检索结果-内蒙古大学图书馆

中国组织工程研究 2013年第16期17卷 2961-2967页

作者：王慧玲李琼郭志坤孙永琨 Kuboki Y 新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南省新乡市453003 日本北海道大学

背景:前期研究中已经在Atelocollagen胶原支架培养出了具有收缩功能的乳鼠心肌细胞。目的:在Atelocollagen胶原支架上三维培养成年大鼠心肌细胞。方法:将成年SD大鼠心肌细胞经消化培养并纯化后,种植到Atelocollagen胶原支架上进行三维... 详细信息

背景:前期研究中已经在Atelocollagen胶原支架培养出了具有收缩功能的乳鼠心肌细胞。目的:在Atelocollagen胶原支架上三维培养成年大鼠心肌细胞。方法:将成年SD大鼠心肌细胞经消化培养并纯化后,种植到Atelocollagen胶原支架上进行三维培养。应用倒置显微镜动态观察心肌细胞在Atelocollagen胶原支架上的生长状况;对三维培养的心肌细胞块进行冰冻切片,分别进行肌钙蛋白免疫组织化学和免疫荧光显色,对支架上生长的细胞进行鉴定。结果与结论:成年SD大鼠心肌细胞接种12h开始贴附支架生长,24h与支架汇合、紧密黏附,但心肌细胞并不产生自律性搏动,细胞之间夹杂少量崩解的细胞碎片;48h换液后支架网孔中崩解的细胞被换掉,剩下大部分细胞贴附在支架壁边缘生长。苏木精-伊红染色显示培养48h细胞与支架形成复合体。形态学鉴定证明支架网孔中生长的主要是心肌细胞。免疫组织化学和免疫荧光显色均显示在支架内生长的大部分是心肌细胞,并且紧贴支架,生长良好。

关键词：生物材料细胞外基质材料胶原支架心肌细胞三维培养免疫组织化学免疫荧光成年大鼠省级基金

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正常大鼠心室肌弹性纤维和弹性蛋白的增龄变化

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解剖学报 2013年第1期44卷 106-110页

作者：翟新博武俊芳郭志坤汪艳丽新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室新乡医学院三全学院河南新乡453003

目的探讨大鼠心脏发育过程中弹性蛋白的形态分布特点和增龄变化规律。方法取孕18d、生后10d、生后1个月和生后3个月大鼠各10只,采用地衣红染色、免疫组织化学和Western blotting技术,观测心室弹性纤维的分布和弹性蛋白表达的变化;利用... 详细信息

目的探讨大鼠心脏发育过程中弹性蛋白的形态分布特点和增龄变化规律。方法取孕18d、生后10d、生后1个月和生后3个月大鼠各10只,采用地衣红染色、免疫组织化学和Western blotting技术,观测心室弹性纤维的分布和弹性蛋白表达的变化;利用图像分析系统对弹性蛋白进行定量分析,并对不同月龄心室弹性蛋白含量进行对比分析。结果弹性纤维广泛分布于心外膜、心肌细胞周围、小动脉壁。弹性纤维形似发丝,无粗大纤维束;胎鼠至初生期增长迅速,幼年到成年期增速减慢。心内膜的弹性纤维在幼年期达到高峰,成年略有降低。结论从胚胎至成年大鼠心室弹性纤维逐渐增加,这种变化是心肌生理性重构的重要组成部分。

关键词：心脏弹性纤维地衣红染色免疫组织化学免疫印迹法大鼠

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在Atelocollagen胶原支架上体外三维培养乳大鼠心肌

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解剖学报 2010年第6期41卷 885-890页

作者：滕伟郭志坤李琼孙庆宁王庆志郁小兵新乡医学院河南省高等学校组织再生重点开放实验室河南新乡453003

目的在Atelocollagen胶原支架上三维培养具有收缩功能的乳鼠心肌细胞块,为进一步开展心肌组织工程奠定基础。方法乳鼠心肌消化培养、纯化后,种植到Atelocollagen胶原支架上进行三维培养。应用倒置显微镜动态观察心肌细胞在Atelocollage... 详细信息

