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西安交通大学学报（医学版） 2019年第1期40卷 71-75页

作者：王颖芳王鹏飞詹煜慧张晓萌段广才郗园林河南科技大学医学院公共卫生教研室河南洛阳471023 河南科技大学医院河南洛阳471023 河南科技大学医学院河南洛阳471023 郑州大学公共卫生学院流行病学教研室河南郑州450001

目的探索志贺菌中成簇的规律间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)与毒力基因和耐药基因的关系。方法从GenBank数据库中获得志贺菌的基因组、毒力基因和耐药基因的序列,通过多序列比... 详细信息

目的探索志贺菌中成簇的规律间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)与毒力基因和耐药基因的关系。方法从GenBank数据库中获得志贺菌的基因组、毒力基因和耐药基因的序列,通过多序列比对等方法获得志贺菌中CRISPR1、CRISPR2和CRISPR-Q1的分布情况、重复序列和间隔序列信息,通过BLAST方法获得毒力基因和耐药基因在志贺菌中的分布情况,SPSS 21.0软件分析CRISPR与毒力基因和耐药基因的关系。结果志贺菌中的CRISPR1和CRISPR2在不同菌株中的间隔序列差别较大,CRISPRQ1分布更为广泛(超过99%)。毒力基因在志贺菌中分布比较广泛(均超过56%),耐药基因中的blaOXA-1、camr、Sul2、tetB分布也比较广(超过50%)。CRISPR1/CRISPR2与是否携带9种毒力基因、4种耐药基因有关(P<0.05),CRISPR-Q1与是否携带3种毒力基因、4种耐药基因有关(P<0.05)。CRISPR1/CRISPR2和CRISPR-Q1均与志贺菌中存在的毒力基因和耐药基因的个数间有统计学关联(P<0.05)。CRISPR1/CRISPR2与CRISPR-Q1的间隔序列数目之间存在统计学关联(χ2=61.6,P<0.001)。结论志贺菌中不同CRISPR的分布差异比较大,存在的间隔序列数目不等;志贺菌CRISPR与部分毒力基因和耐药基因之间存在负相关;CRISPR1/CRISPR2与CRISPR-Q1的间隔序列数目存在正相关。

关键词：志贺菌成簇的规律间隔短回文重复序列毒力基因耐药基因

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O157:H7型大肠埃希菌CRISPR结构及耐药基因和毒力基因分布分析

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中国病原生物学杂志 2019年第7期14卷 761-764,772页

作者：王鹏飞王颖芳段广才郗园林徐亚珂陈帅印詹煜慧河南科技大学医院河南洛阳471023 河南科技大学医学院公共卫生教研室郑州大学公共卫生学院流行病学教研室河南科技大学医学院

目的了解O157:H7型大肠埃希菌中成簇的规律间隔短回文重复序列(Clustered Regularly Interspaced ShortPalindromic Repeats,CRISPR)结构特征以及耐药基因和毒力基因分布情况。方法利用多序列比对、BLAST、RNA二级结构预测等多种生物... 详细信息

目的了解O157:H7型大肠埃希菌中成簇的规律间隔短回文重复序列(Clustered Regularly Interspaced ShortPalindromic Repeats,CRISPR)结构特征以及耐药基因和毒力基因分布情况。方法利用多序列比对、BLAST、RNA二级结构预测等多种生物信息学方法对20株O157:H7型大肠埃希菌的全基因组序列进行分析。结果从GenBank数据库获得2000-2014年20株O157:H7型大肠埃希菌全基因组序列,所有基因组中共存在3个CRISPR位点且每个CRISPR位点的基因序列具有高度一致性(均超过99.7%);CRISPR2被一段序列分隔为CRISPR2a和CRISPR2b;CRISPR1中存在3个不同的间隔序列,CRISPR2也有3个不同的间隔序列,CRISPR3有1个间隔序列;CRISPR1和CRISPR3的重复序列均可形成茎环结构,CRISPR2和CRISPR1的重复序列具有较高的一致性。共检测7个耐药基因,所有菌株ampc均阳性,4株菌株tetB和sul1阳性,其它4个基因均未检出;共检测6个毒力基因,有10株细菌stx1阳性,其他5个毒力基因20株细菌均阳性。结论CRISPR在O157:H7型大肠埃希菌中广泛分布且结构稳定,毒力基因分布广,耐药性问题不可忽视。

