检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医学报 2024年第11期44卷 2463-2469页

作者：宋圣哲罗通旺沈灵俊王书杰郁孝强宋厚辉邵春艳浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室/动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

利用CRISPR/Cas9系统构建HO-1基因敲除的猪肾细胞系(PK-15),为探究HO-1在镉诱导的PK-15细胞铁死亡中的作用及分子机制提供试验材料。设计并合成3条针对HO-1基因的sgRNA,分别连接到慢病毒载体Lenti CRISPRv2上;将构建好的慢病毒质粒转染... 详细信息

利用CRISPR/Cas9系统构建HO-1基因敲除的猪肾细胞系(PK-15),为探究HO-1在镉诱导的PK-15细胞铁死亡中的作用及分子机制提供试验材料。设计并合成3条针对HO-1基因的sgRNA,分别连接到慢病毒载体Lenti CRISPRv2上;将构建好的慢病毒质粒转染至人胚胎肾细胞(HEK293FT),获得重组慢病毒并感染PK-15细胞;经嘌呤霉素筛选和有限稀释法获得HO-1敲除的单克隆细胞系,测序及Western blot验证HO-1基因的敲除情况。用10μmol/L氯化镉(CdCl_(2))处理构建好的HO-1基因敲除的细胞,通过CCK-8法检测细胞活力,利用相差显微镜观察细胞形态,采用荧光探针法检测细胞中亚铁离子(Fe^(2+))的含量。结果显示,sgRNA2编辑效率最高,获得的5株敲除细胞HO-1基因均发生了碱基插入或缺失且引起了目的基因的移码,Western blot结果显示未检测到HO-1蛋白表达,表明成功构建了敲除HO-1基因的PK-15细胞系(PK-15^(HO-1 KO))。CdCl_(2)处理后,与对照细胞相比,PK-15^(HO-1KO)细胞活力显著升高,Fe^(2+)含量显著下降,表明HO-1基因敲除后可以显著缓解镉处理引起的铁代谢异常。综上所述,本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功构建了敲除HO-1基因的PK-15细胞系,并证实HO-1在镉处理诱导PK-15细胞铁代谢异常中发挥着重要作用,为后续进一步研究HO-1在镉暴露致PK-15细胞铁死亡的调控机制奠定了基础。

关键词： HO-1 PK-15 基因敲除 CRISPR/Cas9 镉

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DegU调控单核细胞增生李斯特菌感染宿主细胞及适应高温的机制研究

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微生物学报 2023年第12期63卷 4726-4737页

作者：毛敏杰周思廖俊慧李豪杰徐加利金浩博金戈旋朱富鑫孙静宋厚辉邓思敏程昌勇浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

【目的】本研究旨在探究孤儿调节因子DegU在介导单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)宿主感染和高温环境适应性方面的调控机制。【方法】本研究以单增李斯特菌参考菌株EGD-e、degU基因缺失菌株ΔdegU和回补菌株CΔdegU为研究... 详细信息

【目的】本研究旨在探究孤儿调节因子DegU在介导单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)宿主感染和高温环境适应性方面的调控机制。【方法】本研究以单增李斯特菌参考菌株EGD-e、degU基因缺失菌株ΔdegU和回补菌株CΔdegU为研究材料,通过细胞模型、实时荧光定量聚合酶链式反应和凝胶阻滞试验等方法探究DegU对单增李斯特菌感染宿主细胞和适应高温的调控机制。【结果】研究结果表明:缺失degU后,单增李斯特菌在Caco-2上的黏附和侵袭能力显著降低,在RAW264.7中的增殖能力显著降低,在L929中的空斑形成能力也显著降低;进一步通过实时荧光定量聚合酶链式反应检测degU基因缺失后引起的单增李斯特菌毒力因子转录水平变化,发现多个重要毒力因子转录水平均显著下调;该试验结果还发现与毒力相关的热应激基因clpE(受CtsR抑制的ATP依赖蛋白水解酶编码基因)转录水平显著升高,而在43℃高温条件下,clpE转录水平显著降低;进一步通过凝胶阻滞试验结果表明DegU能够与clpE的启动子直接结合。【结论】综上所述,degU基因缺失能够降低单增李斯特菌在宿主感染过程中的细胞黏附、侵袭、胞内增殖和胞间迁移能力;DegU能够与clpE启动子结合,直接调控clpE基因的转录水平来适应高温环境。该研究为进一步深入解析单增李斯特菌的宿主感染和环境适应性机制奠定了试验基础。

