检索结果-内蒙古大学图书馆

肿瘤 2015年第11期35卷 1208-1215页

作者：吴素霞张赛男李伟华杨菲冯世明柴立辉河南大学医学院抗体药物河南省工程实验室河南省细胞与分子免疫学医学重点实验室河南开封475004 河南大学第一附属医院检验科河南开封475001

目的 :通过沉默肿瘤坏死因子α诱导的蛋白8(tumor necrosis factor alpha induced protein 8,TNFAIP8,TIPE)的表达,研究其对宫颈癌He La细胞生物学特性的影响,并探讨TNFAIP8在He La细胞增殖、迁移及凋亡中可能的作用机制。方法 :构建特... 详细信息

目的 :通过沉默肿瘤坏死因子α诱导的蛋白8(tumor necrosis factor alpha induced protein 8,TNFAIP8,TIPE)的表达,研究其对宫颈癌He La细胞生物学特性的影响,并探讨TNFAIP8在He La细胞增殖、迁移及凋亡中可能的作用机制。方法 :构建特异性针对TNFAIP8基因的慢病毒载体,感染He La细胞后沉默TNFAIP8基因的表达,分别采用实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测TNFAIP8 m RNA及蛋白在He La细胞中的表达情况。划痕实验及平板克隆形成实验检测沉默TNFAIP8基因表达对He La细胞的迁移和增殖能力的影响。MTT法及锥虫蓝染色计数法检测血清饥饿处理后He La细胞的存活能力,FCM法检测血清饥饿状态下He La细胞的凋亡情况。结果 :实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测结果表明,TNFAIP8-shR NA转入HeL a细胞后,TNFAIP8 mR NA(P<0.05)及蛋白的表达水平均被明显下调。划痕实验和克隆形成实验结果显示,沉默TNFAIP8基因在HeL a细胞中的表达,明显抑制了HeL a细胞的迁移和增殖能力(P值均<0.05)。血清饥饿处理后的HeL a细胞中,TNFAIP8沉默组细胞的存活能力显著降低,而凋亡率显著增加(P值均<0.05)。结论 :TNFAIP8作为一种致癌基因能促进人宫颈癌He La细胞的迁移和增殖,并抑制He La细胞的凋亡。

关键词：宫颈肿瘤肿瘤坏死因子α诱导的蛋白8 RNA,小分子干扰细胞增殖细胞凋亡

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沉默TNFAIP8对巨噬细胞功能的影响及其分子机制

沉默TNFAIP8对巨噬细胞功能的影响及其分子机制

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第十届全国免疫学学术大会

作者：杨菲冯世明柴立辉马远方河南大学医学院抗体药物河南省工程实验室河南省细胞与分子免疫学医学重点实验室

研究背景:肿瘤坏死因子α诱导蛋白8(tumor necrosis factor alpha-induced protein8,TNFAIP8,TIPE)是一种分子量为21k Da的胞浆蛋白,在细胞凋亡、肿瘤细胞增生、侵袭及转移等过程中具有重要调节作用。除了在肿瘤组织中高表达,TNFAIP8还... 详细信息

研究背景:肿瘤坏死因子α诱导蛋白8(tumor necrosis factor alpha-induced protein8,TNFAIP8,TIPE)是一种分子量为21k Da的胞浆蛋白,在细胞凋亡、肿瘤细胞增生、侵袭及转移等过程中具有重要调节作用。除了在肿瘤组织中高表达,TNFAIP8还高表达在免疫器官和淋巴组织中,但其在免疫系统中的功能目前还不清楚。研究目的 :沉默TNFAIP8在RAW264.7细胞中表达,观察TNFAIP8对巨噬细胞活化及功能的影响,并分析其分子机制。方法 :构建慢病毒载体,沉默TNFAIP8在RAW264.7细胞中的表达,通过显微镜观察RAW264.7细胞的形态及黏附能力、平板克隆实验检测RAW264.7细胞的增殖能力、趋化实验观察RAW264.7细胞的迁移能力、抗原吞噬实验检测RAW264.7细胞的抗原摄取能力、ELISA试剂盒检测RAW264.7细胞分泌细胞因子的水平,分析沉默TNFAIP8对RAW264.7细胞功能的影响;Western Blot检测MEK-Erk信号通路中相关信号分子的活化,分析TNFAIP8影响巨噬细胞功能的分子机制。结果 :体外沉默TNFAIP8的表达可以抑制RAW264.7细胞的伪足形成,接种2h后黏附到培养皿底面上的细胞数量显著减少;和对照组细胞相比,沉默TNFAIP8的RAW264.7细胞其增殖能力、迁移能力、抗原摄取能力均显著下降。而且,沉默TNFAIP8还显著降低了LPS刺激24h后,RAW264.7细胞培养上清中细胞因子IL-1β,IL-6,TNFα的分泌水平。Western blot结果表明沉默TNFAIP8明显抑制了c-Raf、Erk1/2等的磷酸化水平。结论 :TNFAIP8在巨噬细胞活化和迁移过程中具有重要的调节作用,这种调节作用是通过影响MEK-Erk信号通路中相关信号分子的活化来实现的。

