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猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4-F112弱毒株NSP2区表达猪瘟病毒E2基因表位的研究

病毒学报 2013年第1期29卷 17-25页

作者：徐彦召周艳君童武李玲姜一峰童光志中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 河南科技学院动物科学学院新乡453003

建立共表达猪瘟病毒(Classic swine fever virus,CSFV)E2蛋白主要中和性抗原表位基因的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)反向遗传操作平台,为进一步研究PRRSV作为病毒载体提供实验数据。本研究在PRRSVHuN4-F112疫苗株感染性分子克隆的基础... 详细信息

建立共表达猪瘟病毒(Classic swine fever virus,CSFV)E2蛋白主要中和性抗原表位基因的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)反向遗传操作平台,为进一步研究PRRSV作为病毒载体提供实验数据。本研究在PRRSVHuN4-F112疫苗株感染性分子克隆的基础上,采用突变PCR技术将CSFV E2蛋白的主要中和性抗原表位基因插入HuN4-F112弱毒株PRRSV已鉴定出的两个NSP2蛋白的复制非必需区,经基因片段的克隆、拼接,构建了两株含有CSFV E2蛋白的主要中和性抗原表位基因的感染性PRRSV cDNA克隆psk-HuN4-F112-Δ508-532+E2和psk-HuN4-F112-Δ480-532+E2。用限制性内切酶SwaΙ分别将两株共表达的感染性克隆线性化,之后通过细胞外转录获得病毒RNA,用脂质体法分别将病毒RNA转染BHK-21细胞包装出病毒粒子,再分别将其转接到MARC-145细胞传代拯救出两株病毒。分别对两株拯救病毒进行RT-PCR扩增、酶切和序列分析鉴定。结果表明,两株拯救病毒含有不同于亲本病毒的分子标记(拯救病毒基因组的14 667位因同义突变产生的MluⅠ酶切位点)和插入基因序列。间接免疫荧光试验表明,CSFV E2蛋白主要中和性抗原表位基因均能在两株拯救的PRRSV中表达,且能够在其传代过程中稳定遗传。病毒生长特性结果比较显示两株拯救病毒与亲本病毒在MARC-145细胞上具有相似的增殖特性。本研究构建了两株共表达CSFV E2蛋白主要中和性抗原表位基因的PRRSV感染性克隆并获得了拯救病毒,且外源基因能在拯救病毒中稳定表达,为进一步开发新型PRRSV二联疫苗提供了有效的反向遗传操作平台。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性cDNA 拯救病毒病毒载体

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咖啡渣的生物学功能及在反刍动物生产上的应用

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中国畜牧杂志 2024年第9期60卷 58-65页

作者：陈秋楠张静欣李佳艺董利锋贺永惠崔艳红滕战伟河南科技学院动物科技学院河南新乡453003 中国农业科学院饲料研究所北京100081

咖啡渣是生产咖啡过程中产生的副产品,富含咖啡因、绿原酸、多酚等多种营养活性物质,具有抗氧化、改善肠道环境、提高动物生产性能等生物学功能。将咖啡渣作为功能性饲料添加剂或饲料原料并进行高效利用有利于养殖业节本增效、绿色可持... 详细信息

咖啡渣是生产咖啡过程中产生的副产品,富含咖啡因、绿原酸、多酚等多种营养活性物质,具有抗氧化、改善肠道环境、提高动物生产性能等生物学功能。将咖啡渣作为功能性饲料添加剂或饲料原料并进行高效利用有利于养殖业节本增效、绿色可持续发展。本文主要综述咖啡渣的生物学功能及其在反刍动物生产中的应用现状,以期为咖啡渣在畜牧生产上资源化、高值化利用提供参考。

关键词：咖啡渣营养活性物质微生物发酵反刍动物

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A型流感病毒逃避免疫应答的策略

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生物化学与生物物理进展 2008年第10期35卷 1137-1141页

作者：赵朴郑玉姝乔传玲贾贝贝刘兴友河南科技学院动物科学学院新乡453003 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室哈尔滨150001

综述了IAV逃避抗病毒免疫策略的最新进展.A型流感病毒(IAV)感染是人和多种动物呼吸系统疾病的主要原因,然而不管是IAV引起的季节性流感暴发还是周期性的全球流感大流行,主要归因于IAV逃避宿主免疫反应的策略.越来越多的证据表明,IAV已... 详细信息

综述了IAV逃避抗病毒免疫策略的最新进展.A型流感病毒(IAV)感染是人和多种动物呼吸系统疾病的主要原因,然而不管是IAV引起的季节性流感暴发还是周期性的全球流感大流行,主要归因于IAV逃避宿主免疫反应的策略.越来越多的证据表明,IAV已经进化出高超的策略克服宿主的抗病毒信号,如抗原变异和编码辅助蛋白(NS1和PB1-F2).深入理解IAV逃避宿主免疫的策略,有助于揭示IAV感染的机制和发现针对IAV的抗病毒药物的靶标.

