检索结果-内蒙古大学图书馆

利用CRISPR-Cas9技术和Cre/loxP系统构建猪伪狂犬病病毒gE基因缺失疫苗株

畜牧与兽医 2020年第10期52卷 115-120页

作者：史志斌马宁宁刘占王永生陈陆河南农业大学牧医工程学院动物传染病教研室河南郑州450046

通过对4株伪狂犬病病毒(PRV)流行株进行比较,选择免疫原性最高的HNQYY2012为亲本株,利用CRISPR-Cas9技术和Cre/loxP系统构建带有LoxP位点的HNQYY2012ΔgE/EGFP^+,然后利用环化重组酶(Cre)去除增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因,构建PRV gE... 详细信息

通过对4株伪狂犬病病毒(PRV)流行株进行比较,选择免疫原性最高的HNQYY2012为亲本株,利用CRISPR-Cas9技术和Cre/loxP系统构建带有LoxP位点的HNQYY2012ΔgE/EGFP^+,然后利用环化重组酶(Cre)去除增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因,构建PRV gE基因缺失株HNQYY2012ΔgE。PCR鉴定和测序结果表明,PRV gE基因缺失株构建成功;一步生长曲线表明,HNQYY2012ΔgE增殖速度慢于亲本株,但最高滴度与亲本株相近;HNQYY2012ΔgE和亲本株对小鼠的半数致死量分别为10^3.8TCID50和10^2.5TCID50,表明gE基因缺失株毒力降低。制备的灭活疫苗免疫小鼠能完全抵御5LD50和10LD50强毒攻毒。本文利用CRISPR-Cas9技术和Cre/loxP系统成功构建PRV gE基因缺失株HNQYY2012ΔgE,为猪伪狂犬病灭活疫苗的研制提供了参考。

关键词：猪伪狂犬病灭活疫苗 gE基因缺失 CRISPR-Cas9 Cre/loxP系统免疫效力

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影响TAP肽转运PRV蛋白的生物信息学分析

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中国病原生物学杂志 2019年第12期14卷 1386-1393页

作者：马宁宁刘占史志斌赵小月邓梦梦郭子仪陈陆河南农业大学牧医工程学院预防兽医系动物传染病教研室河南郑州150000

目的利用生物信息学分析抑制抗原加工相关转运体(TAP)肽转运的伪狂犬病病毒(PRV)蛋白。方法和用在线分析软件分析HSV-1 ICP47,BoHV-1 *** *** *** CPXV012等5种已知TAP抑制剂的理化性质、疏水性跨膜域、磷酸化修饰、亚细胞定位、信号肽... 详细信息

目的利用生物信息学分析抑制抗原加工相关转运体(TAP)肽转运的伪狂犬病病毒(PRV)蛋白。方法和用在线分析软件分析HSV-1 ICP47,BoHV-1 *** *** *** CPXV012等5种已知TAP抑制剂的理化性质、疏水性跨膜域、磷酸化修饰、亚细胞定位、信号肽、二级结构等,筛选出与几种TAP抑制剂相似的PRV蛋白,并对TAP抑制剂和筛选出的PRV蛋白进行同源比对及三级结构预测和分析比较。结果筛选出与TAP抑制剂BoHV-1 UL49.5同样存在--个信号肽、两个跨膜域、主要定位于内质网且核背酸同源性为52.0%的疏水性蛋白PRV gN(UL49.5),以及与HCMV US6同样存在一个信号肽、一个跨膜域、主要定位于质膜和内质网且核昔酸同源性分别为44.9%和47.1%的亲水性蛋白PRV gD(US6)和PRV gC(UL44)。筛选蛋白与同源性较高的TAP抑制剂理化性质、亚细胞定位,跨膜域、二级结构等基本类似。结论PRV蛋白的gN(UIL49.5)、gD(US6)和gC(UL44)可能影响TAP的肽转运功能,本研究为揭示TAP介导的PRV蛋白免疫逃逸机制和为与TAP相关的靶向治疗研究提供了理论基础。

关键词： TAP抑制剂 PRV蛋白生物信息学

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河南省猪场蚊虫中Ⅰ、Ⅲ型乙型脑炎病毒的分离及鉴定

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中国兽医学报 2012年第4期32卷 556-559页

作者：杨猛张金来陈陆河南农业大学牧医工程学院动物传染病实验室禽病研究所河南郑州450002

用Vero细胞对2010年河南省采集的猪舍蚊虫标本进行病毒分离,对新分离的乙型脑炎病毒(JEV)进行分子生物学鉴定,并对其PrM基因进行克隆、测序及病毒进化分析。结果显示,从采集的蚊虫标本中分离到1株基因Ⅰ型JEV(HN10-1)和1株基因Ⅲ型JEV(H... 详细信息