关键词： TNFAIP8 巨噬细胞固有免疫 MAPK

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沉默TNFAIP8对巨噬细胞功能的影响及其分子机制

沉默TNFAIP8对巨噬细胞功能的影响及其分子机制

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中国免疫学会第十届全国免疫学学术大会

作者：杨菲冯世明柴立辉马远方河南大学医学院抗体药物河南省工程实验室河南省细胞与分子免疫学医学重点实验室

研究背景：肿瘤坏死因子α诱导蛋白8 (tumor necrosis factor alpha-induced protein8,TNFAIP8,TIPE)是一种分子量为21kDa的胞浆蛋白,在细胞凋亡、肿瘤细胞增生、侵袭及转移等过程中具有重要调节作用。除了在肿瘤组织中高表达,TNFAIP8... 详细信息

研究背景：肿瘤坏死因子α诱导蛋白8 (tumor necrosis factor alpha-induced protein8,TNFAIP8,TIPE)是一种分子量为21kDa的胞浆蛋白,在细胞凋亡、肿瘤细胞增生、侵袭及转移等过程中具有重要调节作用。除了在肿瘤组织中高表达,TNFAIP8还高表达在免疫器官和淋巴组织中,但其在免疫系统中的功能目前还不清楚。

关键词： TNFAIP8 巨噬细胞固有免疫 MAPK

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炎症小体在高糖诱导心肌损伤中的作用及机制

炎症小体在高糖诱导心肌损伤中的作用及机制

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第十届全国免疫学学术大会

作者：陈希张海龙王耀辉抗体药物河南省工程实验室河南大学医学院河南省抗体药物国际联合实验室河南大学医学院细胞与分子免疫重点实验室河南大学医学院

目的 :通过建立体内外高糖损伤模型,研究NLRP3炎症小体是否参与高糖诱导的心肌损伤及其作用机制。方法:(1)用不同浓度葡萄糖处理大鼠心肌细胞,分为control组(5.5m M),MG组(25m M,)及HG组(35m M,),建立高糖损伤细胞模型,分别处理24h、36h... 详细信息

目的 :通过建立体内外高糖损伤模型,研究NLRP3炎症小体是否参与高糖诱导的心肌损伤及其作用机制。方法:(1)用不同浓度葡萄糖处理大鼠心肌细胞,分为control组(5.5m M),MG组(25m M,)及HG组(35m M,),建立高糖损伤细胞模型,分别处理24h、36h、48h。(2)测定细胞上清中LDH含量及MTT值,检测细胞损伤及活力;TUNEL及流式检测细胞的凋亡情况;(3)Western Blotting及RT-PCR检测NLRP3及相关蛋白ASC、caspase-1、IL-1β及细胞色素c的表达;(4)应用caspase-1、ROS、细胞色素c抑制剂,以及联合ROS和细胞色素c抑制剂后,检测细胞损伤及蛋白表达变化。(5)体内建立高糖损伤动物模型,检测心肌损伤及应用抑制剂后心肌变化。结果 :(1)MG和HG组细胞损伤加重;活力逐渐降低;凋亡程度加重,48小时最显著。(2)MG及HG组NLRP3、ASC、caspase-1及IL-1β表达上调,细胞色素c从线粒体释放到胞浆中,48h最明显;m RNA相对表达量也增加。(3)应用caspase-1抑制剂(Z-YVAD-FMK)后,NLRP3及相关蛋白表达降低。(4)分别应用ROS抑制剂NAC及细胞色素c抑制剂(Cyclosporin A)后,NLRP3及相关蛋白表达均降低。(5)联合应用NAC及Cyclosporin A后,NLRP3及相关蛋白进一步下调,说明两者具有协同效应。结论 :(1)高糖对心肌细胞具有明显的损伤作用。(2)高糖通过激活线粒体产生ROS及细胞色素c诱导心肌细胞NLRP3炎症小体活化,进而促进其下游炎症相关蛋白的表达和释放。(3)caspase-1反馈调节NLRP3、ASC,相互作用,共同影响炎症小体对心肌的损伤。

