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第十一届全国中医药博士生学术论坛

作者：项璇儿许颖龄汪雯孙海榉王思思邵芳冰杜俊英房军帆方剑乔浙江中医药大学第三临床医学院针灸神经生物学实验室浙江省针灸神经病学研究重点实验室杭州 310053

目的：比较不同电针频率对神经病理痛维持期的镇痛效应,并探讨其脊髓背角(SCDH)中瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)、P2X3干预机制.方法：大鼠完全随机分为坐骨神经分支选择性损伤(SNI)模型组、假模型组、2Hz电针组、100Hz电针组和2/100H... 详细信息

目的：比较不同电针频率对神经病理痛维持期的镇痛效应,并探讨其脊髓背角(SCDH)中瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)、P2X3干预机制.方法：大鼠完全随机分为坐骨神经分支选择性损伤(SNI)模型组、假模型组、2Hz电针组、100Hz电针组和2/100Hz电针组.除假模型组外,其余各组进行SNI手术建立神经病理痛模型.取双侧足三里、昆仑进行电针干预.采用Von Frey丝检测各组大鼠各时间点的患侧足底机械缩足阈(PWTs);采用免疫印迹法测量SNI维持期(造模后7d)大鼠患侧LA-L6SCDH TRPV1、p-TRPV1、P2X3的表达.结果：与SNI模型组比较,各电针组均能升高SNI大鼠患侧PWTs(P＜0.05),其中,治疗1d后2Hz电针的提升效果最显著;与假模型组比较,SNI维持期大鼠L4-L6 SCDH TRPV1、p-TRPVl、P2X3蛋白表达显著升高(P＜0.05),而各电针组均能有效降低上述蛋白的过表达(P＜0.05),其中,2Hz电针对SNI维持期大鼠SCDH p-TRPVl蛋白过表达的下调作用最为显著(P＜0.05).结论：2Hz、100Hz和2/100Hz电针均能有效缓解SNI维持期大鼠的神经病理痛,该镇痛效应可能与其有效抑制SCDHTRPV1、p-TRPV1和P2X3蛋白表达有关;2Hz对SNI维持期大鼠的优势镇痛效应可能与其强效抑制SCDH p-TRPV1的过表达有关.

关键词：神经病理痛电针镇痛优势频率脊髓背角瞬时受体电位香草酸亚型1 p-TRPV1 P2X3

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大鼠慢性缺血性肢体疼痛模型的探索性构建

大鼠慢性缺血性肢体疼痛模型的探索性构建

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浙江省针灸学会2020学术年会

作者：周游吴茗慧汪雯杜俊英邵晓梅蒋永亮刘伯一梁宜方剑乔浙江中医药大学第三临床医学院针灸神经生物学实验室浙江省针灸神经病学重点实验室浙江杭州310053 浙江中医药大学第三临床医学院针灸神经生物学实验室浙江省针灸神经病学重点实验室浙江杭州310053 浙江中医药大学附属第三医院针灸科浙江杭州310053

目的通过测定大鼠机械痛阈(paw withdrawal thresholds,PWTs)、足跖肿胀程度(paw thickness)、足跖部皮温(local temperature)以及足跖部局部血流(Microcirculation)情况,探索一种简便、可靠的大鼠慢性缺血性肢体疼痛模型的构建方法.方... 详细信息

目的通过测定大鼠机械痛阈(paw withdrawal thresholds,PWTs)、足跖肿胀程度(paw thickness)、足跖部皮温(local temperature)以及足跖部局部血流(Microcirculation)情况,探索一种简便、可靠的大鼠慢性缺血性肢体疼痛模型的构建方法.方法将16只SD大鼠完全随机分为假模型组(sham CILP组,n=8)和慢性缺血性肢体疼痛模型组(CILP组,n=8).慢性缺血性肢体疼痛模型组采用0型圈下肢近膝关节处小压力值缓慢加压,加压强度为1.2N-2.2N,加压每日一次,一次加压30-40min,连续三周造模.检测两组大鼠对患侧于造模前,加压后6d、13d、20d的PWTs以及足跖部肿胀程度、皮温和局部血流情况.结果造模20d完成加压后,CILP组大鼠患对侧PWTs均显著低于同期sham CILP组(P＜0.01);CILP组大鼠患侧足跖部厚度均显著高于同期sham CILP组和同期对侧(P＜0.01);CILP大鼠患侧足跖皮温加压后显著低于同期sham CILP组(P＜0.01);CILP大鼠对患侧足跖平均血流量均显著低于同期sham CILP组(P＜0.01).结论在大鼠下肢处通过长时间缓慢加压,能够有效造成慢性缺血性肢体疼痛的情况,从而建立大鼠慢性缺血性疼痛模型.

