检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学报 2024年第4期64卷 1219-1232页

作者：冯昱超徐加利朱斌杰吴泽斌王雯静丁桉蔡孜萌陈绵绵孙静江铃丽宋厚辉夏菁程昌勇浙江农林大学动物科技学院·动物医学院、浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室、动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心、浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地、中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 宁波卫生职业技术学院浙江宁波315100

【目的】探究单增李斯特菌溶血素O(listeriolysin O,LLO)中D3区域β8折叠片上第253位氨基酸(谷氨酰胺,Q)和第254位氨基酸(异亮氨酸,I)对单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)感染生物学功能的影响。【方法】构建LLO_(Q253A)和LLO_(I25... 详细信息

【目的】探究单增李斯特菌溶血素O(listeriolysin O,LLO)中D3区域β8折叠片上第253位氨基酸(谷氨酰胺,Q)和第254位氨基酸(异亮氨酸,I)对单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)感染生物学功能的影响。【方法】构建LLO_(Q253A)和LLO_(I254A)突变蛋白的原核表达菌株,以及利用同源重组方法构建hly_(Q253A)和hly_(I254A)突变株;通过表达纯化突变蛋白,测定溶血活性;比较LLO第253位Q和第254位I均突变成丙氨酸(A)后,对细菌体外生长能力、黏附侵袭、胞内迁移和增殖能力的影响。【结果】相应位点突变后,LLO蛋白均能够正常表达。在pH 6.5条件下,所有突变蛋白和突变株的溶血活性丧失。然而,在pH 5.5条件下,LLO_(I254A)和hly_(I254A)恢复了溶血活性。与野生株相比,突变株的体外生长、黏附能力和胞内增殖能力均无明显差异;突变株的侵袭能力和胞间迁移能力显著低于野生株。【结论】本研究证实第253位Q和第254位I均突变成A后,单增李斯特菌在pH 6.5条件下丧失溶血活性,并降低了感染宿主细胞的能力,但具体机制还有待进一步探索。本研究为深入探究LLO结构对单增李斯特菌生物学功能的影响奠定基础,对单增李斯特菌点突变株的构建具有一定参考意义。

关键词：单增李斯特菌溶血素O 感染点突变缺失株

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单增李斯特菌末端氧化酶亚基QoxB的生物学功能探究

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微生物学报 2023年第2期63卷 656-669页

作者：江文玲徐加利董欣楠沈云勤陈丹丹江玲丽宋厚辉程昌勇浙江农林大学动物科技学院、动物医学院、浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室、动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心、浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地、中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 宁波卫生职业技术学院浙江宁波315100

【目的】本研究旨在构建单增李斯特菌末端细胞色素aa3氧化酶亚基qoxB基因缺失株,并探索其在细菌生长及感染过程中发挥的生物学功能。【方法】利用同源重组方法构建获得缺失株ΔqoxB后,对野生株EGD-e和缺失株ΔqoxB的生长能力、细菌运动... 详细信息

【目的】本研究旨在构建单增李斯特菌末端细胞色素aa3氧化酶亚基qoxB基因缺失株,并探索其在细菌生长及感染过程中发挥的生物学功能。【方法】利用同源重组方法构建获得缺失株ΔqoxB后,对野生株EGD-e和缺失株ΔqoxB的生长能力、细菌运动能力和细胞内黏附、侵袭、增殖及胞内迁移能力进行比较,同时利用荧光定量PCR方法检测ΔqoxB中鞭毛相关基因转录水平的变化。【结果】缺失qoxB基因后细菌在体外培养过程中生长能力没有差异,细菌的鞭毛运动能力显著降低,在30℃培养24 h和48 h后ΔqoxB运动圈直径分别较EGD-e下降35.86%和34.20%,且22个鞭毛相关基因转录水平显著降低。通过细胞感染试验发现缺失qoxB基因后细胞黏附、侵袭、增殖及胞内迁移能力均显著下降。【结论】本研究首次证实末端氧化酶亚基QoxB能降低单增李斯特菌的运动能力和对细胞的感染能力,此研究为进一步阐明末端细胞色素氧化酶影响单增李斯特菌的致病机制提供重要依据。

关键词：单增李斯特菌末端氧化酶运动性感染

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表达E7蛋白的重组减毒李斯特菌在小鼠宫颈癌模型中的治疗效果