关键词：单增李斯特菌孤儿调节因子DegU 宿主细胞感染毒力因子高温适应

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镉暴露诱导小鼠肝脏铁死亡的作用机制

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中国兽医学报 2024年第3期44卷 543-549页

作者：郁孝强吴亚罗通旺宋圣哲王书杰宋厚辉邵春艳浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室/动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

镉(Cd)是一种重要的环境污染物,可造成蓄积机体包括肝脏在内多种器官的损害。本研究旨在揭示Cd暴露对小鼠肝脏组织铁死亡的作用及其机制。24只8周龄ICR小鼠随机平均分为对照组和3个Cd暴露组(Cd组),Cd组每日给小鼠腹腔注射1、2、3 mg/kg... 详细信息

镉(Cd)是一种重要的环境污染物,可造成蓄积机体包括肝脏在内多种器官的损害。本研究旨在揭示Cd暴露对小鼠肝脏组织铁死亡的作用及其机制。24只8周龄ICR小鼠随机平均分为对照组和3个Cd暴露组(Cd组),Cd组每日给小鼠腹腔注射1、2、3 mg/kg的氯化镉(CdCl2),对照组注射等体积的生理盐水,连续7 d。8 d后处死小鼠,分别观察肝脏组织病理学及超微结构变化,检测血清中肝功能酶(ALT、AST)活性,肝脏组织中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和Cd的含量,检测铁死亡相关因子的蛋白表达水平。结果显示,Cd暴露后肝脏组织间质充血,肝脏细胞索消失、线粒体出现絮状致密物,嵴缺失空化。Cd暴露组小鼠血清ALT和AST,肝脏组织MDA和Cd含量显著升高,肝脏组织GSH-Px含量显著下降(P<0.01)。肝脏组织ACSL4、HO-1蛋白表达量极显著升高(P<0.01),GPX4、SLC7A11、FTH1、FTL蛋白的表达量则极显著下降(P<0.01)。结果表明,Cd暴露可致ICR小鼠肝脏组织铁代谢紊乱,抗氧化水平降低,脂质过氧化,从而介导肝脏发生铁死亡。本研究为进一步完善Cd暴露致肝损伤的毒性机制提供了重要的理论依据。

关键词：镉小鼠肝脏铁死亡

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单核细胞增生李斯特菌二硫键形成蛋白DsbA调控胞间迁移的机制

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微生物学报 2024年第11期64卷 4308-4318页

作者：王喆蒋国李静静王建峰许礼冬徐加利付展鸿秦潜宋厚辉程昌勇夏菁浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 宁波检验检疫科学技术研究院宁波海关技术中心浙江宁波315100

【目的】实验室前期研究发现单核细胞增生李斯特菌(单增李斯特菌,Listeria monocytogenes)二硫键形成蛋白DsbA缺失后,细菌胞间迁移能力增强,本研究旨在深入解析DsbA介导该生物学过程的具体机制。【方法】通过荧光定量PCR和蛋白质免疫印... 详细信息

【目的】实验室前期研究发现单核细胞增生李斯特菌(单增李斯特菌,Listeria monocytogenes)二硫键形成蛋白DsbA缺失后,细菌胞间迁移能力增强,本研究旨在深入解析DsbA介导该生物学过程的具体机制。【方法】通过荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹(Western blotting)方法比较单增李斯特菌野生株和dsbA缺失株毒力基因的转录和表达水平差异;利用免疫荧光共定位方法观察DsbA缺失后对单增李斯特菌胞间迁移相关毒力因子ActA招募宿主肌动蛋白能力的影响(分析ActA与肌动蛋白共定位在细菌一侧形成“彗星状尾巴”的长短和数量);通过等温滴定量热法(isothermal titration calorimetry, ITC)研究DsbA与ActA互作情况。【结果】dsbA缺失后,毒力基因转录水平无显著差异,但毒力因子InlA、InlB、PlcA和PlcB的分泌均显著降低,而ActA、溶血素O (listeriolysin O, LLO)分泌量显著升高。缺失株形成的彗星尾巴数量显著高于野生株且平均长度也较野生株增加,说明dsbA缺失导致细菌招募肌动蛋白能力明显增强。ITC试验发现DsbA与ActA结合存在吸热反应,说明二者互作。【结论】本研究证实单增李斯特菌DsbA通过调控毒力蛋白减弱了对肌动蛋白募集,进而影响细菌胞间迁移。研究结果有助于系统理解单增李斯特菌在宿主感染过程中的毒力调控机制,对人兽共患胞内病原菌的污染控制具有重要公共卫生学意义。

