检索结果-内蒙古大学图书馆

CD8α^+树突状细胞研究进展

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第1期29卷 96-98,101页

作者：李涛马远方姬新颖河南大学医学院河南省细胞与分子免疫学医学重点实验室河南开封475004

根据细胞表面CD8α的表达差异,小鼠脾脏中树突状细胞(DC)可以分为2种,即CD8α-DC和CD8α+DC,二者功能迥异。本文回顾了近年来CD8α+DC的研究动向,重点分析了CD8α+DC的在肿瘤免疫、移植免疫和生殖免疫等中的作用。

关键词： CD8α+树突状免疫细胞抗原提呈减数抑制杂交法免疫治疗

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聚乙二醇作为乙型肝炎病毒DNA疫苗佐剂的体外试验

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微生物学报 2010年第7期50卷 949-954页

作者：王军朋芦丽淦宋红利杨永杰马远方河南大学医学院细胞与分子免疫学重点实验室开封475001 河南大学免疫研究所开封475001 河南大学体育学院开封475001

【目的】研究聚乙二醇作为佐剂是否能够增强HBVDNA疫苗体液和细胞免疫效果。【方法】我们将乙型肝炎病毒(HBV)DNA疫苗(pVAX-S2)单独或PEG/pVAX-S2免疫C57BL/6J小鼠,在最后一次免疫14d检测抗-HBsIgG、T淋巴细胞增殖、细胞因子表达及体内... 详细信息

【目的】研究聚乙二醇作为佐剂是否能够增强HBVDNA疫苗体液和细胞免疫效果。【方法】我们将乙型肝炎病毒(HBV)DNA疫苗(pVAX-S2)单独或PEG/pVAX-S2免疫C57BL/6J小鼠,在最后一次免疫14d检测抗-HBsIgG、T淋巴细胞增殖、细胞因子表达及体内细胞毒T淋巴细胞杀伤作用(CTL)等免疫学指标。【结果】结果表明,与仅免疫pVAX-S2比,PEG/pVAX-S2能够增加免疫小鼠抗-HBsIgG水平;混合免疫组的T淋巴细胞体外经乙肝表面抗原(HBsAg)刺激后,T淋巴细胞增殖数量显著高于对照组;另外,混合免疫组CD4+T淋巴细胞中IL-4和IFN-γ以及CD8+T淋巴细胞中IFN-γ的表达显著高于对照组。更重要的是,混和免疫组HBsAg特异性CTL显著高于对照组。【结论】总之,我们首次证明PEG作为佐剂不仅能够增强体液免疫反应和细胞免疫反应,而且能够显著增强体内CTL的杀伤活性,为HBV DNA的进一步研究奠定了基础。

关键词：聚乙二醇乙型肝炎病毒(HBV)DNA疫苗体液免疫反应细胞免疫反应

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艾洛替尼耐药肝癌HepG2细胞系的建立及其耐药机制

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中国药理学与毒理学杂志 2012年第6期26卷 823-828页

作者：任志广赵青魏寅祥贾砚寒李新颖黎燕彭晖马远方河南大学医学院细胞与分子免疫学实验室河南开封475004 军事医学科学院基础医学研究所分子免疫学研究室北京100850 南开大学医学院天津300071

目的体外建立艾洛替尼(erlotinib)耐药的人肝癌细胞系HepG2/erlotinib,鉴定其生物学特性,并对其耐药机制进行初步探讨。方法逐步递增艾洛替尼并最终给予艾洛替尼50μmol·L-1连续冲击HepG2细胞12个月,建立HepG2/erlotinib。磺酰罗丹... 详细信息

目的体外建立艾洛替尼(erlotinib)耐药的人肝癌细胞系HepG2/erlotinib,鉴定其生物学特性,并对其耐药机制进行初步探讨。方法逐步递增艾洛替尼并最终给予艾洛替尼50μmol·L-1连续冲击HepG2细胞12个月,建立HepG2/erlotinib。磺酰罗丹明B法检测HepG2/erlotinib耐药倍数和耐药谱;测定细胞生长曲线并计算细胞增殖时间;流式细胞术检测细胞周期;RT-PCR和Western印迹法检测HepG2/erlotinib细胞乳腺癌耐药蛋白(BCRP)基因和蛋白的表达;流式细胞术检测细胞表面BCRP蛋白表达。结果经过12个月艾洛替尼诱导的HepG2耐药细胞,艾洛替尼的IC50值为(72.3±6.1)μmol·L-1,艾洛替尼对正常HepG2细胞的IC50值为(10.6±0.3)μmol·L-1,耐药倍数为6.8±0.7,表明HepG2/erlotinib为艾洛替尼耐药细胞系。HepG2/erlotinib对顺铂、多柔比星、米托蒽醌和拓扑替康的IC50均大于正常HepG2细胞的IC50,表明产生交叉耐药性。HepG2细胞和HepG2/erlotinib细胞的群体倍增时间分别为(20.7±3.3)h和(26.7±1.2)h,耐药细胞倍增时间延长。与HepG2细胞相比,HepG2/erlotinib的S期细胞比例明显增高(P<0.05),G0/G1期细胞比例明显降低(P<0.01);HepG2/erlotinib细胞中BCRP基因和BCRP蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论建立的HepG2/erlotinib具有耐药细胞的特征和生物学特性,其耐药机制与BCRP蛋白表达增加有关。

