检索结果-内蒙古大学图书馆

中国食品学报 2023年第8期23卷 75-83页

作者：刘锋陆殷明陶文静王攀林宋丹李向臣浙江农林大学动物科技学院、动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室杭州311300

为研究姜黄素和根皮素联合使用对大肠杆菌的抑菌作用,采用微量肉汤稀释法测定姜黄素、根皮素的亚抑菌浓度;细菌培养测定各药物在亚抑菌浓度剂量下,对大肠杆菌的生长曲线、胞外核酸蛋白、乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(AKP)以及总蛋白含... 详细信息

为研究姜黄素和根皮素联合使用对大肠杆菌的抑菌作用,采用微量肉汤稀释法测定姜黄素、根皮素的亚抑菌浓度;细菌培养测定各药物在亚抑菌浓度剂量下,对大肠杆菌的生长曲线、胞外核酸蛋白、乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(AKP)以及总蛋白含量的影响;牛津杯法分析各药物亚抑菌浓度剂量下,姜黄素与根皮素的联合抑菌效果。结果表明:1)姜黄素与根皮素在质量浓度均为250μg/mL时,对大肠杆菌的生长具有显著的抑制作用,此质量浓度确定为姜黄素与根皮素的亚抑菌浓度;2)亚抑菌浓度的姜黄素和根皮素联合作用,能够有效抑制大肠杆菌的生长,抑菌效果优于姜黄素与根皮素单独处理组(P<0.05);3)亚抑菌浓度的姜黄素和根皮素联合使用对大肠杆菌的细胞壁和细胞膜有很强的破坏性,导致菌液上清中核酸、蛋白质以及AKP指数均升高。同时,亚抑菌浓度的姜黄素和根皮素联合使用减少了菌体内总蛋白(包括LDH)的表达量,效果显著优于姜黄素与根皮素单独处理组(P<0.05)。由此可见,姜黄素和根皮素联合作用大肠杆菌时,抑菌效果优于姜黄素与根皮素单独使用。

关键词：姜黄素根皮素联合作用大肠杆菌抑菌

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江山乌猪肠道黏膜菌群组成及其功能的性别差异

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微生物学报 2024年第4期64卷 1249-1262页

作者：吴娴毕海洋武永淑李向臣张亚南浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室浙江杭州311300

肠道黏膜微生物在调控宿主生理功能方面发挥重要作用,其结构组成受到多种因素影响。性别被认为是塑造肠道微生物的因素之一。然而,性别对肠道黏膜菌群的差异影响还不清楚。【目的】以江山乌猪为研究对象,探究性别差异对其肠道黏膜微生... 详细信息

肠道黏膜微生物在调控宿主生理功能方面发挥重要作用,其结构组成受到多种因素影响。性别被认为是塑造肠道微生物的因素之一。然而,性别对肠道黏膜菌群的差异影响还不清楚。【目的】以江山乌猪为研究对象,探究性别差异对其肠道黏膜微生物组成及功能的影响。【方法】选取性成熟的雌性和雄性江山乌猪各8头,利用16S rRNA基因高通量测序技术分析回肠和结肠黏膜菌群。【结果】在回肠黏膜中,雄性江山乌猪菌群的Chao1指数和Shannon指数显著高于雌性(P<0.05),在结肠黏膜中,不同性别江山乌猪菌群Chao1指数和Shannon指数无显著差异(P>0.05)。菌群差异分析显示,回肠黏膜中,沙雷氏菌属(Serratia)和埃希氏志贺菌属(Escherichia_Shigella)在雌性组中的相对丰度显著高于雄性组(P<0.05),雄性组中Oscillospiraceae UCG-005、拟普雷沃氏菌属(Alloprevotella)、布劳特氏菌属(Blautia)和Prevotellaceae_NK3B31_group相对丰度显著高于雌性组(P<0.05);结肠黏膜中,雌性组中unclassified_Muribaculaceae、Rikenellaceae_RC9_gut_group和Prevotellaceae UCG-003相对丰度显著高于雄性组(P<0.05),Oscillospiraceae UCG-005、Lachnospiraceae_NK4A136_group和unclassified_Lachnospiraceae在雄性组中相对丰度更高(P<0.05)。功能预测发现,雄性乌猪回肠黏膜菌群显著富集了氨基酸代谢、碳水化合物代谢和能量代谢等功能途径(P<0.05);结肠黏膜菌群主要富集了膜转运相关的ABC转运蛋白和信号转导相关的双组分系统等功能途径(P<0.05)。【结论】不同性别江山乌猪肠黏膜菌群结构及功能具有明显差异。这些结果揭示了不同性别江山乌猪肠道黏膜菌群的差异特征,为了解和挖掘我国地方畜禽品种肠道微生物资源提供部分参考。

