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生物化学与生物物理进展 2024年第10期51卷 2757-2772页

作者：伍霞艳柳迪刘禹辰汲淑慧付斌刘莹唐丽安徽医科大学基础医学院免疫学教研室合肥230032 军事医学研究院生命组学研究所国家蛋白质科学中心(北京)北京蛋白质组研究中心医学蛋白质组全国重点实验室北京102206

目的肺泡巨噬细胞(alveolar macrophages,AMs)能够处理表面活性物质来维持肺泡膨胀开放,并充当防御病原体入侵的第一道免疫防线,对肺部微环境稳态的维持至关重要。已有研究表明,肺纤维化过程中,单核来源的AMs持续释放促炎因子和趋化因子... 详细信息

目的肺泡巨噬细胞(alveolar macrophages,AMs)能够处理表面活性物质来维持肺泡膨胀开放,并充当防御病原体入侵的第一道免疫防线,对肺部微环境稳态的维持至关重要。已有研究表明,肺纤维化过程中,单核来源的AMs持续释放促炎因子和趋化因子,招募更多免疫细胞到受损区域,维持并加剧炎症,从而发挥负面作用。目前,大多数研究聚焦于肺纤维化微环境AMs的基因表达水平,而在蛋白质功能和调控方面的报道较少。本研究旨在探讨正常生理条件下与肺纤维化后AMs的差异表达蛋白(differentially expressed proteins,DEPs),以便更全面地理解AMs在肺纤维化发展过程中的作用。方法本研究建立博来霉素诱导肺纤维化小鼠模型,利用流式细胞分选技术收集来自生理盐水对照组和肺纤维化模型的AMs(每个样本2.5×105个细胞),通过无标记蛋白质组学方法获得蛋白质表达谱。结果通过将生理盐水组与已公开的生理AMs蛋白质组数据比对发现,本研究产出的蛋白质组数据质量较高,能够满足研究需求。综合分析结果显示,与对照组相比,博来霉素组AMs有778种蛋白质表达上调。此外,上调的DEPs中富集通路包括I-κB/NF-κB通路、炎症反应调节通路、吞噬调节通路、TGF-β通路和HIF-1通路,表明肺纤维化微环境中的AMs具有促炎和促纤维化功能。对DEPs的蛋白质-蛋白质相互作用网络分析表明,Tlr2和Pycard之间的相互作用是AMs促炎表型的控制节点,从而导致肺纤维化进展。结论本研究探讨了AMs在肺纤维化微环境中蛋白质表达谱的变化。结果发现,AMs显著上调多条与炎症和纤维化关联的通路蛋白,并提示Tlr2和Pycard的相互作用是AMs表现出高度促炎活性的控制节点。

关键词：蛋白质组学肺泡巨噬细胞博来霉素诱导肺纤维化

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给予卵清蛋白表位内化受体DEC⁃205抗体单链可变区嵌合蛋白(SD)可抑制小鼠食物过敏

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细胞与分子免疫学杂志 2023年第5期39卷 391-396页

作者：万冲吴美英张雨晴邵俊维骆晴晴鞠吉雨徐灵芝潍坊医学院基础医学院免疫学教研室山东潍坊261053 青岛市胶州中心医院消化内科山东青岛266300

目的研究卵清蛋白(OVA)表位内化受体DEC⁃205抗体单链可变区嵌合蛋白(SD)对小鼠食物过敏的预防性治疗作用及可能的机制。方法基于食物过敏模型,将小鼠随机分为单纯对照组、PBS组、100μg DEC205受体抗体单链可变区(scFv DEC)处理组、50μ... 详细信息

