检索结果-内蒙古大学图书馆

生物工程学报 2023年第11期39卷 4358-4375页

作者：赵黎丽苏炳恺杜姝姝丁文婷刘熔增河南科技大学基础医学院免疫学教研室河南洛阳471023

酵母表面展示(yeastsurfacedisplay,YSD)技术是一种将外源靶蛋白基因序列与特定的载体基因序列融合后导入酵母细胞,利用酵母细胞内蛋白转运机制将靶蛋白表达并定位于酵母细胞表面的技术,最常用的是α-凝集素表达系统。酵母细胞具有真核... 详细信息

酵母表面展示(yeastsurfacedisplay,YSD)技术是一种将外源靶蛋白基因序列与特定的载体基因序列融合后导入酵母细胞,利用酵母细胞内蛋白转运机制将靶蛋白表达并定位于酵母细胞表面的技术,最常用的是α-凝集素表达系统。酵母细胞具有真核细胞翻译后修饰机制,能够帮助目的蛋白正确折叠,可以用来展示各种真核蛋白,包括抗体、受体、酶和抗原肽等。酵母表面展示技术已成为生物技术和生物医学领域的强大蛋白质工程工具,结合流式细胞分选可用于改善蛋白质性质,包括亲和力、特异性、酶功能和稳定性等。本文从文库构建与筛选、抗体工程、蛋白质工程、酶工程和疫苗开发等方面对酵母表面展示技术应用最新进展进行了综述。

关键词：酵母表面展示技术文库构建抗体工程蛋白质工程酶工程口服疫苗

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热休克预处理对对乙酰氨基酚所致小鼠急性肝损伤的保护作用

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中国药理学与毒理学杂志 2013年第3期27卷 391-397页

作者：李三强杜景霞朱沙河南科技大学肝损伤与修复分子医学重点实验室河南郑州450001 河南科技大学医学院生化与分子生物学教研室河南郑州450001 河南科技大学医学院药理学教研室河南洛阳471003 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室河南郑州450001

目的探讨热休克预处理对对乙酰氨基酚(AAP)诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用。方法40℃分别热休克(HS)处理小鼠10min(HS10组)、20min(HS20组)和30min(HS30组),室温恢复8h后,小鼠ip给予AAP 550mg·kg-1诱导急性肝损伤,分别于AAP后0,6,... 详细信息

目的探讨热休克预处理对对乙酰氨基酚(AAP)诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用。方法40℃分别热休克(HS)处理小鼠10min(HS10组)、20min(HS20组)和30min(HS30组),室温恢复8h后,小鼠ip给予AAP 550mg·kg-1诱导急性肝损伤,分别于AAP后0,6,24,42和72h进行相关指标检测。赖氏法检测小鼠血清中天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)活性,HE染色进行病理学分析,免疫组化法检测给予AAP后0 h,小鼠肝热休克蛋白70(HSP70),细胞色素P4501A2(CYP1A2)和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,Western印迹法检测给予AAP后0,6,24,42和72h时小鼠PCNA的表达。结果与AAP对照组相比,HS20组小鼠血清中AST和ALT酶活水平显著降低(P<0.05),而HS10组和HS30组小鼠无显著差异。与AAP对照组相比,HS20显著降低了AAP诱导的小鼠肝损伤程度(P<0.05),而HS10和HS30未显著降低肝损伤的程度。HS20显著诱导了小鼠肝HSP70(P<0.01),CYP1A2(P<0.01)和PCNA(P<0.05)的表达,而HS10和HS30显著诱导了小鼠肝HSP70和CYP1A2(P<0.05)的表达,但未明显诱导PCNA的表达。与HS10和HS30相比,HS20更加显著地诱导了HSP70和CYP1A2的表达(P<0.05)。HS20组小鼠在注射AAP后0,6,24,42和72h,小鼠肝PCNA的表达均显著高于AAP对照组(P<0.05)、HS10和HS30组(P<0.05)。结论 40℃热休克预处理20min可以有效降低AAP诱导的小鼠急性肝损伤程度,加速肝损伤后的修复。

关键词：热休克对乙酰氨基酚急性肝损伤保护作用

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抗旋毛虫鸡卵黄抗体的活性检测

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中国人兽共患病学报 2009年第11期25卷 1068-1070,1073页

作者：齐静姣张平任新乐李加涛陈雄彬河南科技大学医学院免疫学教研室洛阳471003 河南科技大学第三附属医院河南科技大学医学院

目的制备特异性抗旋毛虫的鸡卵黄免疫球蛋白,研究其免疫应答规律及其稳定性。方法用纯化的旋毛虫幼虫免疫育龄种鸡,经水稀释法初步纯化浓缩后获得卵黄抗体。应用酶联免疫吸附试验检测卵黄抗体的效价及其敏感性和稳定性。结果通过免疫可... 详细信息