关键词：性别肠黏膜微生物微生物功能江山乌猪

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亮氨酸对哺乳期湖羊羔羊小肠发育的影响

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动物营养学报 2024年第6期36卷 3833-3844页

作者：魏智远蔡奕涛孙梦珍纪雯雯王翀茅慧玲浙江农林大学动物科技学院、动物医学院杭州311300 浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室浙江311300

本试验旨在研究亮氨酸对哺乳期湖羊羔羊小肠组织形态、屏障功能及菌群组成的影响。选取30只体重[(3.60±0.37)kg]相近的5日龄湖羊羔羊,随机分成对照组(Con组,未添加亮氨酸)和亮氨酸组(Leu组,添加0.66 g/d亮氨酸),每组5个重复,每个重... 详细信息

本试验旨在研究亮氨酸对哺乳期湖羊羔羊小肠组织形态、屏障功能及菌群组成的影响。选取30只体重[(3.60±0.37)kg]相近的5日龄湖羊羔羊,随机分成对照组(Con组,未添加亮氨酸)和亮氨酸组(Leu组,添加0.66 g/d亮氨酸),每组5个重复,每个重复3只羔羊。试验期25 d。结果显示:1)与Con组相比,Leu组的空肠绒毛高度有增加的趋势(P=0.073),空肠隐窝深度显著降低(P<0.05),空肠绒毛高度/隐窝深度显著增加(P<0.05);回肠绒毛高度显著增加(P<0.05)。2)与Con组相比,Leu组的空肠上皮超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物(GSH-Px)的基因相对表达量均显著升高(P<0.05)。3)与Con组相比,Leu组的空肠上皮咬合蛋白(Occludin)和闭锁小带蛋白-1(ZO-1)的基因和蛋白相对表达量均显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01)。4)与Con组相比,Leu组的空肠布雷德菌属(Bulleidia)的相对丰度有增加的趋势(P=0.076),而空肠颤螺旋菌属(Oscillospira)和链球菌属(Streptococcus)的相对丰度显著降低(P<0.05)。5)相关性分析结果显示,空肠Bulleidia的相对丰度与空肠ZO-1的基因相对表达量呈极显著正相关(P<0.01),空肠Streptococcus的相对丰度与空肠隐窝深度呈极显著正相关(P<0.01)。由此可见,添加亮氨酸可增强湖羊羔羊空肠抗氧化能力,调控肠道上皮紧密连接蛋白的表达,改变空肠菌群结构,从而促进哺乳期羔羊小肠发育。

关键词：亮氨酸哺乳期湖羊羔羊小肠发育空肠菌群

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家禽坏死性肠炎的发病特征与营养调控研究进展

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动物营养学报 2025年第3期37卷 1401-1409页

作者：张瑞强卢姝婉孙耀威杨彩梅浙江农林大学动物科技学院、动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室临安311300

家禽坏死性肠炎(NE)主要是由产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)引起的消化道疾病,因其高发病率和死亡率,对禽类健康和家禽养殖业产生严重威胁。兽用抗菌药能有效控制家禽NE的发生,但由于近年对抗生素的限制,全球范围内NE的发病率表... 详细信息