关键词： A犁流感病毒免疫逃避抗原变异 NS1 PB1-F2

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来航鸡FOXL2基因的克隆与序列分析

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黑龙江畜牧兽医 2012年第5期 5-9页

作者：徐萍李任峰赵坤王三虎何宏轩鲁毅河南科技学院动物科学学院河南新乡453003 中国科学院动物研究所北京100101

为了研究来航鸡FOXL2基因的结构及功能,根据GenBank上登录的红色原鸡FOXL2基因序列设计引物,对来航鸡FOXL2基因进行了克隆、测序,并对该序列进行生物信息学分析。结果表明:克隆得到的来航鸡FOXL2基因全长为1 130 bp(GenBank登录号为JF70... 详细信息

为了研究来航鸡FOXL2基因的结构及功能,根据GenBank上登录的红色原鸡FOXL2基因序列设计引物,对来航鸡FOXL2基因进行了克隆、测序,并对该序列进行生物信息学分析。结果表明:克隆得到的来航鸡FOXL2基因全长为1 130 bp(GenBank登录号为JF708868),包含1个918 bp的完整开放式阅读框,编码305个氨基酸,其CDS编码区的核苷酸序列与红色原鸡、人、牛、野猪、家鼠、欧洲兔、蟾蜍、斑马鱼及罗非鱼的FOXL2基因对应序列的同源性分别为99.8%、80.0%、80.4%、80.3%、80.5%、81.5%、77.7%、71.8%、75.5%,推导的氨基酸序列同源性分别为99.7%、64.7%、64.7%、65.4%、63.5%、63.8%、79.7%、78.3%、79.9%;FOXL2编码蛋白主要存在于细胞核中,存在1个保守结构域,不含信号肽、跨膜结构域和剪切位点,并存在2个蛋白质激酶C磷酸化位点、1个cAMP和cGMP依赖的蛋白激酶磷酸化位点、2个N-糖基化位点、3个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和4个N-豆蔻酰化位点,预测最佳抗原表位候选区域为45～49位(SQKPP)、147～152位(RPPPTH)和169～173位(SPPKY)。

关键词：来航鸡 FOXL2基因克隆序列分析

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转人抑癌基因p53鸡的研究

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2019年第7期47卷 54-61页

作者：李鹏姗雷雪芹徐廷生王攀林宋祯李振红史明艳韦光辉张广平李俊堂河南科技大学动物科技学院河南洛阳471003 河南科技大学第一附属医院河南洛阳471003 洛阳师范学院生命科学学院河南洛阳471022 河南科技学院动物科技学院河南新乡453003 全军肛肠外科研究所河南洛阳471031

【目的】探索MAR调控序列对外源人抑癌基因p53在转基因鸡体内整合稳定性的影响,为转基因禽类输卵管生物反应器的建立奠定基础。【方法】利用脂质体包埋法,将pEGFP-N1-p53/MAR重组真核表达载体转染人肝癌细胞(Hep3B),荧光显微镜和透射电... 详细信息

【目的】探索MAR调控序列对外源人抑癌基因p53在转基因鸡体内整合稳定性的影响,为转基因禽类输卵管生物反应器的建立奠定基础。【方法】利用脂质体包埋法,将pEGFP-N1-p53/MAR重组真核表达载体转染人肝癌细胞(Hep3B),荧光显微镜和透射电镜检测转染含人野生型p53基因的Hep3B细胞形态及超微观结构的变化情况;显微注射法将脂质体介导的重组载体注入鸡X期胚盘的明区和暗区,制备G0代转基因鸡。以EGFP为报告基因,人工授精法制备G1代转基因鸡,对G0代和G1代鸡体外源基因p53进行PCR检测,并对G1代转基因鸡进行小动物活体成像检测。【结果】转染含人p53基因重组载体的Hep3B细胞明显皱缩变圆;微观结构层面,粗面内质网不明显,线粒体肿胀,细胞核中异染色质边集明显,并出现凋亡小体。G0代转基因鸡暗区组孵化率(45%)显著高于明区组孵化率(0)(P<0.05),但均显著低于对照组孵化率(82.5%)(P<0.05);获得4只基因组中含有外源p53基因的G0代转基因鸡,外源基因转染率为22.2%(4/18);获得2只G1代转基因鸡,转基因世代遗传率为3.08%(2/65)。【结论】重组真核表达载体pEGFP-N1-p53/MAR可以促进人肝癌细胞Hep3B的凋亡;脂质体介导的含MAR序列调控元件的pEGFP-N1-p53/MAR质粒,可以提高p53在转基因鸡基因组中的整合稳定性,并可遗传给后代。