目的研究卵清蛋白(OVA)表位内化受体DEC⁃205抗体单链可变区嵌合蛋白(SD)对小鼠食物过敏的预防性治疗作用及可能的机制。方法基于食物过敏模型,将小鼠随机分为单纯对照组、PBS组、100μg DEC205受体抗体单链可变区(scFv DEC)处理组、50μg SD处理组、100μg SD处理组,每次接触卵清蛋白(OVA)24 h前给予相应处理。激发后评估小鼠腹泻发生情况,测肛温,ELISA检测血清中OVA特异性IgE、IgG1、IgG2a以及白细胞介素4(IL⁃4)水平,HE染色观察空肠组织嗜酸性粒细胞浸润情况,甲苯胺蓝染色观察肥大细胞浸润情况。分离培养未成熟骨髓来源的树突状细胞(BMDC),分别以10 ng/mL脂多糖(LPS)、50 ng/mL胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)、1000 ng/mL scFv DEC蛋白、(10、100、1000)ng/mL SD蛋白刺激培养24 h,检测上清中IL⁃10水平。结果与PBS组相比,预防性给予SD蛋白,发生腹泻的小鼠数量明显减少,肛温差显著减小,血清OVA特异性IgE、IgG1、IgG2a以及IL⁃4水平显著降低;空肠组织嗜酸性粒细胞和肥大细胞浸润显著减少,SD体外刺激BMDC培养上清IL⁃10水平显著升高。结论SD通过促进树突状细胞的免疫耐受减轻实验性食物过敏反应。

关键词：树突状细胞食物过敏 DEC⁃205抗体单链可变区嵌合蛋白(SD) 白细胞介素10

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FOXP3调控非小细胞肺癌A549细胞对阿霉素敏感性的作用及其机制

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吉林大学学报（医学版） 2023年第5期49卷 1161-1167页

作者：盖晓东赵颖王鹤霏何程远王星翔历春北华大学基础医学院免疫学教研室吉林吉林132013 吉林大学第一医院肿瘤妇科吉林长春130021

目的:探讨叉头蛋白3(FOXP3)基因沉默后非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞对阿霉素(Dox)敏感性的变化,阐明其参与Dox耐药的机制。方法:采用脂质体法将FOXP3小干扰RNA(siRNA)片段转染至人NSCLC A549细胞,细胞分为空白对照组(不转染)、si-NC组(... 详细信息

目的:探讨叉头蛋白3(FOXP3)基因沉默后非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞对阿霉素(Dox)敏感性的变化,阐明其参与Dox耐药的机制。方法:采用脂质体法将FOXP3小干扰RNA(siRNA)片段转染至人NSCLC A549细胞,细胞分为空白对照组(不转染)、si-NC组(转染对照siRNA)和si-FOXP3组(转染FOXP3-siRNA)。采用Westernblotting法和免疫荧光法检测各组A549细胞中FOXP3蛋白表达水平,CCK-8法检测各组A549细胞增殖活性和半数抑制浓度(IC50)值。各组A549细胞中分别加入0、10和20μmol·L^(-1)DAPT,作为0、10和20μmol·L^(-1)DAPT组;另取A549细胞,分别加入0μmol·L^(-1)DAPT、1.0mg·L^(-1)Dox和1.0mg·L^(-1)Dox联合10μmol·L^(-1)DAPT,作为0μmol·L^(-1)DAPT组、1.0 mg·L^(-1)Dox组和1.0 mg·L^(-1)Dox联合10μmol·L^(-1)DAPT组。Western blotting法检测各组细胞中Notch1、Hes1和FOXP3蛋白表达水平,CCK-8和Western blotting法检测0、10和20μmol·L^(-1)DAPT组A549细胞的IC50值和细胞中Notch1、Hes1及FOXP3蛋白表达水平,Western blotting法检测0μmol·L^(-1)DAPT组、1.0 mg·L^(-1)Dox组和1.0 mg·L^(-1)Dox联合10μmol·L^(-1)DAPT组A549细胞中FOXP3、P-糖蛋白(P-gp)、Notch1和Hes1蛋白表达水平。结果:与空白对照和si-NC组比较,si-FOXP3组A549细胞中FOXP3蛋白表达水平明显降低(P<0.01),增殖活性和IC50值降低(P<0.05或P<0.01),细胞中Notch1、Hes1和FOXP3蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。与0μmol·L^(-1)DAPT组比较,10和20μmol·L^(-1)DAPT组A549细胞中Notch1、Hes1和FOXP3蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。与0μmol·L^(-1)DAPT组比较,1.0 mg·L^(-1)Dox组A549细胞中FOXP3、P-gp、Notch1和Hes1蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与1.0 mg·L^(-1)Dox组比较,1.0 mg·L^(-1)Dox联合10μmol·L^(-1)DAPT组A549细胞中FOXP3、P-gp、Notch1和Hes1蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论:沉默FOXP3可提高NSCLC细胞对Dox的敏感性,其作用机制与抑制Notch1/Hes1信号通路有关。

