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中华微生物学和免疫学杂志 2023年第2期43卷 93-101页

作者：贾如斯辰力李明洋杨佳吴芯蕾朱珊丽温州医科大学第一临床医学院(信息与工程学院) 温州325035 武汉大学医学部基础医学院武汉430062 温州医科大学基础医学院微生物学和免疫学教研室温州325035 温州医科大学第二临床医学院温州325035

目的分析人正常宫颈上皮细胞(HcerEpic)感染沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)前后基因表达谱差异。方法HcerEpic细胞经DEAE-D预处理后加入E型Ct标准株,培养44 h后收集HcerEpic细胞(感染组),并以未感染Ct的HcerEpic细胞作为对照组,... 详细信息

目的分析人正常宫颈上皮细胞(HcerEpic)感染沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)前后基因表达谱差异。方法HcerEpic细胞经DEAE-D预处理后加入E型Ct标准株,培养44 h后收集HcerEpic细胞(感染组),并以未感染Ct的HcerEpic细胞作为对照组,提取两组总RNA后反转录并构建cDNA文库。通过高通量测序分析两组基因表达谱差异,并选择代表性基因通过实时荧光定量PCR(qPCR)验证。结果共检测23997个基因,差异基因125个,其中上调基因119个,下调基因6个;GO分析显示差异基因富集于对病毒防御反应、Ⅰ型干扰素(interferon,IFN)信号通路、对Ⅰ型IFN的细胞反应等条目;KEGG富集通路为甲型流感、单纯疱疹病毒感染、EB病毒感染、HPV感染、NOD样受体通路等相关通路。结论人正常宫颈上皮细胞感染Ct前后转录组存在差异,差异基因主要富集于IFN通路,与细胞抗病毒过程密切相关。qPCR验证了ISG15、IFIT2、OASL、UBE2L6等差异显著且与IFN通路密切相关的基因。

关键词：沙眼衣原体宫颈上皮细胞转录组差异表达基因

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人MR1/IgG1Fc二聚体融合蛋白的构建、表达及功能检测

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华中科技大学学报（医学版） 2023年第5期52卷 649-655页

作者：赵桂华龚业莉翁秀芳江汉大学医学部免疫学教研室武汉430056 华中科技大学同济医学院基础医学院免疫学系武汉430030

目的构建MR1/IgG1Fc融合蛋白杆状病毒表达载体并使其在昆虫细胞内表达获得MR1/IgG1Fc二聚体,制备人工抗原提呈细胞用于黏膜相关恒定T细胞(MAIT)反应性代谢物及MAIT细胞功能调控研究。方法从人外周血单个核细胞中扩增β2m编码基因。商业... 详细信息

目的构建MR1/IgG1Fc融合蛋白杆状病毒表达载体并使其在昆虫细胞内表达获得MR1/IgG1Fc二聚体,制备人工抗原提呈细胞用于黏膜相关恒定T细胞(MAIT)反应性代谢物及MAIT细胞功能调控研究。方法从人外周血单个核细胞中扩增β2m编码基因。商业化合成MR1胞外段和IgG1Fc融合基因的全序列基因MR1/IgG1Fc,与β2m基因重组构建pFastBac^(TM)Dual+[β2m+MR1/IgG1Fc]表达载体;利用Bac-to-Bac昆虫表达系统表达MR1/IgG1Fc二聚体融合蛋白,并通过双抗体夹心ELISA、Western blot及流式细胞术进行检测。建立MR1/IgG1Fc二聚体加载的人工抗原提呈细胞(artificial antigen presenting cells,aAPCs),即MR1aAPCs,提呈大肠埃希菌(DH5α)来源的代谢物,与人外周血单个核细胞共培养,检测MAIT细胞的活化和增殖水平。结果经PCR及测序鉴定证实pFastBac^(TM)Dual+[β2m+MR1/IgG1Fc]载体中MR1/IgG1Fc与β2m具有正确序列。ELISA、Western blot及流式细胞术检测结果表明MR1/IgG1Fc二聚体在重组杆粒感染的Sf9细胞培养上清富集,具有正确构象。加载DH5α来源代谢物的MR1aAPCs能够促进MAIT细胞活化和增殖。结论成功构建pFastBac^(TM)Dual+[β2m+MR1/IgG1Fc]重组质粒,并在Sf9细胞中表达MR1/IgG1Fc二聚体,制备获得MR1aAPCs,为研究MAIT细胞反应性代谢物及MAIT细胞功能提供了新的工具。