关键词：慢性缺血性疼痛压力值动物模型

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CXCL12/CXCR4信号通路参与慢性痛机制的研究进展

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中国疼痛医学杂志 2019年第9期25卷 690-694页

作者：李园园胡奇妙台燕郑小莉尹诚语刘伯一方剑乔浙江中医药大学第三临床医学院针灸神经生物学实验室浙江省针灸神经病理学重点实验室杭州310053 浙江中医药大学中医药科学院电镜研究室杭州310053

CXC趋化因子配体12(chemokine C-X-C motif ligand 12,CXCL12)是一种能诱导细胞向损伤部位定向运动的小分子蛋白质。趋化因子CXCL12通过作用于其特异性受体趋化因子CXC基序受体4(chemokine C-X-C motif receptor 4,CXCR4),参与炎症反应... 详细信息

CXC趋化因子配体12(chemokine C-X-C motif ligand 12,CXCL12)是一种能诱导细胞向损伤部位定向运动的小分子蛋白质。趋化因子CXCL12通过作用于其特异性受体趋化因子CXC基序受体4(chemokine C-X-C motif receptor 4,CXCR4),参与炎症反应、肿瘤形成、免疫等疾病的发生。近年来越来越多的研究表明CXCL12/CXCR4信号通路在慢性痛发生机制方面起重要作用。因此本文拟就当前国内外有关CXCL12/CXCR4信号通路参与炎症痛、神经病理性疼痛、癌痛、阿片类药物诱导痛觉过敏等慢性痛发生机制方面的最新研究进展进行综述。

关键词：慢性痛 CXCL12 CXCR4

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电针对CFA大鼠感觉及情绪的二维调节及前扣带皮层-初级体感皮层p-ERK表达的影响

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世界中医药 2019年第6期14卷 1354-1362页

作者：吴泽民王佳玲徐立雷孙晶沈醉朱怡霖张海艳姚淑静邵晓梅方剑乔浙江中医药大学第三临床医学院针灸神经生物学实验室浙江省针灸神经病学重点实验室

目的:观察电针对慢性炎性痛大鼠痛感觉及其所诱发情绪的干预效应及对前扣带皮层(Anterior Cingulate Cortex,ACC)和初级体感皮层后肢区域(Primary Somatosensory Cortex,Hindlimb Region,S1HL)磷酸化细胞外调节蛋白激酶(Phosphorylated Extracellular Regulated Protein Kinases,p-ERK)表达的影响。方法:建立完全弗氏佐剂(Complete Freund′s Adjuvant,CFA)诱导的慢性炎性痛大鼠模型。痛感觉部分:将38只成年雄性SD大鼠随机分为空白组( n =11)、模型组( n =13)、电针组( n =14),在造模前1 d、模后3 d、6 d、9 d检测大鼠患足机械缩足阈(PWTs)的变化;痛情绪部分:将62只成年雄性SD大鼠,随机分为空白组( n =21)、模型组( n =21)、电针组( n =20)进行条件性位置厌恶实验(Conditioned Place Aversion,CPA)。通过自由跑动(15 min),剔除不符合条件的大鼠,造模前1 d进行条件化前训练(45 min),模后2 h和第2天进行条件化训练(45 min),模后第3天、9天进行检测(15 min)。两部分电针组大鼠均在造模后3 d^9 d进行电针干预,选取双侧“后三里”穴,刺激参数:2/100 Hz疏密波,初始电流强度1 mA,后每10 min增加0.5 mA,共30 min,1次/d,造模后第10天取材,采用免疫荧光法(IF)和免疫印迹法(WB)检测大鼠ACC、S1HL的p-ERK的表达情况。结果:PWTs结果显示,造模后第3天、第6天、第9天,模型组与电针组大鼠PWTs较空白组显著降低( P <0.01),第9天电针组PWTs较模型组显著升高( P <0.01)。CPA检测结果显示,造模后第3天,模型组和电针组CPA score值(大鼠在条件箱停留时间差,Pre-post)较空白组显著升高( P <0.01),造模后第9天,模型组CPA score值较空白组显著升高( P <0.01),电针组CPA score值较模型组显著降低( P <0.01)。与造模后第3比较,造模后第9天模型组CPA score值显著增加( P <0.01),电针组显著降低( P <0.05)。IF检测结果显示,在左侧S1HL,模型组p-ERK免疫阳性细胞的表达较空白组和电针组有上升趋势,在右侧S1HL和双侧ACC,模型组p-ERK免疫阳性细胞的表达较空白组和电针组均显著升高( P <0.01)。WB结果显示,在双侧S1HL,模型组p-ERK1/2蛋白表达与空白组比较,差异无统计学意义。在左侧S1HL,电针组p-ERK1/2蛋白水平与模型组比较明显降低( P <0.05),在右侧S1HL,电针组p-ERK2蛋白水平与模型组比较明显降低( P <0.05),在双侧ACC区,模型组p-ERK1/2蛋白水平较空白组有上升趋势,电针组p-ERK1/2蛋白水平较模型组有下降趋势。结论:电针可提高CFA模型大鼠机械痛阈并缓解CFA大鼠厌恶情绪;该效应可能与其下调右侧S1HL中p-ERK表达水平和下调双侧ACC的p-ERK表达水平有关。