关键词： O157:H7型大肠埃希菌 CRISPR 毒力基因耐药基因

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志贺菌成簇的规律间隔的短回文重复序列系统结构特征的生物信息学分析

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生物医学工程学杂志 2015年第2期32卷 343-349页

作者：王鹏飞王颖芳段广才薛泽润王琳琳郭向娇杨海燕郗园林郑州大学公共卫生学院流行病学教研室郑州450001 河南科技大学医学院公共卫生教研室洛阳471003 新乡医学院新乡453003

利用生物信息学方法探索志贺菌成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)系统结构的特征。本文通过BLAST、序列比对、RNA二级结构预测等方法对志贺菌CRISPR进行研究。结果显示:志贺菌的4个群中均发现有CRISPR结构,其侧翼上、下游序列可... 详细信息

利用生物信息学方法探索志贺菌成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)系统结构的特征。本文通过BLAST、序列比对、RNA二级结构预测等方法对志贺菌CRISPR进行研究。结果显示:志贺菌的4个群中均发现有CRISPR结构,其侧翼上、下游序列可分为相同组群,在leader序列中存在具有回文性质、相对保守的motif;侧翼序列与重复序列具有相同的分组,重复序列有一定的保守性,可以形成以"茎"为主和以"环"为主两类不同的RNA二级结构;间隔序列与质粒或噬菌体有一定的同源性。本研究表明重复序列与侧翼序列间存在相关性,重复序列可能作为一种识别机制来介导外源元素与Cas蛋白间的相互作用。

关键词：志贺菌成簇的规律间隔的短回文重复序列侧翼序列重复序列间隔序列

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山茱萸果核提取物对佐剂性关节炎大鼠免疫调节因子的影响

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中国临床药理学杂志 2016年第6期32卷 549-552页

作者：齐静姣张平郭进武路西明河南科技大学医学院免疫教研室河南科技大学化工与制药学院公共化学教研室河南科技大学医学院药理教研室

目的探讨山茱萸果核提取物（FCOFCE）对佐剂性关节炎大鼠免疫调节因子的影响及其抗炎机制。方法取40只Wistar大鼠构建佐剂性关节炎模型,并随机分为模型组、雷公藤组、低、中、高剂量FCOFCE组,每组8只;另取8只健康Wistar大鼠作为正常组... 详细信息

目的探讨山茱萸果核提取物（FCOFCE）对佐剂性关节炎大鼠免疫调节因子的影响及其抗炎机制。方法取40只Wistar大鼠构建佐剂性关节炎模型,并随机分为模型组、雷公藤组、低、中、高剂量FCOFCE组,每组8只;另取8只健康Wistar大鼠作为正常组。正常组、模型组均予以灌胃0.9%氯化钠,qd;雷公藤组予以灌胃0.01 mg·kg;雷公藤多苷,qd;低、中、高剂量FCOFCE组分别灌胃予以200,400,600 mg·kg;FCOFCE,qd。6组均连续给药4周。用跖围法测量大鼠足趾肿胀程度。用逆转录-聚合酶链反应检测大鼠血淋巴细胞白细胞介素-23（IL-23）、IL-17的mRNA的表达。用酶联免疫吸附法检测大鼠血清IL-23、IL-17的水平。结果与模型组比较,中、高剂量FCOFCE组大鼠的足趾肿胀度、血清IL-17和IL-23的含量、淋巴细胞IL-17和IL-23的mRNA表达水平均显著降低（P<0.05）,而低剂量FCOFCE组上述指标降低不明显（P>0.05）。结论山茱萸果核提取物可抑制佐剂性关节炎大鼠的炎症反应,与降低IL-23和IL-17的表达水平有关。

关键词：山茱萸果核提取物佐剂性关节炎白细胞介素-17 白细胞介素-23

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煤焦沥青烟提取物致BEAS－2B恶性转化细胞端粒蛋白的变化

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中华劳动卫生职业病杂志 2011年第9期29卷 678-681页

