检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2023年第6期45卷 568-574页

作者：罗平高宇杰张晓荟张宁韩先干宋厚辉韩月程昌勇浙江农林大学动物科技学院/动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 中国农业科学院上海兽医研究所上海闵行201199

为研究O抗原侧链岩藻糖合成酶基因fdtACB对禽致病性大肠杆菌(APEC)生物学特性的影响,本研究以O_(2)血清型APEC DE17为亲本株,通过Red同源重组构建fdtACB基因缺失株与回补株,经PCR及测序鉴定确认缺失株ΔfdtACB和回补株CΔfdtACB均正确... 详细信息

为研究O抗原侧链岩藻糖合成酶基因fdtACB对禽致病性大肠杆菌(APEC)生物学特性的影响,本研究以O_(2)血清型APEC DE17为亲本株,通过Red同源重组构建fdtACB基因缺失株与回补株,经PCR及测序鉴定确认缺失株ΔfdtACB和回补株CΔfdtACB均正确构建。采用硝酸银染色法鉴定细菌脂多糖(LPS)图谱,采用western blot鉴定缺失株与O_(2)血清型O因子血清的反应性。硝酸银染色法结果显示,ΔfdtACB缺失株未产生与野生株一样完整的LPS图谱,表现为部分O抗原梯状条带缺失和移位;western blot结果显示,ΔfdtACB与大肠杆菌O_(2)血清型O因子血清无反应条带。各菌株培养16 h后每隔1 h测定OD600nm值,绘制生长曲线;于半固体培养基培养各菌株,通过测量细菌运动圈直径分析各菌株的运动能力,通过结晶紫染色法检测各菌株生物被膜(BF)形成能力,结果显示,ΔfdtACB缺失株、野生株和回补株间生长速率无明显差异(P>0.05);与野生株相比,ΔfdtACB缺失株的运动能力显著降低(P<0.01),BF形成能力显著升高(P<0.01)。以上结果表明fdtACB影响细菌O抗原完整性、运动及BF的形成。将各菌株分别感染DF-1细胞后通过细菌计数分析APEC对细胞的黏附及侵袭力,结果显示,ΔfdtACB对DF-1细胞的黏附及侵袭力均较野生株极显著降低(P<0.01)。以不同浓度各菌株腹腔注射感染大蜡螟后,根据5 d内各组大蜡螟死亡数量计算各菌株LD50,结果显示,除高剂量各菌株外,其它剂量各菌株注射后,ΔfdtACB组大蜡螟死亡数较其它组少,经计算野生株LD50为1.85×10^(2) cfu/mL,缺失株LD50为9.16×10^(2) cfu/mL,回补株LD50为8.0×10^(1) cfu/mL,缺失株致病力比野生株降低约5倍,表明fdtACB影响细菌感染性和致病力。综上所述,本研究首次证实大肠杆菌岩藻糖合成酶FdtACB参与O_(2)型APEC O的抗原合成,在细菌运动、BF形成和感染过程中发挥作用,该结果对掌握APEC O抗原侧链的生物学功能具有重要意义。

关键词：禽致病性大肠杆菌脂多糖(LPS) O抗原侧链岩藻糖糖基合成酶

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丁酸梭菌对肉鸡屠宰性能、肌肉品质和抗氧化功能的影响

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动物营养学报 2021年第6期33卷 3250-3258页

作者：黄翠翠周若钰沈媛媛张瑞强杨彩梅浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室临安311300

本试验旨在研究丁酸梭菌对肉鸡屠宰性能、肌肉品质和抗氧化功能的影响。选取360只健康的1日龄爱拔益加雄性肉仔鸡,随机分为3组,分别为对照组、抗生素组和丁酸梭菌组,每组8个重复,每个重复15只鸡。对照组饲喂无抗生素基础饲粮,抗生素组... 详细信息

