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中国组织工程研究 2025年第28期29卷 6070-6082页

作者：柳小军商雨情管文超许琳琳李贵才河南省药品医疗器械检验院河南省郑州市450018 国家药监局医用生物防护及植入器械质量评价重点实验室河南省郑州市450018 南通大学神经再生教育部重点实验室江苏省南通市226001

背景:取向性聚己内酯/丝素蛋白共混静电纺丝支架修复周围神经损伤可促进神经再生,但修复效果有限,还需要进一步结合生物活性材料、生长因子等因素制备仿生神经支架。钛酸钙纳米颗粒具有促进施万细胞间黏附的能力,已被广泛运用于生物医... 详细信息

背景:取向性聚己内酯/丝素蛋白共混静电纺丝支架修复周围神经损伤可促进神经再生,但修复效果有限,还需要进一步结合生物活性材料、生长因子等因素制备仿生神经支架。钛酸钙纳米颗粒具有促进施万细胞间黏附的能力,已被广泛运用于生物医学材料领域。目的:采用静电纺丝技术制备取向性聚己内酯/丝素蛋白-钛酸钙功能化支架,进一步探索该支架对施万细胞活力与黏附的影响。方法:采用静电纺丝技术制备聚己内酯/丝素蛋白支架,通过调整制备过程中的注射器流速、接收装置转速、纺丝时间筛选最优参数进行后续实验。在最优参数下,采用静电纺丝技术制备随机取向聚己内酯/丝素蛋白支架(记为PCL/SF-R)、取向性聚己内酯/丝素蛋白支架(记为CTO-0)及含0.1,0.5,1.0 mg/mL聚多巴胺修饰钛酸钙的取向性聚己内酯/丝素蛋白支架(依次记为CTO-1、CTO-5、CTO-10),表征5组支架的物理性能。将5组支架浸提液分别与大鼠成纤维细胞系(L929)共培养,采用MTT法检测细胞增殖。将大鼠施万细胞系(RSC96)分别接种于5组支架上,进行细胞活力、细胞骨架染色及细胞骨架与细胞黏附相关基因检测。结果与结论:①制备静电纺丝支架的最优参数为:注射器流速15μL/min,接收装置转速1800 r/min,纺丝时间1 h;②PCL/SF-R组水接触角最大、弹性模量最小,CTO-0组水接触角最小、弹性模量最大;CTO-0组支架降解速率低于CTO-1组,并且随着取向性支架中钛酸钙质量浓度的增加,支架的降解速率降低;③5组支架对L929细胞无毒性作用,具有良好的生物相容性;CCK-8检测结果显示,CTO-10可提升RSC96细胞活力;细胞骨架染色结果显示,取向性支架上细胞的长宽比和细胞突起长度均高于随机取向支架;qPCR检测结果显示,CTO-5组、CTO-0组YAP、Cntn2 mRNA表达均高于PCL/SF-R组(P<0.05);④结果表明,取向性聚己内酯/丝素蛋白-钛酸钙支架具有良好的生物相容性、力学性能及亲水性,可提升施万细胞的活力与迁移能力,促进周围神经再生。

关键词：钛酸钙取向性静电纺丝聚己内酯丝素蛋白周围神经再生工程化神经材料

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兔心包液CD44和波形蛋白阳性细胞具有多项分化潜能

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解剖学报 2019年第6期50卷 735-740页

作者：孙莹孙攀文郭志坤新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室

目的探讨兔心包液内的细胞成分及其分化潜能,为心包液细胞基础研究和临床应用提供形态学依据。方法成年新西兰大白兔30只,无菌开胸,用输液针软管抽取心包液,离心培养。取不同培养代次细胞,倒置显微镜下行细胞形态观察。利用免疫荧光... 详细信息

