检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学报 2022年第12期62卷 5043-5055页

作者：姚宁鲁重王菲钟孝俊杨梦华浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室浙江杭州311300

【目的】探究双组分系统(two-component system,TCS)EnvZ/OmpR对副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)抵抗碱胁迫的作用机制。【方法】用SMART在线工具(https://***/)鉴定出副溶血弧菌基因组中的双组分系统EnvZ/OmpR,再利用同源重组技术将envZ和ompR基因分别进行缺失,构建相应回补株,比较各菌株的生长曲线来检测相应基因对细菌适应高渗透胁迫和碱胁迫的作用,并结合qRT-PCR及荧光检测系统,筛选参与EnvZ/OmpR抵抗碱胁迫的下游靶基因,鉴定该双组分系统对下游基因的调控机制。【结果】在副溶血弧菌基因组中鉴定出vp0155/vp0154编码EnvZ/OmpR双组分系统同源蛋白。ΔompR菌株在高渗透胁迫和碱胁迫中的生长能力明显弱于野生株,而回补株CΔompR、ΔenvZ和CΔenvZ菌株生长能力与野生株类似。在ΔompR菌株中,孔道蛋白基因vp1218、vp0493、vpa1745、vpa0085与vpa1308的转录水平均明显低于野生株,并且发现这些孔道蛋白基因缺失株(Δvpa1308除外)在碱性环境中生长能力均明显弱于野生株。OmpR蛋白可直接抑制调控因子AphB基因转录,而ΔaphB菌株在碱胁迫中的生长能力明显强于野生株。此外,AphB蛋白可直接抑制孔道蛋白基因vp0493和vpa0085转录。【结论】双组分系统EnvZ/OmpR促进副溶血弧菌抵抗碱胁迫,其中OmpR蛋白可通过抑制调控因子AphB的表达,以促进部分孔道蛋白的表达,从而增强副溶血弧菌抵抗碱胁迫的能力。

关键词：副溶血弧菌双组分系统 EnvZ/OmpR 碱胁迫

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异荭草素的生物学功能研究进展

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中国畜牧兽医 2025年第4期52卷 1579-1589页

作者：罗通旺金研盛燚凡王书杰宋厚辉邵春艳浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地中澳动物健康大数据分析联合实验室杭州311300

异荭草素又称异荭草苷,是一种天然的黄酮类化合物,具有广泛的生物学活性和药理作用,主要存在于荞麦、麻花艽、人字草、千屈草和荭草等植物。已有的研究表明,异荭草素具有改善骨质疏松、治疗糖尿病、抗抑郁、抗肿瘤以及减轻脏器损伤等多... 详细信息

异荭草素又称异荭草苷,是一种天然的黄酮类化合物,具有广泛的生物学活性和药理作用,主要存在于荞麦、麻花艽、人字草、千屈草和荭草等植物。已有的研究表明,异荭草素具有改善骨质疏松、治疗糖尿病、抗抑郁、抗肿瘤以及减轻脏器损伤等多种功效,而其作用机制主要是通过抗氧化应激、抗炎和调控细胞凋亡来实现,作用过程中所涉及的关键蛋白包括核因子E2相关因子2(Nrf2)、核因子激活的B细胞κ-轻链增强复合物(NF-κB)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、胞内磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、血红素氧合酶-1(HO-1)等。此外,异荭草素的研究目前主要以实验鼠和相关细胞系为对象进行急性毒性和亚急性毒性试验,缺乏畜禽等其他动物或细胞的基础试验,这在一定程度上影响了异荭草素的产品开发和临床应用。作者综述了异荭草素生物学功能的研究进展,并对其在临床上的应用提出展望,以期为异荭草素生物学活性的进一步研究以及拓展其在临床上的应用提供新思路和理论支撑。

关键词：异荭草素抗氧化抗炎细胞凋亡调控

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丁酸钠和吲哚-3-丙酸共处理对Caco-2细胞紧密连接以及炎症因子的影响

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畜牧兽医学报 2024年第11期55卷 5124-5134页