关键词：黏膜相关恒定T细胞 MR1/IgG1Fc二聚体人工抗原提呈细胞反应性代谢物

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医学免疫学跨学科融合创新创业教育实践探究

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基础医学教育 2025年第3期27卷 196-201页

作者：梅建军张东升程海彧包头医学院基础医学与法医学院免疫学教研室包头医学院招生就业处

医学免疫学跨学科融合创新创业教育是以学科交叉、融合创新为基准，将理论教学与创新创业实践相融合，构建了包含创新创业基础通识课、跨学科融合兴趣课、多主体共育进阶课、创新创业项目校企对接孵化平台的“三课一平台”创新创业教育... 详细信息

医学免疫学跨学科融合创新创业教育是以学科交叉、融合创新为基准，将理论教学与创新创业实践相融合，构建了包含创新创业基础通识课、跨学科融合兴趣课、多主体共育进阶课、创新创业项目校企对接孵化平台的“三课一平台”创新创业教育模式。通过开展创新创业课程，参加创新创业项目、创新创业竞赛、创新创业社团，学生系统掌握了创新创业知识和技能，培养了学生的创新意识、创业精神，提升了学生的创新创业能力，锻炼了教学团队的教学能力，推动了学科建设深入发展。研究成果对于创新型医学人才培养和新时代医学教育融合创新发展具有重要的应用价值。

关键词：医学免疫学教学改革跨学科融合创新创业教育科创融合

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白纹伊蚊唾液ralb34k2-1对DENV2在不同细胞中复制的影响

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中国病原生物学杂志 2023年第6期18卷 683-688,694页

作者：李莹黄贞植覃燕春朱亚妮吴家红商正玲贵州医科大学基础医学院免疫学教研室贵州贵阳550025 联勤保障部队第九四○医院检验科贵州医科大学基础医学院寄生虫学教研室

目的探讨白纹伊蚊ralb34k2-1对DENV2在不同宿主细胞中复制的影响。方法采用Dot-ELISA和间接ELISA检测ralb34k2-1与DENV2/DENV-EDⅢ的结合特性。采用qRT-PCR检测不同剂量ralb34k2-1对蚊细胞C6/36、Aa23T,哺乳动物细胞BHK-21、RAW264.7、HacaT、THP-1中DENV2-E基因表达的影响;检测C6/36细胞中抗菌肽DEFE、DPT以及RAW264.7、THP-1细胞中抗病毒因子IFN-β、ISG15、ISG56基因表达的影响。结果Dot-ELISA和间接ELISA检测显示ralb34k2-1能与DENV2、DENV-EDⅢ结合,其中与DENV-EDⅢ结合的A值最高,为0.9177±0.04422。ralb34k2-1预孵育可促进DENV2在C6/36、Aa23T细胞中的复制(2^(-ΔΔCT)值最高为2.0419±0.1027)。5μg ralb34k2-1对C6/36中DEFE的抑制率可达73%(P<0.05)。ralb34k2-1能促进HacaT、THP-1细胞中DENV2的复制,瞬时混合组DENV-E2^(-ΔΔCT)值最高,为2.8024±0.3091,高于预孵育组的2.1325±0.06746,但对鼠源细胞BHK21、RAW264.7中DENV-E基因的表达无显著影响(均P>0.05)。抗病毒因子检测显示,ralb34k2-1单独作用能诱导RAW264.7、THP-1中IFN-β、ISG15、ISG56的表达,其中5μgralb34k2-1作用于RAW264.7细胞后ISG56RNA相对表达(2^(-ΔΔCT))值为377.9795±12.5457,THP-1细胞ISG56RNA的相对表达(2^(-ΔΔCT))值为9.5703±1.0332。结论ralb34k2-1可与DENV2、DENV-EDⅢ结合,推测该蛋白可能通过抑制蚊细胞中抗菌肽的表达协助蚊源细胞中DENV2的复制,而在人源细胞中ralb34k2-1协助DENV2复制的机制与蚊源细胞不同,可为伊蚊雌蚊唾液中34k2蛋白参与DENV2在蚊-人细胞中循环的研究提供实验线索。