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农业生物技术学报 2024年第5期32卷 1206-1215页

作者：潘晓欣崔明珠罗亚如孙静程昌勇王晶宋厚辉浙江农林大学动物科技学院·动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室/动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室

单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes)是一种能在细胞间迁徙繁殖并能促进抗原特异性CD4+和CD8+T细胞增殖产生适应性细胞免疫的优质候选疫苗活载体。本课题组发现新型减毒李斯特菌(attenuated Listeria monocytogenes, LAM)... 详细信息

单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes)是一种能在细胞间迁徙繁殖并能促进抗原特异性CD4+和CD8+T细胞增殖产生适应性细胞免疫的优质候选疫苗活载体。本课题组发现新型减毒李斯特菌(attenuated Listeria monocytogenes, LAM)较野生型李斯特菌的溶血能力和增殖能力均显著降低的同时仍可正常分泌李斯特菌溶血素O (Listeriolysin O, LLO)蛋白。为了研究LAM的安全性及其对宫颈癌特异性抗原E7蛋白的递送与免疫效果，本研究在小鼠(Mus musculus)模型上检测了LAM的毒力，并对LAM-E7重组菌株在小鼠宫颈癌免疫治疗和预防中的作用进行了评价。结果显示，LAM对小鼠的毒力是野生型李斯特菌毒力的1/8709，且小鼠脏器中的LAM可在一周内被清除。本研究通过同源重组的方法将E7基因整合到LAM基因组上，PCR鉴定结果显示，LAM-E7菌株构建成功。Western blot结果显示，E7蛋白能够与LLO在重组菌株中融合表达并释放。通过对LAM-E7的体外生长能力和溶血活性分析发现，融合后对LAM的生长能力和溶血能力无显著影响，表明E7蛋白的融合不会影响LAM的安全性。通过腹部皮下注射方式构建小鼠宫颈癌模型发现，LAM-E7组小鼠肿瘤平均体积(161.1202 mm3)显著小于LAM组(349.4625 mm3)和PBS组(512.4149 mm3)(P<0.01)，说明接种LAM-E7对肿瘤生长具有显著的抑制作用。经免疫预防试验发现，LAM-E7组小鼠肿瘤平均体积(3.86 mm3)显著小于LAM组(172.67 mm3)和PBS组(57.38 mm3)(P<0.001)，表明LAM-E7对宫颈癌有一定的预防效果。本研究证实LAM-E7对小鼠宫颈癌具有良好的治疗和预防效果，为减毒李斯特菌作为疫苗载体用于宫颈癌治疗提供了新的思路，也为今后宫颈癌治疗疫苗的研发提供数据支持。

关键词：减毒李斯特菌宫颈癌免疫治疗载体疫苗

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镉致肝损伤机制及硒拮抗镉肝毒性的研究进展

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畜牧兽医学报 2024年第4期55卷 1456-1466页

作者：罗通旺吴亚王书杰宋厚辉邵春艳浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地中澳动物健康大数据分析联合实验室杭州311300

镉是一种有毒重金属,能通过食物链蓄积于机体内,造成急性或慢性中毒,严重威胁人类和畜禽的健康。肝是镉毒性损伤的主要靶器官,揭示镉的肝毒性机制以及如何抑制其毒性作用具有重要意义。硒是人体必需的微量元素之一,在维持机体正常生命... 详细信息

镉是一种有毒重金属,能通过食物链蓄积于机体内,造成急性或慢性中毒,严重威胁人类和畜禽的健康。肝是镉毒性损伤的主要靶器官,揭示镉的肝毒性机制以及如何抑制其毒性作用具有重要意义。硒是人体必需的微量元素之一,在维持机体正常生命活动中具有重要作用,近年来,很多研究表明硒能够拮抗镉的肝毒性。本文主要对镉致肝毒性损伤机制以及硒拮抗镉肝毒性的相关研究报道进行归纳总结,以期为镉污染的防治以及硒的临床应用提供参考。

关键词：镉肝毒性硒作用机制

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大蒜粉对肉鸡腿肌肉品质、常规养分和抗氧化功能的影响

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中国畜牧杂志 2021年

作者：曹久爱曾新福张瑞强刘金松范小燕许英蕾杨彩梅浙江农林大学动物科技学院.动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术研究重点实验室浙江惠嘉生物科技股份有限公司