关键词：单增李斯特菌二硫键形成蛋白DsbA 胞间迁移肌动蛋白募集

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牛分枝杆菌PE＿PGRS21蛋白抑制细胞自噬的研究

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中国预防兽医学报 2025年

作者：杨杨陈标徐阿慧黄蓓宋厚辉臧鑫鑫浙江农林大学动物科技学院/动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室

自噬是细胞用来清除受损细胞器、生物大分子以及胞内病原微生物的一种重要方式。为了探究牛分枝杆菌PE＿PGRS21蛋白对细胞自噬的影响，本研究采用同源重组的方法构建真核表达质粒pFlag-PE＿PGRS21，经PCR和测序验证正确后，与重组质粒pE... 详细信息

自噬是细胞用来清除受损细胞器、生物大分子以及胞内病原微生物的一种重要方式。为了探究牛分枝杆菌PE＿PGRS21蛋白对细胞自噬的影响，本研究采用同源重组的方法构建真核表达质粒pFlag-PE＿PGRS21，经PCR和测序验证正确后，与重组质粒pEGFP-LC3共同转染HeLa细胞，采用western blot的方法检测自噬相关蛋白LC3-II的表达。结果显示，PE＿PGRS21能够显著抑制HeLa细胞LC3-II蛋白的表达。通过慢病毒包装质粒构建THP-1诱导表达型细胞系THP-1-PE＿PGRS21，经多西环素和雷帕霉素处理后，采用western blot和免疫荧光的方法检测PE＿PGRS21和LC3-II蛋白的表达。结果显示，PE＿PGRS21在THP-1细胞中成功表达，且显著抑制LC3-II蛋白的表达。通过构建重组质粒pMN437-PE＿PGRS21，经PCR和测序验证正确后，电转至耻垢分枝杆菌感受态细胞中，采用western blot的方法检测PE＿PGRS21在耻垢分枝杆菌中的表达及分泌情况。结果显示，PE＿PGRS21在耻垢分枝杆菌中成功表达，且能分泌到培养上清中。构建并培养重组耻垢分枝杆菌pMN437/Ms和PE＿PGRS21/Ms，通过测定OD600nm值至平台期，检测PE＿PGRS21对耻垢分枝杆菌生长速度的影响。结果显示，PE＿PGRS21不会影响耻垢分枝杆菌的生长速度。将重组耻垢分枝杆菌pMN437/Ms和PE＿PGRS21/Ms分别感染THP-1细胞系，24 h和48 h后采用western blot的方法和菌落计数的方法分别检测LC3-II蛋白的表达及耻垢分枝杆菌的胞内存活。结果显示，PE＿PGRS21能够抑制耻垢分枝杆菌引发的THP-1细胞LC3-II蛋白的表达，并促进耻垢分枝杆菌在THP-1细胞中的存活。综上所述，PE＿PGRS21通过抑制自噬相关蛋白LC3-II蛋白的表达，从而抑制细胞自噬的发生，并促进耻垢分枝杆菌的胞内存活。本研究为牛分枝杆菌蛋白调控细胞自噬机制提供理论依据。

关键词：牛分枝杆菌细胞自噬 PE＿PGRS21蛋白 LC3-II蛋白

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产黄曲霉毒素真菌双重荧光定量PCR检测技术的建立与应用

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中国粮油学报 2024年第2期39卷 188-195页

作者：陈冠果李可陆金虎金晨晨王龑帅江冰鲍维琪程昌勇宋厚辉张晓峰浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地中澳动物健康大数据分析联合实验室杭州311300 浙江省检验检疫科学技术研究院杭州310016 浙江工业大学食品科学与工程学院杭州310014

为实现产黄曲霉毒素真菌的快速检测,本研究建立了检测产黄曲霉毒素真菌的aflR基因和nor-1基因的双重荧光定量PCR方法。分别针对aflR基因和nor-l基因保守序列,各设计2对特异性引物和探针,通过引物对间的有效性实验各筛选出1对最优的aflR... 详细信息

