检索结果-内蒙古大学图书馆

西北农业学报 2025年第1期34卷 133-139页

作者：胡骁飞杨继飞邢云瑞庞杏豪孙亚宁魏凤仙河南省农业科学院动物免疫学重点实验室郑州450002 河南省农业科学院畜牧研究所郑州450002

为建立灵敏、特异的大豆凝集素(soybean agglutinin,SBA)酶联免疫吸附(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测方法。试验以SBA鼠源单克隆抗体为捕获抗体,SBA兔源多克隆抗血清为检测抗体,羊抗兔酶标抗体为二抗,通过对抗体的工... 详细信息

为建立灵敏、特异的大豆凝集素(soybean agglutinin,SBA)酶联免疫吸附(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测方法。试验以SBA鼠源单克隆抗体为捕获抗体,SBA兔源多克隆抗血清为检测抗体,羊抗兔酶标抗体为二抗,通过对抗体的工作浓度及反应时间优化,建立SBA的双抗体夹心ELISA检测方法,并用建立的方法检测大豆、大豆粕、膨化大豆粕及酶解大豆粕中SBA含量。结果表明:建立SBA双抗夹心ELISA检测方法的检测范围为39.06~1250 ng/mL,检出限为3.00 ng/mL,样品添加回收率为77.96%~116.15%,变异系数为6.11%~18.34%,与大豆中胰蛋白酶抑制因子BBI、KTI,大豆球蛋白glycinin及大豆伴球蛋白-conglycinin等其他抗营养因子均无交叉反应。大豆中SBA含量显著高于大豆粕、膨化大豆粕及酶解大豆粕(P<0.05);大豆粕中SBA含量显著高于膨化大豆粕及酶解大豆粕(P<0.05);膨化大豆粕显著高于酶解大豆粕中SBA含量(P<0.05)。综上,本研究建立了灵敏度高、特异性好的SBA双抗夹心ELISA检测方法,该方法可用于饲料中大豆凝集素的监控检测。

关键词：大豆凝集素抗营养因子多克隆抗体单克隆抗体夹心ELISA

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花生致敏蛋白Ara h 2夹心ELISA检测方法的建立

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核农学报 2025年第4期39卷 810-816页

作者：郭开通王耀邢云瑞孙亚宁宋乾召葛梦鋆蔡文锦胡骁飞河南省农业科学院动物疫病防控研究所(河南省农业科学院动物免疫学重点实验室) 河南郑州450002 河南科技大学食品与生物工程学院河南洛阳471023

为建立花生致敏蛋白Ara h 2双抗夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法,本研究基于所制备的抗体,采用双抗体夹心检测模式,以Ara h 2鼠源单克隆抗体作为捕获抗体、兔源多克隆抗体作为检测抗体,并通过棋盘法优化抗体工作浓度,对该方法的灵... 详细信息

为建立花生致敏蛋白Ara h 2双抗夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法,本研究基于所制备的抗体,采用双抗体夹心检测模式,以Ara h 2鼠源单克隆抗体作为捕获抗体、兔源多克隆抗体作为检测抗体,并通过棋盘法优化抗体工作浓度,对该方法的灵敏度、准确度、精密度和特异性进行鉴定。结果表明,建立的双抗夹心ELISA检测方法对Ara h 2的检出限为5.04 ng·mL^(-1),线性范围为15.63~1 000 ng·mL^(-1),添加回收率为80.12%~96.03%,批内和批间变异系数均小于10%,且特异性良好、与其他常见食物过敏原无交叉反应。本研究可为致敏蛋白Ara h 2检测提供一种快速高效的方法。

关键词：酶免疫分析花生致敏蛋白 Ara h 2 过敏反应检测

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猪流行性腹泻病毒COE蛋白在TP309水稻细胞中的表达及纯化

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动物医学进展 2025年第4期46卷 1-5页

作者：陈金炫史倩倩潘世源陈恒耀寇少康楚红燕张磊张二芹张改平河南农业大学动物医学院国家动物免疫学国际联合研究中心河南郑州450046 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室河南郑州450002

为获得TP309水稻细胞表达的猪流行性腹泻病毒(PEDV)COE蛋白,根据水稻密码子偏爱性优化并合成COE基因,构建植物重组质粒pCAMBIA1300-COE,通过根癌农杆菌EHA105介导法将pCAMBIA1300-COE转入水稻愈伤组织。经过暗培养和潮霉素B筛选新愈伤;... 详细信息