试验旨在研究大蒜粉对肉鸡腿肌重、肌肉品质、常规养分、抗氧化能力及抗氧化基因表达量的影响。选取1日龄爱拔益加（AA）肉仔公鸡480只，随机分为4组，每组8个重复，每个重复15只。对照组饲喂基础饲粮，抗生素组在基础饲粮中添加75 mg/k... 详细信息

试验旨在研究大蒜粉对肉鸡腿肌重、肌肉品质、常规养分、抗氧化能力及抗氧化基因表达量的影响。选取1日龄爱拔益加（AA）肉仔公鸡480只，随机分为4组，每组8个重复，每个重复15只。对照组饲喂基础饲粮，抗生素组在基础饲粮中添加75 mg/kg金霉素，试验组在基础饲粮中分别添加1 000 mg/kg（低剂量）和 2 000 mg/kg（高剂量）大蒜粉，试验期42 d。结果表明：与对照组相比，饲粮添加1 000 mg/kg 大蒜粉增加了肉鸡腿肌重（P<0.05），降低了腿肌肉24 h亮度(L;)值和蒸煮损失率（P<0.05）；饲粮添加1 000、2 000 mg/kg大蒜粉均降低了腿肌肉的滴水损失率（P<0.05）；饲粮添加1 000 mg/kg大蒜粉提高了肉鸡腿肌的粗蛋白含量、总超氧化物歧化酶（T-SOD）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）活力（P<0.05）；饲粮添加1 000、2 000 mg/kg大蒜粉均提高了肉鸡腿肌的总抗氧化能力（T-AOC）活力（P<0.05），降低了丙二醛（MDA）含量（P<0.05），提高了Nrf2、SOD1、SOD2、CAT和GPx的表达量（P<0.05）；与抗生素组相比，大蒜粉组肉鸡腿肌滴水损失降低（P<0.05），且1 000 mg/kg大蒜粉提高了肉鸡腿肌肉CAT活性（P<0.05）。综上所述，饲粮添加大蒜粉可提高肉鸡腿肌肉重、肌肉品质和蛋白质含量，改善机体抗氧化能力，上调Nrf2通路相关基因的表达，且日粮添加1 000 mg/kg大蒜粉为宜。

关键词：大蒜粉肉鸡腿肌肌肉品质常规养分抗氧化功能

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猪圆环病毒2d型Cap蛋白猪源化抗体的表达

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农业生物技术学报 2023年第12期31卷 2580-2588页

作者：吴昊刘星雨甘诗琪周小杰周莹珊宋厚辉周兴东王晓杜浙江农林大学动物科技学院/动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室/动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室

猪圆环病毒2d型(Porcine circovirus type 2d, PCV2d)是猪圆环病毒的一个主流亚型，是引起断奶仔猪(Sus scrofa)多系统衰竭综合征等猪免疫抑制相关疾病的重要病原，严重危害着我国养猪业的健康发展。目前报道的PCV2d中和表位均位于衣壳... 详细信息

猪圆环病毒2d型(Porcine circovirus type 2d, PCV2d)是猪圆环病毒的一个主流亚型，是引起断奶仔猪(Sus scrofa)多系统衰竭综合征等猪免疫抑制相关疾病的重要病原，严重危害着我国养猪业的健康发展。目前报道的PCV2d中和表位均位于衣壳蛋白(capsid protein, Cap)上，Cap是产生中和抗体的关键蛋白，其中和抗体能够与病毒结合，从而阻止PCV2d的感染。本研究首先通过原核表达、纯化获得PCV2d Cap重组蛋白，并免疫BALB/c小鼠(Mus musculus)，筛选得到了2株鼠源抗PCV2d Cap蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株1B3和1B4，其中1B3具有中和活性且不与其他病毒发生交叉反应。将1B3抗体可变区基因与猪源恒定区基因嵌合后克隆至真核表达载体中，利用中国仓鼠(Cricetulus griseus)卵巢CHO-S细胞制备1株PCV2d Cap蛋白重组猪源化嵌合抗体r1B3swine稳定表达细胞系。抗体功能验证和Western blot结果显示，r1B3swine与PCV2d病毒结合反应良好，并且不与抗鼠二抗发生交叉反应。综上所述，本研究构建的猪源化抗PCV2d Cap蛋白的单克隆抗体r1B3swine的真核表达体系，为研究PCV2d Cap蛋白的结构、功能及为PCV2研发新的治疗和诊断制剂提供物质基础。