作者：王轲信吴娴龚海洲方巧玉李向臣张亚南浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室杭州311300 浙江大学动物科学学院动物分子营养学教育部重点实验室杭州310058 扬州大学动物科学与技术学院扬州225009

本研究以人克隆结肠腺癌Caco-2细胞系为模型,旨在探究丁酸钠(sodium butyrate,NaB)和吲哚-3-丙酸(indole-3-propionic acid,IPA)共处理对Caco-2细胞紧密连接和炎症因子的影响。使用0.4 mmol·L^(-1)NaB和0.1 mmol·L^(-1)IPA分别和共处理Caco-2细胞24 h,检测细胞跨膜电阻(TEER)值、细胞紧密连接蛋白表达、炎症因子的基因表达和细胞上清液中炎症因子的分泌水平。结果发现,与对照组相比,NaB和IPA共处理组均显著提高TEER值(P<0.01),而NaB和IPA单独处理组TEER值无显著变化(P>0.05)。qPCR和蛋白免疫印迹结果表明,与对照组相比,共处理组显著下调了Claudin-2的mRNA相对表达量(P<0.01);与NaB单独处理组相比,共处理组显著上调了Claudin-1的mRNA相对表达量(P<0.05),并且极显著促进了Claudin-1、ZO-1和Occludin蛋白的表达(P<0.001);与IPA单独处理组相比,共处理组显著上调了ZO-1的mRNA相对表达量(P<0.05),并极显著提高了Claudin-1和ZO-1蛋白表达量(P<0.001)。在炎症因子方面,与对照组相比,NaB和IPA共处理组显著下调炎症因子IL-6、IL^(-1)β、IL-8及TNF-α的mRNA相对表达量(P<0.05)。ELISA结果显示,与对照组相比,共处理极显著降低了细胞上清液中IL-6、IL^(-1)β、IL-8及TNF-α的分泌量(P<0.001)。本研究表明,相比于NaB或IPA单独处理,NaB和IPA共处理可增加细胞跨膜电阻值,促进细胞间紧密连接蛋白表达并且降低促炎因子的分泌,降低了肠道通透性。综上,NaB和IPA共处理在增强上皮细胞屏障功能以及降低炎症反应方面具有更强的作用。

关键词：丁酸钠吲哚-3-丙酸紧密连接炎症因子 Caco-2细胞

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利用CRISPRi技术敲低海分枝杆菌PPE13基因

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中国兽医学报 2023年第8期43卷 1670-1676页

作者：王垚垚毕斯琪陈标宋厚辉杨杨浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室浙江杭州311300

为研究分枝杆菌PPE13基因在宿主细胞的生物功能,本试验利用成簇的规律间隔的短回文重复序列干扰(clustered regularly interspaced short palindromic repeat interference,CRISPRi)构建海分枝杆菌PPE13诱导型敲低菌株。CRISPRi主要包括表达失活的Cas9蛋白(dead cas9,dCas9)和特异性单向导RNA(single guide RNA,sgRNA),通过形成复合体特异性识别相应DNA序列并抑制目的基因的转录。用无水四环素(anhydrotetracycline,ATC)诱导海分枝杆菌PPE13诱导型敲低菌株,提取细菌RNA,利用定量聚合酶链式反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)技术检测dCas9、PPE13基因的表达情况,观察细菌在不同时间D600 nm的变化,分析诱导剂质量浓度和目的基因转录水平之间的关系。使用PPE13敲低菌株感染巨噬细胞并检测胞内菌的存活情况。结果表明,在ATC诱导后,dCas9表达水平显著增高。针对PPE13基因设计的4个sgRNA中,sgRNA1对PPE13基因转录的抑制作用最为明显,为70%~90%。生长曲线结果显示,敲低PPE13菌株在48 h内D600 nm无明显变化。诱导剂的质量浓度越高,对PPE13基因的转录水平的抑制作用越强。敲低PPE13可降低细菌在细胞内的增殖能力。本研究构建了海分枝杆菌PPE13敲低菌株,为深入研究分枝杆菌PPE13感染宿主细胞的致病机制奠定了基础。