关键词：重组真核表达载体 Hep3B 转基因鸡 p53基因转染率世代遗传率

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两类猪ADP-核糖基化因子的克隆分析与原核表达载体构建

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河南师范大学学报（自然科学版） 2012年第4期40卷 103-106页

作者：朱岩昆余燕卢全伟吴世秀张建新马金友河南师范大学生命科学学院河南新乡453007 河南科技学院动物科学学院河南新乡453003 安阳工学院生物与食品工程学院河南安阳455000 河南科技学院动物病毒研究所河南新乡453003

哺乳动物小G结合蛋白——二磷酸腺苷-核糖基化因子(ADP-ribosylation factors,Arfs)除在囊泡运输、细胞骨架重排和调节细胞吞噬等方面起重要作用外,还与病毒的感染有关.前期研究发现猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and re... 详细信息

哺乳动物小G结合蛋白——二磷酸腺苷-核糖基化因子(ADP-ribosylation factors,Arfs)除在囊泡运输、细胞骨架重排和调节细胞吞噬等方面起重要作用外,还与病毒的感染有关.前期研究发现猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染早期ARFs基因表达明显上调,然而在猪只中ARFs与PRRSV的感染至今知之甚少.本研究中,猪ARF1和ARF4分别被克隆,序列分析发现:ARF1包含一个长度为546bp的开放阅读框(Open reading frame,ORF),预测编码181个氨基酸,理论分子质量为20.70kDa,pI为6.62;ARF4包含一个长度为543bp的开放阅读框,预测编码180个氨基酸,理论分子质量为20.50kDa,pI为5.46.蛋白序列结构分析显示猪ARF1和ARF4蛋白含有典型的p loop,switch区,interswitch区和N端疏水区的Hasp,在第二位都含有可被肉豆蔻酰基化的甘氨酸.猪ARF1和ARF4的原核表达载体也被构建,为进一步研究其在PRRSV感染过程中的调控提供基础.

关键词： ARF1 ARF4 原核表达 PRRSV 猪

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毛头鬼伞多糖诱导烟草体内水杨酸的积累

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福建农林大学学报（自然科学版） 2009年第1期38卷 6-10页

作者：吴艳兵谢荔岩谢联辉林奇英福建农林大学植物病毒研究所福建福州350002 河南科技学院资源与环境学院河南新乡453003

以烟草感病品种普通烟K326为材料,以毛头鬼伞多糖(CCP)为诱导因子,采用高效液相色谱法(HPLC)测定了CCP对烟草体内水杨酸(SA)含量的影响.结果表明,CCP可以诱导烟草感病品种体内SA含量增高,SA含量在接种烟草花叶病毒(TMV)后84 h达到最大值... 详细信息

以烟草感病品种普通烟K326为材料,以毛头鬼伞多糖(CCP)为诱导因子,采用高效液相色谱法(HPLC)测定了CCP对烟草体内水杨酸(SA)含量的影响.结果表明,CCP可以诱导烟草感病品种体内SA含量增高,SA含量在接种烟草花叶病毒(TMV)后84 h达到最大值,为458.927 ng.g-1.

关键词：高效液相色谱法毛头鬼伞多糖诱导抗性烟草花叶病毒水杨酸

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Myogenin mRNA丰度在金华猪和长白猪背最长肌中的表达

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中国兽医学报 2009年第3期29卷 374-377,388页

作者：单立莉张敏苗志国王雷杰许梓荣延边大学农学院动物科学系吉林龙井133400 河南科技学院动物科技学院河南新乡453003 浙江大学动物科学学院饲料研究所浙江杭州310029

运用半定量RT-PCR方法对不同生长阶段金华猪和长白猪背最长肌中肌细胞生成素(Myogenin,MyoG)基因mRNA的表达丰度进行测定,分析与肌肉沉积的关系。结果表明:在2种猪35、80、125日龄均可检测到MyoG mRNA,金华猪背最长肌中MyoG基因的表达... 详细信息