本试验旨在研究丁酸梭菌对肉鸡屠宰性能、肌肉品质和抗氧化功能的影响。选取360只健康的1日龄爱拔益加雄性肉仔鸡,随机分为3组,分别为对照组、抗生素组和丁酸梭菌组,每组8个重复,每个重复15只鸡。对照组饲喂无抗生素基础饲粮,抗生素组饲喂基础饲粮+75 mg/kg金霉素,丁酸梭菌组饲喂基础饲粮+500 mg/kg丁酸梭菌(活菌数1×109 CFU/g)。试验期为42 d。结果表明:1)与对照组相比,丁酸梭菌组肉鸡末重、屠宰率和全净膛率显著提高(P<0.05),胸肌24 h的红度值和pH显著提高(P<0.05),胸肌粗蛋白质和粗脂肪含量显著提高(P<0.05),胸肌24 h的亮度值和蒸煮损失显著降低(P<0.05),胸肌总抗氧化能力以及总超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性显著提高(P<0.05),胸肌丙二醛含量显著降低(P<0.05),胸肌核因子E2相关因子2(Nrf2)、谷胱甘肽过氧化物酶1、超氧化物歧化酶1和血红素氧合酶1的mRNA相对表达量显著提高(P<0.05)。2)与抗生素组相比,丁酸梭菌组肉鸡胸肌肉蒸煮损失显著降低(P<0.05)。综上所述,饲粮添加丁酸梭菌可提高肉鸡末重,改善屠宰性能和胸肌肉品质,激活Nrf2信号通路相关基因的表达,增强肌肉抗氧化功能,表明丁酸梭菌可作为抗生素替代物应用于肉鸡饲粮。

关键词：肉鸡丁酸梭菌屠宰性能肉品质抗氧化功能核因子E2相关因子2

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副猪嗜血杆菌的多重耐药性及氨基糖苷类耐药基因分子流行病学分析

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中国动物传染病学报 2024年第6期32卷 145-151页

作者：吴瑗董婉玉王馨雨刘雅琦周莹珊杜静于浩然仲伟宋厚辉张聚民王晓杜金华职业技术大学农学院金华321007 浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地中澳动物健康大数据分析联合实验室杭州311300 杭州市临安区畜牧农机发展中心杭州311300

为了解规模化猪场副猪嗜血杆菌(HPS)的耐药基因流行情况,对来自国内52株HPS分离株开展了耐药基因检测、药敏试验、氨基糖苷类耐药基因Aph(3')-Ia和StrB氨基酸序列的比对及分析。结果表明:HPS分离株含有多重耐药基因(β-内酰胺类,氨... 详细信息

为了解规模化猪场副猪嗜血杆菌(HPS)的耐药基因流行情况,对来自国内52株HPS分离株开展了耐药基因检测、药敏试验、氨基糖苷类耐药基因Aph(3')-Ia和StrB氨基酸序列的比对及分析。结果表明:HPS分离株含有多重耐药基因(β-内酰胺类,氨基糖苷类,磺胺类药和Ⅰ类整合子),其中bla-_(TEM)、Aph(3')-Ia、3'CS和Int1基因检出率为100%;HPS分离菌株对硫酸链霉素的耐药率高达75%。HPS分离菌株Aph(3')-Ia编码的部分氨基酸与除了已知HPS之外的6种细菌的氨基酸序列相同;HPS分离株JX-6 StrB基因编码的氨基酸序列与其他细菌差别较大,该菌株第18号位点StrB基因的ATP结合位点也发生了突变。本研究表明规模化养猪场HPS氨基糖苷类耐药基因Aph(3')-Ia和StrB携带率高,细菌耐药性的差异和耐药基因的改变可能是由一些特定的位点突变所导致。本研究为规模化养殖场HPS耐药基因变化规律研究和相关疾病的防控奠定了基础。

关键词：副猪嗜血杆菌耐药基因氨基糖苷类耐药性分子流行病学

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江浙皖部分地区副鸡禽杆菌分离鉴定及生物学特性研究

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动物医学进展 2024年第5期45卷 39-45页

作者：吴娴毕海洋张燕茹李向臣何玉龙舒建洪武永淑浙江理工大学生命科学与医药学院浙江杭州310018 浙江理工大学绍兴生物医药研究院浙江绍兴312366 浙江农林大学动物科技学院动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

为了解江浙皖地区鸡传染性鼻炎流行状况,对浙江、江苏和安徽部分地区疑似鸡传染性鼻炎的8个鸡场进行样品采集,对122份样品进行病原菌分离,对10株分离株进行形态学、卫星试验、PCR鉴定、生化鉴定和血清型鉴定等检测;利用分离株人工感染SP... 详细信息