目的制备特异性抗旋毛虫的鸡卵黄免疫球蛋白,研究其免疫应答规律及其稳定性。方法用纯化的旋毛虫幼虫免疫育龄种鸡,经水稀释法初步纯化浓缩后获得卵黄抗体。应用酶联免疫吸附试验检测卵黄抗体的效价及其敏感性和稳定性。结果通过免疫可成功诱导出高效价的抗旋毛虫抗体,效价可达1∶106以上,免疫应答持续时间可达34周以上。免疫后卵黄抗体敏感性和血清抗体敏感性无显著性差异(P>0.05)。稳定性试验表明IgY敏感性高,在pH4～10及温度不超过60℃条件下活性稳定。结论成功制备出高效价的特异性抗旋毛虫卵黄抗体,其敏感性高,有一定的耐热、耐酸碱性,可进一步用于旋毛虫感染的研究。

关键词：旋毛虫卵黄抗体酶联免疫吸附试验抗体活性

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3T3-F442A细胞培养弓形虫最佳条件的探索

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中国生物工程杂志 2008年第S1期28卷 76-81页

作者：朱沙李付广李三强王娜唐悦黄玉敏郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450001 河南科技大学医学院生化与分子生物学教研室洛阳471003

目的:研究不同浓度的胰岛素及D-葡萄糖对弓形虫在3T3-F442A细胞内分裂增殖的影响,并确定不同条件下弓形虫的生长活力,探索弓形虫生长最佳条件。方法:采用细胞培养及细胞计数单因素方差分析方法研究不同时间内胰岛素及D-葡萄糖对弓形虫在... 详细信息

目的:研究不同浓度的胰岛素及D-葡萄糖对弓形虫在3T3-F442A细胞内分裂增殖的影响,并确定不同条件下弓形虫的生长活力,探索弓形虫生长最佳条件。方法:采用细胞培养及细胞计数单因素方差分析方法研究不同时间内胰岛素及D-葡萄糖对弓形虫在3T3-F442A细胞内分裂增殖的影响,并采用MTIT方法确定不同条件下弓形虫的生长活力。结果:浓度为10^(-2)μg/ml^10^(-1)μg/ml胰岛素和浓度为4.5 g/L葡萄糖相结合共同作用时,弓形虫3T3-F442A增殖率达到最大,其生长活力为最高。当DMEM中不合D-葡萄糖时,胰岛素则对弓形虫的生长所起的作用较差。结论:胰岛素对弓形虫在细胞中生长具有剂量促进效应,表现在低浓度的胰岛素对弓形虫的生长发育具有促进作用,而高浓度的胰岛素则对弓形虫的生长起抑制作用。D-葡萄糖作为一种能源,也是细胞内弓形虫生长不可缺乏的。

关键词： 3T3-F442A细胞弓形虫 D-葡萄糖胰岛素

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表达载体pEGFP—C3一PENK的构建以及在NIH3T3细胞中的表达

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解剖学杂志 2010年第4期33卷 451-454页

作者：曹靖胡伊乐任秀花臧卫东郑州大学基础医学院解剖学教研室郑州450001 河南科技大学基础医学院解剖学教研室洛阳471000

目的：构建质粒pEGFP-C3-PENK,并观察其在真核细胞中表达的时效.方法：构建质粒pEGFP-C3-PENK;低浓度裸质粒、高浓度裸质粒、脂质体介导分别转染NIH3T3细胞,观察转染率、绿色荧光蛋白表达情况;放射免疫法和免疫细胞化学法检测脑啡肽的... 详细信息

目的：构建质粒pEGFP-C3-PENK,并观察其在真核细胞中表达的时效.方法：构建质粒pEGFP-C3-PENK;低浓度裸质粒、高浓度裸质粒、脂质体介导分别转染NIH3T3细胞,观察转染率、绿色荧光蛋白表达情况;放射免疫法和免疫细胞化学法检测脑啡肽的表达情况.结果：质粒pEGFP-C3-PENK成功构建;低浓度裸质粒转染率5%;高浓度裸质粒转染率8%,脂质体介导转染率为20%;转染5周后仍有绿色荧光蛋白表达.结论：成功构建质粒pEGFP-C3-PENK,可在NIH3T3细胞中表达超过5周.