关键词：癌,非小细胞肺叉头蛋白3 Notch1 阿霉素药物敏感性

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约氏疟原虫感染小鼠肺组织TIGIT^(+)CD8^(+)T细胞数量增加但细胞因子分泌能力降低

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细胞与分子免疫学杂志 2023年第8期39卷 673-679页

作者：谢安琪黎家杰方超石飞虎邢俊敏莫峰谢红艳黄俊魏海霞广州医科大学基础医学院病原生物学与免疫学教研室广东广州511436

目的研究含免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域T细胞免疫受体(TIGIT)对疟原虫感染小鼠肺脏中CD8^(+)T细胞功能的影响。方法约氏疟原虫(Plasmodium yoelii)感染小鼠12 d后,分离肺脏,称体质量,拍照;消化后分离肺脏淋巴细胞,计数、... 详细信息

目的研究含免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域T细胞免疫受体(TIGIT)对疟原虫感染小鼠肺脏中CD8^(+)T细胞功能的影响。方法约氏疟原虫(Plasmodium yoelii)感染小鼠12 d后,分离肺脏,称体质量,拍照;消化后分离肺脏淋巴细胞,计数、染色,流式细胞术检测CD8^(+)、TIGIT^(+)CD8^(+)T细胞的含量;流式细胞术检测TIGIT^(+)CD8^(+)T细胞的L选择素(CD62L)、CD69、程序性死亡蛋白1(PD-1)、CD25和CX3C趋化因子受体1(CX3CR1)的表达情况;佛波酯(PMA)和离子霉素刺激后,检测TIGIT^(+)CD8^(+)T细胞分泌γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素21(IL-21)、IL-4、IL-17和IL-10的能力。结果疟原虫感染小鼠体质量减轻,肺脏变黑变暗,肺脏质量和占体质量比明显增加。与正常组小鼠相比,疟原虫感染后小鼠肺组织CD8^(+)T细胞和TIGIT^(+)CD8^(+)T细胞百分比和绝对数量显著升高。与正常小鼠TIGIT^(+)CD8^(+)T细胞相比,感染组TIGIT^(+)CD8^(+)T细胞中表达CD62L的细胞百分比显著降低,表达CD69、PD-1、CX3CR1的细胞百分比显著升高,感染组TIGIT^(+)CD8^(+)T细胞可分泌IL-21、IL-4、IL-17、IL-10的细胞百分比显著降低。结论疟原虫感染后,小鼠肺脏病变明显,TIGIT^(+)CD8^(+)T细胞数量增加,该细胞群表达多种活化相关分子,但分泌细胞因子的能力降低。

关键词：约氏疟原虫(Plasmodium yoelii) 肺脏 CD8^(+)T淋巴细胞含免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域T细胞免疫受体(TIGIT)

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结肠固有层巨噬细胞在溃疡性结肠炎中的作用研究

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中华炎性肠病杂志（中英文） 2024年第4期8卷 309-313页

作者：赵鑫姜媛但文利张慧媛李娟施京红陈丽华陕西中医药大学医学技术学院咸阳712046 空军军医大学基础医学院免疫学教研室西安710032

溃疡性结肠炎(UC)是一种与免疫功能紊乱密切相关的肠道慢性复发性炎性疾病。结肠固有层巨噬细胞是肠黏膜中最为丰富的巨噬细胞群体,能够有效维持和调节肠道内环境的稳定,其介导的炎症反应在UC发生发展中发挥重要作用。本文围绕两种不同... 详细信息

溃疡性结肠炎(UC)是一种与免疫功能紊乱密切相关的肠道慢性复发性炎性疾病。结肠固有层巨噬细胞是肠黏膜中最为丰富的巨噬细胞群体,能够有效维持和调节肠道内环境的稳定,其介导的炎症反应在UC发生发展中发挥重要作用。本文围绕两种不同亚型的结肠固有层巨噬细胞在UC中的作用机制进行综述,以期为UC的临床治疗提供新思路。

