检索结果-内蒙古大学图书馆

中国粮油学报 2024年第6期39卷 159-165页

作者：徐自强刘金松刘玉兰杨彩梅周琦璐史永浩吴艳萍张瑞强浙江农林大学动物科技学院·动物医学院、浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室、动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室临安311300 惠嘉绿色动物保健品重点农业企业研究院、浙江惠嘉生物科技股份有限公司安吉313300

本实验旨在研究月桂酸(lauricacid,LA)对肉鸡肌肉品质、常规营养成分和抗氧化性能的调控作用。实验选用480只1日龄AA肉仔鸡,随机分为4组,每组8个重复,每个重复15只鸡,分别饲喂基础饲粮(对照组)和基础饲粮分别添加75 mg/kg金霉素(抗生素... 详细信息

本实验旨在研究月桂酸(lauricacid,LA)对肉鸡肌肉品质、常规营养成分和抗氧化性能的调控作用。实验选用480只1日龄AA肉仔鸡,随机分为4组,每组8个重复,每个重复15只鸡,分别饲喂基础饲粮(对照组)和基础饲粮分别添加75 mg/kg金霉素(抗生素组)、500 mg/kg月桂酸(月桂酸低剂量组;LA500)、1000 mg/kg月桂酸(月桂酸高剂量组;LA1000)的实验饲粮,实验期为42 d。结果表明:与对照组相比,饲粮添加500 mg/kg月桂酸提高了肉鸡腿肌24 h的pH、黄度(b^(*))值和粗脂肪含量,增加了过氧化氢酶(CAT)的活力(P<0.05),上调了SOD2、CAT、GPX1、Nrf2、HO-1的基因表达量(P<0.05),降低了24 h和48 h的滴水损失(P<0.05),饲粮添加1000 mg/kg月桂酸提高了肉鸡腿肌24 h的pH、红度(a^(*))值、黄度(b^(*))值、粗脂肪含量(P<0.05),增加了总抗氧化能力(T-AOC)、总超氧化物歧化酶(SOD)、CAT的活力(P<0.05),上调了SOD1、SOD2、CAT、GPX1、Nrf2、HO-1的基因表达量(P<0.05),降低了24 h的亮度(L^(*))值、滴水损失、48 h的滴水损失和丙二醛(MDA)的含量(P<0.05);与抗生素组相比,添加500 mg/kg月桂酸的饲粮提高了肉鸡腿肌CAT的含量,降低了肉鸡腿肌24 h的滴水损失、MDA的含量(P<0.05),饲粮添加1000 mg/kg月桂酸提高了肉鸡腿肌CAT的含量,降低了肉鸡腿肌24、48 h的滴水损失和MDA的含量(P<0.05)。月桂酸能够改善肉鸡肌肉品质和抗氧化能力,激活Nrf2信号通路相关基因的表达,且效果优于抗生素,饲粮添加1000 mg/kg月桂酸更佳。

关键词：月桂酸肉鸡肉品质抗氧化功能 Nrf2信号

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猪圆环病毒2d型Cap蛋白猪源化抗体的表达

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农业生物技术学报 2023年第12期31卷 2580-2588页

作者：吴昊刘星雨甘诗琪周小杰周莹珊宋厚辉周兴东王晓杜浙江农林大学动物科技学院/动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室/动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室

猪圆环病毒2d型(Porcine circovirus type 2d, PCV2d)是猪圆环病毒的一个主流亚型，是引起断奶仔猪(Sus scrofa)多系统衰竭综合征等猪免疫抑制相关疾病的重要病原，严重危害着我国养猪业的健康发展。目前报道的PCV2d中和表位均位于衣壳... 详细信息