目的在Atelocollagen胶原支架上三维培养具有收缩功能的乳鼠心肌细胞块,为进一步开展心肌组织工程奠定基础。方法乳鼠心肌消化培养、纯化后,种植到Atelocollagen胶原支架上进行三维培养。应用倒置显微镜动态观察心肌细胞在Atelocollagen胶原支架上的生长情况。对三维培养不同时间的心肌细胞块进行石蜡包埋、切片,分别进行HE染色、肌球蛋白免疫组织化学染色、肌球蛋白免疫荧光染色、透射电镜观察,对三维培养的细胞进行全面鉴定。结果心肌细胞种植到Atelocollagen胶原支架上6h开始贴支架生长,培养2d心肌细胞相互融合,并与Atelocollagen胶原支架形成复合体,连同支架一起搏动。培养6d细胞与细胞间结合较前更紧密。培养10d细胞在Atelocollagen胶原支架孔中交织成网状,18～20d细胞充满大部分支架网孔,进一步形成紧密的心肌细胞块。在整个培养过程中,心肌细胞始终保持良好的自律性收缩。形态学鉴定证明,支架网孔中生长的主要是心肌细胞,极少数为纤维样细胞。结论利用Atelocollagen胶原支架能够培养出较为理想的、具有收缩功能的三维心肌细胞块。

关键词： Atelocollagen胶原支架肌球蛋白心肌细胞三维培养免疫组织化学免疫荧光乳大鼠

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C1型尼曼-匹克氏症小鼠的肾脏功能及病理变化

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中国病理生理杂志 2016年第8期32卷 1435-1439页

作者：刘彦礼乔梁张金珠杨芬闫岩闫欣林俊堂新乡医学院生命科学技术学院河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的:探讨Npc1基因突变小鼠肾脏功能及病理生理的变化,为C1型尼曼-匹克氏症(NPC1)患者临床上药物的使用及肾功能的维持提供理论依据。方法:用PCR法确定小鼠基因型;选取出生后第60天(P60)的野生型NCPC1(Npc1^(+/+))和突变型NCPC1(Npc1^(-... 详细信息

目的:探讨Npc1基因突变小鼠肾脏功能及病理生理的变化,为C1型尼曼-匹克氏症(NPC1)患者临床上药物的使用及肾功能的维持提供理论依据。方法:用PCR法确定小鼠基因型;选取出生后第60天(P60)的野生型NCPC1(Npc1^(+/+))和突变型NCPC1(Npc1^(-/-))小鼠,检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性及尿素(Urea)、尿酸(UA)和肌酐(Cr)的含量来评价Npc1-/-小鼠的肝肾功能变化;进一步常规冷冻切片后通过β-半乳糖苷酶染色及Masson染色来分别评价Npc1^(-/-)小鼠肾脏衰老及纤维化情况。结果:与P60的Npc1^(+/+)小鼠相比,Npc1^(-/-)小鼠的体重和肾脏重量显著降低(P<0.01);肝肾功能明显减退:ALT、AST及LDH活性显著升高(P<0.05),Urea、UA及Cr的含量显著增加(P<0.05);冷冻切片染色结果表明肾脏组织衰老明显(P<0.01),纤维化程度显著增强(P<0.01)。结论:Npc1基因突变导致的脂质异常代谢可加速肾间质纤维化,促使肾脏衰老,最终导致肾功能减退。

关键词： C1型尼曼-匹克氏症肾脏纤维化 Npc1基因

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CRISPR-Cas9系统在疾病模型中的应用

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中国生物工程杂志 2016年第10期36卷 79-85页