家禽坏死性肠炎(NE)主要是由产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)引起的消化道疾病,因其高发病率和死亡率,对禽类健康和家禽养殖业产生严重威胁。兽用抗菌药能有效控制家禽NE的发生,但由于近年对抗生素的限制,全球范围内NE的发病率表现出整体上升趋势,家禽NE的防治仍任重道远。为深化对该病的认识,本文从NE的特点出发,综述了NE的病原学、流行病学和临床特征,归纳了NE的营养调控措施与抗病机理,为未来对NE的发病机制及其营养调控的深入研究提供参考。

关键词：家禽坏死性肠炎发病机制营养调控

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N-乙酰半胱氨酸对双酚A诱导的猪肾细胞凋亡和炎症反应的抑制作用

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中国农业科学 2023年第3期56卷 549-558页

作者：陶文静张子婷刘媛宋丹李向臣浙江农林大学动物科技学院/动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室

【背景】双酚A(BPA)广泛应用于塑料材料工业制造，其从塑料制品中渗出，暴露在食物、水、土壤和空气等多种环境介质中，导致动物长期接触，并经过胎盘和母乳传递给后代，干扰动物生长和发育，对动物生长性能和生产效率产生不利影响。N-... 详细信息

【背景】双酚A(BPA)广泛应用于塑料材料工业制造，其从塑料制品中渗出，暴露在食物、水、土壤和空气等多种环境介质中，导致动物长期接触，并经过胎盘和母乳传递给后代，干扰动物生长和发育，对动物生长性能和生产效率产生不利影响。N-乙酰半胱氨酸（NAC）作为公认的强效抗氧化剂，能够调节氧化应激、细胞凋亡、炎症等多种病理生理过程。然而，NAC对BPA诱导的猪肾细胞损伤的调节作用尚不清楚。【目的】探究抗氧化剂NAC在BPA诱导的PK15细胞凋亡和炎症反应中的潜在作用，为NAC在对抗BPA诱导的猪肾细胞损伤中的应用研究提供科学依据。【方法】选取PK15细胞为试验材料，采用相应的抗氧化检测试剂盒分别测定细胞内过氧化氢酶（CAT）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性变化；设置不同浓度NAC(0、2、5和10 mmol·L-1)预处理，并与BPA共处理PK15细胞，CCK-8检测细胞活力以筛选最佳的NAC作用浓度；实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测凋亡相关基因（BAX、BCL-2和Caspase3）表达和炎症相关基因（IL-8、IL-6、IL-1β和TNF-α）mRNA相对表达量，蛋白免疫印迹检测凋亡相关蛋白（BAX、BCL-2、cleaved-Caspase3）水平；免疫荧光染色检测凋亡细胞数量和核因子κB(NF-κB)核易位。【结果】与对照组相比，BPA处理显著降低了细胞内CAT、T-SOD和GSH-Px活性（P<0.05）。CCK-8结果显示，与对照组相比，BPA显著降低PK15细胞活力，而不同浓度的NAC均能显著促进PK15细胞活力（P<0.05），且与BPA单独处理相比，5和10 mmol·L-1 NAC预处理均能显著促进PK15细胞活力（P<0.05）;qRT-PCR和蛋白免疫印迹结果显示，BPA处理显著增加了BAX、Caspase3 mRNA相对表达量以及蛋白表达水平，减少了BCL-2mRNA相对表达量和蛋白表达（P<0.05），而NAC预处理能够减少BPA诱导增加的BAX、Caspase3基因和蛋白表达，增加BCL-2基因和蛋白表达；Hoechst 33258荧光染色显示，BPA处理的细胞呈现强蓝色荧光染色且有明显的核皱缩，而NAC预处理后呈现较弱的蓝色荧光；BPA处理显著增加炎症相关因子（IL-8和IL-6）mRNA相对表达量（P<0.05），而NAC预处理抑制BPA诱导增加的炎症相关因子（IL-8、IL-6和IL-1β）mRNA相对表达量，免疫荧光检测NF-κB核易位显示，对照组的NF-κB主要分布在细胞质中，而BPA处理后的NF-κB主要分布在细胞核，NAC预处理明显减少核NF-κB的表达。【结论】NAC显著提高BPA诱导降低的PK15细胞活力，抑制BPA诱导的PK15细胞凋亡和炎症反应。