猪圆环病毒2d型(Porcine circovirus type 2d, PCV2d)是猪圆环病毒的一个主流亚型，是引起断奶仔猪(Sus scrofa)多系统衰竭综合征等猪免疫抑制相关疾病的重要病原，严重危害着我国养猪业的健康发展。目前报道的PCV2d中和表位均位于衣壳蛋白(capsid protein, Cap)上，Cap是产生中和抗体的关键蛋白，其中和抗体能够与病毒结合，从而阻止PCV2d的感染。本研究首先通过原核表达、纯化获得PCV2d Cap重组蛋白，并免疫BALB/c小鼠(Mus musculus)，筛选得到了2株鼠源抗PCV2d Cap蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株1B3和1B4，其中1B3具有中和活性且不与其他病毒发生交叉反应。将1B3抗体可变区基因与猪源恒定区基因嵌合后克隆至真核表达载体中，利用中国仓鼠(Cricetulus griseus)卵巢CHO-S细胞制备1株PCV2d Cap蛋白重组猪源化嵌合抗体r1B3swine稳定表达细胞系。抗体功能验证和Western blot结果显示，r1B3swine与PCV2d病毒结合反应良好，并且不与抗鼠二抗发生交叉反应。综上所述，本研究构建的猪源化抗PCV2d Cap蛋白的单克隆抗体r1B3swine的真核表达体系，为研究PCV2d Cap蛋白的结构、功能及为PCV2研发新的治疗和诊断制剂提供物质基础。

关键词：猪圆环病毒(PCV) 基因工程抗体猪源化改造真核表达

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糖基转移酶WekM参与禽致病性大肠杆菌脂多糖合成和环境适应

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微生物学报 2024年第8期64卷 2702-2712页

作者：曹启予高宇杰张晓荟陈歆丹罗平翟瑞东韩先干宋厚辉程昌勇于纪棉韩月浙江农林大学动物科技学院·动物医学院、浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室、动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心、浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地、中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 中国农业科学院上海兽医研究所上海201199 宁波卫生职业技术学院浙江宁波315100

【目的】研究O_(1)血清型禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)的O抗原糖基转移酶WekM在脂多糖合成和环境适应中的作用。【方法】采用Red同源重组方法,构建APEC O_(1)菌株的wekM基因缺失株,并构建wekM回补株。随... 详细信息

【目的】研究O_(1)血清型禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)的O抗原糖基转移酶WekM在脂多糖合成和环境适应中的作用。【方法】采用Red同源重组方法,构建APEC O_(1)菌株的wekM基因缺失株,并构建wekM回补株。随后分析wekM基因对APEC O_(1)菌株生长和运动能力的影响,通过银染和Western blotting鉴定细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)图谱以及与兔抗O_(1)血清的反应能力,通过实时荧光定量PCR测定细菌鞭毛相关基因转录水平,使用溴化乙锭测定细菌细胞膜通透性。最后,通过药敏试验检测细菌对环丙沙星等抗生素敏感性。【结果】PCR验证及DNA测序结果表明ΔwekM缺失株和回补株构建成功。银染鉴定ΔwekM缺失株较野生株LPS图谱不完整,部分O-抗原条带缺失;同时,Western blotting检测未见到ΔwekM与O因子血清的反应条带,这说明O-抗原糖基转移酶wekM基因缺失后影响LPS合成。生长运动能力分析显示,ΔwekM缺失株的运动能力较野生株显著减弱,生长速率与野生株一致。实时荧光定量PCR检测发现,ΔwekM缺失株的flgC等鞭毛相关基因转录水平降低,表明wekM基因影响细菌鞭毛的合成。此外,ΔwekM的细胞膜通透性较野生株显著增加(P<0.01),药敏结果也显示,ΔwekM缺失株较野生株对多黏菌素等7种抗生素敏感性增加,这说明wekM缺失后细菌细胞膜理化性质改变,适应环境的能力降低。【结论】本研究揭示了禽致病性大肠杆菌糖基转移酶wekM基因缺失导致细菌LPS完整性受损,运动能力降低,鞭毛合成受阻,鞭毛形成基因转录水平下降,细胞膜通透性增强,对抗生素敏感性增加。这些结果为解析wekM基因的功能奠定了研究基础,有助于深入了解禽致病性大肠杆菌O_(1)的环境适应机制。

关键词：禽致病性大肠杆菌O_(1) 脂多糖 O-抗原糖基转移酶环境适应

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稳定表达牛分枝杆菌PPE13的THP-1细胞株的建立

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中国动物传染病学报 2024年第5期32卷 179-184页

作者：刘卓彤毕斯琪孟祥苗胡燕萍宋厚辉杨杨浙江农林大学动物科技学院动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地中澳动物健康大数据分析联合实验室杭州311300

为了深入研究牛分枝杆菌PPE13在病原-宿主相互作用中的具体机制,本研究利用慢病毒表达系统构建了PPE13稳定表达的THP-1细胞系。首先,采用分子克隆技术,以牛分枝杆菌基因组DNA为模板扩增出ppe13目的片段,构建含有ppe13片段的重组慢病毒... 详细信息