关键词： CRISPRi 海分枝杆菌 PPE13 敲低

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冠状病毒基因组非编码区调控病毒复制机制研究进展

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中国兽医学报 2025年第2期45卷 379-388,396页

作者：张静苗何海健杨帆吴雨芯周莹珊董婉玉王晓杜浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室/动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 金华职业技术大学农学院浙江金华321017

冠状病毒是迄今已知的基因组最大的RNA病毒,其中猪冠状病毒是引起仔猪急剧腹泻的重要病原体,具有高度变异特性,防控难度较高,每年给我国养猪业带来严重的经济损失。对冠状病毒RNA合成机制的解析有助于了解冠状病毒的遗传变异规律和筛选... 详细信息

冠状病毒是迄今已知的基因组最大的RNA病毒,其中猪冠状病毒是引起仔猪急剧腹泻的重要病原体,具有高度变异特性,防控难度较高,每年给我国养猪业带来严重的经济损失。对冠状病毒RNA合成机制的解析有助于了解冠状病毒的遗传变异规律和筛选抗病毒药物,目前研究较深入的主要是鼠冠状病毒(murine coronavirus, MHV)和2型人严重呼吸道综合征冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)。为探究猪冠状病毒的复制机制,本研究以MHV和SARS-CoV-2等冠状病毒为参考,总结了其与猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)、传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus, TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(porcine deltacoronavirus, PDCoV)和猪急性腹泻综合征冠状病毒(swine acute diarrhea syndrome coronavirus, SADS-CoV)等猪冠状病毒非编码区调控病毒复制的机制。重点分析5′非编码区(5′untranslated region, 5′UTR)的保守基序及二级结构在病毒复制中的作用、3′UTR的保守结构如何调控病毒复制、病毒非编码区与宿主蛋白的相互作用调控病毒复制以及病毒非编码区变异特征等内容,为针对该类靶点的抗病毒药物和高病毒滴度疫苗候选株的开发提供理论基础。

关键词：冠状病毒非编码区病毒复制调控元件

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猪源携带tet(X4)基因大肠杆菌的消毒剂抗性分析

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畜牧兽医学报 2024年第12期55卷 5880-5885页

作者：潘柄霖王思楠姚国忠翟瑞东宋厚辉程昌勇雷蕾浙江农林大学动物科技学院·动物医学院、浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室、动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室、动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地、中澳动物健康大数据分析联合实验室杭州311300 杭州市余杭区农业农村局杭州310023

旨在分析猪源粪便样本中携带tet(X4)基因大肠杆菌的分布及其耐药性、消毒剂抗性和消毒剂抗性基因携带情况。采集浙江省杭州、诸暨、舟山生猪养殖场猪粪便样本共计440份,通过PCR检测tet(X4)基因、消毒剂基因和Enterobacterial repetitive... 详细信息

旨在分析猪源粪便样本中携带tet(X4)基因大肠杆菌的分布及其耐药性、消毒剂抗性和消毒剂抗性基因携带情况。采集浙江省杭州、诸暨、舟山生猪养殖场猪粪便样本共计440份,通过PCR检测tet(X4)基因、消毒剂基因和Enterobacterial repetitive intergenic consensus(ERIC)分型;通过16S rRNA序列鉴定细菌种属,采用微量肉汤稀释法测试菌株的耐药表型和消毒剂抗性表型。结果显示,3个地区共分离到携带tet(X4)基因的大肠杆菌117株,不同地区的tet(X4)大肠杆菌分离率为24.0%~29.5%。所有菌株对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、氟苯尼考、替加环素耐药率均为100%,但均对黏菌素和美罗培南敏感。菌株对次氯酸钠、过硫酸氢钾的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)值较高,均为消毒剂工作浓度的1/2。与ATCC 25922相比,仅少量菌株对过氧化氢等5种消毒剂的MIC值高于标准菌株,但92.3%的菌株对苯扎溴铵的MIC值高于标准菌株。菌株所携带的消毒剂抗性基因以sugE(c)、qacF和qacEΔ1最常见,携带率分别为100%、25.6%和11.1%。ERIC分型显示117株菌株主要分为9个类群,呈现多样性。综上,携带tet(X4)基因的大肠杆菌主要优势类群在浙江省杭州、诸暨、舟山地区均有分布且均呈现多重耐药性,菌株有消毒剂抗性基因检出但对所试消毒剂的工作浓度均不耐受,养殖场可根据消毒效果选用消毒剂阻断场内多重耐药菌的传播。

