检索结果-内蒙古大学图书馆

遗传 2008年第7期30卷 857-862页

作者：曾永秋税青林赵矫张志宏余红赵小平四川省泸州医学院医学生物学与遗传学教研室泸州646000 四川省泸州医学院医学生物学与遗传学教研室泸州646000

为了探讨不同位点siRNA在不同时间点对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞中hTERT mRNA表达的抑制作用,设计并化学合成4对针对人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的特异性siRNA。以脂质体法转染入MCF-7细胞,在转染后12h、24h、48h、72h和5d,用半定量逆... 详细信息

为了探讨不同位点siRNA在不同时间点对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞中hTERT mRNA表达的抑制作用,设计并化学合成4对针对人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的特异性siRNA。以脂质体法转染入MCF-7细胞,在转染后12h、24h、48h、72h和5d,用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中hTERT mRNA的表达。与对照组相比,4段siRNA中有3段在转染后12h即对hTERT mRNA的表达产生抑制,48h抑制率最高,72h后下降,其中位于hTERT mRNA二级结构中的结构相对简单区域的siRNA抑制率最高,达到75%,说明特异性siRNA对hTERT基因有明显的抑制效果,且该抑制效应具有位置及时间依赖性。

关键词： siRNA hTERT基因位置效应时间效应

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乳腺肿瘤端粒酶活性表达及其与病理学指标的相关性研究

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四川大学学报（自然科学版） 2002年第S1期39卷 121-126页

作者：何国平黄燕税青林余红张莉娟泸州医学院医学生物学与遗传学教研室四川泸州646000

目的　探讨乳腺肿瘤中端粒酶活性表达及其与病理学指标相关性 .方法　运用银染端粒重复序列扩增法 (SS TRAP)检测 5 2例新鲜乳腺癌及其癌旁组织 ,其中有 32例为乳腺良性病变和 14例为正常乳腺组织中端粒酶的活性表达 .结果　乳腺癌组端... 详细信息

目的　探讨乳腺肿瘤中端粒酶活性表达及其与病理学指标相关性 .方法　运用银染端粒重复序列扩增法 (SS TRAP)检测 5 2例新鲜乳腺癌及其癌旁组织 ,其中有 32例为乳腺良性病变和 14例为正常乳腺组织中端粒酶的活性表达 .结果　乳腺癌组端粒酶阳性表达率为 90 .38%;乳腺癌旁、乳腺良性病变及正常乳腺组分别为 2 8.85 %(15 / 5 2 ) ,31.2 5 %(10 / 32 )和 0 (0 / 14) ,与乳腺癌组比较 ,3者均具有高度显著性差异 (P <0 .0 1) .乳腺癌组织中端粒酶表达与病理类型、临床分期、肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移状况等指标明显相关 (P <0 .0 5 ) ,而与患者病程、年龄等因素无关(P >0 .0 5 ) .其中 ,中晚期浸润性癌的端粒酶阳性率比早期癌高 (P <0 .0 5 ) ,Ⅱ期 ,Ⅲ期 ,Ⅳ期与Ⅰ期、直径大于 2cm与小于 2cm、中低分化与高分化及淋巴结转移组 (10 0 %)与未转移组 (72 .2 2 %)间比较 ,前者端粒酶阳性率均高于后者 ,均有显著性差异 (P <0 .0 5 ) .结论　端粒酶的激活可能发生在乳腺癌的早期阶段 ,并在其演进过程中起重要作用 .端粒酶有望成为乳腺肿瘤早期诊断和预后判断的特异性指标 .

