学调查

河北省鸡群鸭源鸡杆菌血清流行病学调查

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十六次学术研讨会

作者：李乔晶张九州姬郭彪韩庆安王川庆河南农业大学牧医工程学院/动物传染病实验室禽病研究所河北省畜牧局动物疾控中心

引言鸡杆菌属(Gallibacterium)是巴氏杆菌科中一个新成立的属,包括鸭源鸡杆菌(Gallibacterium anatis),虎皮鹦鹉鸡杆菌(Gallibacterium melopsittaci),海藻糖发酵鸡杆菌(Gallibacterium trehalosifermentans)和输卵管炎鸡杆菌(Gallibacterium salpingitidis)。鸭源鸡杆菌是其代表种,包括溶血性鸭源鸡杆菌(*** haemolytica,GAH)和鸭子鸭源鸡杆菌(*** anatis)两个生物变型。另外,鸡杆菌基因种1和2以及16S rRNA群Ⅲ(鸡杆菌基因种3)和Ⅴ(鸡杆菌类群Ⅴ)经过验证也被列鸡杆菌属的成员。目前已鉴定的鸡杆菌有24个血清型,其中有3个致病性血清型(Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅳ型),而且各血

关键词：鸭源鸡杆菌流行病学调查河北省

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鸡杆菌河南分离株的分子进化分析

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2011年第6期39卷 8-14页

作者：张金来杨猛陈陆付仁一杨霞赵军王川庆王泽霖河南农业大学牧医工程学院动物传染病实验室禽病研究所河南郑州450002

【目的】确定鸡杆菌河南分离株的具体种属和进化地位。【方法】以9株鸡杆菌河南分离株为研究对象,根据GenBank上登录的相关序列,针对鸡杆菌3个管家基因rpoB、infB和atpD设计引物,并进行PCR扩增、克隆和序列测定分析;将9株鸡杆菌的3个管... 详细信息

【目的】确定鸡杆菌河南分离株的具体种属和进化地位。【方法】以9株鸡杆菌河南分离株为研究对象,根据GenBank上登录的相关序列,针对鸡杆菌3个管家基因rpoB、infB和atpD设计引物,并进行PCR扩增、克隆和序列测定分析;将9株鸡杆菌的3个管家基因部分核苷酸序列,与已知的鸡杆菌属和巴氏杆菌科其他属相关参考株的相应基因序列进行比较分析并构建进化树。【结果】扩增出rpoBi、nfB和atpD3个管家基因部分序列,长度分别为566,531和1 441 bp,将测序结果登陆到GenBank。鸡杆菌分离株间的同源性分别为98.3%~100%（rpoB）、90.5%~100%（infB）和98.3%~100%（atpD）;分离株与国外鸭源鸡杆菌分离株间的同源性分别为97.1%~98.5%（rpoB）8、5.2%~93.2%（infB）和98.3%~98.8%（atpD）;分离株与国外鸡杆菌属其他种的同源性分别为84.3%~86.8%（rpoB）,83.1%~86.7%（infB）;鸡杆菌分离株与巴氏杆菌科其他代表属的同源性分别为77.4%~79.3%（rpoB）、78.2%~79.7%（infB）和83.5%~84.1%（atpD）。遗传进化分析显示,9株鸡杆菌河南分离株与鸭源鸡杆菌处于同一大分支之中。【结论】9株鸡杆菌河南分离株均为鸭源鸡杆菌。

关键词：鸡杆菌管家基因进化分析进化树

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我国部分地区蛋鸡群鸭源鸡杆菌血清流行病学调查

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中国预防兽医学报 2011年第2期33卷 114-117页

作者：王珊陈陆付仁一杨霞赵军高冬生李乔晶姚惠霞王川庆河南农业大学牧医工程学院/动物传染病实验室禽病研究所河南郑州450002

为了解鸭源鸡杆菌(Gallibacterium anatis)在我国部分地区鸡群中的感染状况,本实验采用***微量凝集试验对我国河南、山东和山西等不同地区的1 314份鸡血清样品进行了***感染的血清流行病学调查,对***的感染率、感染品种、日龄等进行分... 详细信息

为了解鸭源鸡杆菌(Gallibacterium anatis)在我国部分地区鸡群中的感染状况,本实验采用***微量凝集试验对我国河南、山东和山西等不同地区的1 314份鸡血清样品进行了***感染的血清流行病学调查,对***的感染率、感染品种、日龄等进行分析。结果表明:我国河南、山东和山西等地鸡群均存在***感染,其中***血清Ⅰ型抗体阳性率为11.95%,***血清Ⅱ型抗体阳性率为23.29%,***血清Ⅳ型抗体阳性率为9.82%。不同省份的鸡群感染***的血清阳性率存在一定差异,河南、山东和山西的血清阳性率分别为23.12%、25.27%和52.94%。对河南地区不同品种和日龄鸡的调查表明,均存在不同程度的感染,但血清阳性率有显著差异,表现为罗曼鸡的血清阳性率比海兰鸡高,开产前蛋鸡的血清阳性率低于开产后的血清阳性率。

关键词：蛋鸡群鸭源鸡杆菌血清阳性率流行病学调查

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河南及山西省21株鸡杆菌分离株16S rRNA基因序列分析

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中国兽医学报 2011年第11期31卷 1599-1604页

作者：高冬生刘红英杨霞赵军陈陆王新卫常洪涛姚慧霞迪丽拜尔.阿木提王川庆河南农业大学牧医工程学院动物传染病实验室禽病研究所河南郑州450002 阿克苏职业技术学院新疆阿克苏843000

对21株分离自河南及山西地区的鸡杆菌的16SrRNA基因序列进行研究,以此分析分离株的进化关系并确定其在鸡杆菌属中所属的具体种。采用PCR方法扩增其16SrRNA基因序列,然后克隆测序。用DNAStar软件对21个菌株的序列及GenBank中已公布的鸡... 详细信息

对21株分离自河南及山西地区的鸡杆菌的16SrRNA基因序列进行研究,以此分析分离株的进化关系并确定其在鸡杆菌属中所属的具体种。采用PCR方法扩增其16SrRNA基因序列,然后克隆测序。用DNAStar软件对21个菌株的序列及GenBank中已公布的鸡杆菌属相关菌株序列进行同源性比较,结果发现21株分离株之间的核苷酸序列同源性为96.0%～100%,同鸭源鸡杆菌F279(Gallibacterium anatis F279)(AF228002)的同源性为95.3%～99.3%,同输卵管炎鸡杆菌F150(Gallibacterium salpingitidis F150)(EU424000)的同源性为88.3%～91.5%,同虎皮鹦鹉鸡杆菌F450(Gallibacterium melopsittaci F450)(EU339196)的同源性为90.3%～93.3%,同海藻糖发酵鸡杆菌52-S3-90(Gallibacterium trehalosifermentans 52-S3-90)(EU339199)的同源性为88.2%～91.4%,同多杀性巴氏杆菌CCUG 179(*** CCUG 17977)(AF294411)的同源性为85.5%～88.8%,对21株细菌的序列同以上菌株的16SrRNA基因序列进行遗传进化树分析,显示21株细菌同鸭源鸡杆菌F279(AF228002)构成一个单独的大分支。结果表明,所有分离株均属于鸭源鸡杆菌,首次大量报道了来源于河南、山西省不同地区的鸡杆菌的16SrRNA基因序列,为鸡杆菌分类的研究提供了参考。

关键词：鸡杆菌鸭源鸡杆菌 16S rRNA 克隆测序同源性比较系统进化分析

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