检索结果-内蒙古大学图书馆

解剖学报 2014年第4期45卷 493-499页

作者：马瑾齐义军刘瑞敏王明张天朱晗马远方河南大学医学院细胞与分子免疫学重点实验室河南开封475004

目的分析鉴定与肝细胞癌(HCC)发生发展相关的差异表达的N-连接糖蛋白。方法应用刀豆蛋白凝集素(ConA)、晶状体凝集素(LCH)和雪花凝集素(GNA)组成的亲合层析柱富集10对HCC和癌旁非癌组织中N-连接糖蛋白、二维电泳(2DE)比较分析差异表达... 详细信息

目的分析鉴定与肝细胞癌(HCC)发生发展相关的差异表达的N-连接糖蛋白。方法应用刀豆蛋白凝集素(ConA)、晶状体凝集素(LCH)和雪花凝集素(GNA)组成的亲合层析柱富集10对HCC和癌旁非癌组织中N-连接糖蛋白、二维电泳(2DE)比较分析差异表达的蛋白质点、串联质谱鉴定差异表达蛋白,Western blotting验证人羧酸酯酶1(hCE1)、触珠蛋白(HP)及组织蛋白酶D(CD)的差异表达;体外侵袭实验检测CD表达沉默后对HCC的侵袭力影响。结果质谱、生物信息学等技术鉴定了28个与HCC相关的差异表达蛋白(HCC中高表达和低表达的蛋白均为14个),Western blotting验证hCE1、HP在HCC中明显低表达,组织蛋白酶D前体(pCD)在HCC中高表达;而ConA亲和层析柱富集的ConA-CD在HCC中显著高表达。CD-siRNA介导的CD表达沉默能够显著降低肝癌细胞系SNU449、SNU473的体外侵袭能力。结论 HP、hCE1蛋白表达变化和CD N-糖链变异可能参与了HCC发生发展过程。

关键词：原发性肝癌糖蛋白组织蛋白酶D 触珠蛋白人羧酸酯酶1 二维电泳质谱人

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TIPE2在类风湿关节炎发病中的表达及其意义

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中华微生物学和免疫学杂志 2013年第3期33卷 212-215页

作者：刘瑞敏孙颖川张爱红朱诗白白慧玲马远方河南大学医学院细胞与分子免疫学重点实验室开封475004

目的探讨TIPE2（tumor necrosis factor—α induced protein 8 like 2）在牛Ⅱ型胶原诱导的CIA模型小鼠脾脏及类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）患者的外周血淋巴细胞中的表达及其意义。方法使用牛Ⅱ型胶原免疫DBA-1／j小鼠，... 详细信息

目的探讨TIPE2（tumor necrosis factor—α induced protein 8 like 2）在牛Ⅱ型胶原诱导的CIA模型小鼠脾脏及类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）患者的外周血淋巴细胞中的表达及其意义。方法使用牛Ⅱ型胶原免疫DBA-1／j小鼠，建立CIA小鼠模型；半定量RT-PCR法检测CIA小鼠脾脏中TIPE2基因的表达变化，荧光定量RT-PCR检测患者和健康对照者新鲜分离的淋巴细胞中TIPE2基因的表达差异；Westernblot检测CIA小鼠脾脏及患者淋巴细胞中TIPE2蛋白表达差异。并研究TIPE2与类风湿关节炎患者病情活动程度的关系。结果CIA小鼠的脾脏细胞中和患者外周血淋巴细胞中TIPE2在mRNA和蛋白水平表达增强，此外类风湿患者在活动期TIPE2表达更高，差异有统计学意义。类风湿关节炎患者的TIPE2表达水平和DAS28评分成明显正相关（P〈0．001）。结论TIPE2参与了类风湿关节炎的发病过程，TIPE2可能是评价类风湿关节炎患者病情严重程度的标志物。

关键词：类风湿关节炎 TIPE2 自身免疫性疾病 CIA小鼠模型

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抗人DR5单克隆抗体对人肝细胞系HL7702的凋亡作用

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第5期22卷 641-643页

作者：张军马远方刘广超李淑莲卢锋河南大学医学院细胞与分子免疫学重点实验室河南开封475003

目的:探讨抗人DR5单克隆抗体(mDRA6)对人肝细胞系HL7702致凋亡的作用。方法:流式细胞术检测HL7702细胞表面DR5的表达。在荧光显微镜下观察mDRA6对HL7702细胞形态变化的影响;MTT法检测mDRA6的细胞毒性作用;AnnexinVFITC/PI双染法流式细... 详细信息

