目的 探究威廉环毛蚓抗血栓蛋白DPf3经胃肠道消化后活性及成分变化，并结合同源建模预测其活性蛋白DPf3 ID NO.2的空间结构。方法 体外模拟胃排空状态(pH 2)及半排空状态(pH 5)下胃蛋白酶(及胰蛋白酶)对DPf3的消化作用，昆明小鼠经灌胃...
详细信息
目的 探究威廉环毛蚓抗血栓蛋白DPf3经胃肠道消化后活性及成分变化，并结合同源建模预测其活性蛋白DPf3 ID NO.2的空间结构。方法 体外模拟胃排空状态(pH 2)及半排空状态(pH 5)下胃蛋白酶(及胰蛋白酶)对DPf3的消化作用，昆明小鼠经灌胃给药DPf3考察体内酶解对其消化作用；纤维蛋白平板法联合十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分析DPf3经体内外水解后活性及成分变化；I-TASSER联合SAVES v5.0同源建模并评价DPf3的活性蛋白成分DPf3 ID NO.2,并预测其二级和三级结构。结果 DPf3经体外酶解后，在pH 2孵育条件下丧失纤溶活性，在pH 5条件下，DPf3经热灭活胃蛋白酶孵育后，纤溶活性较未经热灭活胃蛋白酶孵育物稍高；经体内酶解后，与对照组相比，仅胃部灌流液的纤溶活性具显著性差异；蛋白质谱图结果显示DPf3 ID NO.2的稳定存在或为DPf3具纤溶活性的重要原因；空间结构预测表明DPf3 ID NO.2属于典型的凝乳胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶，揭示其催化中心、酶原中心、重要的氨基酸残基及S1活性口袋。结论 通过体内外水解为威廉环毛蚓抗血栓蛋白DPf3口服后蛋白表达谱及活性变化提供依据，同源建模可用于中药动物药大分子蛋白质中活性多肽的结构预测。
暂无评论