关键词：白纹伊蚊重组34k2蛋白 DENV2 蚊源细胞鼠源细胞系人源细胞

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《医学免疫学·抗原》章节的教学难点分析和突破方法

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细胞与分子免疫学杂志 2023年第6期39卷 571-574页

作者：唐康王微张瑞张宇丝张春梅庄然张赟陈丽华马樱空军军医大学基础医学院免疫学教研室陕西西安710032

抗原概念是相对概念,其中狭义的抗原概念高度凝练了适应性免疫应答激活及再次识别相同抗原的过程,揭示了疫苗的保护作用机制,对于指导疫苗研发具有重要意义。但狭义的抗原概念涉及适应性免疫系统成员B细胞、T细胞及其效应产物,初学者难... 详细信息

抗原概念是相对概念,其中狭义的抗原概念高度凝练了适应性免疫应答激活及再次识别相同抗原的过程,揭示了疫苗的保护作用机制,对于指导疫苗研发具有重要意义。但狭义的抗原概念涉及适应性免疫系统成员B细胞、T细胞及其效应产物,初学者难理解其内在含义;且抗原分类是免疫应答过程的高度总结,多种分类方式加大了本章节的学习难度。本教学团队针对抗原章节中存在的教学难点深入剖析,实施了以抗体结构和功能为突破点、简化的适应性免疫应答过程为教学逻辑核心的策略,形成了贯穿抗原章节主要内容的思维导图,有效地提高了课堂教学效果。

关键词：抗原相对概念免疫应答抗原分类思维导图

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体外培养的人胸腺组织移植到裸鼠不同部位后的免疫重建效果分析

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免疫学杂志 2024年第2期40卷 113-121页

作者：关万青罗贵华撖菁萱糜建红冯泽清吴玉章南方医科大学基础医学院免疫学教研室广州510000 重庆国际免疫研究院 401338 陆军军医大学基础医学院免疫学教研室重庆400038 重庆理工大学药学与生物工程学院 400054

目的通过分析人胸腺组织切片移植到裸鼠肾包膜,皮下和股四头肌后的免疫重建效果,探究胸腺组织异位移植的最佳位置。方法收集先天性心脏病患者手术废弃的胸腺组织,制作成0.5~1 mm厚的组织切片,体外培养以清除免疫细胞。利用H&E染色... 详细信息

目的通过分析人胸腺组织切片移植到裸鼠肾包膜,皮下和股四头肌后的免疫重建效果,探究胸腺组织异位移植的最佳位置。方法收集先天性心脏病患者手术废弃的胸腺组织,制作成0.5~1 mm厚的组织切片,体外培养以清除免疫细胞。利用H&E染色、免疫组织化学染色和定量PCR等方法评估组织切片中残余的组织结构、细胞类型和功能。最后将胸腺组织切片分别移植入裸鼠的肾包膜、皮下和股四头肌3个部位,并通过流式细胞术和组织学检测等手段比较3个部位移植后的免疫重建效果。结果体外培养14 d的胸腺组织切片中T淋巴细胞的清除率达90%以上,上皮细胞网状结构保存完整,残存大量的巨噬细胞、树突状细胞、内皮细胞。定量PCR结果显示,体外培养能有效维持胸腺组织切片中上皮细胞标志物及其分泌细胞因子的基因表达量。流式细胞术显示移植后16周,不同移植组小鼠外周血中T细胞的比例均显著增加,其中股四头肌移植组小鼠的T细胞比例最高。原位组织学检测显示,移植物在3个部位均能检出胸腺组织再生。但是肾包膜组移植物检出率为40%,皮下组移植物检出率为60%,股四头肌组移植物检出率为100%。结论体外培养14 d的胸腺组织切片保留了完整的胸腺基质微环境,移植人的胸腺组织切片后可有效重建裸鼠的T细胞比例,且股四头肌部位移植的效果优于肾包膜和皮下部位。