关键词：高糖活性氧细胞色素c 炎症小体心肌细胞

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炎症小体在高糖诱导心肌损伤中的作用及机制

炎症小体在高糖诱导心肌损伤中的作用及机制

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中国免疫学会第十届全国免疫学学术大会

作者：陈希张海龙王耀辉抗体药物河南省工程实验室河南大学医学院开封475004中国河南省抗体药物国际联合实验室河南大学医学院开封475004中国细胞与分子免疫重点实验室河南大学医学院开封475004中国

目的：通过建立体内外高糖损伤模型,研究NLRP3炎症小体是否参与高糖诱导的心肌损伤及其作用机制.方法：(1)用不同浓度葡萄糖处理大鼠心肌细胞,分为control组(5.5mM),MG组(25mM,)及HG组(35mM,),建立高糖损伤细胞模型,分别处理24h、36h、48h.

关键词：高糖活性氧细胞色素c 炎症小体心肌细胞

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破骨细胞抑制凝集素相关蛋白2对小鼠内毒素血症的保护作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2014年第9期34卷 657-661页

作者：吴素霞柴立辉杨菲李伟华谷敬丽马远方抗体药物河南省工程实验室、河南大学医学院细胞与分子免疫学实验室开封475004

目的：研究重组破骨细胞抑制凝集素相关蛋白2胞外段蛋白（OCILRP2-Fc）阻断OCILRP2受体信号对LPS诱导的内毒素血症的影响，探讨OCILRP2受体在机体炎症反应中的作用。方法荧光定量RT-PCR检测LPS刺激前后OCILRP2在RAW264．7细胞的表达；... 详细信息

目的：研究重组破骨细胞抑制凝集素相关蛋白2胞外段蛋白（OCILRP2-Fc）阻断OCILRP2受体信号对LPS诱导的内毒素血症的影响，探讨OCILRP2受体在机体炎症反应中的作用。方法荧光定量RT-PCR检测LPS刺激前后OCILRP2在RAW264．7细胞的表达；小鼠腹腔注射20mg/kg体重的LPS诱导内毒素血症的发生，分析OCILRP2-Fc对内毒素血症小鼠存活率的影响；称量小鼠脾脏重量分析脾脏充血肿大情况；HE染色观察肺脏、肝脏组织病理损伤情况；ELISA检测小鼠血清中炎症性细胞因子的水平；Westernblot检测LPS刺激前后巨噬细胞中NF-κB的活化。结果荧光定量RT-PCR结果表明LPS刺激显著提高了OCILRP2在小鼠巨噬细胞的表达（P＜0．05）；与对照组相比，OCILRP2-Fc可以显著提高内毒素血症小鼠的存活率；减轻小鼠脾脏肿大程度和内毒素血症对肺脏和肝脏组织造成的病理损伤；降低血清中细胞因子IL-6、IL-12、TNF-α和IFN-γ的浓度（P＜0．05）。Westernblot结果表明OCILRP2-Fc抑制LPS诱导的RAW264．7细胞内IκB的降解和NF-κBp65的磷酸化。结论采用OCILRP2-Fc阻断OCILRP2受体信号，减轻了小鼠内毒素血症对机体造成的炎症性损伤，提示OCILRP2在LPS诱导的炎症反应发生过程中具有促进作用。

关键词：脂多糖内毒素血症破骨细胞抑制凝集素相关蛋白2 核因子-κB

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破骨细胞抑制凝集素相关蛋白2的真核表达及多克隆抗体制备

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中国免疫学杂志 2014年第10期30卷 1374-1377,1392页