关键词：乳腺肿瘤端粒酶端粒酶活性

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外周血淋巴细胞培养及染色体制备过程中的问题分析

引用

现代预防医学 2009年第11期36卷 2108-2109+2112页

作者：赵小平陈绍坤黄燕税青林泸州医学院医学生物学与遗传学教研室

[目的]分析外周血淋巴细胞培养及染色体制备过程中的影响因素,以便提高外周血淋巴细胞染色体标本制备成功率。[方法]常规外周血淋巴细胞培养及染色体制备,对1730例受检者8650张染色体的标本进行观察记录并总结分析。[结果]1730例受检者... 详细信息

[目的]分析外周血淋巴细胞培养及染色体制备过程中的影响因素,以便提高外周血淋巴细胞染色体标本制备成功率。[方法]常规外周血淋巴细胞培养及染色体制备,对1730例受检者8650张染色体的标本进行观察记录并总结分析。[结果]1730例受检者中染色体标本制作失败37例,成功率97.9%;67例在细胞培养过程中未按常规操作或出现问题后采取补救措施而未终止实验,结果成功67例,成功率为100%。[结论]影响外周血淋巴细胞培养及染色体制备的因素很多,在操作过程中及时发现问题并迅速采取补救措施,可大大提高外周血淋巴细胞染色体标本制备成功率。

关键词：外周血淋巴细胞染色体制备影响因素

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影响分裂相指数的各环节控制与染色体制备效果分析

引用

现代预防医学 2009年第21期36卷 4156-4157页

作者：赵小平曾永秋赵矫黄燕税青林泸州医学院医学生物学与遗传学教研室

[目的]对影响分裂相指数的各环节进行优化控制,分析该条件下染色体标本制备效果。[方法]在外周血淋巴细胞培养染色体标本制备的基本过程中,对细胞培养、细胞周期阻滞、细胞收获等步骤中与分裂相指数相关的各环节进行优化控制,采用显微... 详细信息

[目的]对影响分裂相指数的各环节进行优化控制,分析该条件下染色体标本制备效果。[方法]在外周血淋巴细胞培养染色体标本制备的基本过程中,对细胞培养、细胞周期阻滞、细胞收获等步骤中与分裂相指数相关的各环节进行优化控制,采用显微镜下直接观察、计数及染色体分散面积测量等方法对控制后的标本制备效果进行分析。[结果]在优化条件下所得染色体标本分裂相数较多、染色体分散良好、制备效果稳定。[结论]该优化控制方案可获得理想的可供分析的染色体分裂相,效果稳定,保证了外周血淋巴细胞染色体制备及分析的成功率。

关键词：分裂相指数优化控制效果分析

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腺病毒载体介导hTERT特异性RNAi诱导乳腺癌细胞凋亡的研究

引用

现代预防医学 2010年第6期37卷 1101-1103页

作者：刘岚陈绍坤税青林赵娇余红曾永秋赵小平泸州医学院医学生物学与遗传学教研室

[目的]构建hTERT特异性RNAi腺病毒载体,并研究该载体对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响,为针对端粒酶的乳腺癌基因治疗提供新的途径。[方法]设计针对人端粒酶逆转录酶催化亚基(hTERT)的干扰靶序列GGAACACCAAGAAGTTCATCT,构建RNAi腺病毒载体rA... 详细信息

[目的]构建hTERT特异性RNAi腺病毒载体,并研究该载体对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响,为针对端粒酶的乳腺癌基因治疗提供新的途径。[方法]设计针对人端粒酶逆转录酶催化亚基(hTERT)的干扰靶序列GGAACACCAAGAAGTTCATCT,构建RNAi腺病毒载体rAd-shRNA-hTERT。同时构建不针对任何基因的shRNA阴性对照rAd-shRNA-HK和只含EGFP的rAd-EGFP对照。转染人乳腺癌MCF-7细胞后48h,以荧光定量PCR和免疫印迹法检测MCF-7细胞hTERT基因的表达、流式细胞仪检测细胞凋亡情况。[结果]病毒载体经酶切、电泳分析表明插入序列正确,构建成功;转染MCF-7细胞后,rAd-shRNA-hTERT组可明显抑制hTERT基因表达,并抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡。[结论]通过腺病毒介导的RNAi技术可有效抑制MCF-7细胞中hTERT基因表达进而诱导肿瘤细胞凋亡,有望用于肿瘤的基因治疗。

关键词： hTERT RNAi 腺病毒载体基因治疗

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hTERT-siRNA表达载体的构建及对MCF-7细胞生长、端粒酶活性的抑制作用

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解放军医学杂志 2007年第6期32卷 561-564页