关键词：转基因前脑啡肽原基因增强型绿色荧光蛋白真核表达

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哮喘患儿血清可溶性细胞间黏附分子-1水平的检测研究

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中国现代医学杂志 2007年第2期17卷 180-182页

作者：齐静姣张平任新乐河南科技大学医学院免疫学教研室河南洛阳471003 河南科技大学第三附属医院河南洛阳471003

目的进一步探讨可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)在支气管哮喘中的作用。方法采用放射免疫测定法对48例支气管哮喘发作期患儿及26例正常对照组儿童血清sICAM-1的水平进行检测。结果支气管哮喘儿童血清sICAM-1水平在急性期和缓解期均较... 详细信息

目的进一步探讨可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)在支气管哮喘中的作用。方法采用放射免疫测定法对48例支气管哮喘发作期患儿及26例正常对照组儿童血清sICAM-1的水平进行检测。结果支气管哮喘儿童血清sICAM-1水平在急性期和缓解期均较正常对照组升高,差异有显著性(P<0.05)。重度哮喘发作儿童较轻、中度发作升高具显著性(P<0.01)。结论sICAM-1可能参与了哮喘的发生与发作,其水平的高低可能与哮喘的活动度有关,提示sICAM-1可视为判断病情严重程度的重要指标之一。

关键词：儿童支气管哮喘 sICAM-1

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降钙素原检测在鉴别细菌和病毒性肠道感染性疾病中的应用

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检验医学 2005年第6期20卷 539-540页

作者：齐静姣张平河南科技大学医学院免疫学教研室河南洛阳471003 河南科技大学第三附属医院河南洛阳471003

目的探讨降钙素原(PCT)对儿童感染性腹泻的诊断价值。方法采用半定量的胶体金免疫渗滤法对52例感染性腹泻患儿和20名正常儿童进行PCT检测。结果细菌性痢疾患儿组的PCT阳性率为41.2%(14/34),轮状病毒性肠炎组为5.6%(1/18),细菌性痢疾组... 详细信息

目的探讨降钙素原(PCT)对儿童感染性腹泻的诊断价值。方法采用半定量的胶体金免疫渗滤法对52例感染性腹泻患儿和20名正常儿童进行PCT检测。结果细菌性痢疾患儿组的PCT阳性率为41.2%(14/34),轮状病毒性肠炎组为5.6%(1/18),细菌性痢疾组与轮状病毒性肠炎组比较差异有显著性(P<0.01)。结论PCT水平与细菌感染相平行,是一项鉴别细菌和病毒性肠道感染性疾病的敏感指标。

关键词：降钙素原感染性腹泻胶体金免疫渗滤法

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自噬基因Beclin1对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长的影响

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肿瘤 2011年第12期31卷 1061-1066页

作者：王文玉朱涵伍钢周云樊红琨赵国强河南省人民医院肿瘤科郑州450003 华中科技大学同济医学院联合医院肿瘤中心武汉430023 郑州大学基础医学院生理教研室郑州450001 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450001

目的:探讨自噬基因Beclin1在裸鼠体内对人肺腺癌A549细胞成瘤性的影响。方法:将重组质粒pRNAT-U6.2/Lenti-si423和pLenex-Beclin1通过脂质体介导的方法分别转染到A549细胞中。采用实时荧光定量PCR(real-time fluorogenic quantitative-PCR,RFQ-PCR)和蛋白质印迹法分别检测转染细胞中Beclin1mRNA和蛋白的表达;MTT法检测转染细胞在体外的增殖能力。将过表达或沉默Beclin1基因的A549细胞株分别接种于裸鼠右侧腋部皮下,观察瘤体的生长速度和大小,并采用RFQ-PCR和免疫组织化学法检测瘤体组织中Beclin1mRNA和蛋白的表达。结果:转染重组质粒pLenex-Beclin1的A549细胞中Beclin1mRNA和蛋白表达量显著增加,而体外增殖能力被明显降低;转染重组质粒pRNAT-U6.2/Lenti-si423的A549细胞中Beclin1mRNA和蛋白表达量显著减少。过表达Beclin1组的裸鼠皮下移植瘤生长缓慢,肿瘤体积明显缩小、质量明显减轻,移植瘤组织中Beclin1mRNA以及蛋白的相对表达量增加;而Beclin1基因沉默组的移植瘤组织中Beclin1mRNA及其蛋白的相对表达量降低。结论:自噬基因Beclin1的过表达可以抑制A549细胞在裸鼠体内的生长,有望成为肿瘤治疗的一个新靶点。

关键词：癌,非小细胞肺自我吞噬 Beclin1基因小鼠,裸 A549细胞

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pEGFP-C3-PENK/NIH3T3表达的脑啡肽对神经细胞PKA表达的影响

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郑州大学学报（医学版） 2010年第2期45卷 269-272页

