检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医学报 2019年第11期39卷 2135-2139,2151页

作者：秦飞燕孙杰马凡舒王洋柏玲张蕾闫喜军中国农业科学院特产研究所特种经济动物分子生物学国家重点实验室/农业部经济动物疫病重点实验室吉林长春130122 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室河南郑州450002

为探究水貂阿留申病毒(ADV)VP2主要抗原表位在水貂阿留申病血清学诊断中的作用,本试验将VP2蛋白主要抗原区的表位基因用柔性肽串联连接,将其克隆到表达载体pET-30a(+)中进行原核表达,并对诱导条件进行优化。利用Ni-NTA His-Bind纯化系... 详细信息

为探究水貂阿留申病毒(ADV)VP2主要抗原表位在水貂阿留申病血清学诊断中的作用,本试验将VP2蛋白主要抗原区的表位基因用柔性肽串联连接,将其克隆到表达载体pET-30a(+)中进行原核表达,并对诱导条件进行优化。利用Ni-NTA His-Bind纯化系统对融合蛋白进行纯化,经SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物,并将融合蛋白作为检测抗原进行CIEP试验。结果显示,融合蛋白在IPTG终浓度为1mmol/L、37℃诱导表达4h,蛋白表达量最高,其大小约为30000,以可溶性表达形式为主;融合蛋白能与6×His单克隆抗体及ADV多克隆抗体发生特异性反应,说明该蛋白具有较好的反应原性;且该蛋白作为对流免疫电泳技术(CIEP)检测抗原与ADV阳性血清之间产生了明显的沉淀线,证实了该蛋白作为CIEP检测抗原的可能性。以纯化后的重组蛋白为抗原初步建立的间接ELISA方法具有较高的准确性。结果表明该蛋白具有良好的血清学检测价值,为水貂阿留申病血清学诊断方法的建立奠定了基础。

关键词：阿留申病毒 VP2蛋白表位基因原核表达 CIEP ELISA

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诺氟沙星单克隆抗体的制备及其特性鉴定

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中国预防兽医学报 2010年第9期32卷 716-720页

作者：刘庆堂职爱民李青梅柴书军赵东张磊邓瑞广张改平河南省农业科学院农业部动物免疫学重点开放实验室河南郑州450002

为制备诺氟沙星单克隆抗体(MAb),用碳二亚胺法将诺氟沙星(Norfloxacin,NFLX)分别偶联于载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA),合成免疫原BSA-NFLX和包被原OVA-NFLX,并用紫外(UV)扫描、SDS-PAGE电泳和免疫小鼠进行鉴定;用BSA-NFLX免... 详细信息

为制备诺氟沙星单克隆抗体(MAb),用碳二亚胺法将诺氟沙星(Norfloxacin,NFLX)分别偶联于载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA),合成免疫原BSA-NFLX和包被原OVA-NFLX,并用紫外(UV)扫描、SDS-PAGE电泳和免疫小鼠进行鉴定;用BSA-NFLX免疫BALB/C小鼠,间接ELISA和阻断ELISA选择细胞融合备用鼠;应用杂交瘤技术建立分泌NFLX MAb的细胞株,用体内诱生腹水法制备NFLX MAb;对NFLX MAb的效价、敏感性和特异性等特性进行测定。结果表明:NFLX人工抗原制备成功,融合筛选后获得3C6、3G11两株特异敏感的杂交瘤细胞,两株细胞培养上清液效价为1∶512,腹水效价为1∶6.4×105,3C6株对NFLX的IC50为2.52μg/L,与二氟沙星、沙拉沙星有小于0.03%的交叉反应性,与其他抑制物无交叉反应性。本实验获得了高效价、敏感、特异的抗NFLXMAb,为NFLX残留快速检测方法的建立奠定了基础。

关键词：诺氟沙星单克隆抗体免疫学特性

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H5N1亚型禽流感病毒核衣壳蛋白(NP)基因的进化及原核表达

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华北农学报 2010年第3期25卷 19-22页

作者：邬成业王爱萍郝慧芳史平玲游雷鸣李培培张改平河南省农业科学院农业部动物免疫学重点开放实验室河南省动物免疫学重点实验室河南郑州450002 郑州大学生物工程系河南郑州450001