为实现产黄曲霉毒素真菌的快速检测,本研究建立了检测产黄曲霉毒素真菌的aflR基因和nor-1基因的双重荧光定量PCR方法。分别针对aflR基因和nor-l基因保守序列,各设计2对特异性引物和探针,通过引物对间的有效性实验各筛选出1对最优的aflR引物探针和nor-1引物探针,随后建立并优化双重荧光定量PCR的反应条件,构建标准曲线,测定该方法的重复性、灵敏度和特异性。结果显示,成功筛选出aflR-2和nor1-2 2组引物/探针组合,并优化和确定了引物/探针的最佳反应终浓度。特异性实验结果显示,本研究建立的检测方法仅对产黄曲霉毒素真菌的aflR基因和nor-1基因呈现特异性扩增,对黑曲霉、碳黑曲霉、赭曲霉和镰刀菌等常见产毒真菌的核酸样品均无扩增曲线。建立的方法重复性好,批内和批间变异系数均<3%,双重反应体系的检测灵敏度均低至1×10^(2)copies/μL。利用本研究所建立的方法与ELISA试剂盒分别对80份食品样品进行检测,结果显示,双重荧光定量PCR共检测出9份阳性样品,而ELISA试剂盒只检测出了7份阳性,表明本研究建立的方法具有更高的灵敏度和准确性。

关键词：产黄曲霉毒素真菌双重荧光定量PCR 快速检测

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单宁酸对脂多糖应激仔猪肝组织的功能、抗氧化能力和炎症应答的影响

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畜牧兽医学报 2024年第6期55卷 2519-2529页

作者：周琦璐刘金松吴超杨彩梅刘玉兰张瑞强浙江农林大学动物科技学院•动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室杭州311300 惠嘉绿色动物保健品重点农业企业研究院浙江惠嘉生物科技股份有限公司安吉313300

旨在研究断奶仔猪饲粮添加单宁酸(tannic acid, TA)对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)应激断奶仔猪肝组织功能、抗氧化能力、炎症应答反应及相关基因表达的影响。本试验分为两部分。第一部分选择72头体重相近、健康状况良好的28日龄三... 详细信息

旨在研究断奶仔猪饲粮添加单宁酸(tannic acid, TA)对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)应激断奶仔猪肝组织功能、抗氧化能力、炎症应答反应及相关基因表达的影响。本试验分为两部分。第一部分选择72头体重相近、健康状况良好的28日龄三元杂交(杜×长×大)断奶仔猪,随机分为2组,分别为基础饲粮饲喂组(饲喂基础饲粮)和单宁酸饲喂组(饲喂在基础饲粮中额外添加1 000 mg·kg^(-1)单宁酸的试验饲粮),每组6个重复,每个重复6头猪,试验期为28 d。第二部分于第一部分试验结束时,分别从基础饲粮饲喂组和单宁酸饲喂组各选取12头体重接近平均体重、健康状况良好的56日龄仔猪,将其分为4组,每组6头仔猪。对照组(CON)和LPS应激组(LPS)的仔猪来自第一部分试验的基础饲粮饲喂组;单宁酸组(TA)和单宁酸+LPS组(TA+LPS)的仔猪来自第一部分试验的单宁酸饲喂组。在仔猪56日龄早上8:00,给LPS组和TA+LPS组仔猪腹腔注射1.5 mL浓度为1 mg·mL^(-1)的LPS,给CON组和TA组仔猪腹腔注射1.5 mL生理盐水,注射1.5 h后屠宰采样。结果发现,LPS应激增加了仔猪的肝脏指数,提高了血清中谷草转氨酶(aspartate aminotransferase, AST)和谷丙转氨酶(alanine aminotransferase, ALT)活性,降低了仔猪肝组织过氧化氢酶(catalase, CAT)和总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase, T-SOD)水平,提高了仔猪肝组织基因Kelch-1ike ECH-associated protein-1(Keap1)、Toll-like receptor 4(TLR4)、Myeloid differentiation factor 88(MyD88)、Nod-like receptor protein 3(NLRP3)、Interleukin-6(IL-6)和Tumor necrosis factor-α(TNF-α)的表达水平,降低了Nuclear factor erythroid 2-related factor 2(Nrf2)、NADH Quinone Oxidoreductase 1(NQO1)、Manganese superoxide dismutase(Mn-SOD)和Catalase(CAT)的表达水平(P<0.05)。饲粮中添加TA可降低仔猪血清中AST和ALT水平,提高仔猪肝组织CAT和T-SOD水平,显著影响仔猪肝组织IL-6、IL-10和TNF-α含量,下调仔猪肝组织基因Keap1、TLR4、MyD88、NLRP3、IL-6和TNF-α的表达水平,上调Nrf2、NQO1、Cu/Zn-SOD、Mn-SOD和CAT的表达水平(P<0.05)。与CON组相比,TA+LPS组仔猪血清中AST的水平降低(P<0.05)。与LPS组相比,TA+LPS组血清中AST和ALT水平降低,IL-6和TNF-α含量减少,基因Keap1、TLR4、IL-6和TNF-α表达水平降低,Mn-SOD和CAT的表达量增加(P<0.05)。综上,在本试验条件下,单宁酸通过调节仔猪肝脏指数,改善肝抗氧化能力,抑制肝组织炎症因子的分泌,调控Nrf2信号、TLR4信号和NLRP3炎症小体信号相关基因表达,缓解LPS应激引起的仔猪肝应激损伤状态。