为了深入研究牛分枝杆菌PPE13在病原-宿主相互作用中的具体机制,本研究利用慢病毒表达系统构建了PPE13稳定表达的THP-1细胞系。首先,采用分子克隆技术,以牛分枝杆菌基因组DNA为模板扩增出ppe13目的片段,构建含有ppe13片段的重组慢病毒表达质粒,将该质粒和慢病毒包装质粒转染至239T细胞中,72 h后收集病毒。然后,将获得的病毒感染THP-1细胞中,经1μg/mL嘌呤霉素筛选获得稳定表达PPE13的细胞株THP-1/PPE13。最后,使用ELISA方法检测稳定表达细胞系中TNF-α、IL-1β和IL-6分泌的情况,以验证细胞系中PPE13的生物学活性。结果显示,相较于对照细胞THP-1/Con,THP-1/PPE13中TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌水平均显著升高。该细胞系的建立为深入研究PPE13调控细胞信号通路的功能提供了实验基础。

关键词：牛分枝杆菌 PPE13 慢病毒包装稳定表达

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糖基水解酶参与猪链球菌2型的致病作用

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微生物学通报 2025年第2期52卷 643-653页

作者：范靖妍张锦鹏曹江东姜合祥邓思敏杨杨宋厚辉浙江农林大学动物科技学院动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地“一带一路”同一健康和食品安全国际联合实验室中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

【背景】猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2,SS2)是一种重要的人畜共患病原菌,可引起猪和人的严重感染,导致肺炎和感染性休克,甚至死亡。【目的】尽管多数毒力因子被相继发现,但其致病机制仍不清晰,寻找新的毒力因子或毒力相... 详细信息

【背景】猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2,SS2)是一种重要的人畜共患病原菌,可引起猪和人的严重感染,导致肺炎和感染性休克,甚至死亡。【目的】尽管多数毒力因子被相继发现,但其致病机制仍不清晰,寻找新的毒力因子或毒力相关基因进一步解析其致病机理依旧迫在眉睫。【方法】基于前期SS2的Tn917转座子插入突变体库的大蜡螟幼虫筛选结果,选取了一株致病性显著下降的插入突变体,其突变基因鉴定为B9H01_RS10315,编码糖基水解酶(glycosyl hydrolase,GhA)。通过构建ghA基因的缺失株(△ghA)及回补株(C△ghA),进行生长观察和体内体外致病力试验,探究ghA参与的致病作用。【结果】相较于野生株,缺失株△ghA表现出一定的生长缺陷,大蜡螟幼虫24 h致死率下降25%,对上皮细胞的黏附能力下降约50%,在全血中存活能力下降约35%,以及在细菌对细胞10倍和50倍的感染比下被吞噬细胞的吞噬增加约100%和200%。【结论】猪链球菌2型糖基水解酶GhA有助于细菌的生长,并通过促进细菌黏附、血液存活、抗吞噬能力等参与其致病过程。

关键词：猪链球菌致病作用毒力基因糖基水解酶

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单核增生李斯特氏菌LPXTG基序锚定蛋白Lmo0175介导的抗氧化应激和感染生物学研究

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微生物学报 2025年

作者：葛泓睿李豪杰高宇杰徐加利张蕊宋厚辉程昌勇邓思敏浙江农林大学动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地同一健康和食品安全“一带一路”国际联合实验室中澳动物健康大数据分析联合实验室中国农业大学动物医学院

【目的】通过比较单核增生李斯特氏菌参考菌株EGD-e、lmo0175基因缺失株Δlmo0175和回补株CΔlmo0175在细菌生长、抗氧化应激、细胞和宿主感染等方面的差异，明确LPXTG基序锚定蛋白Lmo0175在单核增生李斯特氏菌抗氧化应激和感染致病中... 详细信息