参考GenBank上H5N1亚型禽流感病毒(AIV)的核衣壳蛋白(NP)基因序列设计引物,PCR扩增NP基因,对其进行序列分析并构建分子进化树。将克隆的NP基因插入原核表达载体pET32a,在大肠杆菌中进行诱导表达,对诱导表达的NP重组蛋白进行纯化、Wester... 详细信息

参考GenBank上H5N1亚型禽流感病毒(AIV)的核衣壳蛋白(NP)基因序列设计引物,PCR扩增NP基因,对其进行序列分析并构建分子进化树。将克隆的NP基因插入原核表达载体pET32a,在大肠杆菌中进行诱导表达,对诱导表达的NP重组蛋白进行纯化、Western-Blot鉴定及免疫原性分析。结果表明,克隆的NP基因与GenBank上发表的另外2个河南AIV毒株亲缘关系较近,诱导表达的NP重组蛋白主要以可溶性形式存在,分子量约为70 kDa,并且能够与H5亚型AIV阳性血清发生特异性反应,具有良好的抗原性。

关键词：禽流感病毒 H5亚型核衣壳蛋白(NP) 原核表达

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缺失免疫抑制位点的人早孕因子重组蛋白的免疫原性

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细胞与分子免疫学杂志 2011年第8期27卷 918-920,922页

作者：王林林张改平郭军庆王丽杜晓明冯华权凯王爱萍郑州大学生物工程系河南郑州450001 河南省农业科学院农业部动物免疫学重点开放实验室/河南省动物免疫学重点实验室河南郑州450002

目的:构建缺失免疫抑制位点的人早孕因子基因的原核表达载体pGEX6P-EPF11,诱导GST-EPF11融合蛋白在大肠杆菌中表达,并免疫小鼠,测定效价。方法:以pMD18T-HSPE1模板,PCR扩增缺失免疫抑制位点的人早孕因子基因片段,经限制性内切酶BamHI和X... 详细信息

目的:构建缺失免疫抑制位点的人早孕因子基因的原核表达载体pGEX6P-EPF11,诱导GST-EPF11融合蛋白在大肠杆菌中表达,并免疫小鼠,测定效价。方法:以pMD18T-HSPE1模板,PCR扩增缺失免疫抑制位点的人早孕因子基因片段,经限制性内切酶BamHI和XhoI双酶切后,连接到原核表达载体pGEX-6P-1中,构建重组表达质粒pGEX6P-EPF11。将表达质粒转化大肠杆菌BL21,以1 mmol/L IPTG进行诱导表达GST-EPF11融合蛋白,Western blot鉴定。以表达的GST-EPF11融合蛋白作为免疫原免疫小鼠,抗体效价用ELISA检测。结果:在大肠杆菌中成功表达出相对分子质量约35 000的融合蛋白GST-EPF11。ELISA法检测免疫小鼠的抗体血清可达1∶12 800。结论:在大肠杆菌中成功表达出GST-EPF11融合蛋白,并免疫了小鼠,测定了抗体效价,为下步制备缺失免疫抑制位点的人早孕因子的单克隆抗体(mAb)奠定了基础。

关键词：早孕因子免疫抑制位点原核表达 PCR

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鸡TGFβ1对MDCC-MSB1细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响

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畜牧兽医学报 2020年第10期51卷 2567-2575页

作者：余祖华丁轲贾艳艳郁川何雷廖成水李静张春杰李银聚吴庭才程相朝门凯凯张瑾余祖玲周子誉罗俊河南科技大学动物疫病与公共卫生重点实验室洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室洛阳471023 洛阳职业技术学院洛阳471003 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室农业部动物免疫学重点实验室河南省动物免疫学重点实验室郑州450002

旨在探讨鸡TGFβ1对MDCC-MSB1细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响。作者将构建的鸡TGFβ1过表达载体、干扰表达载体以及相应阴性对照转染MDCC-MSB1细胞,然后检测转染后各组细胞鸡TGFβ1的表达水平、细胞增殖能力、细胞周期与凋亡,细胞的... 详细信息