用Vero细胞对2010年河南省采集的猪舍蚊虫标本进行病毒分离,对新分离的乙型脑炎病毒(JEV)进行分子生物学鉴定,并对其PrM基因进行克隆、测序及病毒进化分析。结果显示,从采集的蚊虫标本中分离到1株基因Ⅰ型JEV(HN10-1)和1株基因Ⅲ型JEV(HN10-2)。结果表明,河南省同时存在Ⅰ、Ⅲ2种基因型JEV的传播和流行。

关键词：乙型脑炎病毒分离鉴定基因分型

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鸭源鸡杆菌对SPF雏鸡的感染特性研究

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中国预防兽医学报 2012年第5期34卷 379-383页

作者：李乔晶张九州杨霞常洪涛王珊皇甫和平姚惠霞迪丽拜尔·阿木提王川庆河南农业大学牧医工程学院/禽病研究所动物传染病实验室河南郑州450002 新疆阿克苏职业技术学院新疆阿克苏843000

为研究鸭源鸡杆菌的流行病学特性,本研究采用从自然病例分离得到的鸭源鸡杆菌人工感染4日龄SPF雏鸡,通过形态学、PCR、荧光定量PCR和组织学等方法分别对感染后SPF雏鸡的组织脏器进行了细菌分离、检测和鉴定,用ELISA对其血清抗体水平进... 详细信息

为研究鸭源鸡杆菌的流行病学特性,本研究采用从自然病例分离得到的鸭源鸡杆菌人工感染4日龄SPF雏鸡,通过形态学、PCR、荧光定量PCR和组织学等方法分别对感染后SPF雏鸡的组织脏器进行了细菌分离、检测和鉴定,用ELISA对其血清抗体水平进行检测。结果表明,人工感染鸡无临床症状,组织学检查感染鸡的肝脏、气管和肺脏组织均有损伤。人工感染后第3 d和同居感染第2 d鸡体内可分离出鸭源鸡杆菌,人工感染后第96 d仍能够分离到鸡杆菌。ELISA方法证实人工感染后47 d和同居后32 d出现抗体高峰,持续2～3周,人工感染组和同居组抗体水平均高于对照组(p<0.05);荧光定量PCR检测病料结果显示人工感染组和同居组的气管组织中细菌含量最高。本研究表明雏鸡在4日龄即可感染鸭源鸡杆菌,并能通过同居传播,长期带菌、排菌;感染后抗体产生缓慢、持续期短。本研究为鸭源鸡杆菌的流行病学、致病机理研究及防治措施的制定等提供了参考依据。

关键词：鸡杆菌 SPF雏鸡人工感染同居感染带菌排菌期

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稳定分泌抗羊种布鲁菌脂多糖单克隆抗体细胞株的筛选与应用

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畜牧兽医学报 2012年第2期43卷 290-298页

作者：王艳王新卫陈陆赵军杨霞王珊王川庆迪丽拜尔.阿木提河南农业大学牧医工程学院动物传染病实验室/禽病研究所郑州450002 新疆维吾尔自治区阿克苏职业技术学院阿克苏843000

研制抗羊种布鲁菌脂多糖抗原的单克隆抗体,并应用其建立检测布病的双夹心ELISA方法。本研究采用热酚水法提纯羊种布鲁菌(16M菌株)的脂多糖抗原,并经SDS-PAGE鉴定。用脂多糖和灭活的羊种布鲁菌16M作为免疫抗原,交替免疫6～8周龄BALB/c雌... 详细信息