关键词：溃疡性结肠炎巨噬细胞结肠固有层细胞因子

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棘球蚴EM10蛋白T/B联合表位预测分析及表达产物鉴定

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中华地方病学杂志 2024年第10期43卷 796-802页

作者：马西智李艳敏陈娜菲祖力胡马·艾麦提王嘉祯周晓涛新疆医科大学基础医学院免疫学教研室乌鲁木齐830011 新疆医科大学第一临床医学院乌鲁木齐830011 新疆地方病分子生物学重点实验室乌鲁木齐830011

目的预测分析棘球蚴EM10蛋白的T/B联合表位,并鉴定生物合成EM10多表位重组蛋白表达产物。方法通过NCBI GenBank公共数据库获得EM10蛋白的基因相关信息。采用生物信息技术预测分析EM10蛋白的T/B联合表位,根据预测结果,生物合成原核表达... 详细信息

目的预测分析棘球蚴EM10蛋白的T/B联合表位,并鉴定生物合成EM10多表位重组蛋白表达产物。方法通过NCBI GenBank公共数据库获得EM10蛋白的基因相关信息。采用生物信息技术预测分析EM10蛋白的T/B联合表位,根据预测结果,生物合成原核表达重组质粒pET30a-EM10(epitope),转化至大肠埃希菌BL21(DE3),经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法鉴定EM10多表位重组蛋白表达产物。结果EM10基因全长1759 bp(GenBank登记号:U05573),其蛋白氨基酸序列(GenBank登记号:AAA50580.1)全长559个氨基酸。Phyre软件同源建模,获得EM10蛋白三级结构,预测EM10蛋白优势T/B联合表位位于46~61、133~183、239~255、442~475位氨基酸。利用(GGGGS)n linker序列连接各表位,设计构建EM10多表位重组蛋白,共206个氨基酸,DNA片段长度为618 bp,蛋白相对分子质量为22.66×10^(3)。构建的原核表达重组质粒pET30a-EM10(epitope),经双酶切鉴定,质粒大小为5000~6000 bp,与预期(5854 bp)相符。SDS-PAGE显示,在37℃IPTG诱导条件下上清中有目的蛋白表达且效果较好;蛋白质印迹法鉴定,表达产物相对分子质量为22.66×10^(3),与预期相符。结论利用生物信息技术成功预测并设计了EM10蛋白的优势T/B联合表位,构建的原核表达重组质粒转化诱导表达产物经实验证实为EM10多表位重组蛋白,为构建EM10优势表位诊断试剂盒提供了实验基础。

关键词：棘球蚴病免疫诊断重组质粒

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3型固有淋巴细胞在慢性炎症性疾病中的作用

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中国免疫学杂志 2024年第9期40卷 2006-2010,F0004页

作者：徐峥于明凯张峰波丁剑冰新疆医科大学基础医学院免疫学教研室乌鲁木齐830011 新疆医科大学第一附属医院乌鲁木齐830054

3型固有淋巴细胞(ILC3)分化于淋巴祖细胞,在机体内分布广泛,是连接固有免疫和适应性免疫的桥梁。既往研究认为ILC3主要参与肠道免疫调节,而最新研究表明除在肠道疾病中的作用外,ILC3还参与多种慢性炎症性疾病发生发展。本文就ILC3在慢... 详细信息

3型固有淋巴细胞(ILC3)分化于淋巴祖细胞,在机体内分布广泛,是连接固有免疫和适应性免疫的桥梁。既往研究认为ILC3主要参与肠道免疫调节,而最新研究表明除在肠道疾病中的作用外,ILC3还参与多种慢性炎症性疾病发生发展。本文就ILC3在慢性炎症性疾病中的作用进行综述。

关键词： 3型固有淋巴细胞细胞因子免疫调节慢性炎症性疾病

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NLRP3炎症小体在感染性疾病中的作用研究进展

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中国病原生物学杂志 2024年第11期19卷 1371-1376页