目的探讨兔心包液内的细胞成分及其分化潜能,为心包液细胞基础研究和临床应用提供形态学依据。方法成年新西兰大白兔30只,无菌开胸,用输液针软管抽取心包液,离心培养。取不同培养代次细胞,倒置显微镜下行细胞形态观察。利用免疫荧光技术对心包液细胞进行免疫显色,观察CD44、CD45、波形蛋白(vimentin)的表面标记。取第3代细胞进行成骨、成脂诱导。利用PCR技术检测CD44、CD45、vimentin相关分子表达情况及分析表达量的差异。结果成年兔心包液中含有形态较为均匀、生长状态良好、增殖能力强的细胞群。免疫荧光结果显示,CD44、vimentin阳性表达,不表达CD45。成脂和成骨诱导后,可向成骨和成脂细胞分化。结论兔心包液中含有多项分化潜能的细胞,它们可能对心肌修复具有积极意义。

关键词： CD44 CD45 波形蛋白心包液免疫荧光新西兰白兔

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镁基生物材料在骨科中的改性研究进展

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新乡医学院学报 2025年第4期42卷 260-265页

作者：朱振东皇甫晶晶李月路坦姜来胡涛任文杰新乡医学院组织工程与再生临床医学中心河南新乡453003 新乡医学院第三附属医院河南省创伤与骨科研究医学重点实验室河南新乡453003 新乡医学院第一附属医院骨科河南卫辉453100 南京吾岳道医疗科技发展有限公司江苏南京210000 上海骁博科技发展有限公司上海200120

随着生物医学工程的不断发展,镁基生物材料因其优异的生物相容性、适中的密度以及良好的生物降解性,成为骨科植入材料研究的热点。镁基生物材料能够在体内逐渐降解并被骨组织吸收,从而避免传统金属生物材料在治疗过程中需要二次手术取... 详细信息

随着生物医学工程的不断发展,镁基生物材料因其优异的生物相容性、适中的密度以及良好的生物降解性,成为骨科植入材料研究的热点。镁基生物材料能够在体内逐渐降解并被骨组织吸收,从而避免传统金属生物材料在治疗过程中需要二次手术取出的弊端。然而,镁基生物材料仍然面临降解速率过快、耐腐蚀性较差、力学性能不稳定等问题,限制了其在临床上的广泛应用。为了解决这些挑战,研究人员开发了多种改性方法,包括合金化、表面处理、多孔结构设计以及纳米技术等。本文总结了镁基生物材料的基本特性,探讨了各类改性技术的原理、优势与局限性,并展望了未来的发展方向。

关键词：镁基生物材料骨科植入材料合金化改性表面处理多孔化纳米技术

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新生大鼠心脏成纤维细胞体外分裂方式

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解剖学报 2016年第1期47卷 55-61页

作者：李辞霞常玉巧郭志坤新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的观察体外培养状态下心脏成纤维细胞（CFs）的形态特征和分裂增殖方式。方法原代培养新生大鼠CFs，免疫荧光双标法分别检测波形蛋白和磷酸化组蛋白H3（H3P）共表达，波形蛋白和微管蛋白共表达。利用活细胞工作站和荧光显微镜观目的... 详细信息

目的观察体外培养状态下心脏成纤维细胞（CFs）的形态特征和分裂增殖方式。方法原代培养新生大鼠CFs，免疫荧光双标法分别检测波形蛋白和磷酸化组蛋白H3（H3P）共表达，波形蛋白和微管蛋白共表达。利用活细胞工作站和荧光显微镜观目的观察处于不同分裂期的细胞时相。结果CFs 0．5～1h贴壁，培养2～3d细胞增殖旺盛，大量细胞进入有丝分裂期，其中多数CFs先隆起变圆，而少数则仍维持扁平状进行分裂。偶见无丝分裂现象。圆隆型有丝分裂时长为20～30min，扁平型分裂时长为40～50min。分裂前期胞核形状规则，H3P开始表达；前中期核膜破裂，纺锤体形成；中期染色体排列在赤道面，H3P高表达，纺锤体呈典型纺锤样；后期染色单体分开并移向两极，H3P在染色单体上持续表达；末期两个子核形成，微管聚集在两子核之间；胞质分裂期，两个子细胞形成，H3P不表达。结论体外培养的CFs存在圆隆型和扁平型两种有丝分裂形态，在分裂方式上存在有丝分裂和无丝分裂两种形式。