为了解江浙皖地区鸡传染性鼻炎流行状况,对浙江、江苏和安徽部分地区疑似鸡传染性鼻炎的8个鸡场进行样品采集,对122份样品进行病原菌分离,对10株分离株进行形态学、卫星试验、PCR鉴定、生化鉴定和血清型鉴定等检测;利用分离株人工感染SPF鸡的动物回归试验,对攻毒后7 d和14 d的鸡只进行病理剖检和病理组织切片观察。结果表明,122份样品中副鸡禽杆菌阳性数为48个,阳性率为39.3%,8个养殖场的阳性率为36.8%~50.0%。10株副鸡禽杆菌分离菌,其中A型3株、B型4株、C型3株,致病率为60%~80%。表明不同血清型副鸡禽杆菌在江浙皖地区均有流行,具有一定的致病性,这为鸡传染性鼻炎三价疫苗研发和防控提供参考。

关键词：鸡传染性鼻炎副鸡禽杆菌分离鉴定

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2015年~2021年我国东部地区猪流行性腹泻病毒S1蛋白关键表位的变异分析

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中国预防兽医学报 2023年第9期45卷 968-972页

作者：程亚豪胡灵子刘雅琦周莹珊杜静周兴东王晓杜吴瑗董婉玉浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室/动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 金华职业技术学院农学院浙江金华321007

为了解2015年~2021年我国东部地区猪流行性腹泻病毒(PEDV)的流行特征和遗传变异规律,本研究利用RT-PCR扩增2015年~2017年11株分离自浙江地区PEDV流行株的S1基因序列,并与GenBank中我国东部地区(上海、江苏、山东、河南和安徽)的86株PED... 详细信息

为了解2015年~2021年我国东部地区猪流行性腹泻病毒(PEDV)的流行特征和遗传变异规律,本研究利用RT-PCR扩增2015年~2017年11株分离自浙江地区PEDV流行株的S1基因序列,并与GenBank中我国东部地区(上海、江苏、山东、河南和安徽)的86株PEDV流行株的S1基因序列通过MEGA 7.0软件比较分析S1基因的遗传进化关系,采用CLC Sequence Viewer 8软件分析比对S1蛋白氨基酸序列的变异。PEDV S1基因遗传进化分析结果显示,97株PEDV中有92%的流行株属于G2型,与疫苗株CV777同源性较低(90.4%~96.1%),山东地区2017年~2018年间的部分流行株与疫苗株CV777等属于G1型;G2型中,33%的流行株属于G2a型,67%的流行株属于G2b亚型,其中2019年~2021年的流行株有15%流行株属于G2a亚型,85%的流行株属于G2b亚型。S1蛋白关键表位的变异分析结果显示,与经典株CV777相比,中和表位COE(CO-26K equivalent epitope)发生8个氨基酸位点(A^(517)S、S^(523)G、V^(527)I、T^(549)S、G^(594)S、A^(605)E/D、L^(612)F/Y、I^(635)V)的突变,SS2区域无氨基酸变异,SS6发生1个氨基酸位点(Y^(766)S)的突变,2018年后出现新的突变位点(T^(636)I和S^(749)G)。不同地区S1蛋白关键表位的变异分析结果显示,aa501变异在河南地区(L^(501)P)和江苏地区(L^(501)W)存在明显的差异;aa536突变(F^(536)L)多集中于河南、山东地区的流行株,aa542突变(D^(542)E)集中于江苏、上海地区。本研究首次系统分析了我国东部地区PEDV流行株S1基因及其氨基酸的遗传变异规律,为我国该地区PEDV变异株疫苗选择、生物安全防控方案制定提供了参考依据。

关键词：猪流行性腹泻病毒 S1基因遗传变异序列分析

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单增李斯特菌DegU直接调控CtsR介导的温度适应

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中国兽医学报 2023年第5期43卷 986-992页

作者：金浩博徐加利郑晨煦邓思敏程昌勇江玲丽宋厚辉浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 宁波卫生职业技术学院浙江宁波315100