关键词： tet(X4) 大肠杆菌耐药性消毒剂抗性

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单增李斯特菌LPXTG蛋白Lmo0880在感染致病中的作用

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微生物学报 2024年第3期64卷 893-906页

作者：林柯辰李豪杰赵秀玲周思廖俊慧王子念金戈旋朱富鑫徐加利孙静宋厚辉邓思敏程昌勇浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 宁波检验检疫科学技术研究院宁波海关技术中心浙江宁波315000

【目的】通过构建单核细胞增生李斯特菌(单增李斯特菌)LPXTG蛋白Lmo0880的基因缺失菌株和回补菌株,探究Lmo0880在细菌生长、细胞感染和宿主感染等方面发挥的作用。【方法】利用同源重组原理构建lmo0880的基因缺失株及回补株,比较野生株... 详细信息

【目的】通过构建单核细胞增生李斯特菌(单增李斯特菌)LPXTG蛋白Lmo0880的基因缺失菌株和回补菌株,探究Lmo0880在细菌生长、细胞感染和宿主感染等方面发挥的作用。【方法】利用同源重组原理构建lmo0880的基因缺失株及回补株,比较野生株、缺失株和回补株在生长能力、细胞黏附与侵袭和胞内增殖能力等方面的差异,从而鉴定Lmo0880在单增李斯特菌感染宿主中的作用。【结果】缺失lmo0880基因后,单增李斯特菌在生长能力上无明显变化;对细胞的黏附能力无显著差异,但对细胞侵袭能力、胞内增殖能力、小鼠致病力和小鼠组织定殖能力显著降低。【结论】本研究阐明了单增李斯特菌LPXTG蛋白Lmo0880在细胞侵袭、胞内增殖和组织定殖等方面发挥的重要作用。

关键词：单增李斯特菌 LPXTG蛋白Lmo0880 宿主感染

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葡萄糖苷转运蛋白Lmo0738介导单增李斯特菌毒力的作用研究

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微生物学报 2024年第8期64卷 2671-2683页

作者：沈云勤王建峰应煜翁艳岚郝云黄丽英韩月孙静赵秀玲宋厚辉徐加利程昌勇浙江农林大学动物科技学院·动物医学院、浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室、动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心、浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地、中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 宁波检验检疫科学技术研究院宁波海关技术中心浙江宁波315100

【目的】以单增李斯特菌葡萄糖苷转运蛋白Lmo0738为研究对象,研究其介导细菌毒力发挥的生物学作用。【方法】通过细菌同源重组技术构建lmo0738基因缺失株和回补株,研究它们在生长、溶血、细胞黏附与侵袭以及胞间迁移等方面与野生株的差... 详细信息

【目的】以单增李斯特菌葡萄糖苷转运蛋白Lmo0738为研究对象,研究其介导细菌毒力发挥的生物学作用。【方法】通过细菌同源重组技术构建lmo0738基因缺失株和回补株,研究它们在生长、溶血、细胞黏附与侵袭以及胞间迁移等方面与野生株的差异。同时,采用荧光定量PCR和Western blotting方法检测Δlmo0738毒力相关基因的转录水平和毒力相关蛋白的表达情况。【结果】缺失lmo0738后,李斯特菌体外生长能力、溶血能力、黏附和侵袭能力以及胞间迁移能力均显著减弱,溶血素O(listeriolysin O,LLO)蛋白毒力表达水平和关键毒力基因转录水平均显著降低。【结论】本研究证实缺失lmo0738能够降低单增李斯特菌毒力,为完善包括单增李斯特菌在内的重要食源性病原菌磷酸转移酶系统(phosphotransferase system,PTS)糖分解代谢及感染机制奠定了关键基础。