为获得TP309水稻细胞表达的猪流行性腹泻病毒(PEDV)COE蛋白,根据水稻密码子偏爱性优化并合成COE基因,构建植物重组质粒pCAMBIA1300-COE,通过根癌农杆菌EHA105介导法将pCAMBIA1300-COE转入水稻愈伤组织。经过暗培养和潮霉素B筛选新愈伤;PCR鉴定阳性愈伤;阳性愈伤研磨后制成细胞并进行培养,阳性细胞经无糖诱导培养10 d后,Western blot鉴定表达COE蛋白;并利用Q阴离子层析和MMC阳离子层析纯化COE蛋白。结果显示,经潮霉素筛选获得73个新愈伤,PCR检测有50个阳性愈伤,阳性率约为68.49%,Western blot检测有15个水稻细胞株表达COE蛋白,COE蛋白经Q和MMC纯化后,其纯度达到50%左右。这些研究结果对制备猪流行性腹泻亚单位疫苗具有重要意义。

关键词：猪流行性腹泻 COE蛋白水稻愈伤水稻植株纯化

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新城疫病毒基因Ⅶ型血凝素-神经氨酸酶蛋白在水稻细胞中的表达及免疫原性

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农业生物技术学报 2025年第4期 879-887页

作者：史倩倩陈金炫陈恒耀寇少康楚红燕张磊潘世源张二芹张改平河南农业大学动物医学院/国家动物免疫学国际联合研究中心龙湖现代免疫实验室北京大学现代农学院河南省农业科学院动物免疫学重点实验室

新城疫是新城疫病毒（Newcastle disease virus, NDV）引起的一种急性、热性、高度接触性传染病，其中基因Ⅶ型病毒流行广泛。血凝素-神经氨酸酶蛋白（hemagglutinin-neuraminidase protein, HN）是病毒的结构蛋白，也是宿主细胞受体识... 详细信息

新城疫是新城疫病毒（Newcastle disease virus, NDV）引起的一种急性、热性、高度接触性传染病，其中基因Ⅶ型病毒流行广泛。血凝素-神经氨酸酶蛋白（hemagglutinin-neuraminidase protein, HN）是病毒的结构蛋白，也是宿主细胞受体识别和促进细胞膜融合的重要免疫原性蛋白。水稻（Oryza sativa）细胞是生产生物药物的一个有前景的经济有效的生物反应器平台，水稻α-淀粉酶3D系统包含一个诱导启动子，在糖饥饿条件下具有很强的激活活性，可以高效、高水平地表达外源蛋白。本研究从NCBI上筛选NDV基因Ⅶ型HN氨基酸序列，根据水稻密码子偏爱性对HN基因进行优化，构建了重组植物表达载体pCAMBIA1300-HN；利用根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）介导法将HN基因转入到水稻愈伤组织中，经潮霉素筛选和PCR鉴定阳性愈伤，在阳性愈伤中诱导表达HN蛋白，通过Western blot鉴定。利用SP阳离子层析和Hiloard 75 pg凝胶层析纯化HN蛋白,并以5和10μg剂量分别与Al（OH）3和50V佐剂乳化，免疫6周龄BALB/c雌鼠（Mus musculus），通过血凝抑制（hemagglutination inhibition, HI）实验和中和实验（neutralizing test, NT）检测抗体的效价，并检测二次免疫6周后白细胞介素-2 （interleukin-2, IL-2）水平。结果显示，成功构建了重组植物表达载体pCAMBIA1300-HN，并鉴定出85个阳性愈伤，HN蛋白在水稻细胞中成功表达和纯化。免疫小鼠后，除PBS组，每组产生的抗体水平达到免疫保护效果（HI≥24），能够产生中和抗体，具有病毒中和作用。本研究在水稻细胞中表达了新城疫HN蛋白，建立了HN蛋白纯化方法，低剂量HN蛋白免疫动物后，具有良好的免疫效果，为今后新城疫亚单位疫苗的研究提供了参考依据。

关键词：新城疫病毒(NDV) 血凝素-神经氨酸酶蛋白(HN) 水稻细胞纯化免疫试验

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两种司帕沙星完全抗原的合成鉴定及免疫效果研究

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中国食品学报 2014年第4期14卷 191-197页

作者：贾国超张改平职爱民宋春美张静李梦琴河南农业大学食品科学技术学院郑州450002 河南省农业科学院农业部动物免疫学重点开放实验室河南省动物免疫学重点实验室郑州450002

目的:用两种方法合成司帕沙星人工抗原,并制备相应的鼠源多克隆抗体。方法:用混合酸酐法和DCC法将半抗原SPFX与BSA偶联制备免疫原SPFX-BSA,通过DCC法制备人工包被原SPFX-OVA,采用紫外光扫描和聚丙烯酰胺凝胶电泳进行鉴定与分析。免疫小... 详细信息