目的:探讨抗人DR5单克隆抗体(mDRA6)对人肝细胞系HL7702致凋亡的作用。方法:流式细胞术检测HL7702细胞表面DR5的表达。在荧光显微镜下观察mDRA6对HL7702细胞形态变化的影响;MTT法检测mDRA6的细胞毒性作用;AnnexinVFITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:mDRA6导致HL7702细胞呈现典型细胞凋亡的形态特征;MTT法检测显示在40mg/L浓度下可杀伤39%的细胞;经流式细胞术检测显示,3mg/L的mDRA6作用HL7702细胞6h导致25.5%的细胞发生凋亡。结论:mDRA6能够诱导人肝细胞系HL7702凋亡,mDRA6具有诱导细胞凋亡的活性。

关键词： DR5 单克隆抗体细胞凋亡

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小鼠MEF/Hsf1^(-/-)/Hsf1细胞系的重建及Hsf1,SV40T-ag蛋白的表达

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中国免疫学杂志 2014年第9期30卷 1218-1223页

作者：蒋杞英张智胡延忠王明丽马远方郑州大学基础医学院郑州450052 河南大学医学院细胞与分子免疫学重点实验室开封475004

目的:重建热休克转录因子1(Heat shock transcription factor 1,Hsf1)过表达的MEF/Hsf1-/-/Hsf1细胞系,为进一步研究Hsf1的功能提供实验模型。方法:将携带Hsf1全长基因的逆转录病毒载体pWZL-blast-flag-Hsf1,通过瞬时转染的方法,转染产... 详细信息

目的:重建热休克转录因子1(Heat shock transcription factor 1,Hsf1)过表达的MEF/Hsf1-/-/Hsf1细胞系,为进一步研究Hsf1的功能提供实验模型。方法:将携带Hsf1全长基因的逆转录病毒载体pWZL-blast-flag-Hsf1,通过瞬时转染的方法,转染产生病毒的小鼠包装细胞293Phoenix。用病毒上清直接感染MEF/Hsf1-/-细胞,建立Hsf1稳定表达的MEF/Hsf1-/-/Hsf1细胞系。通过Western blot实验,检测Hsf1和SV40T抗原(T-antigen,T-ag)蛋白的表达。结果:Hsf1蛋白在MEF/Hsf1-/-/Hsf1细胞中的表达比WT/MEF细胞强,而在MEF/Hsf1-/-细胞中没有明显表达。SV40T-ag蛋白在MEF/Hsf1-/-细胞中的表达明显比WT/MEF细胞和MEF/Hsf1-/-/Hsf1细胞强,而SV40T-ag蛋白在WT/MEF细胞中的表达强于MEF/Hsf1-/-/Hsf1细胞。结论:成功建立了MEF/Hsf1-/-/Hsf1细胞系;Hsf1参与了对SV40T-ag蛋白的表达调控。

关键词：热休克转录因子1 SV40T抗原转染逆转录病毒载体小鼠胚胎成纤维细胞

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食管鳞癌的蛋白质组学

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中国生物化学与分子生物学报 2012年第12期28卷 1100-1108页

作者：张娟卜旺雨齐义军河南大学医学院细胞与分子免疫学重点实验室河南开封475004

大部分食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)确诊时已发展至中晚期,临床治疗效果差,是导致我国华北地区ESCC死亡率居高不下的主要原因之一.因此,亟需筛查ESCC特异性、敏感性的生物标志物,以期用于ESCC早期诊断、个体化分... 详细信息

大部分食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)确诊时已发展至中晚期,临床治疗效果差,是导致我国华北地区ESCC死亡率居高不下的主要原因之一.因此,亟需筛查ESCC特异性、敏感性的生物标志物,以期用于ESCC早期诊断、个体化分子靶向治疗和预后评价.与相对稳定、携带遗传信息的基因组不同,蛋白质组具有时空变化特性,由此构成生命活动复杂性的物质基础.在病理情况下,蛋白质组能够精确反映患病组织器官的功能状态,因此为疾病的监测提供了窗口.本文总结了ESCC蛋白质组研究现状及差异表达的蛋白质谱,并探讨了ESCC候选分子标志物的潜在临床应用价值.