作者：王威李智涛祝寒松赵勇王丽霞燕贞李时恩许东吴卫东吴拥军吴逸明郑州大学公共卫生学院劳动卫生与职业病学教研室 450001 河南科技大学医学院

目的通过检测端粒保卫蛋白复合体中端粒保卫蛋白1（POT1）、端粒重复序列结合因子1（TRF1）和TRF2在煤焦沥青烟致永生化人支气管上皮细胞（BEAS－2B）癌变细胞中的表达变化，探讨其在煤焦沥青烟致肺癌发生中的作用。方法用中温煤焦沥青... 详细信息

目的通过检测端粒保卫蛋白复合体中端粒保卫蛋白1（POT1）、端粒重复序列结合因子1（TRF1）和TRF2在煤焦沥青烟致永生化人支气管上皮细胞（BEAS－2B）癌变细胞中的表达变化，探讨其在煤焦沥青烟致肺癌发生中的作用。方法用中温煤焦沥青烟提取物作为诱导剂，建立BEAS－2B的恶性转化模型，用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应法（RT—PCR）检测POTI、TRF1和TRF2基因mRNA表达水平；细胞爬片免疫组化半定量法检测其蛋白表达改变。结果BEAS－2B恶性转化细胞POT1和TRF1基因mRNA表达水平（分别为：0．63±0．04，0．36±0．01）和蛋白表达水平（分别为：0．36±0．05，0．09±0．03）均下调，与正常对照组（mRNA：POT1：1．00±0．04，TRF1：1．01±0．16；蛋白：POT1：0．55±0．07，TRF1：0．27±0．07）和二甲亚砜溶剂对照组（mRNA：POT1：0．89±0．12，TRF1：0．90±0．08；蛋白：POT1：0．55±0．10，TRF1：0．26±0．04）相比，差异均有统计学意义（P〈0．05）。BEAS-2B恶性转化细胞TRF2基因mRNA表达水平（1．45±0．07）和蛋白表达水平（0．88±0．06）均上调，与正常对照组（mRNA：1．00±0．07，蛋白：0．48±0．06）和二甲亚砜溶剂对照组（mRNA：1．00±0．06，蛋白：0．50±0．06）相比，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论在煤焦沥青烟致支气管上皮细胞恶性演化过程中，POT1、TRF1和TRF2基因和蛋白表达水平发生变化。

关键词：煤焦油细胞转化,肿瘤端粒重复序列,核酸

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志贺菌中成簇的规律间隔短回文重复序列的特点及其关联性分析

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吉林大学学报（医学版） 2018年第6期44卷 1131-1137页

作者：王颖芳王鹏飞段广才郗园林张晓萌詹煜慧河南科技大学医学院公共卫生教研室河南洛阳471023 郑州大学公共卫生学院流行病学教研室河南郑州450001 河南科技大学医院河南洛阳471023 河南科技大学医学院河南洛阳471023

目的:利用数据库和临床分离的志贺菌菌株分析志贺菌中成簇的规律间隔短回文重复序列(CRISPR)的特点,探讨CRISPR-Q1的特性及CRISPR间的关联性。方法:根据志贺菌基因组数据库利用引物序列和PCR扩增获得志贺菌的CRISPR序列信息,采用多序列... 详细信息

目的:利用数据库和临床分离的志贺菌菌株分析志贺菌中成簇的规律间隔短回文重复序列(CRISPR)的特点,探讨CRISPR-Q1的特性及CRISPR间的关联性。方法:根据志贺菌基因组数据库利用引物序列和PCR扩增获得志贺菌的CRISPR序列信息,采用多序列比对等方法获得每个菌株中CRISPR的分布、间隔序列数及序列特点;利用BLAST分析CRISPR-Q1中重复序列和间隔序列,检测重复序列和间隔序列在菌株中的分布特点以及CRISPR-Q1在菌株中的位置及特征;分析数据库和实验室中志贺菌CRISPR-Q1中间隔序列数与CRISPR1或CRISPR2的关系。结果:在数据库107株志贺菌中,106株志贺菌含有CRISPR1或CRISPR2,8株志贺菌的CRISPR1或CRISPR2含有多个间隔序列;106株志贺菌含有CRISPR-Q1,其中有13株志贺菌的CRISPR-Q1中有多个间隔序列。在实验室12株志贺菌中,有6株含有CRISPR1或CRISPR2,12株均含有CRISPR-Q1;CRISPR-Q1间隔序列中的一部分(约35bp)在同一个菌株的染色体基因组上分布广泛,重复序列同样如此,CRISPR-Q1中还存在基因外重复序列(REP)元素。数据库志贺菌中的CRISPR-Q1间隔序列数与CRISPR1和CRISPR2有关联(χ~2=61.6,P<0.01),实验室志贺菌中的CRISPR-Q1间隔序列数与CRISPR1和CRISPR2有关联(P=0.015)。结论:CRISPR-Q1在志贺菌中广泛分布,其序列中存在REP元素;志贺菌的CRISPR1和CRISPR2与CRISPR-Q1有关联。