关键词：电针慢性炎性痛磷酸化细胞外调节蛋白激酶前扣带皮层体感皮层痛感觉痛情绪大鼠

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痛记忆模型大鼠ACC脑区蛋白质组学研究及电针干预

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世界中医药 2019年第6期14卷 1339-1348页

作者：徐立雷孙晶李菲何俏颖何晓芬沈醉刘伯宇方剑乔邵晓梅浙江中医药大学第三临床医学院针灸神经生物学实验室浙江省针灸神经病学重点实验室

目的:采用蛋白质组学方法筛选痛记忆模型大鼠ACC脑区差异蛋白,并进一步筛选与电针干预痛记忆可能相关的差异蛋白,为电针干预痛记忆的深入研究提供理论支持。方法:将18只健康雄性SD大鼠随机分为空白组(生理盐水对照组)、模型组和电针组,... 详细信息

目的:采用蛋白质组学方法筛选痛记忆模型大鼠ACC脑区差异蛋白,并进一步筛选与电针干预痛记忆可能相关的差异蛋白,为电针干预痛记忆的深入研究提供理论支持。方法:将18只健康雄性SD大鼠随机分为空白组(生理盐水对照组)、模型组和电针组,每组6只。模型组及电针组大鼠通过二次角叉菜胶足跖注射建立痛记忆模型。对照组注射同等剂量的生理盐水。电针组于首次注射后5h、1~5d进行电针治疗。模型组与空白组仅作与电针组相同的束缚处理。分别检测3组大鼠造模前,首次注射后4h、5d和二次注射后4h、72h的机械痛阈。二次注射后第3天,大鼠处死后取ACC脑组织。以双向凝胶电泳分离,双向电泳后经不同波长光激发扫描得到不同样品的蛋白质组图谱,经ImageMaster2D6.0软件进行分析后,筛选相差在1.5倍以上的蛋白作为差异表达的蛋白质,并进行质谱鉴定。结果:1)与空白组比较,模型组二次未注射角叉菜胶足跖痛阈显著下降(P<0.05);与模型组比较,电针组二次未注射角叉菜胶足跖痛阈显著上升(P<0.05)。2)经蛋白质组学分析共筛选出18个差异蛋白质。其中模型组有明显差异者有11个,4个表达呈现下调,分别为微管蛋白α-1A链、DAB2相互作用蛋白、NADH脱氢酶的辅酶黄素蛋白2、转凝蛋白-3;7个表达呈现上调,分别为微管蛋白β-3链、肌动蛋白1、磷酸甘油酸激酶1、类固醇激素合成急性蛋白、肌动蛋白2、细胞色素c氧化酶6A1亚基、泛素40S核糖体蛋白S27a。与空白组比较,电针组有明显差异者有15个,3个表达呈现下调,分别为微管蛋白α-1C链、RhoGDP解离抑制因子、NADH脱氢酶的辅酶黄素蛋白2;12个表达呈现上调,分别为微管蛋白β-2A链、微管蛋白β-3链、肌动蛋白1、乌头酸水合酶、丙酮酸激酶同工酶、异柠檬酸脱氢酶、磷酸甘油酸激酶1、Ras相关Rab-19蛋白、类固醇激素合成急性蛋白、肌动蛋白2、细胞色素c氧化酶6A1亚基、泛素40S核糖体蛋白S27a。电针组与模型组比较后呈现明显差异的有8个差异蛋白,2个呈现下调,分别是RhoGDP解离抑制因子、肌动蛋白2。6个呈现上调,分别是微管蛋白α-1A链、微管蛋白β-2A链、DAB2相互作用蛋白、乌头酸水合酶、异柠檬酸脱氢酶、Ras相关Rab-19蛋白。结论:经蛋白质组学分析发现,有11个差异蛋白参与痛记忆的唤醒过程;有8个差异蛋白参与电针干预痛记忆的过程。提示电针对痛记忆的干预可能与稳定神经细胞骨架蛋白,进而抑制神经突触可塑性改变有关。

关键词：电针痛记忆前扣带皮层蛋白质组学差异蛋白角叉菜胶全景式大鼠

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慢性炎性痛电针镇痛频率优选及其DRG TRPV1活化机制研究