作者：吴素霞柴立辉王战争刘广超田文志马远方抗体药物河南省工程实验室河南大学医学院细胞与分子免疫学实验室开封475004

目的:为了获得真核表达的重组蛋白OCILRP2-Fc和OCILRP2特异性抗体,用于OCILRP2生物学功能的进一步研究。方法:构建了融合人IgG Fc段的小鼠OCILRP2真核表达载体pIg-CD5-OCILRP2,将pIg-CD5-OCILRP2转染CHO细胞,G418筛选稳定表达细胞株;Pro... 详细信息

目的:为了获得真核表达的重组蛋白OCILRP2-Fc和OCILRP2特异性抗体,用于OCILRP2生物学功能的进一步研究。方法:构建了融合人IgG Fc段的小鼠OCILRP2真核表达载体pIg-CD5-OCILRP2,将pIg-CD5-OCILRP2转染CHO细胞,G418筛选稳定表达细胞株;Protein A亲和层析从CHO细胞培养上清中纯化重组蛋白OCILRP2-Fc并免疫家兔制备OCILRP2多克隆抗体。ELISA检测抗血清和多克隆抗体的效价,Western blot验证多克隆抗体的特异性,并应用该抗体检测OCILRP2在树突状细胞(Dendritic cells,DC)中的表达。结果:ELISA结果表明OCILRP2-Fc稳定表达细胞株经过多次传代培养后仍然具有较高的蛋白表达水平;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示纯化后的蛋白只有单一条带出现,且该条带可以被抗人IgG检测到;重组蛋白OCILRP2-Fc免疫家兔获得的抗血清和纯化后得到的OCILRP2多克隆抗体效价分别为1∶1 280 000和1∶320 000,Western blot证明该抗体可以和免疫原OCILRP2-Fc及NIH/3T3细胞中表达的OCILRP2特异性结合。应用该抗体检测OCILRP2在DC的表达发现OCILRP2在成熟DC的表达明显高于不成熟DC。结论:获得了真核表达的重组蛋白OCILRP2-Fc和高效价的OCILRP2特异性抗体,为进一步研究OCILRP2在免疫应答中的功能奠定了基础。

关键词： C型凝集素相关蛋白真核表达多克隆抗体树突状细胞

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OCILRP2-Fc对小鼠内毒素血症的保护作用

OCILRP2-Fc对小鼠内毒素血症的保护作用

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第九届全国免疫学学术大会

作者：杨菲柴立辉吴素霞李伟华马远方抗体药物河南省工程实验室河南大学医学院细胞与分子免疫学实验室

研究背景:固有免疫系统识别病原菌的成分尤其是革兰阴性菌的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)可以启动机体的炎症反应,严重时可发生败血症,导致感染性休克、多器官功能衰竭、弥漫性血管内凝血等。通过干扰LPS对效应细胞如树突状细胞(dend... 详细信息

研究背景:固有免疫系统识别病原菌的成分尤其是革兰阴性菌的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)可以启动机体的炎症反应,严重时可发生败血症,导致感染性休克、多器官功能衰竭、弥漫性血管内凝血等。通过干扰LPS对效应细胞如树突状细胞(dendritic cells,DC)和巨噬细胞的激活,调节固有免疫细胞的活化和下调过度的炎症反应是目前败血症治疗中的一个重要方向。目的:研究OCILRP2-Fc阻断OCILRP2受体信号对LPS诱导的内毒素血症的影响,探讨OCILRP2受体在机体炎症反应中的作用。方法:荧光定量RT-PCR检测LPS刺激前后OCILRP2在RAW264.7巨噬细胞的表达;小鼠腹腔注射20mg/kg体重的LPS诱导内毒素血症的发生,分析OCILRP2-Fc对内毒素血症小鼠存活率的影响;HE染色观察肺脏、肝脏组织病理损伤情况;ELISA检测小鼠血清中炎症性细胞因子的水平;western blot检测LPS刺激前后巨噬细胞中NF-κB的活化。结果:荧光定量RT-PCR结果表明LPS刺激显著提高了OCILRP2在小鼠巨噬细胞的表达(p<0.05);与对照组相比,OCILRP2-Fc可以显著提高内毒素血症小鼠的存活率;减轻小鼠脾脏肿大程度和内毒素血症对肺脏和肝脏组织造成的病理损伤;降低血清中细胞因子IL-1β、IL-6、IL-12和TNFα的浓度(p<0.05)。western blot结果表明OCILRP2-Fc抑制了LPS诱导的巨噬细胞中I-κB的降解和NF-κB p65的磷酸化。结论:采用OCILRP2-Fc阻断OCILRP2受体信号,减轻了小鼠内毒素血症对机体造成的炎症性损伤,提示OCILRP2在LPS诱导的内毒素血症发生中具有促进作用。