研制抗羊种布鲁菌脂多糖抗原的单克隆抗体,并应用其建立检测布病的双夹心ELISA方法。本研究采用热酚水法提纯羊种布鲁菌(16M菌株)的脂多糖抗原,并经SDS-PAGE鉴定。用脂多糖和灭活的羊种布鲁菌16M作为免疫抗原,交替免疫6～8周龄BALB/c雌鼠,第1次免疫用羊种布鲁菌标准菌16M全菌加等量弗氏完全佐剂;第2次免疫用脂多糖加等量弗氏不完全佐剂。将脂多糖作为包被抗原建立间接ELISA方法,筛选针对抗羊种布鲁菌(16M菌株)脂多糖的单克隆抗体杂交瘤细胞株。筛选出3株能稳定分泌抗羊种布鲁菌脂多糖单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为5H3、6B8和3H7,细胞培养上清的ELISA效价在1∶1 000～1∶5 000,小鼠腹水单克隆抗体ELISA效价在1∶10 000～1∶160 000;抗体亚类鉴定表明:5H3、6B8属于IgM亚类,3H7属于IgG3亚类;特异性试验结果显示:3株杂交瘤细胞分泌的抗体不与大肠杆菌O157裂解抗原、鸡白痢沙门氏菌裂解抗原、鸭源鸡杆菌脂多糖抗原以及福氏志贺菌裂解抗原反应,仅与灭活的羊种布鲁菌(16M)发生反应。布鲁菌虎红平板凝集试验和试管凝集试验检测结果显示,获得的单抗可与标准检测抗原形成明显的颗粒凝集物和伞状凝集物。利用所建立的单克隆抗体细胞株,建立了一种检测布鲁菌的双夹心间接ELISA方法,并进行了特异性和敏感性检测。对模拟样品和临床样品进行检测,准确性均很高。

关键词：羊布鲁菌脂多糖抗原酶联免疫吸附试验单克隆抗体杂交瘤细胞

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河北省鸡群鸭源鸡杆菌血清流行病学调查

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河南农业科学 2012年第2期41卷 132-135页

作者：李乔晶张九州姬郭彪韩庆安王川庆河南农业大学牧医工程学院/动物传染病实验室禽病研究所河南郑州450002 河北省畜牧局动物疾控中心河北石家庄050030

为了解鸭源鸡杆菌(Gallibacterium anatis)在河北省鸡群中的感染状况,采用乳胶凝集试验对河北省10个不同地市的677份鸡血清样品进行了鸭源鸡杆菌的血清流行病学调查,对鸭源鸡杆菌的感染率进行分析。结果表明:河北省不同地区鸡群均存在... 详细信息

为了解鸭源鸡杆菌(Gallibacterium anatis)在河北省鸡群中的感染状况,采用乳胶凝集试验对河北省10个不同地市的677份鸡血清样品进行了鸭源鸡杆菌的血清流行病学调查,对鸭源鸡杆菌的感染率进行分析。结果表明:河北省不同地区鸡群均存在鸭源鸡杆菌感染,平均阳性率为48.60%,其中血清Ⅰ型抗体阳性率为29.54%,血清Ⅱ型抗体阳性率为29.69%,血清Ⅳ型抗体阳性率为22.16%。不同地市的鸡群血清阳性率存在一定差异,其中张家口和石家庄的鸭源鸡杆菌血清阳性率较高,分别为72.73%和80.95%。

关键词：河北省鸡群鸭源鸡杆菌流行病学调查乳胶凝集试验血清阳性率

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河南省猪场蚊虫中Ⅰ、Ⅲ型乙型脑炎病毒的分离及鉴定

河南省猪场蚊虫中Ⅰ、Ⅲ型乙型脑炎病毒的分离及鉴定

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会

作者：杨猛张金来赵军常洪涛王川庆陈陆河南农业大学牧医工程学院动物传染病实验室禽病研究所

目的对2010年河南省采集的猪舍蚊虫标本进行乙型脑炎病毒(JEV)的分离、鉴定并确定其基因分型。方法用Vero细胞对2010年采集的蚊虫标本进行病毒分离,对新分离的乙型脑炎病毒进行分子生物学鉴定,并对其PrM基因进行克隆、测序及病毒进化分... 详细信息

目的对2010年河南省采集的猪舍蚊虫标本进行乙型脑炎病毒(JEV)的分离、鉴定并确定其基因分型。方法用Vero细胞对2010年采集的蚊虫标本进行病毒分离,对新分离的乙型脑炎病毒进行分子生物学鉴定,并对其PrM基因进行克隆、测序及病毒进化分析。结果从采集的蚊虫标本中分离到一株基因Ⅰ型乙型脑炎病毒(HN10-1)和一株基因Ⅲ型乙型脑炎病毒(HN10-2)。结论河南省同时分离到基因Ⅰ型和Ⅲ型乙型脑炎病毒。

关键词：乙型脑炎病毒分离鉴定基因分型

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鸭源鸡杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

鸭源鸡杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十六次学术研讨会

作者：李乔晶杨霞王珊赵军张九州常洪涛姬郭彪王新卫王川庆河南农业大学牧医工程学院动物传染病实验室禽病研究所

引言鸭源鸡杆菌(***)是巴氏杆菌科、鸡杆菌属的代表种。有报道表明鸭源鸡杆菌与鸡的输卵管囊肿密切相关,能引起开产鸡蛋质和产蛋量的下降。国内外对于鸭源鸡杆菌的血清学研究较少。目前检测鸡血清中鸭源鸡杆菌的抗体方法有乳胶凝集实验... 详细信息