作者：张志宏曾永秋税青林田强黄燕赵小平泸州医学院医学生物学与遗传学教研室四川泸州646000

目的构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的RNA干扰(RNAi)表达载体,并研究该载体对乳腺癌MCF-7细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响,为针对端粒酶的乳腺癌基因治疗提供新的途径。方法设计针对人端粒酶逆转录酶催化亚基(hTERT)的干扰靶序列TGTTC... 详细信息

目的构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的RNA干扰(RNAi)表达载体,并研究该载体对乳腺癌MCF-7细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响,为针对端粒酶的乳腺癌基因治疗提供新的途径。方法设计针对人端粒酶逆转录酶催化亚基(hTERT)的干扰靶序列TGTTCAGCGTGCTCAACTA,构建重组siRNA表达质粒pGenesil-hTERT,同时构建不针对任何基因的阴性对照重组pGenesil-HK。两种重组质粒经酶切、电泳分析和测序鉴定后,用脂质体转染法分别转染乳腺癌MCF-7细胞,应用端粒酶重复序列扩增聚合酶链反应(TRAP-PCR)及聚丙烯酰胺凝胶电泳检测端粒酶活性,流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果酶切电泳测序分析表明插入序列正确,重组质粒构建成功。转染pGenesil-hTERT的MCF-7细胞,凝胶电泳见端粒酶特征性条带明显减少,端粒酶活性受到明显抑制;pGenesil-hTERT转染细胞后凋亡率较对照组明显升高(P<0.01),且转染48h凋亡率最高,达54.7%±2.41%。结论hTERT-siRNA可有效抑制乳腺癌MCF-7细胞端粒酶活性、促进细胞凋亡,此法有望应用于肿瘤基因治疗。

关键词： RNA干扰 siRNA表达载体基因,hTERT 细胞凋亡

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Dicer蛋白的晶体结构及其功能

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解放军医学杂志 2007年第6期32卷 648-649页

作者：张志宏税青林泸州医学院医学生物学与遗传学教研室四川泸州646000

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种进化上保守的抵御转基因或外来病毒侵犯的防御机制,为与靶基因的转录产物mRNA存在同源互补序列的内源性或外源性双链RNA(double stranded RNA,dsRNA).。RNAi 可在细胞内降解特异性的mRNA ,从而导... 详细信息

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种进化上保守的抵御转基因或外来病毒侵犯的防御机制,为与靶基因的转录产物mRNA存在同源互补序列的内源性或外源性双链RNA(double stranded RNA,dsRNA).。RNAi 可在细胞内降解特异性的mRNA ,从而导致序列特异性的转录后基因沉默(post-transcriptional gene silencing ,PTGS) 。早在1990 年,生物学家就在植物中发现了RNAi 现象 ,后来其被证实广泛存在于真菌、拟南芥、线虫、果蝇和小鼠等各种生物中[3] 。此过程所涉及的酶在不同物种间具有高度同源性。作为关闭基因的新技术,RNAi 已成为基因功能研究中一种快速、简便的新方法,美国《Science》杂志将其列为2002 年十大科技突破之首。

关键词： RNA干扰 Dicer蛋白核糖核酸酶类

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PI3K/Akt调控内质网应激对GRP78的诱导

引用

中国病理生理杂志 2011年第4期27卷 749-754页

作者：刘友平严冬梅陈川宁段春燕陈绍坤李洪代荣阳泸州医学院生物化学教研室四川泸州646000 泸州医学院医学生物学与遗传学教研室四川泸州646000

目的:研究内质网应激条件下PI3K/Akt信号通路对HEK293细胞中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达水平的调控作用。方法:采用PI3K抑制剂LY294002、Akt1失活型突变载体Akt1(K179M)及Akt siRNAs阻断内质网应激介导的Akt活化,采用Akt激活型突变载体... 详细信息