旨在探讨鸡TGFβ1对MDCC-MSB1细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响。作者将构建的鸡TGFβ1过表达载体、干扰表达载体以及相应阴性对照转染MDCC-MSB1细胞,然后检测转染后各组细胞鸡TGFβ1的表达水平、细胞增殖能力、细胞周期与凋亡,细胞的迁移与侵袭能力。结果显示,与相应阴性对照相比,转染TGFβ1过表达质粒可显著上调MDCC-MSB1细胞的TGFβ1表达水平,显著抑制MDCC-MSB1细胞的增殖,且使G1期细胞增加、S和G2期细胞减少,同时增加细胞凋亡率,降低细胞的迁移与侵袭能力;转染TGFβ1干扰表达质粒可显著下调MDCC-MSB1细胞的TGFβ1表达水平,显著促进MDCC-MSB1细胞的增殖,G1期细胞减少、S和G2期细胞增加,同时降低细胞凋亡率,增加细胞的迁移与侵袭能力。结果表明,鸡TGFβ1可抑制MDCC-MSB1细胞增殖、迁移与侵袭,促进其凋亡。

关键词： TGFβ1 MDCC-MSB1细胞细胞增殖细胞凋亡迁移侵袭

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赭曲霉毒素A人工抗原的合成与鉴定

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食品工业科技 2011年第5期32卷 172-175页

作者：孙亚宁胡骁飞邓瑞广职爱民刘庆堂柴书军王磊宋幸辉侯玉泽张改平河南省农业科学院农业部动物免疫学重点开放实验室河南省动物免疫学重点实验室河南郑州450002 河南科技大学食品与生物工程学院河南洛阳471003

采用N-羟琥珀酰亚胺酯(N-hydroxysuccinimide NHS)法将赭曲霉毒素A(OTA)与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备了免疫抗原OTA-BSA,采用1-乙基-3(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)法将赭曲霉毒素A(OTA)与卵清白蛋白(OVA)偶联制备了包被抗原OTA-OVA... 详细信息

采用N-羟琥珀酰亚胺酯(N-hydroxysuccinimide NHS)法将赭曲霉毒素A(OTA)与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备了免疫抗原OTA-BSA,采用1-乙基-3(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)法将赭曲霉毒素A(OTA)与卵清白蛋白(OVA)偶联制备了包被抗原OTA-OVA。紫外扫描和SDS-PAGE凝胶电泳结果初步表明偶联成功。用OTA-BSA分10μg/只和50μg/只两个剂量分别免疫BALB/C小鼠,获得了高效价的特异性多克隆抗血清,效价可达1∶104,抑制效价达14.7ng,证明偶联成功,并显示低剂量免疫可以提高小鼠pAb的敏感性。本研究为OTA单抗的制备及其免疫学分析方法的建立奠定了基础。

关键词：赭曲霉毒素A 免疫原制备 ELISA

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猪细小病毒病研究进展

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动物医学进展 2024年第3期45卷 107-110页

作者：刘运超陈玉梅杨苏珍魏蔷郝慧芳柴书军河南省农业科学院动物免疫学重点实验室河南郑州450002

猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)是一种无囊膜DNA病毒,主要引起母猪繁殖障碍。该病毒在全世界广泛流行,我国猪场PPV感染率高达90%以上,给养猪业带来巨大经济损失。PPV经口、鼻传播,主要侵染猪的生殖器官,引起母猪的死胎、木乃伊胎... 详细信息

猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)是一种无囊膜DNA病毒,主要引起母猪繁殖障碍。该病毒在全世界广泛流行,我国猪场PPV感染率高达90%以上,给养猪业带来巨大经济损失。PPV经口、鼻传播,主要侵染猪的生殖器官,引起母猪的死胎、木乃伊胎和公猪的精液质量下降。临床采用接种疫苗的方式进行防控,起到了一定的效果。论文对病毒的基因组和蛋白特征、流行病学和疫苗研究进行综述,以期为PPV的基础研究和疫苗开发提供参考。

关键词：猪细小病毒 VLP组装病毒抗原表位 VP2蛋白

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gga-miR-155对MDCC-MSB1细胞生物学行为的影响

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畜牧兽医学报 2018年第11期49卷 2496-2504页