关键词：单宁酸脂多糖猪肝应激

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月桂酸替代金霉素对肉鸡腿肌肉品质和抗氧化功能的影响

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中国粮油学报 2024年第6期39卷 159-165页

作者：徐自强刘金松刘玉兰杨彩梅周琦璐史永浩吴艳萍张瑞强浙江农林大学动物科技学院·动物医学院、浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室、动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室临安311300 惠嘉绿色动物保健品重点农业企业研究院、浙江惠嘉生物科技股份有限公司安吉313300

本实验旨在研究月桂酸(lauricacid,LA)对肉鸡肌肉品质、常规营养成分和抗氧化性能的调控作用。实验选用480只1日龄AA肉仔鸡,随机分为4组,每组8个重复,每个重复15只鸡,分别饲喂基础饲粮(对照组)和基础饲粮分别添加75 mg/kg金霉素(抗生素... 详细信息

本实验旨在研究月桂酸(lauricacid,LA)对肉鸡肌肉品质、常规营养成分和抗氧化性能的调控作用。实验选用480只1日龄AA肉仔鸡,随机分为4组,每组8个重复,每个重复15只鸡,分别饲喂基础饲粮(对照组)和基础饲粮分别添加75 mg/kg金霉素(抗生素组)、500 mg/kg月桂酸(月桂酸低剂量组;LA500)、1000 mg/kg月桂酸(月桂酸高剂量组;LA1000)的实验饲粮,实验期为42 d。结果表明:与对照组相比,饲粮添加500 mg/kg月桂酸提高了肉鸡腿肌24 h的pH、黄度(b^(*))值和粗脂肪含量,增加了过氧化氢酶(CAT)的活力(P<0.05),上调了SOD2、CAT、GPX1、Nrf2、HO-1的基因表达量(P<0.05),降低了24 h和48 h的滴水损失(P<0.05),饲粮添加1000 mg/kg月桂酸提高了肉鸡腿肌24 h的pH、红度(a^(*))值、黄度(b^(*))值、粗脂肪含量(P<0.05),增加了总抗氧化能力(T-AOC)、总超氧化物歧化酶(SOD)、CAT的活力(P<0.05),上调了SOD1、SOD2、CAT、GPX1、Nrf2、HO-1的基因表达量(P<0.05),降低了24 h的亮度(L^(*))值、滴水损失、48 h的滴水损失和丙二醛(MDA)的含量(P<0.05);与抗生素组相比,添加500 mg/kg月桂酸的饲粮提高了肉鸡腿肌CAT的含量,降低了肉鸡腿肌24 h的滴水损失、MDA的含量(P<0.05),饲粮添加1000 mg/kg月桂酸提高了肉鸡腿肌CAT的含量,降低了肉鸡腿肌24、48 h的滴水损失和MDA的含量(P<0.05)。月桂酸能够改善肉鸡肌肉品质和抗氧化能力,激活Nrf2信号通路相关基因的表达,且效果优于抗生素,饲粮添加1000 mg/kg月桂酸更佳。

关键词：月桂酸肉鸡肉品质抗氧化功能 Nrf2信号

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猪圆环病毒2d型Cap蛋白猪源化抗体的表达

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农业生物技术学报 2023年第12期31卷 2580-2588页

作者：吴昊刘星雨甘诗琪周小杰周莹珊宋厚辉周兴东王晓杜浙江农林大学动物科技学院/动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室/动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室

猪圆环病毒2d型(Porcine circovirus type 2d, PCV2d)是猪圆环病毒的一个主流亚型，是引起断奶仔猪(Sus scrofa)多系统衰竭综合征等猪免疫抑制相关疾病的重要病原，严重危害着我国养猪业的健康发展。目前报道的PCV2d中和表位均位于衣壳... 详细信息

