目的基于网络药理学筛选丹参-红花药对配伍抗缺血性脑卒中的成分靶点、作用靶点,并对大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)大鼠模型进行相关作用靶点的实验验证。方法①通过系统药理学平台(Traditional Chinese Medic...
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目的基于网络药理学筛选丹参-红花药对配伍抗缺血性脑卒中的成分靶点、作用靶点,并对大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)大鼠模型进行相关作用靶点的实验验证。方法①通过系统药理学平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology,TCMSP)、基因名片(GeneCards)数据库筛选丹参-红花的有效成分、成分靶点及缺血性脑卒中的相关靶点;运用STRING数据库构建蛋白互作网络图(protein protein interaction network,PPI),并利用生物信息分析软件(Cytoscape3.8.0)构建成分靶点互作网络;利用David在线分析工具对目标基因进行基因本体论(gene ontology,GO)富集分析和基因的京都百科全书和基因组(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路分析。②采用改良MCAO法制备缺血性脑卒中大鼠模型,采用免疫组化法、实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组大鼠脑组织中NLR家族Pyrin域蛋白3(NLRP3)炎症小体和核转录因子-B(NF-kB)p65(NFkBp65)蛋白的阳性表达,探讨丹红配伍抗脑缺血损伤炎症反应的作用机制。结果①丹参-红花药对中筛选出87个有效成分,253个靶点,缺血性脑卒中疾病靶点1448个,药物与疾病相关靶点161个,通过GO分析得出730个生物学过程(biological process,BP),81个细胞组分(cellular component,CC),128个分子功能(molecular function,MF),通过KEGG分析得出127条信号通路。②免疫组化法和Real-time PCR测定结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠脑组织中NLRP3炎症小体和NFkBp65蛋白表达明显增加(P<0.01),与模型组比较,丹红配伍组和尼莫地平组NLRP3炎症小体和NFkBp65蛋白表达明显降低(P<0.01)。结论丹红有效组分配伍能够通过NF-κB信号通路下调NLRP3炎症小体的释放,阻断炎症损伤环节,最终达到抗炎损伤的作用。
目的:探究中药活性单体白藜芦醇对β-淀粉样蛋白(amyloid-beta,Aβ)诱导PC12细胞损伤的保护作用及对相关蛋白表达调控的影响。方法:用不同浓度(1,5和10μmol·L;)白藜芦醇处理Aβ;诱导的PC12细胞,应用MTT法检测PC12细胞增殖情况,ELISA法检测PC12细胞内Aβ;含量变化,qPCR法检测晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)和低密度脂蛋白受体相关蛋白1 (low-density lipoprotein receptor-related protein 1,LRP1)在基因水平的变化,应用Western Blot法检测RAGE和LRP1在蛋白水平的变化。结果:白藜芦醇对PC12细胞增殖的IC;值是11.2μmol·L;。白藜芦醇能够改善Aβ;诱导的细胞增殖活力下降,同时白藜芦醇能够降低Aβ;在PC12细胞内Aβ累积量。不同浓度的白藜芦醇能够在基因水平增加LRP1的表达,而白藜芦醇在10μmol·L;时降低RAGE表达。此外,不同浓度的白藜芦醇能够在蛋白水平增加LRP1表达而降低RAGE在蛋白水平的表达。结论:白藜芦醇降低Aβ;累积改善Aβ;诱导的神经细胞毒性机制可能与调控LRP1和RAGE有关。
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