关键词：有丝分裂无丝分裂活细胞工作站心脏成纤维细胞免疫荧光新生大鼠

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5-氮杂胞苷诱导大鼠心脏成纤维细胞向心肌样细胞分化进程相关基因的表达差异

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解剖学报 2020年第6期51卷 861-867页

作者：常玉巧贾阳阳韩贝郭志坤新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的探讨5-氮杂胞苷(5-aza)诱导心脏成纤维细胞(CFs)向心肌样细胞分化5 d、7 d、14 d、21 d和28 d相关基因的表达差异。方法新生1~3 d SD大鼠12只,胰蛋白酶/胶原酶联合消化法分离培养新生大鼠CFs,采用CFs分子标记盘状结构域受体2(DDR2)... 详细信息

目的探讨5-氮杂胞苷(5-aza)诱导心脏成纤维细胞(CFs)向心肌样细胞分化5 d、7 d、14 d、21 d和28 d相关基因的表达差异。方法新生1~3 d SD大鼠12只,胰蛋白酶/胶原酶联合消化法分离培养新生大鼠CFs,采用CFs分子标记盘状结构域受体2(DDR2)并行细胞免疫荧光染色。含15μmol/L 5-aza心肌细胞诱导液培养第3代CFs,Real-time PCR检测心肌化诱导不同时间点相关基因vimentin、DDR2、Nanog、sox2、c-kit、sca-1、Tbx5、CD73、CD34、c Myc、klf4、Gata4、Oct4、Mef2c和心肌肌钙蛋白T(c Tn T)的表达差异,细胞免疫荧光检测心肌化诱导后5 d、7 d、14 d、21 d和28 d肌钙蛋白T(c Tn T)的表达。透射电子显微镜观察心肌化诱导28 d CFs的超微结构变化。结果 5-aza诱导CFs后3 d细胞生长速率减慢,部分细胞由三角形、梭形向圆形和杆状转变。诱导后7 d、14 d、21 d和28 d,与诱导前相比,DDR2表达稳定,vimentin在14 d表达下降,Nanog、c-kit、sox2和Tbx5伴随着心肌化进程呈现表达下降趋势,而CD73、Mef2c、CD34、Gata4、Oct4和c Tn T表达逐步增加,sca-1在7 d表达上升又下降,c Myc和klf4在14 d表达上升又下降。诱导后5 d少量细胞表达c Tn T,14~21 d c Tn T阳性细胞数明显增高,28 d表达c Tn T较多且趋于稳定。透射电子显微镜显示,CFs心肌化诱导28 d,细胞与细胞间出现端-端连接,细胞质内出现大量的肌原纤维,排列较为规律,但肌节不明显,H带、Z线和M线显示不清。结论 CFs经5-aza诱导,可向心肌样细胞分化,但不能形成成熟的心肌细胞。

关键词： 5-氮杂胞苷心脏成纤维细胞心肌样细胞基因表达实时定量聚合酶链反应大鼠

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体外培养状态下心肌细胞有丝分裂的证据

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解剖学报 2015年第1期46卷 63-68页

作者：李辞霞卢杏郭志坤新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的探讨体外培养状态下心肌细胞有丝分裂、增殖的证据。方法分离新生大鼠心肌细胞,分别原代培养0h至12d;免疫荧光分别双标心肌肌钙蛋白-T（c Tn T）、磷酸化组蛋白H3（H3P）和微管蛋白（tubulin）,利用活细胞工作站和荧光显微镜观察处... 详细信息