在食品加工过程中温和的热处理方式难以完全消灭耐热性强的食源性单增李斯特菌,该菌对食品安全构成显著风险。团队前期发现李斯特菌孤儿反应调节因子DegU与细菌的耐热应激密切相关,为进一步探索DegU参与温度适应调控的分子机制,本研究... 详细信息

在食品加工过程中温和的热处理方式难以完全消灭耐热性强的食源性单增李斯特菌,该菌对食品安全构成显著风险。团队前期发现李斯特菌孤儿反应调节因子DegU与细菌的耐热应激密切相关,为进一步探索DegU参与温度适应调控的分子机制,本研究以单增李斯特菌EGD-e为参考菌株,利用同源重组方法构建单增李斯特菌基因缺失株ΔdegU和回补株CΔdegU,在前期基础上挖掘DegU调控单增李斯特菌适应环境温度的相关分子机制。研究结果显示:荧光定量PCR试验发现单增李斯特菌缺失degU后导致基因ctsR(编码应激调节因子CtsR)的转录水平显著降低;凝胶迁移阻滞试验首次证明DegU能与基因ctsR的启动子区结合,表明DegU以直接方式调控ctsR。综上,本研究发现DegU通过直接调控应激调节因子CtsR的表达适应环境温度变化,为进一步深入理解单增李斯特菌等重要人兽共患病原菌适应环境应激过程中的调控机制奠定了研究基础,具有重要的公共卫生学意义。

关键词：单增李斯特菌 DegU 应激调节因子CtsR 温度适应

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单增李斯特菌感染并调控宿主丙酰辅酶A羧化酶α(PCCA)的研究

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中国预防兽医学报 2023年第8期45卷 787-793页

作者：魏思雨陈绵绵刘郁匆章先江玲丽孙静宋厚辉程昌勇浙江农林大学动物科技学院/动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 宁波卫生职业技术学院浙江宁波315100

为探究单增李斯特菌感染与宿主丙酰辅酶A羧化酶α(PCCA)表达的相互影响机制,本研究将单增李斯特菌野生株(LM-EGD-e)以MOI 200感染HeLa细胞5 h后,利用qRT-PCR检测感染LM-EGD-e后HeLa细胞中Pcca基因的转录水平变化,结果显示LM-EGD-e感染H... 详细信息

为探究单增李斯特菌感染与宿主丙酰辅酶A羧化酶α(PCCA)表达的相互影响机制,本研究将单增李斯特菌野生株(LM-EGD-e)以MOI 200感染HeLa细胞5 h后,利用qRT-PCR检测感染LM-EGD-e后HeLa细胞中Pcca基因的转录水平变化,结果显示LM-EGD-e感染HeLa细胞中Pcca基因的转录水平无明显变化(log2FC=-0.305);采用相应试剂盒分别提取感染后的HeLa细胞蛋白和线粒体蛋白,采用western blot检测PCCA蛋白表达变化,结果显示,LM-EGD-e感染后的HeLa细胞中,以及线粒体中PCCA蛋白表达水平均无显著变化(P>0.05)。PCR扩增Pcca基因后构建pCMV-N-HA-PCCA重组质粒,并经PCR和测序鉴定正确后转染HeLa细胞中过表达PCCA蛋白后,利用qRT-PCR检测HeLa细胞中Pcca基因的转录水平,收集细胞总蛋白采用western blot检测PCCA蛋白表达水平,结果显示,与转染空载体的细胞相比,转染重组质粒的HeLa细胞中Pcca基因的转录水平上调(log2FC=8.454),且细胞内PCCA蛋白表达量显著增加(P<0.001)。利用LM-EGD-e以MOI 200感染过表达PCCA蛋白的HeLa细胞,在感染后2 h、5 h和8 h分别收集感染细胞进行点样计数,结果显示,感染后各时间点PCCA蛋白过表达显著或极显著抑制LM-EGD-e的感染及其在胞内增殖的能力(P<0.05、P<0.001、P<0.001)。综上所述,单增李斯特菌感染对宿主细胞内PCCA蛋白的表达无显著影响,但在宿主细胞中过表达PCCA会降低单增李斯特菌的胞内增殖能力。本研究首次探究了单增李斯特菌与宿主PCCA蛋白的调控关系,为深入探究单增李斯特菌等重要胞内菌的感染与宿主的内在联系机制,以及防控该病原感染奠定了基础。