关键词：猪圆环病毒(PCV) 基因工程抗体猪源化改造真核表达

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西尼罗河病毒感染与免疫机制研究进展

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中国兽医学报 2021年第10期41卷 2059-2063页

作者：孙静何展蔡畅卫芳芳程昌勇宋厚辉浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

西尼罗河病毒(West Nile virus,WNV)是一种在世界范围内流行的嗜神经虫媒病毒,鸟类、马等多种动物和人均易感,蚊虫和鸟类是该病毒的主要传播媒介。WNV感染人引起以亚临床症状为主的西尼罗河热(West Nile fever,WNF),以典型的西尼罗河脑... 详细信息

西尼罗河病毒(West Nile virus,WNV)是一种在世界范围内流行的嗜神经虫媒病毒,鸟类、马等多种动物和人均易感,蚊虫和鸟类是该病毒的主要传播媒介。WNV感染人引起以亚临床症状为主的西尼罗河热(West Nile fever,WNF),以典型的西尼罗河脑炎以及神经系统疾病为主要特征,严重可致死亡。研究显示,WNV感染在全球范围内呈逐步扩大趋势,对全世界人类公共卫生构成了重大威胁。WNV的持续蔓延以及缺乏有效防治感染的疗法和疫苗,迫切需要揭示WNV感染机制,从而为有效防控该疾病提供理论根据。现主要对近年来有关WNV感染以及宿主病毒互作免疫机制的研究进展进行综述。

关键词：西尼罗河病毒免疫机制公共卫生

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姜黄素与根皮素联合作用对金黄色葡萄球菌的抑菌作用研究

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中国畜牧杂志 2023年第4期59卷 241-246页

作者：刘锋吴娴徐燕毕海洋宋丹杨松柏周晓龙李向臣浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室浙江杭州311300 浙江省安吉县鄣吴镇便民服务中心浙江安吉313399

试验旨在研究姜黄素与根皮素联合使用对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的抑菌作用。采用微量肉汤法测定亚抑菌浓度;菌落分析仪测定抑菌圈大小;酶标仪微量法测定OD260和OD280数值、碱性磷酸酶活力(AKP)、乳酸脱氢酶活性(LDH);SDS... 详细信息

试验旨在研究姜黄素与根皮素联合使用对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的抑菌作用。采用微量肉汤法测定亚抑菌浓度;菌落分析仪测定抑菌圈大小;酶标仪微量法测定OD260和OD280数值、碱性磷酸酶活力(AKP)、乳酸脱氢酶活性(LDH);SDS-PAGE凝胶电泳检测金黄色葡萄球菌菌体总蛋白。结果表明:与对照组相比,15.625μg/m L姜黄素、根皮素分别作用于金黄色葡萄球菌16 h时,均显著抑制其生长;与姜黄素、根皮素单独处理组相比,15.625μg/m L姜黄素和根皮素联合作用显著抑制金黄色葡萄球菌生长;与对照组相比,姜黄素、根皮素单独与联合处理均显著增加OD260、OD280数值和AKP活力、降低LDH活性以及减少菌体胞内总蛋白含量。综上,姜黄素与根皮素联合使用对金黄色葡萄球菌的抑菌作用优于单独使用。

关键词：姜黄素根皮素金黄色葡萄球菌抑菌联合作用

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双酚A对猪肾细胞炎性因子表达及凋亡的影响

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中国畜牧杂志 2021年第12期57卷 223-227,233页

作者：周羽刘媛汪序忠周晓龙杨松柏段星宋丹李向臣浙江农林大学动物科技学院动物医学院浙江杭州311300 浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室浙江杭州311300 浙江省安吉振望农牧科技有限公司浙江湖州313300

本试验旨在研究双酚A(BPA)对猪肾细胞炎性因子表达和凋亡的影响。以猪肾细胞(PK15)为试验材料,设置不同浓度(0、1、10、100、200、500和1000μmol/L)和时间梯度(0、2、4、6 h)BPA处理PK15细胞,CCK-8检测细胞活力;琼脂糖凝胶电泳分析RNA... 详细信息