关键词：志贺菌成簇的规律间隔短回文重复序列间隔序列基因外重复序列

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O157∶H7型大肠埃希菌CRISPR/Cas系统结构的生物信息学分析

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中国畜牧兽医 2020年第2期47卷 363-371页

作者：王鹏飞王颖芳段广才詹煜慧陈帅印郗园林徐亚珂河南科技大学医院洛阳471023 河南科技大学医学院公共卫生教研室洛阳471023 郑州大学公共卫生学院流行病学教研室郑州450001

为了解O157∶H7型大肠埃希菌中成簇的规律间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)分布和结构特征及cas基因分布情况,本试验通过GenBank数据库和CRISPRdb database获得92株O157∶H7型大肠埃希菌全基因组序列、CRISPR位点位置、CRISPR的侧翼序列及cas基因簇的序列范围,利用多序列比对、启动子预测和RNA二级结构预测等方法分析细菌中CRISPR系统的特点。结果显示,O157∶H7型大肠埃希菌的基因组存在3个CRISPR位点(CRISPR1、CRISPR2和CRISPR3),每个CRISPR位点上的序列一致;CRISPR1和CRISPR2的重复序列可形成茎环状结构,环上的碱基易发生变化;CRISPR2中存在一段长451 bp的序列(命名为序列X),该序列X将CRISPR2分为2个部分CRISPR2a和CRISPR2b,其碱基A和T比例为74%,在91株O157∶H7型大肠埃希菌中均存在该序列,在该序列中可预测出至少有1个启动子和9个转录因子结合位点;侧翼序列中的疑似前导序列位于CRISPR2下游,序列长340 bp,其碱基A和T比例为69%,在92株O157∶H7型细菌中均存在该序列,其可预测出至少有1个启动子和3个转录因子结合位点;在20株O157∶H7型大肠埃希菌的全基因组序列中,有15株具有完整的cas基因簇,有5株缺乏cas 3基因。本试验结果表明,O157∶H7型大肠埃希菌的CRISPR系统结构稳定,序列具有较高保守性,cas基因簇也相对保守。CRISPR2的结构与其他类型大肠埃希菌有较大差别。本研究发现的序列X在O157∶H7型大肠埃希菌分布广泛且序列保守,可作为鉴定O157∶H7型大肠埃希菌的潜在分子靶标。

关键词： O157∶H7型大肠埃希菌 CRISPR cas

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壁虎醇提物抗肿瘤及增效减毒作用的研究

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中药材 2010年第8期33卷 1213-1216页

作者：王晓兰皓恒友王建刚李瑞芳河南科技大学医学院河南洛阳471003 洛阳市卫生学校生理教研室河南洛阳471000

目的:研究壁虎醇提物对S180小鼠的抗肿瘤作用及其对化疗药物环磷酰胺(CTX)的增效减毒作用。方法:以S180荷瘤小鼠为模型,观察不同剂量的壁虎醇提物的抑瘤率,ELISA法测定小鼠血清TNF-α的含量。腹腔注射壁虎醇提物与CTX(20 mg/kg)联合用药... 详细信息