关键词：双酚A N-乙酰半胱氨酸细胞凋亡炎症反应 PK15细胞氧化应激

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小麦豆粕饲粮添加ε-聚赖氨酸盐酸盐对蛋鸡生产性能、蛋品质和肝脏脂质代谢的影响

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农业生物技术学报 2024年第11期32卷 2582-2592页

作者：刘梦琪史明骅吴健清樊金云汪涵杨松柏赵阿勇周晓龙浙江农林大学动物科技学院·动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室

我国大豆年产量较低，无法满足生产生活需求，严重依赖进口，国际上大豆价格不断飞涨，而小麦替代玉米可以实现豆粕减量。ε-聚赖氨酸盐酸盐(ε-poly-L-lysine hydrochloride, ε-PLH)是一种天然防腐剂和抗菌剂，常用于食品等领域。本... 详细信息

我国大豆年产量较低，无法满足生产生活需求，严重依赖进口，国际上大豆价格不断飞涨，而小麦替代玉米可以实现豆粕减量。ε-聚赖氨酸盐酸盐(ε-poly-L-lysine hydrochloride, ε-PLH)是一种天然防腐剂和抗菌剂，常用于食品等领域。本研究旨在探讨小麦豆粕饲料添加ε-PLH对蛋鸡(Gallus gallus domesticus)生产性能、蛋品质和肝脏脂质代谢的影响。实验选取21周龄海兰褐蛋鸡共120只，随机分为4组，每组5个重复，每个重复6只鸡，分为对照组、小麦组、小麦+0.01%ε-PLH组和小麦+0.05%ε-PLH组，进行3周的换粮饲养，正式实验期为12周。结果表明，对照组和3个处理组产蛋率和料蛋比均无显著差异，小麦+0.01%ε-PLH组和小麦+0.05%ε-PLH组的平均蛋重显著高于对照组(P<0.05)；小麦组、小麦+0.01%ε-PLH组和小麦+0.05%ε-PLH组蛋形指数、蛋白高度和哈氏单位显著高于对照组(P<0.05)，小麦+0.01%ε-PLH组蛋壳厚度显著高于对照组和小麦组(P<0.05)；小麦+0.01%ε-PLH组能够显著上调过氧化物酶体增殖物激活受体γ (peroxisome proliferator-activated receptor gamma, PPARG)、脂肪酸去饱和酶2(fatty acid desaturase 2, FADS2)和脂肪酸结合蛋白1 (fatty acid binding protein 1, FABP1)等脂质代谢相关基因的表达量(P<0.05)。由此可见，小麦替代玉米并添加ε-PLH可以改善蛋鸡的生产性能、蛋品质和缓解肝脏脂质沉积。本研究为将ε-PLH应用于畜禽养殖提供理论和实践支持，也为国家玉米豆粕减量替代政策提供备选方案。

关键词：海兰褐蛋鸡小麦 ε-聚赖氨酸盐酸盐(ε-PLH) 产蛋性能脂质代谢

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基于近红外高光谱成像技术的地方鸡品种鉴别

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现代食品科技 2024年第5期40卷 247-254页

作者：金航峰于昌昊范锴萍吴健清颜菲菲汪涵浙江农林大学动物科技学院、动物医学院浙江杭州311300 浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室浙江杭州311300

我国拥有丰富的地方鸡遗传资源,不同品种的地方鸡在营养、口感和风味上表现出显著区别。该研究利用近红外高光谱成像技术研究地方鸡品种的鉴别方法。以龙游麻鸡、江山乌骨鸡和丝羽乌骨鸡为研究对象,采集3个品种鸡肉在900~1700 nm波段的... 详细信息