猪圆环病毒2d型(Porcine circovirus type 2d, PCV2d)是猪圆环病毒的一个主流亚型，是引起断奶仔猪(Sus scrofa)多系统衰竭综合征等猪免疫抑制相关疾病的重要病原，严重危害着我国养猪业的健康发展。目前报道的PCV2d中和表位均位于衣壳蛋白(capsid protein, Cap)上，Cap是产生中和抗体的关键蛋白，其中和抗体能够与病毒结合，从而阻止PCV2d的感染。本研究首先通过原核表达、纯化获得PCV2d Cap重组蛋白，并免疫BALB/c小鼠(Mus musculus)，筛选得到了2株鼠源抗PCV2d Cap蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株1B3和1B4，其中1B3具有中和活性且不与其他病毒发生交叉反应。将1B3抗体可变区基因与猪源恒定区基因嵌合后克隆至真核表达载体中，利用中国仓鼠(Cricetulus griseus)卵巢CHO-S细胞制备1株PCV2d Cap蛋白重组猪源化嵌合抗体r1B3swine稳定表达细胞系。抗体功能验证和Western blot结果显示，r1B3swine与PCV2d病毒结合反应良好，并且不与抗鼠二抗发生交叉反应。综上所述，本研究构建的猪源化抗PCV2d Cap蛋白的单克隆抗体r1B3swine的真核表达体系，为研究PCV2d Cap蛋白的结构、功能及为PCV2研发新的治疗和诊断制剂提供物质基础。

关键词：猪圆环病毒(PCV) 基因工程抗体猪源化改造真核表达

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糖基转移酶WekM参与禽致病性大肠杆菌脂多糖合成和环境适应

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微生物学报 2024年第8期64卷 2702-2712页

作者：曹启予高宇杰张晓荟陈歆丹罗平翟瑞东韩先干宋厚辉程昌勇于纪棉韩月浙江农林大学动物科技学院·动物医学院、浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室、动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心、浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地、中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 中国农业科学院上海兽医研究所上海201199 宁波卫生职业技术学院浙江宁波315100

【目的】研究O_(1)血清型禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)的O抗原糖基转移酶WekM在脂多糖合成和环境适应中的作用。【方法】采用Red同源重组方法,构建APEC O_(1)菌株的wekM基因缺失株,并构建wekM回补株。随... 详细信息

【目的】研究O_(1)血清型禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)的O抗原糖基转移酶WekM在脂多糖合成和环境适应中的作用。【方法】采用Red同源重组方法,构建APEC O_(1)菌株的wekM基因缺失株,并构建wekM回补株。随后分析wekM基因对APEC O_(1)菌株生长和运动能力的影响,通过银染和Western blotting鉴定细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)图谱以及与兔抗O_(1)血清的反应能力,通过实时荧光定量PCR测定细菌鞭毛相关基因转录水平,使用溴化乙锭测定细菌细胞膜通透性。最后,通过药敏试验检测细菌对环丙沙星等抗生素敏感性。【结果】PCR验证及DNA测序结果表明ΔwekM缺失株和回补株构建成功。银染鉴定ΔwekM缺失株较野生株LPS图谱不完整,部分O-抗原条带缺失;同时,Western blotting检测未见到ΔwekM与O因子血清的反应条带,这说明O-抗原糖基转移酶wekM基因缺失后影响LPS合成。生长运动能力分析显示,ΔwekM缺失株的运动能力较野生株显著减弱,生长速率与野生株一致。实时荧光定量PCR检测发现,ΔwekM缺失株的flgC等鞭毛相关基因转录水平降低,表明wekM基因影响细菌鞭毛的合成。此外,ΔwekM的细胞膜通透性较野生株显著增加(P<0.01),药敏结果也显示,ΔwekM缺失株较野生株对多黏菌素等7种抗生素敏感性增加,这说明wekM缺失后细菌细胞膜理化性质改变,适应环境的能力降低。【结论】本研究揭示了禽致病性大肠杆菌糖基转移酶wekM基因缺失导致细菌LPS完整性受损,运动能力降低,鞭毛合成受阻,鞭毛形成基因转录水平下降,细胞膜通透性增强,对抗生素敏感性增加。这些结果为解析wekM基因的功能奠定了研究基础,有助于深入了解禽致病性大肠杆菌O_(1)的环境适应机制。

关键词：禽致病性大肠杆菌O_(1) 脂多糖 O-抗原糖基转移酶环境适应

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