关键词：单增李斯特菌葡萄糖苷转运蛋白毒力

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细胞焦亡在动物传染性疾病中的研究进展

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中国兽医学报 2024年第9期44卷 2072-2080页

作者：张儒新梁慧美曾欢郭宸戚景怡潘嘉睿吴贝宁陈启益宋厚辉王巍赵菁华浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室/动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

细胞焦亡(pyroptosis)是由病原体入侵触发的炎性细胞程序性死亡,依赖于Caspase激活,通过经典焦亡和非经典焦亡途径实现。细胞焦亡与微生物感染引起的多种动物传染病的发生发展有关,微生物侵入机体后,细胞受到病理相关分子模式刺激,引起... 详细信息

细胞焦亡(pyroptosis)是由病原体入侵触发的炎性细胞程序性死亡,依赖于Caspase激活,通过经典焦亡和非经典焦亡途径实现。细胞焦亡与微生物感染引起的多种动物传染病的发生发展有关,微生物侵入机体后,细胞受到病理相关分子模式刺激,引起强烈的免疫反应,刺激炎症信号通路,继而激活炎性小体,引发焦亡。免疫系统已经进化出多种机制来抵抗微生物感染和调节炎症反应。先天免疫系统通过识别病原体中的微生物分子,并通过产生炎性小体和激活细胞焦亡来进行快速反应,有助于清除病原体防止感染,维持机体正常运行。充分深入研究细胞焦亡在动物传染性疾病中的致病机制及免疫逃逸机制,必将为动物传染性疾病提供新的治疗方向。

关键词：细胞焦亡炎性小体动物传染病分子机制

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镉通过Nrf2/HO-1通路诱导猪肾PK-15细胞铁死亡

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中国兽医学报 2024年第9期44卷 1992-1998页

作者：宋圣哲罗通旺沈灵俊吴亚王书杰郁孝强宋厚辉邵春艳浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

镉(Cd)是非必需且难降解的重金属元素之一,镉蓄积可导致肾损伤。本研究旨在揭示镉暴露诱导猪肾PK-15细胞铁死亡的作用机制。首先,CCK-8法检测梯度浓度氯化镉(CdCl_(2))对PK-15细胞活力的影响,以筛选出合适的工作浓度。其次,用10μmol/L ... 详细信息

镉(Cd)是非必需且难降解的重金属元素之一,镉蓄积可导致肾损伤。本研究旨在揭示镉暴露诱导猪肾PK-15细胞铁死亡的作用机制。首先,CCK-8法检测梯度浓度氯化镉(CdCl_(2))对PK-15细胞活力的影响,以筛选出合适的工作浓度。其次,用10μmol/L CdCl_(2)处理PK-15细胞3、6和12 h,通过比色法检测细胞上清中乳酸脱氢酶(LDH)和细胞中丙二醛(MDA)的含量,Western blot检测铁死亡相关蛋白的表达水平,荧光探针法检测细胞中亚铁离子(Fe^(2+))含量。最后,用10μmol/L的HO-1抑制剂锌原卟啉(ZnPP)预处理PK-15细胞6 h,再用10μmol/L CdCl_(2)处理PK-15细胞12 h,通过相差显微镜观察细胞形态,Western blot检测铁死亡相关蛋白表达水平。结果显示,CdCl_(2)处理后细胞活力下降,LDH、MDA和Fe^(2+)水平极显著升高(P<0.01),Nrf2、HO-1和ALOX5蛋白表达水平极显著升高(P<0.01),FTH1蛋白表达水平极显著下降(P<0.01)。与CdCl_(2)处理组相比,ZnPP可以显著改善CdCl_(2)处理诱导的猪肾PK-15细胞铁死亡。ZnPP预处理组细胞形态明显好转,Nrf2、HO-1和ALOX5蛋白表达水平极显著下降(P<0.01),FTH1蛋白表达水平极显著升高(P<0.01)。结果表明,镉通过Nrf2/HO-1通路引发细胞铁过载和脂质过氧化,诱导猪肾PK-15细胞铁死亡。

关键词：镉 PK-15 HO-1 铁死亡

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