引言鸭源鸡杆菌(***)是巴氏杆菌科、鸡杆菌属的代表种。有报道表明鸭源鸡杆菌与鸡的输卵管囊肿密切相关,能引起开产鸡蛋质和产蛋量的下降。国内外对于鸭源鸡杆菌的血清学研究较少。目前检测鸡血清中鸭源鸡杆菌的抗体方法有乳胶凝集实验,平板凝集实验等,虽然这些方法操作简单,但受多种因素影响敏感性低。ELISA具有特异、灵敏、稳定、快速等优点,已被越广泛用于各种病原及抗体的检测。本研究以超声裂解分离株菌液作为包被抗原,建立检测抗体的间接ELISA方法,为临床诊断、流行病学调查及相关研究提供有效检测手

关键词：鸭源鸡杆菌微量凝集试验 ELISA 检测方法

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河北省鸡群鸭源鸡杆菌血清流行病学调查

河北省鸡群鸭源鸡杆菌血清流行病学调查

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十六次学术研讨会

作者：李乔晶张九州姬郭彪韩庆安王川庆河南农业大学牧医工程学院/动物传染病实验室禽病研究所河北省畜牧局动物疾控中心

引言鸡杆菌属(Gallibacterium)是巴氏杆菌科中一个新成立的属,包括鸭源鸡杆菌(Gallibacterium anatis),虎皮鹦鹉鸡杆菌(Gallibacterium melopsittaci),海藻糖发酵鸡杆菌(Gallibacterium trehalosifermentans)和输卵管炎鸡杆菌(Gallibacterium salpingitidis)。鸭源鸡杆菌是其代表种,包括溶血性鸭源鸡杆菌(*** haemolytica,GAH)和鸭子鸭源鸡杆菌(*** anatis)两个生物变型。另外,鸡杆菌基因种1和2以及16S rRNA群Ⅲ(鸡杆菌基因种3)和Ⅴ(鸡杆菌类群Ⅴ)经过验证也被列鸡杆菌属的成员。目前已鉴定的鸡杆菌有24个血清型,其中有3个致病性血清型(Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅳ型),而且各血

关键词：鸭源鸡杆菌流行病学调查河北省

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鸡杆菌河南分离株的分子进化分析

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2011年第6期39卷 8-14页

作者：张金来杨猛陈陆付仁一杨霞赵军王川庆王泽霖河南农业大学牧医工程学院动物传染病实验室禽病研究所河南郑州450002

【目的】确定鸡杆菌河南分离株的具体种属和进化地位。【方法】以9株鸡杆菌河南分离株为研究对象,根据GenBank上登录的相关序列,针对鸡杆菌3个管家基因rpoB、infB和atpD设计引物,并进行PCR扩增、克隆和序列测定分析;将9株鸡杆菌的3个管... 详细信息

【目的】确定鸡杆菌河南分离株的具体种属和进化地位。【方法】以9株鸡杆菌河南分离株为研究对象,根据GenBank上登录的相关序列,针对鸡杆菌3个管家基因rpoB、infB和atpD设计引物,并进行PCR扩增、克隆和序列测定分析;将9株鸡杆菌的3个管家基因部分核苷酸序列,与已知的鸡杆菌属和巴氏杆菌科其他属相关参考株的相应基因序列进行比较分析并构建进化树。【结果】扩增出rpoBi、nfB和atpD3个管家基因部分序列,长度分别为566,531和1 441 bp,将测序结果登陆到GenBank。鸡杆菌分离株间的同源性分别为98.3%~100%（rpoB）、90.5%~100%（infB）和98.3%~100%（atpD）;分离株与国外鸭源鸡杆菌分离株间的同源性分别为97.1%~98.5%（rpoB）8、5.2%~93.2%（infB）和98.3%~98.8%（atpD）;分离株与国外鸡杆菌属其他种的同源性分别为84.3%~86.8%（rpoB）,83.1%~86.7%（infB）;鸡杆菌分离株与巴氏杆菌科其他代表属的同源性分别为77.4%~79.3%（rpoB）、78.2%~79.7%（infB）和83.5%~84.1%（atpD）。遗传进化分析显示,9株鸡杆菌河南分离株与鸭源鸡杆菌处于同一大分支之中。【结论】9株鸡杆菌河南分离株均为鸭源鸡杆菌。

关键词：鸡杆菌管家基因进化分析进化树

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