关键词：食管鳞癌蛋白质组蛋白差异表达谱质谱生物标志物

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PCNP在类风湿关节炎发病中的表达及其意义

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中国免疫学杂志 2013年第5期29卷 499-502页

作者：刘瑞敏王明丽孙颖川张爱红朱诗白白慧玲马远方河南大学医学院细胞与分子免疫学重点实验室开封475004

目的:探讨PCNP在牛Ⅱ型胶原诱导的类风湿性小鼠关节炎模型(CIA)脾脏及类风湿关节炎(RA)患者外周血淋巴细胞中的表达及其意义。方法:使用牛Ⅱ型胶原免疫DBA-1/j小鼠,建立CIA小鼠模型;将RA患者分为静止组和活动期组,取外周血提取淋巴细胞... 详细信息

目的:探讨PCNP在牛Ⅱ型胶原诱导的类风湿性小鼠关节炎模型(CIA)脾脏及类风湿关节炎(RA)患者外周血淋巴细胞中的表达及其意义。方法:使用牛Ⅱ型胶原免疫DBA-1/j小鼠,建立CIA小鼠模型;将RA患者分为静止组和活动期组,取外周血提取淋巴细胞。分别用半定量RT-PCR及荧光定量RT-PCR检测CIA小鼠脾脏和患者外周血淋巴细胞中PC-NP基因的表达差异;Western blot检测CIA小鼠脾脏及患者淋巴细胞中PCNP蛋白表达差异。结果:CIA小鼠的脾脏细胞中和患者外周血淋巴细胞中PCNP在基因和蛋白水平表达增强,RA患者在活动期PCNP表达更高,有统计学意义。结论:在基因和蛋白水平,PCNP在CIA小鼠脾脏和RA患者外周血淋巴细胞中的表达明显高于健康对照组,而且PCNP的表达水平和类风湿关节炎的严重程度密切相关。

关键词：类风湿关节炎 PCNP 表达差异

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Hsf1对人肝癌细胞株PLC/PRF5的生长调控作用

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中国免疫学杂志 2014年第12期30卷 1601-1605页

作者：蒋杞英张智王明丽马远方河南大学医学院细胞与分子免疫学重点实验室开封475004

目的:探讨热休克转录因子1(Heat shock transcription factor 1,Hsf1)对人肝癌细胞株PLC/PRF5生长的调控作用。方法:通过shRNA基因沉默技术,构建Hsf1基因沉默的PLC/PRF5肝癌细胞株。采用Western blot检测PLC/PRF5肝癌细胞Hsf1、p53和Rb蛋白的表达。通过四甲基偶氮唑盐(Methylthiazolyl tetrazolium assay,MTT)法、平板克隆实验和细胞周期的检测,观察PLC/PRF5细胞株的增殖情况。结果:shRNA-Hsf1能有效地沉默Hsf1在PLC/PRF5细胞中的表达;shRNAHsf1能有效阻滞细胞周期于G1期,抑制PLC/PRF5细胞的生长速度和细胞克隆形成率;Hsf1基因沉默可上调PLC/PRF5细胞p53和Rb蛋白的表达。结论:Hsf1基因沉默可通过上调p53和Rb蛋白的表达抑制肝癌细胞株PLC/PRF5的增殖。

关键词：热休克转录因子1 肝癌细胞 p53 Rb

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卡介苗在关节炎模型小鼠诱导中的作用

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中国免疫学杂志 2014年第10期30卷 1330-1333页

作者：刘瑞敏林波朱诗白白慧玲马远方河南大学医学院细胞与分子免疫学重点实验室开封475004

目的:探讨在牛Ⅱ型胶原诱导性关节炎模型(Collagen-induced arthritis,CIA)小鼠的诱导过程中,弗氏完全佐剂(FCA)中的卡介苗(BCG)浓度和CIA小鼠关节炎严重程度的关系。方法:将牛Ⅱ型胶原蛋白溶液与含不同BCG的FCA等体积混合乳化,在小鼠... 详细信息

目的:探讨在牛Ⅱ型胶原诱导性关节炎模型(Collagen-induced arthritis,CIA)小鼠的诱导过程中,弗氏完全佐剂(FCA)中的卡介苗(BCG)浓度和CIA小鼠关节炎严重程度的关系。方法:将牛Ⅱ型胶原蛋白溶液与含不同BCG的FCA等体积混合乳化,在小鼠尾根部注射进行免疫。免疫后观察小鼠的相关指标包括体重、发病率、血清TNF-α、关节炎指数及小鼠关节和脾脏的病理变化。结果:与1 mg/ml卡介苗组相比,4 mg/ml卡介苗组诱导的CIA小鼠发病早,关节炎指数、关节和脾脏病理评分升高及小鼠体重下降更明显,血清TGF-α明显升高,差异有统计学意义。结论:在进行CIA小鼠诱导时,BCG浓度和CIA小鼠关节炎严重程度呈正相关,实验中可以根据对动物的要求,选择含不同BCG的佐剂来诱导CIA小鼠。

关键词：关节炎模型小鼠卡介苗弗氏完全佐剂 CIA相关指标

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米哚妥林对P糖蛋白介导的多药耐药的逆转作用

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中国药理学与毒理学杂志 2013年第1期27卷 77-83页