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世界中医药 2019年第6期14卷 1349-1353,1362页

作者：项璇儿邵芳冰许颖龄杜俊英房军帆方剑乔浙江中医药大学第三临床医学院针灸神经生物学实验室浙江省针灸神经病学研究重点实验室

目的:筛选电针干预慢性炎性痛的优势频率,观察不同频率电针对慢性炎性痛大鼠DRG p-TRPV1的干预情况,探讨优势频率电针的DRG p-TRPV1活化干预机制。方法:所有实验大鼠完全随机分为空白组、模型组、2 Hz电针组、100 Hz电针组和2/100 Hz电... 详细信息

目的:筛选电针干预慢性炎性痛的优势频率,观察不同频率电针对慢性炎性痛大鼠DRG p-TRPV1的干预情况,探讨优势频率电针的DRG p-TRPV1活化干预机制。方法:所有实验大鼠完全随机分为空白组、模型组、2 Hz电针组、100 Hz电针组和2/100 Hz电针组。除空白组外,其余各组均进行CFA造模。电针组选用双侧“足三里”和“昆仑”穴,0.5 mA^1.5 mA,30 min/次。采用Von Frey Hair检测各组大鼠不同时间点患侧PWT和PWL;采用免疫印迹法检测大鼠DRG p-TRPV1的表达。结果:100 Hz电针对CFA大鼠的PWT提升最为显著( P <0.05),100 Hz、2/100 Hz电针均能有效提高CFA大鼠的PWL( P <0.05, P <0.05);CFA模型大鼠L4-6 DRG p-TRPV1蛋白表达均有上调,其中L4水平上调差异无统计学意义( P >0.05),L5、L6水平上升较为显著( P <0.05),100 Hz电针能有效抑制CFA大鼠L5 DRG p-TRPV1蛋白的过表达( P <0.05),对L4、L6 DRG p-TRPV1蛋白的过表达虽有下调趋势,但差异无统计学意义( P >0.05)。结论:100 Hz电针对慢性炎性痛的镇痛效应最佳,这可能与其能有效下调CFA大鼠L5 DRG p-TRPV1蛋白的过表达有关。

关键词：电针频率优选炎性痛镇痛 DRG TRPV1 活化

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优效电针干预不同病理痛的脊髓P2X3机制研究

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世界中医药 2019年第6期14卷 1368-1372页

作者：沈科展何淑峥孙鑫陈扬朱雨鑫杜俊英方剑乔浙江中医药大学第三临床医学院针灸神经生物学实验室浙江省针灸神经病学研究重点实验室

目的:观察优效电针干预对炎性痛和坐骨神经分支选择性损伤大鼠的镇痛作用及脊髓背角P2X3蛋白表达的影响。方法:实验分2部分:1)SD大鼠完全随机分为空白组、CFA组、100Hz组和假电针组;2)SD大鼠完全随机分为假SNI组、SNI组、2Hz组和假电针... 详细信息

目的:观察优效电针干预对炎性痛和坐骨神经分支选择性损伤大鼠的镇痛作用及脊髓背角P2X3蛋白表达的影响。方法:实验分2部分:1)SD大鼠完全随机分为空白组、CFA组、100Hz组和假电针组;2)SD大鼠完全随机分为假SNI组、SNI组、2Hz组和假电针组。通过足底皮下注射完全弗氏佐剂建立炎性痛模型;通过结扎并切断左侧腓总神经和胫神经后远端,保留腓肠神经的方法建立坐骨神经分支选择性损伤模型。于造模后1d,100Hz或2Hz电针足三里、昆仑穴,持续干预3d。采用up and down方法检测机械缩足阈,采用免疫印迹法检测患侧脊髓背角P2X3蛋白表达。结果:1)与空白对照组比较,CFA组大鼠机械缩足阈造模后各个时间点都显著下降,CFA组大鼠脊髓背角P2X3蛋白表达增多;与CFA组比较,电针干预1次、3次均能显著提升机械缩足阈,电针干预3次能降低脊髓背角P2X3的蛋白表达,假电针无干预作用。2)与假SNI组比较,SNI组大鼠机械缩足阈造模后各个时间点都显著下降,SNI组大鼠脊髓背角P2X3蛋白表达增多;与SNI组比较,电针干预1次、3次均能显著提升机械缩足阈,电针干预3次能降低脊髓背角P2X3的蛋白表达,假电针无干预作用。结论:100Hz电针可有效干预慢性炎性痛大鼠机械缩足阈,2Hz电针可有效干预神经病理痛大鼠机械缩足阈;其镇痛作用可能与下调脊髓背角P2X3蛋白表达相关。

关键词：优效电针干预炎性痛神经病理痛脊髓 P2X3 机制比较

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