关键词：脂多糖败血症破骨细胞抑制凝集素相关蛋白2 核因子-κB

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OCILRP2-Fc抑制小鼠树突状细胞的发育成熟

OCILRP2-Fc抑制小鼠树突状细胞的发育成熟

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第九届全国免疫学学术大会

作者：李伟华柴立辉吴素霞杨菲刘广超马远方抗体药物河南省工程实验室河南大学医学院细胞与分子免疫学实验室

研究背景:树突状细胞(dendritic cells,DC)是体内唯一能够激活初始T淋巴细胞的抗原提呈细胞,在连接固有免疫和适应性免疫中起桥梁作用。DC的发育分化是一个十分复杂的过程,许多因素参与调控DC的发育分化过程。破骨细胞抑制凝集素相关蛋... 详细信息

研究背景:树突状细胞(dendritic cells,DC)是体内唯一能够激活初始T淋巴细胞的抗原提呈细胞,在连接固有免疫和适应性免疫中起桥梁作用。DC的发育分化是一个十分复杂的过程,许多因素参与调控DC的发育分化过程。破骨细胞抑制凝集素相关蛋白2(Osteoclast Inhibitory Lectin Related Protein 2,OCILRP2)是由217个氨基酸残基组成的Ⅱ型跨膜蛋白,选择性表达在淋巴组织、活化的淋巴细胞和DC,虽然OCILRP2高表达在DC,但有关OCILRP2在DC分化成熟中的作用目前还鲜有报道。目的:采用OCILRP2胞外段蛋白OCILRP2-Fc阻断OCILRP2受体,探讨OCILRP2对小鼠树突状细胞发育成熟的影响及其机制。方法:分离培养小鼠骨髓来源的树突状细胞(BMDC),荧光定量RT-PCR和流式细胞术检测LPS刺激前后OCILRP2在BMDC的表达差异;流式细胞术分析OCILRP2-Fc对BMDC细胞表面标志分子的表达以及对BMDC抗原摄取能力的影响;ELISA检测培养上清中细胞因子的浓度分析OCILRP2-Fc对BMDC分泌炎性细胞因子的影响;western blot检测LPS刺激前后巨噬细胞中NF-κB的活化分析OCILRP2-Fc影响BMDC成熟的分子机制。结果:荧光定量RT-PCR和流式细胞术结果均表明LPS可以上调OCILRP2在BMDC的表达(p<0.05);与对照组相比,OCILRP2-Fc可以明显抑制MHC-II类分子及共刺激分子CD80在LPS诱导的成熟DC的表达;和成熟DC相比,OCILRP2-Fc组BMDC经LPS诱导24h后仍然具有较强的抗原吞噬能力;OCILRP2-Fc处理组BMDC培养上清中炎性细胞因子IL-6、IL-12、TNF-α的浓度明显低于对照组(p<0.05)。western blot结果表明OCILRP2-Fc抑制LPS诱导的BMDC中I-κB的降解和NF-κBp65的磷酸化。结论:OCILRP2-Fc阻断OCILRP2受体信号,通过抑制LPS诱导的NF-κB活化影响小鼠BMDC的分化成熟。提示OCILRP2受体在BMDC的分化成熟过程中具有促进作用。

关键词：破骨细胞抑制凝集素相关蛋白2 树突状细胞脂多糖核因子кB

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OCILRP2-Fc对小鼠内毒素血症的保护作用

OCILRP2-Fc对小鼠内毒素血症的保护作用

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中国免疫学会第九届全国免疫学学术大会

作者：杨菲柴立辉吴素霞李伟华马远方抗体药物河南省工程实验室河南大学医学院细胞与分子免疫学实验室

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