目的探讨体外培养状态下心肌细胞有丝分裂、增殖的证据。方法分离新生大鼠心肌细胞,分别原代培养0h至12d;免疫荧光分别双标心肌肌钙蛋白-T（c Tn T）、磷酸化组蛋白H3（H3P）和微管蛋白（tubulin）,利用活细胞工作站和荧光显微镜观察处于分裂期的心肌细胞。结果原代培养的心肌细胞生长状态好、纯度高,可观察到分裂各期的心肌细胞及其微管蛋白的变化。处于分裂各期的心肌细胞不隆起变圆仍维持扁平状。分裂前期细胞核形状规则,染色质凝集,H3P开始表达;前中期核膜破裂,纺锤体形成;中期染色体排列在赤道面,纺锤体呈典型纺锤样;后期染色单体分开并移向两极;末期子核形成,平行微管聚结在两子核之间;胞质分裂期形成两个子细胞,两个细胞分开后,可见有少量微管呈丝状连接。原代培养1～12d的心肌细胞在整个细胞分裂图像中很少见到双核心肌细胞。培养第3天开始发现分裂象的心肌细胞,占总心肌细胞数的2/127（1.57%）和1/92（1.09%）,培养第7天,分裂细胞比率达3/69（4.35%）和5/163（3.07%）,培养第12天有2/100（2%）和0/60（0）的心肌细胞处于分裂期。结论体外培养的心肌细胞存在一定数量的完全有丝分裂,是心肌增殖和心肌再生的细胞学证据。

关键词：有丝分裂心肌细胞免疫荧光技术体外培养大鼠

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Nanog蛋白在CD73^+小鼠脂肪源间充质干细胞中的表达

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解剖学报 2012年第5期43卷 619-623页

作者：齐立杰郭志坤李琼罗欢欢新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的探讨Nanog蛋白在小鼠脂肪源间充质干细胞(ADMSCs)中的表达规律。方法体外分离培养ADMSCs,利用流式细胞仪从ADMSCs中分选出CD73+和CD73-两个细胞亚群。体外分别培养两组细胞,用免疫细胞化学和免疫荧光测定两组细胞Nanog蛋白的表达,... 详细信息

目的探讨Nanog蛋白在小鼠脂肪源间充质干细胞(ADMSCs)中的表达规律。方法体外分离培养ADMSCs,利用流式细胞仪从ADMSCs中分选出CD73+和CD73-两个细胞亚群。体外分别培养两组细胞,用免疫细胞化学和免疫荧光测定两组细胞Nanog蛋白的表达,并比较其差异。结果 CD73+ADMSCs细胞约占总细胞的5%,形态上分为大细胞和小细胞。Nanog蛋白在CD73+ADMSCs细胞中强阳性表达率(16.85±6.83)%,弱阳性表达率(81.78±7.19)%,阴性表达率(1.63±3.59)%;nanog蛋白在CD73-ADMSCs细胞中强阳性表达率(5.74±2.79)%,弱阳性表达率(85.84±37.31)%,阴性表达率(8.42±4.12)%。在Nanog阳性表达的细胞中可见不同分裂时相的有丝分裂细胞,CD73+细胞的分裂象明显多于CD73-细胞。结论 CD73和Nanog可能均是ADMSCs特异性表达的标志,Nanog蛋白强阳性的细胞可能更具幼稚性。通常采用分离培养方法获得的ADMSCs是多种细胞的复合物。

关键词： Nanog蛋白脂肪源间充质干细胞 CD73 免疫组织化学免疫荧光小鼠

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着丝粒蛋白A在大鼠心脏的表达及增龄变化

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解剖学报 2018年第4期49卷 512-517页

作者：冯颖殷国田李爱荣郭志坤新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的探讨着丝粒蛋白A(CENP-A)在大鼠心脏中的表达部位及增龄变化。方法取新生1 d、1周龄、2周龄、3周龄、4周龄、3月龄、6月龄大鼠各10只,采用免疫组织化学、免疫荧光、Western blotting、Real-time PCR技术,观察心脏不同部位CENP-A的... 详细信息

目的探讨着丝粒蛋白A(CENP-A)在大鼠心脏中的表达部位及增龄变化。方法取新生1 d、1周龄、2周龄、3周龄、4周龄、3月龄、6月龄大鼠各10只,采用免疫组织化学、免疫荧光、Western blotting、Real-time PCR技术,观察心脏不同部位CENP-A的分布和增龄变化;利用图像分析系统对CENP-A进行定量分析,并对不同年龄组心脏CENP-A含量进行对比。结果大鼠心脏中CENP-A的表达主要分布在血管壁、心外膜及外膜下组织。随着年龄增长血管壁中CENP-A表达基本稳定,心外膜及外膜下组织中CENP-A表达逐渐减少,新生1 d表达最多,3月龄、6月龄明显减少。血管壁中CENP-A主要是在平滑肌细胞表达,且各年龄段表达基本不变。在靠近心外膜的组织中也有少量心肌细胞表达,且随增龄变化而减少。结论大鼠心脏CENP-A的表达随增龄变化逐渐减少,血管壁CENP-A的表达稳定不变。