作者：朱少义管丽红林俊堂新乡医学院生命科学技术学院新乡453003 河南省医用组织再生重点实验室新乡453003

规律成簇间隔短回文重复(CRISPR)及相关核酸内切酶(Cas)系统是最近发现的一种关于RNA指导核酸内切酶的基因编辑技术,这一技术的发现促进了生物学和医学研究的发展。CRISPR-Cas9系统的简便性使其广泛应用于细胞基因组编辑、动物模型的构... 详细信息

规律成簇间隔短回文重复(CRISPR)及相关核酸内切酶(Cas)系统是最近发现的一种关于RNA指导核酸内切酶的基因编辑技术,这一技术的发现促进了生物学和医学研究的发展。CRISPR-Cas9系统的简便性使其广泛应用于细胞基因组编辑、动物模型的构建及疾病模型的基因治疗。现就CRISPR-Cas9系统的结构特点、作用机制及应用进行了综述。

关键词： CRISPR-Cas9 基因编辑动物模型基因治疗

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基于鸡胚电转技术研究脊髓神经干细胞相关基因功能方法的建立

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解剖学报 2016年第3期47卷 415-420页

作者：于亚楠刘彦礼杨慈清张必超徐振平林俊堂新乡医学院生命科学技术学院河南新乡453003 河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的建立一种基于鸡胚电转技术研究脊髓神经干细胞（NSCs）相关基因功能的方法。方法 RT-PCR检测鸡胚发育不同时期脊髓NSCs表面标志物;在鸡胚胚龄（E）E2.5~E3时,利用活体电转基因技术将p CAGGSGFP质粒转染到鸡胚脊髓,E6时体视荧光显微... 详细信息

目的建立一种基于鸡胚电转技术研究脊髓神经干细胞（NSCs）相关基因功能的方法。方法 RT-PCR检测鸡胚发育不同时期脊髓NSCs表面标志物;在鸡胚胚龄（E）E2.5~E3时,利用活体电转基因技术将p CAGGSGFP质粒转染到鸡胚脊髓,E6时体视荧光显微镜下筛选绿色荧光蛋白（GFP）阳性胚胎,每组至少取材5个;通过脊髓横切及open-book技术观察神经纤维投射情况;普通光学显微镜下剥离出3~5条脊髓,经胰蛋白酶消化、离心后,无血清NSCs培养基重悬获得细胞铺板,于37℃、5%CO_2细胞培养箱内培养,定时观察GFP阳性脊髓NSCs的形态变化。结果 RT-PCR结果表明,鸡胚脊髓中阳性表达NSCs表面标志物;随后的脊髓横切及open-book结果表明,GFP阳性转染侧的神经纤维能穿过底板,投射到脊髓对侧;而脊髓NSCs体外培养结果显示,GFP标记的脊髓细胞具有典型的NSCs形态,继续培养后有明显突起产生。结论本实验成功建立了一种基于鸡胚电转技术研究脊髓神经干细胞相关基因功能的方法。

关键词：脊髓神经干细胞基因功能活体电转鸡胚

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睡眠剥夺对抑郁样模型大鼠探索行为及海马神经元脑源性神经营养因子表达的影响

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中华行为医学与脑科学杂志 2012年第6期21卷 481-483页

作者：徐辉罗欢欢朱金富 453003新乡新乡医学院心理学系河南省医用组织再生重点实验室

目的研究睡眠剥夺对抑郁样模型大鼠探索行为的影响，并从脑源性神经营养因子（BDNF）的角度探讨其机制。方法30只sD大鼠随机分为正常组、抑郁组和剥夺组，慢性不可预知性刺激法制备抑郁样模型；在第6，12，18，24天运用多平台水环境法... 详细信息