关键词：单增李斯特菌丙酰辅酶A羧化酶α(PCCA) 病原宿主调控关系

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猪圆环病毒2型和3型双重荧光定量PCR检测方法的建立

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浙江农业学报 2022年第3期34卷 457-463页

作者：牟泓晔周小杰杨永春王晓杜周莹珊宋厚辉浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心浙江杭州311300 浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

为建立一种同时检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的方法,参照GenBank上已登录的PCV2 Cap基因和PCV3 Cap基因的保守序列,设计特异性引物和TaqMan探针,通过优化反应条件,建立了同时检测PCV2和PCV3的双重荧光定量PCR检测方法... 详细信息

为建立一种同时检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的方法,参照GenBank上已登录的PCV2 Cap基因和PCV3 Cap基因的保守序列,设计特异性引物和TaqMan探针,通过优化反应条件,建立了同时检测PCV2和PCV3的双重荧光定量PCR检测方法,并对其进行特异性、灵敏性、可重复性检验。特异性试验结果显示,该方法除了对PCV2和PCV3的检测结果为阳性外,对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)检测均呈阴性,无交叉反应,特异性较强。敏感性试验结果显示,该检测方法同时检测猪圆环病毒2型和3型质粒标准品的最低检测极限均可达到10拷贝·μL^(-1),敏感性较高;该方法组内和组间的变异系数均小于2%,重复性较好。采集浙江省181份猪肉及全血样品,分别利用本文建立的检测方法与标准普通荧光PCR检测方法进行检测,结果显示,PCV2的阳性率为50.83%(92/181),PCV3的阳性率为37.57%(68/181),PCV2和PCV3共感染率为12.15%(22/181);而普通荧光PCR的上述检测结果分别为50.28%(91/181)、36.46%(66/181),共感染率为11.60%(21/181),两种方法对PCV2和PCV3的检测符合率分别可达98.91%和97.06%,对PCV2和PCV3混合感染符合率为95.45%。综上所述,本试验建立的双重荧光定量PCR检测方法可同时对PCV2和PCV3进行快速鉴别检测,可用于病原学检测和流行病学调查等。

关键词：猪圆环病毒2型猪圆环病毒3型 TaqMan探针双重荧光定量PCR

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大肠杆菌P88噬菌体gp52和gp53基因对其裂解活性和宿主谱形成影响的研究

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中国预防兽医学报 2023年第10期45卷 994-1000页

作者：费定润吴柔霖程丽丽鲁珂蓥庄楠茜孙静程昌勇陈绵绵宋厚辉浙江农林大学动物科技学院/动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 台州市椒江区农业农村和水利局浙江台州318000

为探究大肠杆菌溶原性噬菌体P88中非结构与功能基因gp52和gp53对其裂解活性和宿主谱形成的影响,本研究在P88宿主细菌K88基因组中对其进行基因工程操作,然后诱导出相应噬菌体进行功能研究。首先在大肠杆菌Red同源重组质粒p KD46基础上,融... 详细信息