作者：余祖华丁轲郁川贾艳艳何雷廖成水李静张春杰李银聚吴庭才程相朝张梦珂邱静静罗俊河南科技大学动物疫病与公共卫生重点实验室洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室洛阳471023 洛阳职业技术学院洛阳471003 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室农业部动物免疫学重点实验室河南省动物免疫学重点实验室郑州450002

为了解gga-miR-155对MDCC-MSB1细胞生物学行为的影响,将人工合成的gga-miR-155模拟物、gga-miR-155抑制物以及阴性对照瞬时转染MDCC-MSB1细胞。然后采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测MDCC-MSB1细胞中gga-miR-155的表达水平,CCK-8法检测转染后细胞增殖能力的变化,流式细胞术检测MDCC-MSB1细胞的细胞周期与凋亡的变化,Transwell检测MDCC-MSB1细胞的迁移、侵袭能力的变化。结果显示,gga-miR-155模拟物可显著上调MDCC-MSB1细胞gga-miR-155表达水平,促进MDCC-MSB1细胞增殖,细胞G1期细胞减少,S和G2期细胞增加,同时凋亡减少,迁移、侵袭能力增加;gga-miR-155抑制物可显著下调MDCCMSB1细胞gga-miR-155表达水平,抑制MDCC-MSB1细胞增殖,细胞G1期细胞增加、S和G2期细胞减少,同时凋亡增加,迁移、侵袭能力下降。结果表明,gga-miR-155可促进MDCC-MSB1细胞增殖、迁移和侵袭,抑制其凋亡。

关键词： gga-miR-155 MDCC-MSB1细胞细胞增殖细胞凋亡迁移侵袭

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猪FcγRⅢ和γ链共转染Marc-145细胞系的建立

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华北农学报 2011年第1期26卷 6-10页

作者：邬成业史平玲乔松林王爱萍郝慧芳杜晓明王林林张改平河南省农业科学院农业部动物免疫学重点开放实验室河南省动物免疫学重点实验室河南郑州450002 郑州大学生物工程系河南郑州450001

为了建立稳定表达猪FcγRⅢ(Porcine Fc gamma receptorⅢ,poFcγRⅢ)的Marc-145细胞系,从PAM细胞中提取总RNA,应用RT-PCR技术获得猪FcγRⅢ和γ链的cDNA,并构建PIREShyg3-γ和pcDNA3.1-FcγRⅢ真核表达质粒;用脂质体共转染Marc-145细胞,经潮霉素B(300 mg/L)和G418(400 mg/L)共筛选获得稳定表达猪FcγRⅢ的细胞系;运用RT-PCR、玫瑰花环试验和流式细胞术对细胞系进行了鉴定。结果表明,成功构建了猪FcγRⅢ和γ链真核表达载体,建立了稳定表达猪FcγRⅢ的细胞系,表达于转染细胞表面的猪FcγRⅢ受体分子能与猪IgG特异结合。

关键词：猪FcγRⅢ受体 γ链共转染 Marc145细胞

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猪繁殖与呼吸综合征病毒膜融合机制研究进展

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动物医学进展 2021年第2期42卷 88-91页

作者：李睿乔松林张改平河南省农业科学院动物免疫学重点实验室河南郑州450002

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的高度接触性传染疫病,对全球尤其是我国养猪业危害巨大。然而,目前对PRRS防控并未取得实质性成效,究其原因是PRRSV具有独特而且复杂的感染机制。作为一种具有囊膜的病毒... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的高度接触性传染疫病,对全球尤其是我国养猪业危害巨大。然而,目前对PRRS防控并未取得实质性成效,究其原因是PRRSV具有独特而且复杂的感染机制。作为一种具有囊膜的病毒,PRRSV感染宿主细胞必须经病毒囊膜与宿主靶细胞膜的融合(membrane fusion),这是由病毒膜融合蛋白(fusion protein)介导,宿主细胞受体、蛋白酶等诸多因素共同参与的复杂过程。干扰PRRSV膜融合将会有效阻止病毒的感染与传播。论文通过总结PRRSV膜融合机制最新研究进展,旨在为防控PRRS提供新的理论依据,同时为PRRSV新型药物开发、新型疫苗研制提供参考。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒感染膜融合膜融合蛋白蛋白酶

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