我国拥有丰富的地方鸡遗传资源,不同品种的地方鸡在营养、口感和风味上表现出显著区别。该研究利用近红外高光谱成像技术研究地方鸡品种的鉴别方法。以龙游麻鸡、江山乌骨鸡和丝羽乌骨鸡为研究对象,采集3个品种鸡肉在900~1700 nm波段的高光谱图像并提取光谱数据。对光谱数据进行预处理后选取特征波长,建立PLS和SVM鉴别模型。结果显示,Detrending-SNV为最优预处理方法,ACCc、ACCp和ACCt分别为94.17%、95%和94.59%。基于MCUVE-SPA算法选取的16个特征波长建立的PLS鉴别模型为最优模型,ACCc、ACCp和ACCt分别为95.83%、100%和97.92%,与全光谱模型相比分别提高了1.76%、5.26%和3.52%。研究结果表明,利用近红外高光谱成像技术鉴别地方鸡品种具有一定的可行性。

关键词：地方鸡近红外高光谱去趋势标准正态变量变换连续投影算法支持向量机

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牛病毒性腹泻病毒Erns蛋白激活NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3炎症小体诱发细胞焦亡的研究

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微生物学报 2023年第11期63卷 4271-4282页

作者：李园韩言言钟林翰宋京格周佳莹王美徐义刚浙江农林大学动物科技学院·动物医学院\浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室浙江杭州311300

【目的】牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)是引起牛病毒性腹泻-黏膜病的关键病毒。BVDV的结构蛋白Erns可在病毒感染的初期削弱宿主的免疫防御,引发牛群炎症反应。核苷酸寡聚化结构域样受体(nucleotide-binding oligo... 详细信息

【目的】牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)是引起牛病毒性腹泻-黏膜病的关键病毒。BVDV的结构蛋白Erns可在病毒感染的初期削弱宿主的免疫防御,引发牛群炎症反应。核苷酸寡聚化结构域样受体(nucleotide-binding oligomerization domain,NOD)热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体是NOD样受体(NOD-like receptor,NLRs)家族重要成员,调控炎症性疾病的发生发展,同时激活的NLRP3炎症小体能够引起宿主细胞焦亡,进而诱发级联放大的炎症反应。但BVDV Erns蛋白在BVDV感染诱发炎症反应的分子机制尚不清楚。【方法】为进一步探索Erns蛋白对BVDV感染激活NLRP3炎症小体诱发细胞焦亡的影响,构建了BVDV Erns蛋白的真核表达质粒pCMV-HA-Erns,过表达BVDV Erns蛋白,检测BVDV感染细胞中NLRP3炎症小体组分[半胱氨酸蛋白酶(caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein,ASC)和NLRP3]、IL-1β的mRNA转录水平和蛋白表达水平,以及细胞死亡调节蛋白(gasdermin D,GSDMD)的基因表达和蛋白剪切情况,并通过扫描电镜观察牛睾丸(bovine testis,BT)细胞膜成孔及BT细胞内容物释放情况,以分析Erns蛋白诱导BT细胞产生细胞焦亡。【结果】Erns蛋白能够显著引起NLRP3炎症小体活化进而激活caspase-1,活化的caspase-1一方面切割GSDMD,形成有活性的GSDMD-N端并在BT细胞膜形成孔洞,释放内容物,诱导BT细胞发生细胞焦亡;另一方面活化的caspase-1切割pro-IL-1β,形成有活性的IL-1β,并释放到BT细胞外,引起BT细胞上清中IL-1β水平上升。【结论】系统解析了BVDV Erns蛋白激活NLRP3炎症小体介导细胞焦亡的产生,对疫苗及治疗药物的研制具有重要指导意义。

关键词：牛病毒性腹泻病毒 Erns蛋白 NLRP3炎症体细胞焦亡

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茶皂苷对壬基酚诱导小鼠脾损伤的保护作用机制研究

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动物医学进展 2025年第7期46卷 89-94页

作者：陈丹娜雷卓凡邹彦璐王爽宋泉江宋厚辉姜胜浙江农林大学动物科技学院动物医学院/浙江农林大学浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室浙江杭州311300