目的:用两种方法合成司帕沙星人工抗原,并制备相应的鼠源多克隆抗体。方法:用混合酸酐法和DCC法将半抗原SPFX与BSA偶联制备免疫原SPFX-BSA,通过DCC法制备人工包被原SPFX-OVA,采用紫外光扫描和聚丙烯酰胺凝胶电泳进行鉴定与分析。免疫小鼠后,采用间接ELISA法测定多抗血清效价,阻断ELISA,鉴定其抑制价和特异性。结果:UV和SDS-PAGE鉴定结果初步表明SPFX人工抗原成功合成;动物试验表明,4只小鼠多抗血清效价均在3.2×104以上,其中1号小鼠IC50值为163.87 ng/mL,与其他竞争物无明显交叉反应,抗体特异性良好。结论:两种偶联方法均能成功合成人工抗原,制备出鼠源抗SPFX多克隆抗体,其中混合酸酐法能明显提高完全抗原的合成和免疫效果。

关键词：司帕沙星人工抗原合成多抗血清酶联免疫吸附

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伏马菌素B1兔源多克隆抗血清的制备与鉴定

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中国食品学报 2014年第4期14卷 216-221页

作者：王耀胡骁飞刘胜男裴亚峰张改平李志西邓瑞广河南省农业科学院农业部动物免疫学重点实验室河南省动物免疫学重点实验室郑州450002 西北农林科技大学食品科学与工程学院陕西杨凌712100 河南省农业科学院农业部动物免疫学重点实验室河南省动物免疫学重点实验室郑州450002 三门峡出入境检验检疫局河南三门峡472000 河南农业大学牧医工程学院郑州450002

目的:合成伏马菌素B1(FB1)人工抗原,制备敏感性高、特异性强的FB1兔源多克隆抗血清。方法:采用EDC法制备人工抗原,将FB1分别偶联于载体蛋白牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)上。通过免疫新西兰兔制备多抗血清,间接ELISA方法测定抗血清效... 详细信息

目的:合成伏马菌素B1(FB1)人工抗原,制备敏感性高、特异性强的FB1兔源多克隆抗血清。方法:采用EDC法制备人工抗原,将FB1分别偶联于载体蛋白牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)上。通过免疫新西兰兔制备多抗血清,间接ELISA方法测定抗血清效价,间接竞争ELISA鉴定敏感性和特异性。结果:2只新西兰兔生产的多抗血清效价在1∶1.28×105以上,其中,2号多抗血清敏感性最好,半数抑制浓度IC50为17 ng/mL,且具有良好的特异性。结论:成功制备了敏感性高、特异性强的FB1兔源多克隆抗体血清,为建立FB1免疫学快速检测方法提供了理论基础。

关键词：伏马菌素B1 人工抗原兔源多抗血清酶联免疫吸附

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猪圆环病毒2型主要蛋白编码序列的密码子偏性分析

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动物医学进展 2022年第5期43卷 36-41页

作者：冯华刘运超李青梅金前跃张改平河南省农业科学院动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室河南郑州450002

为进一步了解猪圆环病毒2型(PCV2)分子进化特点,以PCV2主要蛋白编码序列ORF1和ORF2为研究对象,对74株不同亚型(2a-2e)PCV2进行核酸组成、相对同义密码子使用频率(RSCU)、有效密码子数目(ENC)、中性绘图和密码自适应指数等生物信息学分析... 详细信息

为进一步了解猪圆环病毒2型(PCV2)分子进化特点,以PCV2主要蛋白编码序列ORF1和ORF2为研究对象,对74株不同亚型(2a-2e)PCV2进行核酸组成、相对同义密码子使用频率(RSCU)、有效密码子数目(ENC)、中性绘图和密码自适应指数等生物信息学分析,以了解PCV2密码子使用模式及其影响因素。结果显示,相比AU含量,PCV2 GC含量较低(低于50%),但更倾向于使用以C和U结尾的密码子;RSCU值和对应分析显示在密码子使用上,各亚型PCV2间差异较小,但PCV2各亚型与寄主Sus.s间则存在较大的差异;ENC分析和中性分析显示,相比突变压力,各亚型PCV2密码子使用模式受到较大程度的自然选择的影响;CAI值分析结果进一步确定,相比PCV2c和PCV2e,PCV2a、2b和2d在密码子使用上更适应其寄主。论文揭示了自然选择是影响PCV2密码子使用模式的重要因素,并分析了影响各PCV2亚型流行的因素,该结果有助于PCV2分子进化的研究和理解该病毒在其寄主内翻译的机制。