【目的】通过比较单核增生李斯特氏菌参考菌株EGD-e、lmo0175基因缺失株Δlmo0175和回补株CΔlmo0175在细菌生长、抗氧化应激、细胞和宿主感染等方面的差异，明确LPXTG基序锚定蛋白Lmo0175在单核增生李斯特氏菌抗氧化应激和感染致病中的作用。【方法】通过构建lmo0175的基因缺失株和回补株，探究Lmo0175对单核增生李斯特氏菌生长、抗氧化应激、细胞黏附、细胞侵袭、胞内增殖和组织定殖能力及小鼠致病力等方面的影响，从而明确Lmo0175在该菌抗氧化应激和感染宿主中的作用。【结果】lmo0175基因缺失后，单核增生李斯特氏菌在抗氧化应激、胞内增殖和小鼠脏器定殖等方面的能力显著降低，但在生长能力、细胞黏附和侵袭能力方面无显著差异。【结论】本研究阐明了LPXTG基序锚定蛋白Lmo0175参与单核增生李斯特氏菌抗氧化应激、胞内增殖和组织定殖等过程，且有助于该菌对小鼠的致病力。

关键词：单核增生李斯特氏菌氧化应激宿主感染 LPXTG基序锚定蛋白Lmo0175

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单增李斯特菌二硫键形成蛋白DsbG介导酸耐受及鞭毛运动性调控

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微生物学报 2023年第2期63卷 700-716页

作者：刘雨晴夏菁王喆费定润罗亚如陈绵绵江玲丽宋厚辉程昌勇浙江农林大学动物科技学院动物医学院、浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室、动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心、浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地、中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 宁波卫生职业技术学院浙江宁波315100

【目的】本研究旨在通过构建单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)二硫键形成蛋白编码基因dsbG缺失株和回补株,探究该蛋白在酸耐受和鞭毛介导的运动性中发挥的生物学功能。【方法】利用同源重组方法构建单增李斯特菌dsbG缺失株和回补株... 详细信息

【目的】本研究旨在通过构建单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)二硫键形成蛋白编码基因dsbG缺失株和回补株,探究该蛋白在酸耐受和鞭毛介导的运动性中发挥的生物学功能。【方法】利用同源重组方法构建单增李斯特菌dsbG缺失株和回补株,比较野生株和突变株在不同pH梯度培养基条件下的生长速率和存活率;通过实时荧光定量PCR方法,比较致死酸应激条件下野生株和缺失株酸耐受基因转录水平。通过半固体培养基、荧光定量PCR方法和鞭毛负染色透射电镜观察,比较野生株和突变株的运动能力、鞭毛相关基因转录水平变化和鞭毛形态差异。【结果】与野生株相比,dsbG缺失株的生长能力和速率差异不显著;在pH 3.5(盐酸和柠檬酸)培养条件下,存活率显著降低;精氨酸合成途径基因argD和argF转录水平分别下调2.4和3.7倍。同时,dsbG缺失株的运动能力减弱,且鞭毛形成相关的flaA、flgB和flgD等基因转录水平显著下调(分别为29.7、6.7和6.9倍),鞭毛形成能力减弱。【结论】本研究首次证实了单增李斯特菌二硫键形成蛋白DsbG能感应低pH应激,并形成耐受;证实了DsbG通过调控鞭毛相关基因的转录进而影响细菌的鞭毛形成和运动性。本研究有助于深入了解二硫键形成蛋白家族介导单增李斯特菌环境适应的分子机制,为食源性致病菌的防控提供理论基础。

关键词：单增李斯特菌二硫键形成蛋白酸耐受运动性鞭毛

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单核增生李斯特氏菌LPXTG基序锚定蛋白Lmo0130的感染生物学作用

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微生物学报 2025年

作者：邓思敏葛泓睿单? 毛敏杰徐加利夏菁宋厚辉程昌勇浙江农林大学动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地同一健康和食品安全“一带一路”国际联合实验室中澳动物健康大数据分析联合实验室

【目的】为了探究LPXTG基序锚定蛋白Lmo0130对单核增生李斯特氏菌EGD-e在感染致病中的影响，比较该菌EGD-e、lmo0130基因缺失株和回补株在生长、细胞和宿主感染等方面的差异。【方法】构建单核增生李斯特氏菌lmo0130基因缺失株Δlmo013... 详细信息