关键词：艾洛替尼肝癌细胞系耐药

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可溶性死亡受体5在化疗前后肺癌患者外周血中的检测

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中国免疫学杂志 2012年第11期28卷 1028-1031页

作者：朱诗白杨永杰刘瑞敏张爱红孙颍川白慧玲河南大学医学院免疫学研究所河南大学细胞与分子免疫学重点实验室开封475004

目的:探讨正常人群外周血清中sDR5及与肺癌患者的差异。方法:采用ELISA夹心法检测106例正常人群、79例肺癌患者与肺癌化疗以后血清中死亡受体5的含量,并运用SPSS软件对其结果进行统计学分析。结果:正常人群外周血清中sDR5平均值为(6.25&... 详细信息

目的:探讨正常人群外周血清中sDR5及与肺癌患者的差异。方法:采用ELISA夹心法检测106例正常人群、79例肺癌患者与肺癌化疗以后血清中死亡受体5的含量,并运用SPSS软件对其结果进行统计学分析。结果:正常人群外周血清中sDR5平均值为(6.25±3.09)μg/L,肺癌患者的sDR5含量为(53.91±13.42)μg/ml明显高于正常人群,P<0.001。肺癌病人化疗后外周血sDR5水平为(23.99±14.23)μg/ml较治疗前明显下降,P<0.001。结论:外周血中sDR5的消退水平有可能与肿瘤病人发病、发展及预后密切相关。

关键词：死亡受体5 夹心ELISA 肺癌

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正常人群中DR5天然自身抗体的分布特点及与肿瘤患者的差异分析

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中国免疫学杂志 2010年第9期26卷 797-800,809页

作者：王艳鸽李燕杰都景芳马远方河南大学医学院免疫学研究所细胞与分子免疫学重点实验室开封475004

目的:探讨正常人群中DR5天然自身抗体的分布特点及与肿瘤患者的差异。方法:采用ELISA间接法检测正常人群与肿瘤患者血清中死亡受体5的天然自身抗体,并运用SPSS软件对其结果进行统计学分析。结果:正常人群中血清DR5天然自身抗体OD值平均... 详细信息

目的:探讨正常人群中DR5天然自身抗体的分布特点及与肿瘤患者的差异。方法:采用ELISA间接法检测正常人群与肿瘤患者血清中死亡受体5的天然自身抗体,并运用SPSS软件对其结果进行统计学分析。结果:正常人群中血清DR5天然自身抗体OD值平均值为0.39,在人群中呈近正态分布。正常人群血清DR5自身抗体OD值在不同年龄组之间存在显著性差异(P<0.05),随年龄增大而增高。相同年龄组之间,正常人群与肿瘤患者的血清中DR5天然自身抗体的OD值存在差异,肿瘤患者的OD值(0.17±0.014)小于正常人群的OD值(0.39±0.011),P<0.01。结论:我们发现人群中存在DR5的天然自身抗体,但平均滴度较低,符合生理性天然自身抗体的特点。正常人群血清中DR5的NAA水平随着年龄增加而增高,而肿瘤患者血清中DR5的NAA水平低于正常人群。提示在衰老的过程中,血清中DR5天然自身抗体的提高可能有助于清除恶变的细胞,施行肿瘤监视功能,阻止恶变细胞进展为肿瘤。

关键词：死亡受体5 天然自身抗体间接ELISA

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密度梯度离心法同时分离新生大鼠原代心肌细胞与成纤维细胞

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生理学报 2015年第4期67卷 423-430页

作者：陈希许瑞蒋易楠祝伟娜王耀辉抗体药物河南省工程实验室河南省抗体药物国际联合实验室河南大学医学院细胞与分子免疫重点实验室开封475004 郑州大学基础医学院郑州450001

本文旨在探讨一种改良的同时分离新生大鼠原代心肌细胞和成纤维细胞的方法,以建立良好的原代心肌细胞及成纤维细胞研究模型。无菌状态下取Wistar乳鼠(出生不超过2天)心室,用II型胶原酶消化,控制消化时间及次数、搅拌速度、离心次数和速... 详细信息