关键词：猪圆环病毒2型亚型基因密码子密码子偏性

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西马特罗人工抗原的合成及鼠源多克隆抗血清的制备

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华北农学报 2010年第4期25卷 97-101页

作者：职爱民刘庆堂李青梅杨苏珍胡骁飞柴书军邓瑞广张改平河南省农业科学院农业部动物免疫学重点实验室河南省动物免疫学重点实验室河南郑州450002

拟合成并鉴定西马特罗(Cimaterol,CIM)人工抗原,通过动物免疫生产亲和力高、特异性好的鼠源CIM多克隆抗血清。通过重氮化方法将西马特罗偶联于载体蛋白BSA和OVA上,分别合成免疫抗原BSA-CIM和包被抗原OVA-CIM,并采用紫外分光光度法和SDS-... 详细信息

拟合成并鉴定西马特罗(Cimaterol,CIM)人工抗原,通过动物免疫生产亲和力高、特异性好的鼠源CIM多克隆抗血清。通过重氮化方法将西马特罗偶联于载体蛋白BSA和OVA上,分别合成免疫抗原BSA-CIM和包被抗原OVA-CIM,并采用紫外分光光度法和SDS-PAGE进行了鉴定。结果表明,半抗原CIM和载体蛋白偶联成功。动物免疫试验结果显示,6只小鼠效价均达1×10-3以上,且4号小鼠多抗血清抗CIM的IC50为86.9ng/mL,表明成功获得了高效价、特异性好、亲和力高的的鼠源抗CIM多抗血清。

关键词：西马特罗人工抗原合成多抗血情

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人热休克蛋白10和鼠热休克蛋白10的克隆、序列分析及其原核表达

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华北农学报 2011年第3期26卷 56-59页

作者：王丽杜晓明王林林史西保藤蔓李功权权凯郭军庆张改平河南省农业科学院农业部动物免疫学重点实验室河南省动物免疫学重点实验室河南郑州450002

提取人肝癌SMMC-7721细胞和小鼠NS0细胞总RNA,对热休克蛋白10基因(Hsp10)进行RT-PCR扩增、TA克隆和测序。结果表明,从上述2种细胞中获得的cDNA分别由312,313 bp组成,与报道的人HSPE1 mRNA(NM-002157)、鼠肌肉Hspe1 mRNA(NM-008303)序列同源性分别为99%,97%,命名为HSPE1-1和Hspe1-1,序列分析表明,二者之间在核苷酸水平上的同源性为92%,氨基酸水平上的同源性为97%。将上述2种cDNA进行双酶切、亚克隆,成功构建了重组表达载体pET-28a-HSPE1-1与pET-28a-Hspe1-1,转化大肠杆菌并进行了诱导表达。检测结果表明,pET-28a-HSPE1-1与pET-28a-Hspe1-1均能在大肠杆菌中表达,表达蛋白分子量大小约为14 kDa,与预期大小一致。Western-Blot结果证实了其为目的蛋白,经镍树脂柱纯化,获得了相应的重组蛋白。为进一步研究这2种蛋白的结构、功能及临床应用奠定了基础。

关键词：热休克蛋白人热休克蛋白1 鼠热休克蛋白1 基因克隆原核表达

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狂犬病病毒糖蛋白胞外区基因的原核表达、纯化及鉴定

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华北农学报 2010年第3期25卷 28-31页

作者：杨艳艳王丽杨继飞郅玉宝滕蔓邓瑞广肖治军张改平河南省农业科学院农业部动物免疫学重点开放实验室河南省动物免疫学重点实验室河南郑州450002

利用RT-PCR技术,将狂犬病病毒株ERA株糖蛋白胞外区基因分两段进行扩增,经克隆与序列分析,两片段大小分别为523,381 bp,各编码174,127个氨基酸,分子量分别为19.7,14.5 kDa。在原核表达载体pET-43a中分别克隆了这两段糖蛋白基因,将重组质... 详细信息

利用RT-PCR技术,将狂犬病病毒株ERA株糖蛋白胞外区基因分两段进行扩增,经克隆与序列分析,两片段大小分别为523,381 bp,各编码174,127个氨基酸,分子量分别为19.7,14.5 kDa。在原核表达载体pET-43a中分别克隆了这两段糖蛋白基因,将重组质粒转化到表达菌BL21(DE3)中,经SDS-PAGE电泳分析,在分子量约为94,89kDa处分别出现新蛋白带,和预期的目的蛋白的分子量相符。两重组蛋白主要以可溶形式表达,利用Ni2+亲和层析柱纯化了蛋白,纯度大于95%。Western-Blot分析结果显示,两种重组融合蛋白均可与兔抗RBV多抗血清反应,具有良好的反应原性。

关键词：狂犬病病毒糖蛋白胞外区纯化

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