【目的】为了探究LPXTG基序锚定蛋白Lmo0130对单核增生李斯特氏菌EGD-e在感染致病中的影响，比较该菌EGD-e、lmo0130基因缺失株和回补株在生长、细胞和宿主感染等方面的差异。【方法】构建单核增生李斯特氏菌lmo0130基因缺失株Δlmo0130和回补株CΔlmo0130，探究Lmo0130对单核增生李斯特氏菌的生长能力、细胞表面的细菌黏附与侵袭能力、细胞内的细菌增殖能力、细胞间的迁移能力，以及感染小鼠的存活能力和细菌定殖能力等方面的影响，从而阐明Lmo0130对单核增生李斯特氏菌在细胞和宿主感染中的作用。【结果】LPXTG基序锚定蛋白Lmo0130有助于单核增生李斯特氏菌在细胞表面的黏附与侵袭、在细胞内的增殖、在感染小鼠组织中的定殖，并最终有助于在小鼠中的致病力，但对该菌的生长和胞间迁移能力无显著影响。【结论】本研究最终阐明了Lmo0130在单核增生李斯特氏菌感染细胞和宿主中的作用。

关键词： LPXTG基序锚定蛋白Lmo0130 感染致病胞内增殖单核增生李斯特氏菌

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单增李斯特菌末端氧化酶亚基QoxB的生物学功能探究

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微生物学报 2023年第2期63卷 656-669页

作者：江文玲徐加利董欣楠沈云勤陈丹丹江玲丽宋厚辉程昌勇浙江农林大学动物科技学院、动物医学院、浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室、动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心、浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地、中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 宁波卫生职业技术学院浙江宁波315100

【目的】本研究旨在构建单增李斯特菌末端细胞色素aa3氧化酶亚基qoxB基因缺失株,并探索其在细菌生长及感染过程中发挥的生物学功能。【方法】利用同源重组方法构建获得缺失株ΔqoxB后,对野生株EGD-e和缺失株ΔqoxB的生长能力、细菌运动... 详细信息

【目的】本研究旨在构建单增李斯特菌末端细胞色素aa3氧化酶亚基qoxB基因缺失株,并探索其在细菌生长及感染过程中发挥的生物学功能。【方法】利用同源重组方法构建获得缺失株ΔqoxB后,对野生株EGD-e和缺失株ΔqoxB的生长能力、细菌运动能力和细胞内黏附、侵袭、增殖及胞内迁移能力进行比较,同时利用荧光定量PCR方法检测ΔqoxB中鞭毛相关基因转录水平的变化。【结果】缺失qoxB基因后细菌在体外培养过程中生长能力没有差异,细菌的鞭毛运动能力显著降低,在30℃培养24 h和48 h后ΔqoxB运动圈直径分别较EGD-e下降35.86%和34.20%,且22个鞭毛相关基因转录水平显著降低。通过细胞感染试验发现缺失qoxB基因后细胞黏附、侵袭、增殖及胞内迁移能力均显著下降。【结论】本研究首次证实末端氧化酶亚基QoxB能降低单增李斯特菌的运动能力和对细胞的感染能力,此研究为进一步阐明末端细胞色素氧化酶影响单增李斯特菌的致病机制提供重要依据。

关键词：单增李斯特菌末端氧化酶运动性感染

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A型塞内卡病毒、口蹄疫病毒和猪捷申病毒3重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

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中国兽医学报 2025年第1期45卷 22-29页

作者：甘诗琪魏千禾倪语晨倪健波赵秀玲董婉玉周莹珊王晓杜浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 宁波市口岸生物与食品安全检测重点实验室宁波海关技术中心浙江宁波315100

针对A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)、口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)和猪捷申病毒(porcine teschovirus,PTV)核酸的保守区域,设计了用于构建TaqMan荧光定量PCR体系的引物和探针。以含有这3种病毒核酸保守序列的重... 详细信息

针对A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)、口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)和猪捷申病毒(porcine teschovirus,PTV)核酸的保守区域,设计了用于构建TaqMan荧光定量PCR体系的引物和探针。以含有这3种病毒核酸保守序列的重组阳性质粒标准品为模板,建立了3重TaqMan荧光定量PCR方法,并对该体系进行了优化,确定了该方法的特异性、重复性、灵敏性及标准曲线,同时建立了混合感染模型。此外,利用所构建的3重TaqMan荧光定量PCR方法对临床样品进行了检测。结果显示,该方法能够特异性检测SVA、FMDV和PTV 3种病毒,与其他病原体无交叉反应;检测SVA、FMDV和PTV的最低浓度均可达到1×10~1拷贝/μL;组间和组内变异系数均小于5%;在126份样品中未检出这3种病毒。上述结果表明,该方法具有较强的特异性、高灵敏性和良好的稳定性,可用于临床检测。

关键词： A型塞内卡病毒口蹄疫病毒猪捷申病毒荧光定量RT-PCR

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