目的:研究内质网应激条件下PI3K/Akt信号通路对HEK293细胞中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达水平的调控作用。方法:采用PI3K抑制剂LY294002、Akt1失活型突变载体Akt1(K179M)及Akt siRNAs阻断内质网应激介导的Akt活化,采用Akt激活型突变载体Myr-Akt过度激活内质网应激介导的Akt活化,并利用RT-PCR和Western blotting技术分析内质网应激条件下PI3K/Akt信号途径对HEK293细胞中GRP78表达水平的调控作用。结果:LY294002、Akt1(K179M)及Akt1 siRNA均明显抑制了内质网应激对GRP78的诱导。Myr-Akt1明显促进内质网应激对GRP78的诱导。Myr-Akt2/3及Akt2/3 siRNA对GRP78的诱导均无影响。PI3K/Akt信号通路阻断或过度激活对GRP78 mRNA水平的诱导无影响,但是对GRP78的降解有显著影响。结论:HEK293细胞中,PI3K/Akt通过蛋白稳定性调节促进内质网应激对GRP78的诱导。

关键词： PI3K/Akt 葡萄糖调节蛋白质78 内质网应激 HEK293细胞

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染色体多态性的生育异常临床效应分析

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现代预防医学 2010年第10期37卷 1998-1999页

作者：余红赵矫赵小平黄燕四川泸州医学院医学生物学与遗传学教研室

[目的]探讨染色体多态性与生育异常临床效应之间的关系。[方法]以有异常生育史的个体作为患者组,无异常生育史的正常个体作为正常对照组,通过培养外周血淋巴细胞、常规染色体制备、G显带技术进行核型分析,判断两组中各种染色体多态性的... 详细信息

[目的]探讨染色体多态性与生育异常临床效应之间的关系。[方法]以有异常生育史的个体作为患者组,无异常生育史的正常个体作为正常对照组,通过培养外周血淋巴细胞、常规染色体制备、G显带技术进行核型分析,判断两组中各种染色体多态性的检出率有无差异。[结果]患者组染色体多态性的检出率高于正常组,但两组间染色体多态性检出率的差异不具有统计学意义。[结论]尚不能认为染色体多态性与个体异常生育史之间有必然的联系。

关键词：染色体多态性核型分析生育异常

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Akt和胞外信号调节激酶通路间的信号交流对内质网应激条件下肝癌细胞周期的调控

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中华肝脏病杂志 2010年第12期18卷 909-914页

作者：严冬梅代荣阳段春燕陈绍坤刘友平陈川宁李洪泸州医学院生物化学教研室 646000 泸州医学院医学生物学与遗传学教研室 646000 泸州医学院人类疾病细胞信号与调控四川省高校重点实验室 646000

目的研究内质网应激介导的磷脂酰肌醇3激酶（P13K）／Akt和丝裂原活化蛋白激酶（MEK）／胞外信号调节激酶（ERK）途径间的信号交流及其对内质网应激条件下肝癌细胞周期的调控作用。方法采用P13K抑制剂LY294002、Akt激活型突变载体myr-Ak... 详细信息

目的研究内质网应激介导的磷脂酰肌醇3激酶（P13K）／Akt和丝裂原活化蛋白激酶（MEK）／胞外信号调节激酶（ERK）途径间的信号交流及其对内质网应激条件下肝癌细胞周期的调控作用。方法采用P13K抑制剂LY294002、Akt激活型突变载体myr-Akt和MEK抑制剂U0126分别阻断或激活内质网应激介导的Akt和ERK活化，并利用Westernblot和流式细胞技术分析内质网应激条件下P13K／Akt和MEK／ERK途径间的信号交流及其对肝癌细胞株SMMC-7721、Hep3B和HepG2细胞周期的调控作用。数据处理采用Sperman等级相关分析，P〈0．05为差异有统计学意义。结果阻断P13K／Akt明显促进内质网应激介导的MEK／ERK活化，而过度激活P13K／Akt则抑制内质网应激介导的MEK／ERK活化。阻断MEK／ERK对内质网应激介导的P13K／Akt活化无影响。持续活化的Akt突变载体myr—Akt和MEK抑制剂U0126均明显抑制了内质网应激诱导的肝癌细胞G0／G1期阻滞。结论P13K／Akt和MEK／ERK信号途径在内质网应激肝癌细胞中存在信号交流，该信号交流对细胞周期起重要调控作用。

关键词：癌,肝细胞细胞周期信号传递内质网应激胞外信号调节激酶 Akt

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