沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)的生殖道感染可导致女性盆腔炎症、输卵管炎症、异位妊娠和不孕等严重并发症,然而其致病机制尚不明确。CT质粒蛋白3(plasmid gene protein 3,Pgp3)的缺失可使CT上行感染致病力减弱、无法诱导上生...
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沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)的生殖道感染可导致女性盆腔炎症、输卵管炎症、异位妊娠和不孕等严重并发症,然而其致病机制尚不明确。CT质粒蛋白3(plasmid gene protein 3,Pgp3)的缺失可使CT上行感染致病力减弱、无法诱导上生殖道输卵管的病变,表明Pgp3在CT致病中起重要作用。Pgp3通过抑制宿主细胞凋亡、改善宿主细胞生存状态以及抑制人类抗菌肽等多种机制,维持CT生存并促进其感染上行。Pgp3还可通过促进CT转移并定植于胃肠道,建立CT的持续感染。此外,Pgp3通过诱导产生炎症因子等方式促进炎症的发生发展。因此,Pgp3是CT致病的重要毒力因子。此文就Pgp3对CT致病机制的研究进展作一综述。
目的构建过表达内质网应激标志蛋白葡萄糖调节蛋白78(Glucose-regulated protein 78,GRP78)的人乳腺癌细胞系HS578T、MDA-MB-231,为探讨GRP78在乳腺癌发生发展中的作用机制提供基础。方法采用分子克隆技术构建表达GRP78的慢病毒载体pCDH...
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目的构建过表达内质网应激标志蛋白葡萄糖调节蛋白78(Glucose-regulated protein 78,GRP78)的人乳腺癌细胞系HS578T、MDA-MB-231,为探讨GRP78在乳腺癌发生发展中的作用机制提供基础。方法采用分子克隆技术构建表达GRP78的慢病毒载体pCDH-CMV-GRP78-HA-EF1-Puro质粒,采用PCR法扩增质粒,后使用EcoRⅠ、NotⅠ限制性内切酶切割质粒,对酶切产物进行测序鉴定,成功构建pCDH-CMV-GRP78-HA-EF1-Puro质粒。取对数生长期293FT细胞系(克隆分离株),在培养皿中加入pCDH-CMV-GRP78-HA-EF1-Puro混合液,培养48 h收集含GRP78慢病毒颗粒的上清液,保存备用。另取对数生长期人乳腺癌细胞系HS578T及MDA-MB-231,置于含GRP78慢病毒颗粒上清液的培养基中培养,培养48 h时在培养基中加入1∶500稀释嘌呤霉素,筛选GRP78过表达的HS578T、MDA-MB-231细胞系。加入嘌呤霉素培养48 h采用Western Blotting法检测HS578T、MDA-MB-231细胞GRP78。采用激光共聚焦显微镜对HS578T、MDA-MB-231细胞中GRP78蛋白进行定位。结果构建表达GRP78的慢病毒载体pCDH-CMV-GRP78-HA-EF1-Puro质粒。GRP78过表达的HS578T、MDA-MB-231细胞系在78 kD左右可见明显GPR78蛋白电泳条带。HS578T细胞系中存在GRP78蛋白表达,主要分布在细胞质中。结论成功构建GRP78过表达的MDA-MB-231、HS578T细胞系,GRP78主要表达于细胞质中。
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