作者：高雪涵卫麟娜董品志陈晋柯源张浪浪王海燕覃明罗军敏遵义医科大学基础医学院免疫学教研室贵州遵义563000 遵义医科大学流行病学与卫生统计学教研室

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(Nucleotide-bindingoligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)是一类存在于胞浆中的大分子蛋白复合物,作为炎症反应的核心,能够感知外源性病原体和内源性危险信号,在多种感染性疾病的... 详细信息

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(Nucleotide-bindingoligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)是一类存在于胞浆中的大分子蛋白复合物,作为炎症反应的核心,能够感知外源性病原体和内源性危险信号,在多种感染性疾病的发生发展中发挥重要作用。因此,本文对NLRP3炎症小体的激活机制以及NLRP3炎症小体在感染性疾病中的研究进展予以综述,旨在为感染性疾病的治疗提供新的靶点。

关键词：固有免疫模式识别受体 NLRP3炎症小体感染性疾病综述

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靶向HER2的通用型CAR-T细胞来源的细胞外囊泡的制备及功能鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第2期40卷 121-128页

作者：蒙若彤王鹏举赵晓娟郑瑞梁思辛张依婷董昊韩玉洁杨安钢白占涛阎博路凡延安大学生命科学学院陕西延安716000 空军军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032 空军军医大学基础医学院免疫学教研室陕西西安710032 新乡医学院医学检验学院河南新乡453003

目的利用可持续传代的T淋巴细胞系,制备携带靶向人表皮生长因子受体2(HER2)蛋白的嵌合抗原受体(CAR)的细胞外囊泡(EV),并检测其对HER2^(+)肿瘤细胞的杀伤能力。方法采用分子克隆技术构建重组慢病毒质粒。利用成簇的规律间隔的短回文... 详细信息

目的利用可持续传代的T淋巴细胞系,制备携带靶向人表皮生长因子受体2(HER2)蛋白的嵌合抗原受体(CAR)的细胞外囊泡(EV),并检测其对HER2^(+)肿瘤细胞的杀伤能力。方法采用分子克隆技术构建重组慢病毒质粒。利用成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)/CRISPR相关蛋白9(Cas9)技术和慢病毒感染的方法构建底盘Jurkat细胞。流式细胞术检测底盘Jurkat细胞、嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞和CAR-Jurkat细胞的构建。通过聚乙二醇6000(PEG6000)浓缩方法和细胞挤压方法制备EV;微粒子追踪分析(NTA)和Western blot法鉴定EV。萤光素酶报告基因系统检测细胞和EV对肿瘤细胞的杀伤作用。荧光显微镜观察免疫细胞对EV的吞噬作用。结果酶切鉴定和基因测序结果表明重组质粒构建成功。流式细胞术结果显示底盘Jurkat细胞、 CAR-T细胞和CAR-Jurkat细胞顺利制备。NTA结果显示制备的EV大小正确。萤光素酶报告基因系统证明CAR-T细胞、 CAR-Jurkat细胞、 CAR-T EV和CAR-Jurkat EV对HER2+肿瘤细胞均具有靶向杀伤能力。荧光显微镜观察表明,提高CD47分子的表达水平能够减弱免疫细胞对通用型CAR-Jurkat EV的吞噬作用。结论通用型CAR-T细胞来源EV能够靶向杀伤HER2+肿瘤细胞。

关键词：嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞同种异体底盘细胞细胞外囊泡

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课程思政视角下《医学免疫学》课程教学设计与实践——以“补体系统”为例

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教育进展 2024年第7期14卷 1100-1107页

作者：王希君朱薿廖纪元刘红云潘清容湖北科技学院医学部基础医学院免疫学教研室湖北咸宁

文章以“补体系统”为例,在课程思政视角下,从教学准备、教学实施过程、教学效果等方面进行探讨,探索如何在《医学免疫学》课程中进行课程思政教学,使学生在学习专业知识的同时,提高思想政治素养、社会责任感和创新精神,为未来的医学事... 详细信息

文章以“补体系统”为例,在课程思政视角下,从教学准备、教学实施过程、教学效果等方面进行探讨,探索如何在《医学免疫学》课程中进行课程思政教学,使学生在学习专业知识的同时,提高思想政治素养、社会责任感和创新精神,为未来的医学事业和社会发展做出积极贡献。

关键词：课程思政医学免疫学教学补体系统

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