关键词：人胸腺组织切片胸腺移植免疫重建

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间充质干细胞来源的外泌体:肿瘤治疗的双刃剑

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中国肿瘤生物治疗杂志 2022年第10期29卷 937-943页

作者：孙宇恒(综述) 黄静怡虞淦军(审阅) 海军军医大学基础医学院上海200433 海军军医大学基础医学院免疫学教研室上海200433

间充质干细胞来源的外泌体(MSC-Exo)是由MSC分泌的一类膜泡状物质,与其他细胞来源的Exo相比,MSC-Exo在成分和功能上有其独特性。MSC-Exo对肿瘤的作用十分复杂且具有双向性,包括肿瘤生长、转移和侵袭、血管生成和耐药等多个方面,既可促... 详细信息

间充质干细胞来源的外泌体(MSC-Exo)是由MSC分泌的一类膜泡状物质,与其他细胞来源的Exo相比,MSC-Exo在成分和功能上有其独特性。MSC-Exo对肿瘤的作用十分复杂且具有双向性,包括肿瘤生长、转移和侵袭、血管生成和耐药等多个方面,既可促进肿瘤的生长与转移,也可抑制肿瘤的发生和发展。因此,基于MSC-Exo对肿瘤的影响及其机制,设计相关的肿瘤治疗策略和方案已经成为新的研究方向。本文综述了MSC-Exo的成分与特征、对肿瘤的促进或抑制作用及其机制、作为通讯介质或药物载体或类细胞治疗在肿瘤治疗中的应用,以及在临床应用中面临的规模化制备难、质量控制难等挑战。

关键词：间充质干细胞(MSC) 外泌体(Exo) 作用机制肿瘤治疗

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结肠癌皮下荷瘤小鼠体内NK细胞表型检测和分析

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空军军医大学学报 2025年

作者：陈子嫣郭紫婵陈丽华空军军医大学基础医学院免疫学教研室

目的系统性检测并分析结肠癌皮下荷瘤小鼠体内的自然杀伤（NK）细胞的表型特征和功能变化，同时探究NK细胞表面CD226和TIGIT表达水平的相关性。方法将10只C57BL/6小鼠随机分为结肠癌皮下荷瘤组（MC38组）和对照组（WT组），皮下分别注... 详细信息

目的系统性检测并分析结肠癌皮下荷瘤小鼠体内的自然杀伤（NK）细胞的表型特征和功能变化，同时探究NK细胞表面CD226和TIGIT表达水平的相关性。方法将10只C57BL/6小鼠随机分为结肠癌皮下荷瘤组（MC38组）和对照组（WT组），皮下分别注射MC38细胞和无菌磷酸盐缓冲液。造模后应用流式细胞术检测外周血、脾脏、肺脏和肝脏中总NK细胞比例、NK细胞各亚群比例和细胞毒分子（穿孔素、颗粒酶B、TNF-α）的表达水平，同时在检测CD226和TIGIT表达水平的基础上进一步分析其相关性。结果与WT组相比，MC38组体内外周血、脾脏、肺脏和肝脏中NK细胞比例显著降低（P＜0.05），杀伤型NK细胞所占比例减少（P＜0.01），且细胞毒分子（穿孔素、颗粒酶B、TNF-α）表达水平下降（P＜0.05）；MC38组体内NK细胞表面CD226表达减少（P＜0.01），TIGIT表达增加（P＜0.01），二者表达呈负相关（P＜0.05）。结论结肠癌皮下荷瘤小鼠体内NK细胞表型和功能发生改变。

关键词：结直肠肿瘤自然杀伤细胞小鼠表型免疫细胞毒性流式细胞术 CD226抗原免疫受体

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结核分枝杆菌ESX-5分泌系统的研究进展

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医学研究与战创伤救治 2023年第11期36卷 1207-1211页

作者：余海燕(综述) 杨国平(审校) 大理大学基础医学院医学微生物学及免疫学教研室大理671000

ESX-5分泌系统是结核分枝杆菌(Mtb)的ESX分泌系统中最晚进化形成的,仅存于生长缓慢的致病性分枝杆菌中,是Mtb营养吸收和维持膜渗透性所需的基本分泌系统,也是Mtb与宿主相互作用的重要调节剂,并参与PE/PPE家族蛋白的运输与分泌、对维持Mt... 详细信息