本文旨在探讨一种改良的同时分离新生大鼠原代心肌细胞和成纤维细胞的方法,以建立良好的原代心肌细胞及成纤维细胞研究模型。无菌状态下取Wistar乳鼠(出生不超过2天)心室,用II型胶原酶消化,控制消化时间及次数、搅拌速度、离心次数和速度等,结合Percoll密度梯度离心法分离心肌细胞及成纤维细胞,进行体外培养,观察细胞形态,继而用0.2%台盼蓝染色检测细胞存活率,免疫荧光染色法检测心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I,c Tn I)、波形蛋白(Vimentin)及α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达,分别用于鉴定心肌细胞和成纤维细胞纯度。结果显示,本方法5次分离的心肌细胞平均存活率达92%,纯度达95%以上,细胞生长状态良好,可见贴壁自发搏动;成纤维细胞平均存活率达96%,纯度达94%。本方法能同时获得新生大鼠原代心肌细胞和成纤维细胞,具有很高的产量、存活率及纯度,且操作简便,耗时短,重复性好,是一种较为理想的原代细胞分离、培养方法,可满足各种后续实验要求。

关键词：心肌细胞成纤维细胞原代培养:新生大鼠 Percoll分离

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Hsf4-/-小鼠晶状体永生化上皮细胞系建立的研究

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中华眼科杂志 2013年第11期49卷 1029-1031页

作者：张军马增翼王悦玲王继燕胡延忠河南大学医学院细胞与分子免疫学重点实验室开封475000 复旦大学附属华山医院神经外科

目的建立Hsf4-/-小鼠的晶状体永生化上皮细胞系.方法实验研究.取新生P6天的Hsf4-/-小鼠晶状体原代培养晶状体上皮细胞（MLEC）,用SV40,T-抗原转染,C418筛选建立永生化细胞系MLEC/Hsf4-/-,免疫印迹法检测α-A晶状体蛋白表达.结果倒置... 详细信息

目的建立Hsf4-/-小鼠的晶状体永生化上皮细胞系.方法实验研究.取新生P6天的Hsf4-/-小鼠晶状体原代培养晶状体上皮细胞（MLEC）,用SV40,T-抗原转染,C418筛选建立永生化细胞系MLEC/Hsf4-/-,免疫印迹法检测α-A晶状体蛋白表达.结果倒置相差显微镜下观察可见细胞贴壁生长,有伪足伸出,多角形,大小均匀,细胞膜边界清晰,细胞质透亮.消化后的细胞呈圆形透亮,胞质丰富.免疫印迹法检测MLEC/Hsf4-/-细胞（两个克隆）中的α-A晶状体蛋白（α-A-crystallin）有表达.转染Hsf4b蛋白后Hsp25蛋白表达上调.结论采用组织块接种法获得小鼠晶状体上皮细胞后,转染SV40大T-抗原,G418筛选可成功建立永生化细胞系MLEC/Hsf4-/-.

关键词： DNA结合蛋白质类转录因子晶体上皮细胞细胞系免疫印迹法

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二维电泳和质谱技术鉴定肝细胞癌相关N-连接糖蛋白

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解剖学报 2015年第4期46卷 495-502页

作者：王明丽韩大正晁玮霞刘瑞敏赵云岗张天齐义军河南大学医学院细胞与分子免疫学重点实验室河南开封475004 河南大学第一附属医院消化内科河南开封475000

目的鉴定与肝细胞癌(HCC)发生发展相关的差异表达N-连接糖蛋白。方法采用刀豆凝集素A(Con A)、晶状体凝集素(LCH)、雪花凝集素(GNA)等3种植物凝集素组成的亲和层析柱,分别从肝永生化细胞系L02和HCC细胞系Huh7、PLC5、SNU449中纯化N-连... 详细信息