目的研究睡眠剥夺对抑郁样模型大鼠探索行为的影响，并从脑源性神经营养因子（BDNF）的角度探讨其机制。方法30只sD大鼠随机分为正常组、抑郁组和剥夺组，慢性不可预知性刺激法制备抑郁样模型；在第6，12，18，24天运用多平台水环境法对剥夺组进行连续24h的全睡眠剥夺，剥夺干预后随即对各组大鼠进行敞箱实验；免疫组织化学和逆转录聚合链式反应法测海马神经元BDNF表达水平。结果第6，12，18，24天四次行为测试得分显示，剥夺组大鼠的探索行为得分呈现先降低后升高趋势，第24天探索行为得分与抑郁组比较差异有统计学意义（P〈0．01），而与正常组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。免疫组化结果显示，与抑郁组[积分光密度：108．53±4．45，阳性面积比：0．0747±0．0262]相比，剥夺组[积分光密度：116．00±5．61，阳性面积比：0．2034±0．0352]大鼠海马神经元BDNF蛋白表达明显增高（尸〈0．05），而与正常组[积分光密度：117．27±10．66，阳性面积比：0．2252±0．1143]相比差异无统计学意义（P〉0．05）。RT—PCR结果和免疫组化结果相符。结论睡眠剥夺能改善抑郁模型大鼠的探索行为能力，其机制可能与提高海马组织BDNF的含量有关。

关键词：抑郁症海马脑源性神经营养因子探索行为

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C1型尼曼-匹克症小鼠脊髓胶质细胞的活性变化

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解剖学报 2017年第3期48卷 260-265页

作者：杨恩慧乔梁林俊堂闫欣新乡医学院生命科学技术学院河南新乡453003 河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的通过观察C1型尼曼-匹克症小鼠不同脊髓节段星形胶质细胞和小胶质细胞的活性变化,探讨Npc1基因突变对脊髓发育的影响。方法 Npc1^(+/-)小鼠交配繁殖产生Npc^(1-/-)(n=3)和Npc1^(+/+)小鼠(n=3),PCR检测新生小鼠的基因型;选取35日龄的N... 详细信息

目的通过观察C1型尼曼-匹克症小鼠不同脊髓节段星形胶质细胞和小胶质细胞的活性变化,探讨Npc1基因突变对脊髓发育的影响。方法 Npc1^(+/-)小鼠交配繁殖产生Npc^(1-/-)(n=3)和Npc1^(+/+)小鼠(n=3),PCR检测新生小鼠的基因型;选取35日龄的Npc1^(-/-)和Npc1^(+/+)小鼠,采用免疫荧光方法观察对比脊髓不同节段(颈、胸、腰、骶)星形胶质细胞和小胶质细胞的活性变化。采用免疫双染色检测胶质细胞中炎性因子的表达情况,采用免疫印迹方法检测白细胞介素-1β(IL-1β)、SMI31和磷酸化的tau蛋白表达情况。结果在35日龄Npc1^(-/-)小鼠脊髓的各个节段,其背角和腹角的星形胶质细胞和小胶质细胞的活性均明显增强(P<0.05),并伴随细胞炎性因子IL-1β表达量的显著增加;同时,脊髓神经丝蛋白和骨架蛋白tau蛋白发生超磷酸化。结论 Npc1基因突变引起脊髓神经胶质细胞发生病理性变化,可能是脊髓神经元病理性损伤的重要原因。

关键词： C1型尼曼-匹克症脊髓星形胶质细胞小胶质细胞免疫印迹法小鼠

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金葡菌类肠毒素K原核表达载体构建及其生物学活性分析

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中国生物工程杂志 2015年第12期35卷 45-50页

作者：刘彦礼牛荣成杨芬朱文慧林俊堂新乡医学院生命科学技术学院新乡453003 河南省医用组织再生重点实验室新乡453003

目的:金葡菌类肠毒素K(SElK)原核表达载体构建及其生物学活性初步分析。方法:通过常规分子生物学技术将SElK基因片段插入载体p ET-28a中,阳性单菌落扩大培养,诱导目的基因表达后通过Ni+亲和层析纯化SElK重组蛋白;小鼠脾淋巴细胞增殖实... 详细信息