关键词：着丝粒蛋白心肌组织心外膜心脏免疫组织化学免疫荧光大鼠

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大鼠心肌梗死后心功能变化与新生血管的关系

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解剖学报 2014年第6期45卷 835-840页

作者：左红波李辞霞郭志坤新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的探讨大鼠心肌梗死后心功能变化及其与血管新生之间的关系。方法结扎大鼠左冠状动脉前降支,制备心肌梗死模型,术后利用心脏彩超分别评价梗死后1周、2周、3周和4周的心功能,采用免疫组织化学和Western blotting方法,检测各周大鼠梗死... 详细信息

目的探讨大鼠心肌梗死后心功能变化及其与血管新生之间的关系。方法结扎大鼠左冠状动脉前降支,制备心肌梗死模型,术后利用心脏彩超分别评价梗死后1周、2周、3周和4周的心功能,采用免疫组织化学和Western blotting方法,检测各周大鼠梗死边缘Ⅷ因子和血管内皮生长因子(VEGF)的表达变化。结果大鼠心肌梗死1周时心功能最差,2周和3周心功能有所改善,4周时心功能降低;Ⅷ因子与VEGF于术后1周、2周呈高表达,3周表达开始降低,4周时已接近正常水平。结论梗死后心功能的变化与血管新生不一致,心肌梗死早期血管密度的增加不能明显改善心功能。

关键词： Ⅷ因子血管内皮生长因子心肌梗死新生血管心脏彩超免疫组织化学免疫印迹法大鼠

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心脏成纤维细胞生物表型多样性

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解剖学报 2018年第3期49卷 317-323页

作者：常玉巧李辞霞贾阳阳郭志坤新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的探讨心脏成纤维细胞(CFs)生物表型多样性。方法新生1~3天SD大鼠12只,胰蛋白酶/胶原酶联合消化法分离培养新60只生大鼠CFs,比较原代和传代培养细胞形态学变化,免疫组织化学学检测鉴定常见成纤维细胞标记波形蛋白(vimentin)、成纤维... 详细信息

目的探讨心脏成纤维细胞(CFs)生物表型多样性。方法新生1~3天SD大鼠12只,胰蛋白酶/胶原酶联合消化法分离培养新60只生大鼠CFs,比较原代和传代培养细胞形态学变化,免疫组织化学学检测鉴定常见成纤维细胞标记波形蛋白(vimentin)、成纤维细胞特异性蛋白1(FSP1)和盘状结构域受体(DDR2)的表达,细胞免疫荧光检测CFs干细胞标记nanog、c-kit、sca-1、CD73和CD90的表达,细胞免疫荧光三标技术检测CFs干细胞标记间的共表达情况。结果酶联合消化法分离培养的CFs收获细胞量大,第3代细胞活力好、纯度高。Vimentin、FSP1和DDR2在CFs中均表达,但DDR2在CFs中呈强表达。部分CFs分别表达nanog、c-kit、sca-1、CD73和CD90,部分nanog阳性的CFs分别和CD73、CD90和sca-1,及其CD90和sca-1存在共表达,nanog^+/CD73^+共表达阳性率最高(59.02%±8.39%),与其他3组相比差异均有极显著性(P<0.01);而nanog^+/CD90^+共表达阳性率与nanog^+/sca-1^+之间差异无显著性(P>0.05),但这两组与CD90^+/sca-1^+相比差异均有极显著性(P<0.01);CD90^+/sca-1^+共表达阳性率均低于其他3组,差异具有极显著意义(P<0.01)。结论 CFs是具有干细胞特征混合细胞群,在表型上具有多样性。

关键词：心脏成纤维细胞干细胞标记细胞培养免疫组织化学新生大鼠

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