作者：魏寅祥赵青任志广贾砚寒李新颖黎燕彭晖马远方河南大学医学院细胞与分子免疫学实验室河南开封475003 军事医学科学院基础医学研究所分子免疫室北京100850

目的评价新型激酶抑制剂类抗癌药米哚妥林逆转P糖蛋白(P-gp)介导肿瘤细胞多药耐药的作用,并探讨其可能机制。方法米哚妥林0.5,1和5μmol·L-1分别加入P-gp高表达的K562/A02和K562细胞中培养72 h,MTS法测定细胞存活率以检测细胞毒性... 详细信息

目的评价新型激酶抑制剂类抗癌药米哚妥林逆转P糖蛋白(P-gp)介导肿瘤细胞多药耐药的作用,并探讨其可能机制。方法米哚妥林0.5,1和5μmol·L-1分别加入P-gp高表达的K562/A02和K562细胞中培养72 h,MTS法测定细胞存活率以检测细胞毒性。米哚妥林0.125,0.25和0.5μmol·L-1在K562/A02和K562细胞中与无毒剂量的P-gp底物多柔比星、紫杉醇或长春新碱共培养72 h,MTS法测定细胞存活率以检测逆转耐药作用。米哚妥林0.5和10μmol·L-1与P-gp荧光底物罗丹明123在耐药和敏感细胞中共同孵育30 min后用流式细胞术分析底物积累的变化。米哚妥林0.5μmol·L-1与耐药和敏感细胞共同孵育72 h,Western印迹法检测耐药蛋白和信号分子的表达,定量PCR检测MDR1基因表达的变化。将米哚妥林与P-gp膜蛋白共孵育,化学发光法测定剩余ATP的量,检测米哚妥林对P-gp ATP酶活性的影响。结果米哚妥林对P-gp高表达的K562/A02和亲本敏感细胞K562的细胞毒性无明显的差异,其中米哚妥林0.5μmol·L-1时2种细胞的存活率均达80%以上。米哚妥林0.5μmol·L-1在细胞水平即可有效逆转K562/A02对多种底物的耐药,而对敏感细胞无显著作用;米哚妥林能显著抑制P-gp的外排作用,增加底物Rh-123在K562/A02细胞中的积累,且效果好于阴性对照维拉帕米0.5和10μmol·L-1;米哚妥林对P-gp基因和蛋白表达以及AKT和ERK的表达与磷酸化水平均无影响;米哚妥林对P-gp的ATP酶活性具有明显的抑制作用。结论米哚妥林可抑制P-gp介导的药物外排并逆转P-gp介导的肿瘤多药耐药。

关键词：米哚妥林多药耐药相关蛋白糖蛋白类蛋白激酶抑制剂

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热休克转录因子4b的克隆表达及MAP激酶P38对其磷酸化调控

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细胞与分子免疫学杂志 2010年第4期26卷 325-328页

作者：马增翼张军李雪丽席子明胡延忠河南大学医学院细胞与分子免疫学重点实验室河南开封475000

目的:构建热休克转录因子4b(Hsf4b)的真核表达载体,探讨MAP激酶P38对其磷酸化调控作用。方法:用人心脏cDNA文库为模板,应用囊括Hsf4b全长的引物进行PCR并在Hsf4b cDNA的N-端加入Flag标签。将PCR产物经KpnI和EcoRI酶切后,与该二酶线性化p... 详细信息

目的:构建热休克转录因子4b(Hsf4b)的真核表达载体,探讨MAP激酶P38对其磷酸化调控作用。方法:用人心脏cDNA文库为模板,应用囊括Hsf4b全长的引物进行PCR并在Hsf4b cDNA的N-端加入Flag标签。将PCR产物经KpnI和EcoRI酶切后,与该二酶线性化pcDNA3.0质粒一起连接获得重组质粒pcDNA-Flag-Hsf4b,将克隆好的pcDNA-flag-Hsf4b转染HEK293T细胞,并用抗Flag抗体进行免疫印迹分析,免疫沉淀实验和体内Pulldown实验证明Hsf4b可与MAP激酶P38结合,激酶实验结果显示P38可体外磷酸化Hsf4b。结果:应用基因克隆技术,将人Hsf4b的cDNA克隆到真核表达质粒pcDNA3.0和pEBG中。pcDNA-Flag-Hsf4b可在真核细胞HEK293T中表达一个相对分子质量(Mr)约为60000的蛋白。进一步研究发现,Hsf4b可与MAP激酶P38结合,Hsf4b的C-端转录调控区参与和P38的结合,P38可体外磷酸化Hsf4b。结论:实验首次证明Hsf4b可结合并被P38磷酸化,为进一步探讨Hsf4b在晶状体发育过程中的作用提供新的信号通路。

关键词：热休克转录因子4 晶状体 MAP激酶P38 磷酸化

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