作者：胡伊乐曹靖任秀花徐玉英臧卫东河南科技大学基础医学院人体解剖学教研室洛阳471000 郑州大学基础医学院人体解剖学教研室郑州450001

目的:观察pEGFP-C3-PENK/NIH3T3表达的脑啡肽对神经细胞疼痛模型兴奋性的抑制作用。方法:取新生大鼠的皮质神经元细胞培养,以106mL-1的密度种植于培养皿中。细胞分为4组:对照组(神经细胞)、前列腺素刺激组(神经细胞+42 ng/L前列腺素)、... 详细信息

目的:观察pEGFP-C3-PENK/NIH3T3表达的脑啡肽对神经细胞疼痛模型兴奋性的抑制作用。方法:取新生大鼠的皮质神经元细胞培养,以106mL-1的密度种植于培养皿中。细胞分为4组:对照组(神经细胞)、前列腺素刺激组(神经细胞+42 ng/L前列腺素)、脑啡肽组(神经细胞+42 ng/L前列腺素+pEGF-C3-PENK/NIH3T3细胞)和纳洛酮拮抗组(10 mmol/L钠洛酮+神经细胞+42 ng/L前列腺素+pEGF-C3-PENK/NIH3T3细胞)。继续培养24 h后收集神经元细胞,提取总蛋白,采用Western blot测定各组神经元细胞中蛋白激酶A(PKA)的量。结果:4组细胞PKA的量比较,差异有统计学意义(F=59.873,P<0.001)。与对照组相比,前列腺素刺激组PKA增多(P<0.05);与前列腺素刺激组相比,脑啡肽组PKA减少(P<0.05);与脑啡肽组相比,纳洛酮拮抗组PKA增多(P<0.05)。结论:pEGFP-C3-PENK/NIH3T3表达的脑啡肽可以抑制神经细胞PKA系统的活化,其抑制作用可被纳洛酮拮抗。

关键词：神经细胞疼痛模型蛋白激酶A 脑啡肽

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缺血缺氧对VX2细胞自噬活性和生物学行为的影响

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实用放射学杂志 2021年第6期37卷 1017-1021页

作者：张延超刘旺根王朝阳魏乐群王彤肖全平杜廷伟杨海牛焕章河南科技大学临床医学院河南科技大学第一附属医院介入科河南洛阳 471003 新乡医学院基础医学院组织学与胚胎学教研室河南新乡 453003

目的研究自噬在不同阶段对VX2细胞增殖、侵袭和转移的影响.方法将VX2细胞分为对照组、3-甲基嘌呤(3-MA)组、缺血缺氧(I/H)组、I/H+3-MA组、再灌注组、再灌注+3-MA组.荧光显微镜观察各组细胞吖啶橙染色后细胞质内自噬泡数量;Western b... 详细信息

目的研究自噬在不同阶段对VX2细胞增殖、侵袭和转移的影响.方法将VX2细胞分为对照组、3-甲基嘌呤(3-MA)组、缺血缺氧(I/H)组、I/H+3-MA组、再灌注组、再灌注+3-MA组.荧光显微镜观察各组细胞吖啶橙染色后细胞质内自噬泡数量;Western blot检测LC3及P62(P62/SQSTM1)信号蛋白、基质金属蛋白酶MMP2、MMP9蛋白表达情况;MTT实验测定细胞存活情况;细胞划痕实验观察迁移能力;Transwell实验评价VX2细胞迁移及侵袭能力.结果缺血缺氧早期吖啶橙标记的橙色或红色自噬泡增多,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达增大、P62表达减少,加入3-MA后细胞存活数目由0.38±0.01减至0.25±0.01(P<0.05);I/H后、再灌注后LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达进一步增大(P<0.01),同时MMP2、MMP9蛋白表达也增加,侵袭性细胞计数高于对照组(121.0±5.2 vs 78.3±7.3,P<0.01);加入3-MA后细胞存活数目由0.50±0.01增加到0.61±0.01(P<0.05),侵袭性细胞计数高于再灌注+3-MA组(121.0±5.2 vs 70.0±2.1,P<0.05).结论缺血缺氧可诱导VX2细胞产生保护性自噬;再灌注后自噬过度激活,对细胞有杀伤作用,联合3-MA抑制自噬细胞存活增多、侵袭性减低;再灌注后VX2肝癌细胞自噬增强促进VX2细胞迁移与侵袭,这可能是局部浸润和远处转移的机制之一,可能为肝动脉化疗栓塞(TACE)术后肝细胞癌(HCC)的复发、转移治疗提供理论基础.

关键词：自噬肝细胞癌缺氧缺血肝动脉化疗栓塞

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