为探究大肠杆菌溶原性噬菌体P88中非结构与功能基因gp52和gp53对其裂解活性和宿主谱形成的影响,本研究在P88宿主细菌K88基因组中对其进行基因工程操作,然后诱导出相应噬菌体进行功能研究。首先在大肠杆菌Red同源重组质粒p KD46基础上,融合p ST98-AS质粒的四环素抗性基因和I-Sce I核酸内切酶基因,构建缺失质粒p WRG99。利用质粒p WRG99分别构建大肠杆菌K88的gp52和gp53基因缺失突变株(Δgp52和Δgp53)并经PCR和测序鉴定。利用丝裂霉素C诱导Δgp52和Δgp53,采用双层平板法检测噬菌体的裂解活性,结果显示,Δgp52和Δgp53的诱导液可以在大肠杆菌DE048为宿主菌的平皿上形成清晰的噬菌斑,表明Δgp52和Δgp53能诱导出可以感染DE048的噬菌体(将该噬菌体命名为P88-52和P88-53),并且gp52和gp53基因缺失均不影响噬菌体P88的形成和裂解活性。将P88-52和P88-53纯化并经电镜观察,结果显示,P88-52和P88-53与野生株P88形态相似,具有P2-like噬菌体典型的肌尾和短尾丝特征,表明gp52和gp53基因缺失均不影响P88噬菌体颗粒的形态。利用P88的宿主菌对P88-52和P88-53进行宿主谱分析,结果显示,P88-52和P88-53在DE048为宿主菌的平皿上均可以形成清晰的噬菌斑,在MC1061、DH5α和BL21为宿主菌的平皿上均不能形成噬菌斑,与噬菌体P88宿主谱相同,表明gp52和gp53基因缺失均不影响P88噬菌体的宿主谱。综上所述,在宿主菌K88基因组的基础上缺失gp52和gp53基因后,诱导出的P88突变噬菌体的裂解活性和宿主谱均不受影响。本研究通过在宿主菌中对前噬菌体基因编辑来研究溶原性噬菌体的基因功能,为其他溶原性噬菌体基因功能的研究提供了参考依据。

关键词：大肠杆菌前噬菌体裂解活性宿主谱

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基于基因缺失减毒单增李斯特菌的小鼠宫颈癌治疗性疫苗效果评估

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农业生物技术学报 2022年第10期30卷 1987-1996页

作者：汪枫婷孙静刘晨程茵蒋昕祝艺然卫芳芳章先宋厚辉程昌勇浙江农林大学动物科技学院.动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室

减毒单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)作为一种安全高效的异源抗原递呈载体可用于肿瘤免疫治疗。缺失重要毒力基因是目前较为成熟的李斯特菌减毒策略。基因缺失减毒菌株ΔactAΔinlB (简称ΔAB)是其中一种较为成熟、安全的李斯特... 详细信息

减毒单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)作为一种安全高效的异源抗原递呈载体可用于肿瘤免疫治疗。缺失重要毒力基因是目前较为成熟的李斯特菌减毒策略。基因缺失减毒菌株ΔactAΔinlB (简称ΔAB)是其中一种较为成熟、安全的李斯特菌肿瘤免疫治疗疫苗载体。本研究旨在ΔAB基础上，利用肿瘤相关抗原与重要毒力因子融合表达的创新手段，构建一种能高效表达和递呈宫颈癌相关抗原E7的肿瘤疫苗载体(ΔAB-E7)，以肿瘤生物学方法评估ΔAB-E7在小鼠(Mus musculus)宫颈癌模型中的免疫治疗效果。本研究利用细菌分子遗传操作技术构建ΔAB，在ΔAB基础上构建李斯特菌溶血素O (Listeriolysin O,LLO)和肿瘤抗原E7融合表达的ΔAB-E7；通过Western blot验证ΔAB-E7菌株中的E7抗原能否与LLO融合表达；利用细菌体外培养以及吞噬细胞内增殖实验研究体外生长能力，细胞内复制和增殖能力；通过小鼠脏器内细菌增殖实验评估ΔAB及ΔAB-E7在小鼠体内的增殖能力；构建小鼠宫颈癌模型，通过记录肿瘤模型在小鼠体内的生长趋势评价ΔAB-E7的免疫治疗效果。结果显示，ΔAB-E7菌株的E7抗原能与LLO融合表达并正常分泌；ΔAB及ΔAB-E7菌株在体外生长能力与野生型无显著差异，并且在吞噬细胞中保持稳定的增殖能力；ΔAB及ΔAB-E7感染小鼠后致病力显著下降，在小鼠脏器中的增殖能力显著降低，表明其毒力减弱，在小鼠感染模型中具有安全性；在小鼠宫颈癌模型中，ΔAB-E7免疫治疗组小鼠肿瘤的生长趋势明显较对照组更慢，表明ΔAB-E7抑制肿瘤生长，展现了良好的免疫治疗效果。本研究制备了一种基于减毒李斯特菌的小鼠宫颈癌治疗载体疫苗，为人类宫颈癌及其他恶性肿瘤的免疫治疗提供技术支持。

关键词：减毒单增李斯特菌宫颈癌免疫疗法疫苗载体 ΔAB-E7

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