运用半定量RT-PCR方法对不同生长阶段金华猪和长白猪背最长肌中肌细胞生成素(Myogenin,MyoG)基因mRNA的表达丰度进行测定,分析与肌肉沉积的关系。结果表明:在2种猪35、80、125日龄均可检测到MyoG mRNA,金华猪背最长肌中MyoG基因的表达随着年龄和胴体瘦肉率的增加而增加,并且MyoG基因表达与胴体瘦肉率呈正比;而长白猪背最长肌中MyoG基因的表达恰好相反。除35日龄以外品种间无显著差异。

关键词： Myogenin mRNA丰度金华猪长白猪背最长肌

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中国荷斯坦奶牛CCR5基因克隆、生物信息学及表达分析

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中国畜牧兽医 2021年第12期48卷 4372-4381页

作者：陈伶慧张文婷申祥张伟郭利亚张子敬徐萍白跃宇张晓建河南科技学院动物科技学院新乡453000 河南省农业科学院畜牧兽医研究所郑州450002 河南省动物卫生监督所郑州410100

试验旨在克隆中国荷斯坦奶牛CC趋化因子受体5(C-C chemokine receptor type 5,CCR5)基因,对其进行生物信息学分析,并探究CCR5基因在奶牛炎性和健康组织中的表达水平。采用PCR技术扩增并克隆荷斯坦奶牛CCR5基因CDS区全长序列,连接pMD18-... 详细信息

试验旨在克隆中国荷斯坦奶牛CC趋化因子受体5(C-C chemokine receptor type 5,CCR5)基因,对其进行生物信息学分析,并探究CCR5基因在奶牛炎性和健康组织中的表达水平。采用PCR技术扩增并克隆荷斯坦奶牛CCR5基因CDS区全长序列,连接pMD18-T载体并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,通过蓝白斑方法筛选阳性克隆并测序,对序列进行相似性比对及系统进化树构建;应用多种在线生物信息学软件对其编码蛋白进行分析,并利用实时荧光定量PCR方法检测CCR5基因在健康和炎症奶牛乳腺组织中的表达情况。结果显示,中国荷斯坦奶牛CCR5基因CDS区全长1059 bp,编码352个氨基酸。相似性和遗传进化分析结果显示,奶牛CCR5基因与绵羊的遗传距离最近,高达96.0%,与鸡遗传关系最远,为61.0%,且在不同物种之间CCR5基因高度保守。中国荷斯坦奶牛CCR5蛋白分子质量为40.235 ku,理论等电点(pI)为9.30,为疏水性蛋白但不是分泌蛋白,主要存在于细胞质内;在CCR5蛋白二级结构中α-螺旋和无规则卷曲分别占51.14%和32.95%,三级结构模型预测结果与二级结构一致。实时荧光定量PCR结果显示,CCR5基因在健康奶牛乳腺组织中的表达量极显著低于炎性奶牛乳腺组织(P<0.01),提示其可能参与奶牛乳腺炎的发生过程。本试验结果为进一步研究奶牛CCR5蛋白的功能提供了理论依据,对探究奶牛CCR5基因在奶牛乳腺炎中的调控功能等具有重要意义。

关键词：中国荷斯坦奶牛 CCR5基因克隆生物信息学分析表达

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基于氟吡菌酰胺残留量概率分布评估膳食风险

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中国环境科学 2024年第5期44卷 2714-2723页

作者：韩文浩张明浩刘凤娇陈艺夫程有普吴艳兵陈增龙中国科学院动物研究所农业虫害鼠害综合治理研究国家重点实验室北京100101 河南科技学院资源与环境学院河南新乡4530032 天津农学院园艺园林学院天津300384

基于黄瓜中氟吡菌酰胺的残留特征,全面评估了我国不同膳食消费人群的暴露风险.建立了黄瓜中氟吡菌酰胺快速、灵敏的超高效液相色谱-串联质谱痕量分析方法,定量限(LOQ)为0.001mg/kg,保留时间为2.6min.黄瓜中氟吡菌酰胺的半衰期为2.6~6.7d... 详细信息

基于黄瓜中氟吡菌酰胺的残留特征,全面评估了我国不同膳食消费人群的暴露风险.建立了黄瓜中氟吡菌酰胺快速、灵敏的超高效液相色谱-串联质谱痕量分析方法,定量限(LOQ)为0.001mg/kg,保留时间为2.6min.黄瓜中氟吡菌酰胺的半衰期为2.6~6.7d,属于易消解农药.最终残留水平为研究中应重点关注氟吡菌酰胺的多暴露途径和联合风险放大带来的健康暴露负效应,特别是对于弱势儿童群体.

关键词：氟吡菌酰胺残留特征浓度差异概率性模型风险评估

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