目的:研究壁虎醇提物对S180小鼠的抗肿瘤作用及其对化疗药物环磷酰胺(CTX)的增效减毒作用。方法:以S180荷瘤小鼠为模型,观察不同剂量的壁虎醇提物的抑瘤率,ELISA法测定小鼠血清TNF-α的含量。腹腔注射壁虎醇提物与CTX(20 mg/kg)联合用药12 d后,检测各组小鼠的抑瘤率、外周血白细胞数、脾指数、胸腺指数等指标,分析壁虎醇提物对CTX的增效减毒作用。结果:不同剂量的壁虎醇提物(0.6、1.2、2.4 g/kg)均可抑制S180肉瘤在昆明小鼠体内生长,抑瘤率分别为44.88%、63.94%、69.53%,对小鼠血清TNF-α含量影响不明显。单用CTX组抑瘤率为46.17%,联用壁虎醇提物低、中、高剂量组的抑瘤率分别为56.93%、67.15%、70.24%,与单用CTX组抑瘤率比较(P<0.01)。壁虎醇提物各组联用CTX,与单用CTX组比较,可不同程度地升高荷瘤小鼠的白细胞数(P<0.01)和胸腺指数、脾指数(P<0.05)。结论:壁虎醇提物对S180荷瘤小鼠具有抗肿瘤作用,对化疗药物CTX具有增效减毒作用。

关键词：壁虎醇提物 S180小鼠肿瘤化疗增效减毒肿瘤坏死因子-α

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一氧化氮和环磷酸鸟苷与分娩发动的关系

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天津医药 2003年第9期31卷 602-603页

作者：李锋吕姝焱河南科技大学第一附属医院妇产科洛阳市471003 河南科技大学医学院公共卫生教研室

一氧化氮（NO）是近年来新发现的一种细胞信使分子，它与分娩发动的关系尚不清楚，本研究通过测定临产前后孕妇外周血一氧化氮和环磷酸鸟苷（cGMP)i水平，探讨其在分娩发动过程中的作用。

关键词：一氧化氮环磷酸鸟苷分娩发动子宫平滑肌活动

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亲环素A基因在非小细胞肺癌中的功能

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中华劳动卫生职业病杂志 2010年第2期28卷 87-91页

作者：冯艳铭燕贞吴逸明徐正顺吴卫东河南科技大学医学院洛阳471003 郑州大学公共卫生学院劳动卫生教研室美国北卡罗那大学环境医学、哮喘与肺生物学中心

目的研究亲环素A（CyPA）基因在非小细胞肺癌中的功能。方法设计并合成4对针对CyPA siRNA靶序列的寡核苷酸单链，退火形成双链DNA，与经HpaI和XhoI酶切后的pGCL—GFP载体连接产生Lv-shCyPA慢病毒载体，该载体含u6启动子和绿色荧光蛋白（... 详细信息

目的研究亲环素A（CyPA）基因在非小细胞肺癌中的功能。方法设计并合成4对针对CyPA siRNA靶序列的寡核苷酸单链，退火形成双链DNA，与经HpaI和XhoI酶切后的pGCL—GFP载体连接产生Lv-shCyPA慢病毒载体，该载体含u6启动子和绿色荧光蛋白（GFP），经聚合酶链反应（PCR）筛选阳性克隆并测序鉴定。将Lv—shCyPA、pHelper1．0和pHelper2．0质粒共感染包装细胞293T细胞，包装成假病毒颗粒并感染非小细胞肺癌A549细胞，经免疫印迹法（Westernblot）检测筛选CyPA siRNA有效靶点和慢病毒颗粒，采用流式细胞技术分析细胞周期和凋亡率，进行裸鼠移植瘤实验。结果PCR和测序结果证实，Lv—sbCvPA慢病毒载体构建正确，经Westernblot法筛选最有效的CyPA siRNA病毒颗粒滴度为2×10^9 TU/ml，感染A549细胞凋亡率（5．01％±0．57％）增加，细胞周期G2-M期比例（11．40％±0．68％）减少，裸鼠移植瘤瘤体生长明显减缓，与未感染病毒的A549细胞细胞凋亡率（0．35％±0．17％）及G2-M期比例（14．52％±1．19％）相比，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论CyPA基因沉默在非小细胞肺癌的发生中有一定的抑瘤作用，对非小细胞肺癌的预防和分子流行学研究提供了新的理论依据。

关键词：慢病毒感染基因癌非小细胞肺细胞周期

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