为探讨茶皂苷(TS)拮抗壬基酚(NP)毒性的作用机制,48只清洁级ICR小鼠被随机分为对照组(CON)、中毒组(NPG)、茶皂苷对照组(TSG)和茶皂苷干预组(TSN),各组连续处理30 d后,分析小鼠生长状况、免疫因子变化、氧化与抗氧化指标,以及抗氧化蛋... 详细信息

为探讨茶皂苷(TS)拮抗壬基酚(NP)毒性的作用机制,48只清洁级ICR小鼠被随机分为对照组(CON)、中毒组(NPG)、茶皂苷对照组(TSG)和茶皂苷干预组(TSN),各组连续处理30 d后,分析小鼠生长状况、免疫因子变化、氧化与抗氧化指标,以及抗氧化蛋白表达差异。数据显示,TS可显著改善小鼠生长状况(P<0.05);显著提升机体抗氧化能力和免疫因子水平(P<0.05),并上调抗氧化蛋白Nrf2、NQO1和HO-1的表达水平(P<0.05),显著改善NP导致的小鼠脾脏组织结构损伤。表明TS能够拮抗NP毒性,对机体具有保护作用,这与增强脾脏抗氧化蛋白表达、抑制氧化应激有关。研究结果为研究茶皂苷解毒保护产品及其应用提供基本的理论参数。

关键词：茶皂苷壬基酚脾损伤氧化应激抗氧化

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致牛腹泻主要病毒四重PCR检测方法的建立与初步应用

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黑龙江畜牧兽医 2024年第4期 67-75页

作者：李沫萱钟林翰韩言言张晓梅刘伊湄张梦媛王美徐义刚李园浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室杭州311300

为了建立能同时检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛冠状病毒(BCoV)、牛轮状病毒(BRV)和牛细小病毒(BPV)的四重PCR方法,试验首先分别以BVDV 5′-UTR、BCoV Nsp10、BRV VP6和BPV VP2为靶基因设计检测引物,然后通过优化退火温度、Mg^(2+)体积... 详细信息

为了建立能同时检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛冠状病毒(BCoV)、牛轮状病毒(BRV)和牛细小病毒(BPV)的四重PCR方法,试验首先分别以BVDV 5′-UTR、BCoV Nsp10、BRV VP6和BPV VP2为靶基因设计检测引物,然后通过优化退火温度、Mg^(2+)体积、rTaq酶体积、dNTPs Mix体积和上下游引物体积建立致牛腹泻主要病毒的四重PCR检测方法,并对该方法进行了特异性、灵敏度和重复性评价,最后应用该方法对临床样本进行检测。结果表明:所建立的四重PCR方法的最优退火温度为55.2℃,最优Mg^(2+)体积为3.0μL,最优rTaq酶体积为0.8μL,最优dNTPs Mix体积为2.5μL,BVDV、BRV、BcoV和BPV对应基因最优的上下游引物分别为1.3μL/1.3μL、0.7μL/0.7μL、1.3μL/1.3μL和0.8μL/0.8μL。该方法仅对靶标病毒检测为阳性,对其他牛源病毒[牛副流感病毒3型(BPIV3)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)]和口蹄疫病毒(FMDV)灭活疫苗检测均为阴性;对BVDV、BCoV、BRV和BPV的最低检出限分别为1.0×10^(3)copies/μL、1.0×10^(3)copies/μL、1.0×10^(4)copies/μL和1.0×10^(3)copies/μL;对3个批次样本的各个重复均能扩增出目的基因;可准确检测出牛粪便样本组合中已知的病毒;对临床样本中4种病毒的检出率与商品化病毒核酸检测试剂盒的检测结果具有较好的一致性。说明本研究建立的致牛腹泻主要病毒四重PCR检测方法能同时检测BVDV、BCoV、BRV和BPV,该方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于临床样本的检测。

关键词：牛病毒性腹泻病毒牛冠状病毒牛轮状病毒牛细小病毒四重PCR检测方法

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