目的鉴定与肝细胞癌(HCC)发生发展相关的差异表达N-连接糖蛋白。方法采用刀豆凝集素A(Con A)、晶状体凝集素(LCH)、雪花凝集素(GNA)等3种植物凝集素组成的亲和层析柱,分别从肝永生化细胞系L02和HCC细胞系Huh7、PLC5、SNU449中纯化N-连接糖蛋白、二维电泳分析差异表达的蛋白质斑点,质谱、生物信息学等技术鉴定差异表达蛋白,Western blotting验证了转录调控肿瘤蛋白(TCTP)、上皮细胞黏附分子(Ep CAM)和膜联蛋白A2(annexin A2)在肝永生化及HCC细胞和HCC及癌旁组织中的表达规律,体外侵袭实验检测TCTP沉默后对SNU449的侵袭力影响。结果质谱、生物信息学等技术共鉴定出42个差异表达的蛋白质分子/异质体(HCC细胞中高、低表达的蛋白/异质体分别为14个、28个),代表32个蛋白质分子,其中的22个蛋白含有至少1个N糖基化位点(Net NGlyc 1.0预测)。这些差异表达的蛋白主要参与氧化还原内稳态维系、碳水化合物/能量代谢、糖酵解、抗凋亡等生物学过程。Western blotting检测表明,TCTP、Ep CAM和annexin A2在6个肝癌细胞系PLC5、Hep G2、SNU449、Huh7、HCC7721和SNU473及肝癌组织中表达显著升高,siRNA介导的TCTP沉默明显抑制了HCC细胞系SNU449的体外侵袭能力。结论 TCTP、Ep CAM和annexin可能参与了HCC发生发展过程,TCTP可能成为HCC靶向治疗的分子靶点之一。

关键词：肝细胞癌 N-连接糖蛋白植物凝集素质谱二维电泳

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细胞培养稳定同位素标记定量分析食管癌顺铂耐药相关蛋白

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药学学报 2012年第3期47卷 409-416,258页

作者：王攀高小飞卜旺雨张娟侯艳芳牛保华王玮马远方齐义军河南大学医学院细胞与分子免疫学重点实验室河南开封475000 河南大学药学院河南开封475000 河南大学环境医学研究所河南开封475000

多药耐药性(multidrug resistance,MDR)是临床肿瘤化疗失败的主要原因之一,定量分析与鉴定食管鳞癌顺铂(cis-diamminedichloroplatinum,CDDP)耐药相关蛋白对阐明食管癌耐药的分子机制具有重要理论意义。本研究采用浓度递增法建立食管癌C... 详细信息

多药耐药性(multidrug resistance,MDR)是临床肿瘤化疗失败的主要原因之一,定量分析与鉴定食管鳞癌顺铂(cis-diamminedichloroplatinum,CDDP)耐药相关蛋白对阐明食管癌耐药的分子机制具有重要理论意义。本研究采用浓度递增法建立食管癌CDDP耐药细胞系EC9706/CDDP,细胞培养稳定同位素标记(stable isotope labeling with amino acids in cell culture,SILAC)和高效液相-电喷雾串联质谱检测、生物信息学定量分析并鉴定EC9706/CDDP及其母细胞系EC9706的差异蛋白表达谱。EC9706/CDDP细胞呈贴壁性生长但增殖缓慢,多形性、异形性明显,耐药指数为3.23。74种差异表达的蛋白质分子主要包括细胞骨架相关蛋白(20%)、能量代谢相关蛋白(11%)、转录调控及DNA修复相关蛋白(11%)、氧化还原内稳态维持类蛋白(9.5%)、蛋白合成及参与mRNA处理类蛋白(12%)、核糖体结构类蛋白(8.1%)、分子伴侣蛋白(8.1%)、免疫/炎症反应相关蛋白(5.4%)、细胞内转运功能相关蛋白(5.4%)、核组装相关蛋白(2.7%)等。表明食管癌顺铂耐药的发生是多分子参与、多代谢通路失调的复杂过程,差异表达的蛋白分子将有助于深入理解MDR发生的分子机制,并为MDR表型逆转的新型药物设计提供有价值的分子靶点。

关键词：食管癌顺铂多药耐药细胞培养稳定同位素标记串联质谱

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侧向层析技术标记物研究进展

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生物医学工程学杂志 2018年第4期35卷 661-664页

作者：靖静王志增河南大学基础医学院抗体药物开发技术国家地方联合工程实验室细胞与分子免疫重点实验室河南开封475004

侧向层析技术以其简单、快速、灵敏、经济等优势广泛应用于即时检验、现场检验以及家庭自检中。合适的标记物的选择对整个实验的灵敏度起着重要作用。传统的标记物有胶体金、纳米硒以及纳米碳等,尤以胶体金最为常用。近年来新型标记物... 详细信息

侧向层析技术以其简单、快速、灵敏、经济等优势广泛应用于即时检验、现场检验以及家庭自检中。合适的标记物的选择对整个实验的灵敏度起着重要作用。传统的标记物有胶体金、纳米硒以及纳米碳等,尤以胶体金最为常用。近年来新型标记物的出现,如量子点、纳米酶等,使得侧向层析有了进一步的发展,实现了从定性检测逐步向定量检测的转变。本文旨在介绍目前已有的侧向层析标记物,为侧向层析工作者筛选合适的标记物提供一定的研究依据。

关键词：侧向层析标记物胶体金纳米酶

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