目的:金葡菌类肠毒素K(SElK)原核表达载体构建及其生物学活性初步分析。方法:通过常规分子生物学技术将SElK基因片段插入载体p ET-28a中,阳性单菌落扩大培养,诱导目的基因表达后通过Ni+亲和层析纯化SElK重组蛋白;小鼠脾淋巴细胞增殖实验及尾静脉注射后血常规检测SElK超抗原活性;进一步通过检测血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)活性及尿素(Urea)和肌酐(CR)含量来评价SElK潜在肠毒性。结果:成功构建SElK原核表达载体,并通过Ni^+亲和层析获得高纯度SElK重组蛋白(>95%);随后的超抗原活性检测发现SElK能够在体外刺激小鼠脾淋巴细胞显著增殖,尾静脉注射后能够有效地刺激血液中淋巴细胞增殖;最终的肠毒性检测结果发现SElK能够显著增加血清中AST活性及Urea含量。结论:成功构建并纯化获得高纯度SElK重组蛋白,并对其超抗原活性及潜在肠毒性进行初步分析,为开发更优的抗肿瘤制剂提供备选药物。

关键词：超抗原金葡菌类肠毒素 T淋巴细胞血常规肠毒性

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不同年龄小鼠脂肪源间充质干细胞体外原代培养衰老和凋亡的变化

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解剖学报 2012年第3期43卷 366-371页

作者：齐立杰李琼郭志坤新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003 华中科技大学同济医学院组织学与胚胎学教研室武汉430000

目的探讨小鼠脂肪源间充质干细胞(ADMSCs)体外原代培养过程中衰老和凋亡变化。方法用差速贴壁法对1月和24月龄小鼠(各30只)腹股沟脂肪组织的ADMSCs进行原代培养,免疫荧光技术检测第3代ADMSCs表面抗原CD73、CD90和CD105的表达,比较两组... 详细信息

目的探讨小鼠脂肪源间充质干细胞(ADMSCs)体外原代培养过程中衰老和凋亡变化。方法用差速贴壁法对1月和24月龄小鼠(各30只)腹股沟脂肪组织的ADMSCs进行原代培养,免疫荧光技术检测第3代ADMSCs表面抗原CD73、CD90和CD105的表达,比较两组细胞的形态差异和生长情况,β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测ADMSCs衰老情况,PI-Hoechst33342双染色观察ADMSCs的凋亡变化。结果两组体外原代培养的ADMSCs均贴壁生长,具有典型干细胞的形态和生长特征,两组ADMSCs CD73、CD90和CD105的表型一致。SA-β-Gal染色显示:原代培养的老年组ADMSCs衰老比例比幼年组多,1月组原代培养2～7d的ADMSCs阳性率分别为(3.87±1.34)%、(4.21±1.22)%、(9.00±0.98)%、(11.20±1.24)%、(9.50±2.19)%和(13.20±2.93)%;24月组分别为(8.67±1.05)%、(10.23±0.98)%、(12.80±0.78)%、(17.10±1.13)%、(19.80±1.59)%和(24.70±1.86)%。PI-Hoechst 33342染液双染显示:1月组原代培养2～7d的ADMSCs凋亡率分别为(22.1±1.4)%、(36.7±1.62)%、(11.7±1.45)%、(38.4±1.57)%、(6.5±1.32)%和(11.3±1.63)%;24月组4～7d的ADMSCs凋亡率分别为(29.4±1.72)%、(37.6±1.64)%、(19.4±1.29)%和(18.9±1.25)%。结论老龄ADMSCs增殖能力下降,衰老、凋亡和坏死的细胞比例增加;随着ADMSCs原代培养时间的延长,其衰老增加,但凋亡和坏死无规律性变化。

关键词：脂肪间充质干细胞衰老坏死免疫荧光细胞培养小鼠

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