ESX-5分泌系统是结核分枝杆菌(Mtb)的ESX分泌系统中最晚进化形成的,仅存于生长缓慢的致病性分枝杆菌中,是Mtb营养吸收和维持膜渗透性所需的基本分泌系统,也是Mtb与宿主相互作用的重要调节剂,并参与PE/PPE家族蛋白的运输与分泌、对维持Mtb细胞壁的完整性和毒力的发挥具有重要作用。文章对Mtb ESX-5分泌系统的组成与结构、分泌机制及作用进行综述,以期为进一步解析Mtb的ESX-5分泌系统,研发抗结核疫苗提供新的思路。

关键词：结核分枝杆菌 ESX-5分泌系统 ESX分泌系统

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IL-33通过激活NF-κB信号通路上调eIF3a的表达介导小鼠肺肌纤维母细胞增殖分化促进肺纤维化

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细胞与分子免疫学杂志 2023年第8期39卷 693-700页

作者：高云星付裕陈晓李泽朋何晓伟李先伟皖南医学院基础医学院医学微生物学与免疫学教研室安徽芜湖241002 皖南医学院临床医学院临床医学系安徽芜湖241002 皖南医学院药学院药理学教研室安徽芜湖241002

目的探讨白细胞介素33(IL-33)介导的肺肌纤维母细胞(MFb)增殖分化在肺纤维化(PF)中的作用及机制。方法C57BL/6小鼠随机分为对照组、博莱霉素(BLM)组、 BLM联合IL-33组和BLM联合抗IL-33抗体组,每组各12只。气管内注射BLM(5000U/kg)建立... 详细信息

目的探讨白细胞介素33(IL-33)介导的肺肌纤维母细胞(MFb)增殖分化在肺纤维化(PF)中的作用及机制。方法C57BL/6小鼠随机分为对照组、博莱霉素(BLM)组、 BLM联合IL-33组和BLM联合抗IL-33抗体组,每组各12只。气管内注射BLM(5000U/kg)建立肺纤维化小鼠模型。HE和Masson染色观察肺组织病理变化及胶原纤维沉积情况。ELISA检测血浆IL-33的水平。免疫组织化学染色法检测肺组织α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。分离培养小鼠原代成纤维细胞,分为对照组、 IL-33组、 IL-33联合二甲基亚砜(DMSO)组及IL-33联合吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)组。细胞先用PDTC或DMSO预处理1 h,再用IL-33处理48 h。5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)染色检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,Transwell^(TM)实验观察细胞迁移能力。实时定量PCR检测Ⅰ型胶原蛋白(Col1)、 Col3和α-SMA mRNA的表达。Western blot法检测IL-33、 Col1、 Col3、 α-SMA、磷酸化核因子κB抑制物α(p-IκBα)、磷酸化核因子κB p65(p-NF-κB p65)、真核翻译起始因子3a(eIF3a)及核内NF-κB p65的蛋白水平。结果与对照组相比,BLM组IL-33、 p-IκBα、 p-NF-κB p65、 eIF3a的表达及核内NF-κB p65蛋白水平显著升高,同时α-SMA、 Col1和Col3的表达明显上调。与BLM组相比,IL-33组p-IκBα、 p-NF-κB p65和eIF3a的表达及NF-κB p65核转移水平进一步增加,肺组织α-SMA、 Col1和Col3的表达进一步上调;而抗IL-33抗体的作用正好和IL-33的作用相反。体外实验表明IL-33能够明显提高成纤维细胞增殖和迁移的能力、显著上调IκBα、 NF-κB p65磷酸化水平和NF-κB p65核转移水平及eIF3a的表达,明显促进α-SMA、 Col1和Col3的表达。而IL-33的这些作用能够被PDTC所逆转。结论 IL-33可能通过激活NF-κB信号通路而上调eIF3a的表达,进而诱导肺MFb增殖分化而促进PF的发生发展。

关键词：白细胞介素33(IL-33) 核因子κB(NF-κB) 真核翻译起始因子3a(eIF3a) 肌纤维母细胞肺纤维化

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