本试验旨在研究双酚A(BPA)对猪肾细胞炎性因子表达和凋亡的影响。以猪肾细胞(PK15)为试验材料,设置不同浓度(0、1、10、100、200、500和1000μmol/L)和时间梯度(0、2、4、6 h)BPA处理PK15细胞,CCK-8检测细胞活力;琼脂糖凝胶电泳分析RNA、cDNA的高质量性与引物扩增条带大小;qRT-PCR检测炎性相关因子白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和凋亡相关基因(Caspase3、BAX、BCL-2)mRNA表达水平;免疫荧光检测细胞凋亡和ROS水平。结果表明:随着BPA浓度增加和处理时间的延长,细胞活力逐渐降低,当BPA浓度大于200μmol/L,作用6 h时,细胞活力降低(P<0.05);RNA的28S、18S和5S条带清晰,引物扩增条带单一且片段大小符合预期;与对照组相比,BPA处理后IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA相对表达量升高(P<0.05),Caspase3和BAX mRNA相对表达量升高,BCL-2 mRNA相对表达量降低(P<0.05);BPA增加凋亡细胞数和ROS水平(P<0.01)。综上,BPA促进细胞凋亡和炎性反应,诱导PK15细胞产生过量的ROS。

关键词： PK15 BPA 细胞凋亡炎症

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基于基因缺失减毒单增李斯特菌的小鼠宫颈癌治疗性疫苗效果评估

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农业生物技术学报 2022年第10期30卷 1987-1996页

作者：汪枫婷孙静刘晨程茵蒋昕祝艺然卫芳芳章先宋厚辉程昌勇浙江农林大学动物科技学院.动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室

减毒单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)作为一种安全高效的异源抗原递呈载体可用于肿瘤免疫治疗。缺失重要毒力基因是目前较为成熟的李斯特菌减毒策略。基因缺失减毒菌株ΔactAΔinlB (简称ΔAB)是其中一种较为成熟、安全的李斯特... 详细信息

减毒单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)作为一种安全高效的异源抗原递呈载体可用于肿瘤免疫治疗。缺失重要毒力基因是目前较为成熟的李斯特菌减毒策略。基因缺失减毒菌株ΔactAΔinlB (简称ΔAB)是其中一种较为成熟、安全的李斯特菌肿瘤免疫治疗疫苗载体。本研究旨在ΔAB基础上，利用肿瘤相关抗原与重要毒力因子融合表达的创新手段，构建一种能高效表达和递呈宫颈癌相关抗原E7的肿瘤疫苗载体(ΔAB-E7)，以肿瘤生物学方法评估ΔAB-E7在小鼠(Mus musculus)宫颈癌模型中的免疫治疗效果。本研究利用细菌分子遗传操作技术构建ΔAB，在ΔAB基础上构建李斯特菌溶血素O (Listeriolysin O,LLO)和肿瘤抗原E7融合表达的ΔAB-E7；通过Western blot验证ΔAB-E7菌株中的E7抗原能否与LLO融合表达；利用细菌体外培养以及吞噬细胞内增殖实验研究体外生长能力，细胞内复制和增殖能力；通过小鼠脏器内细菌增殖实验评估ΔAB及ΔAB-E7在小鼠体内的增殖能力；构建小鼠宫颈癌模型，通过记录肿瘤模型在小鼠体内的生长趋势评价ΔAB-E7的免疫治疗效果。结果显示，ΔAB-E7菌株的E7抗原能与LLO融合表达并正常分泌；ΔAB及ΔAB-E7菌株在体外生长能力与野生型无显著差异，并且在吞噬细胞中保持稳定的增殖能力；ΔAB及ΔAB-E7感染小鼠后致病力显著下降，在小鼠脏器中的增殖能力显著降低，表明其毒力减弱，在小鼠感染模型中具有安全性；在小鼠宫颈癌模型中，ΔAB-E7免疫治疗组小鼠肿瘤的生长趋势明显较对照组更慢，表明ΔAB-E7抑制肿瘤生长，展现了良好的免疫治疗效果。本研究制备了一种基于减毒李斯特菌的小鼠宫颈癌治疗载体疫苗，为人类宫颈癌及其他恶性肿瘤的免疫治疗提供技术支持。

关键词：减毒单增李斯特菌宫颈癌免疫疗法疫苗载体 ΔAB-E7

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